关于血浆凝血酶激活的纤溶抑制物ELISA定量检测及意义
凝血七项的临床意义
凝血七项的临床意义目录一、血浆凝血酶原时间（PT）二、活化部分凝血活酶时间（APTT）三、凝血酶时间（TT）四、纤维蛋白原（FIB）五、纤维蛋白（原）降解产物（FDP）六、D－二聚体（D-Dimer）七、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)01血浆凝血酶原时间（prothrombin time，PT）正常参考值：10-14秒，建议建立各个实验室的参考范围。
临床应用：凝血酶原时间是检查外源性凝血因子的一种过筛试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原、和凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺陷或抑制物的存在，同时用于监测口服抗凝剂的用量，是监测口服抗凝剂的首选指标。
还可作为肝脏合成蛋白质功能的检测。
延长：>3秒有临床意义。
1、广泛而严重的肝脏实质性损伤，如急性重症肝炎及肝硬化2、先天性外源凝血因子Ⅱ、V、Ⅶ、Ⅹ减少及纤维蛋白原的缺乏。
3、获得性凝血因子缺乏，如：急性DIC消耗性低凝期、原发性纤溶亢进、阻塞性黄疸、维生素K 缺乏。
4、血循环中有抗凝物质存在：如服用口服抗凝剂、肝素、FDP和香豆素等抗凝剂。
缩短：1、DIC早期呈高凝状态2、血栓栓塞性疾病和其它血栓前状态（凝血因子和血小板活性增高及血管损伤等）3、口服避孕药4、先天性凝血因子V增多INR正常参考值范围为0.8-1.5。
抗凝治疗监控：口服抗凝剂“法华林”，用药维持范围2.0-4.0。
02活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplatin time, APTT）正常参考值：20-40秒。
建议建立各个实验室的参考范围。
临床应用：活化部分凝血活酶时间（APTT）是检查内源性凝血因子的一种过筛试验，是用来证实先天性或获得性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ的缺陷或是否存在它们相应的抑制物，同时，APTT也可用来凝血因子Ⅻ、激肽释放酶原和高分子量激肽释放酶原是否缺乏，由于APTT的高度敏感性和肝素的作用途径主要是内源性凝血途径，所以APTT成为监测普通肝素首选指标，前后之比1.5-2.5为佳。
白血病患者血浆vWF和D-D的检测及其临床意义
白血病患者血浆ｖＷＦ和Ｄ－Ｄ的检测及其临床意义【摘要】目的：探讨白血病患者治疗前后血浆血管性假血友病因子(vWF:Ag)和D二聚体(D-D)含量变化及临床价值。
方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）测定29例白血病患者血浆vWF:Ag含量和磁珠凝固法测定D-D含量的变化。
结果：白血病患者化疗前血浆vWF:Ag和D-D升高，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。
缓解后vWF:Ag和D-D比治疗前有明显降低，但仍高于正常水平（P<0.01）。
结论：白血病患者存在不同程度的血管内皮损伤，并随病情的好转而有所改善。
【关键词】白血病；vWF:Ag；D-D出血是急性白血病常见并发症及致死的重要原因，主要见于急性早幼粒细胞白血病，急性粒单细胞性白血病及急性粒细胞白血病，而在慢性白血病患者中比较少见，这可能与急性白血病患者体内凝血、纤溶状态的改变密切相关。
我们通过21例白血病患者的血管性假血友病因子（vWF:Ag）和D－二聚体(D-D)等相关凝血活化标志物的动态检测，以进一步揭示其临床价值。
1 材料与方法1.1 研究对象：对照组：临床健康体检者25例。
白血病组：我院附属医院血液科2002年11月~2006年12月住院患者29例，男15例，女14例，年龄40～65岁。
其中急性白血病患者21例，均为初发。
慢性白血病患者8例。
白血病组和对照组年龄、性别差异无显著性。
1.2 标本的采集与保存方法：所有白血病患者在入院明确诊断后于清晨空腹采静脉血。
标本采集要迅速，取静脉血1.8 ml，129 mmol/L枸盐酸钠9：1抗凝，3000r/min，离心10 min，分离血浆，D-D立即上机检测，余下部分置-80℃冻存供vWF:Ag待测。
所有指标均按照试剂说明书的操作步骤。
1.3 检测方法：vWF:Ag酶免疫试剂由上海太阳生物公司提供，采用ELISA 双抗体夹心法检测，反应后在酶标仪上492 nm波长下测吸光度，再计算其血浆含量。
血栓四项临床意义解读
血栓四项临床意义解读咱们今儿个来唠唠血栓四项的临床意义，这血栓四项啊，就像是我们身体里的小侦探，能给医生透露不少身体里面的秘密呢。
血栓四项包括凝血酶 - 抗凝血酶复合物（TAT）、纤溶酶 - α2纤溶酶抑制物复合物（PIC）、血栓调节蛋白（TM）和组织型纤溶酶原激活物 - 纤溶酶原激活物抑制剂 - 1复合物（t - PAI - C）。
这每一项都有它独特的作用，就像一个小团队里的每个成员都有自己的专长。
先说说TAT吧。
TAT这东西要是升高了呀，那就有点像你家里的报警器响了，提示着身体里凝血系统可能有点“兴奋过度”了。
比如说，一个人受了重伤，身体就会启动凝血机制来止血，这时候TAT就可能升高。
但要是没有明显的受伤情况，TAT还升高，那就得小心了，可能身体里面有一些隐藏的血栓形成的风险，就像在平静的海面下可能隐藏着漩涡一样危险。
这时候医生就得好好检查检查，看是不是血管内皮有损伤了，或者是凝血因子有点失控了，就像要检查一个复杂机器的各个零件是不是出问题了。
再看看PIC。
PIC就像是凝血系统和纤溶系统之间的一个小信使。
当身体里的纤溶系统开始工作，溶解血栓的时候，PIC就会升高。
如果PIC升高得比较明显，就像是纤溶系统在大声呼喊：“我在干活儿呢，这里有血栓要处理！”这对于医生判断患者是不是有血栓溶解的过程非常重要。
比如说，一个患者刚刚接受了溶栓治疗，那PIC升高就可能是治疗起作用了的一个信号。
但要是莫名其妙地升高，那也可能意味着身体里有一些异常的纤溶活动，这就像一个本来平静的小镇突然出现了很多忙碌的人在到处奔走，肯定是有什么事情发生了。
血栓调节蛋白（TM）呢，它在血管内皮细胞上待着，就像一个守门员一样，守护着血液的正常流动。
当血管内皮细胞受到损伤的时候，TM就会跑到血液里去，这时候检测到血液里TM升高，就像看到守门员离开了自己的岗位一样，说明血管内皮可能出问题了。
这可能是因为炎症啊，感染啊之类的原因。
你想啊，血管内皮就像河道的内壁，如果内壁有破损，那水里的东西就容易乱套，血液也是一样的道理。
急性肺损伤患者凝血及纤溶相关指标的临床意义_邰文琳
作者简介： 邰文琳，1970 年生，女，副主任技师，博士研究生，从事临床血液学检验工作。 通信作者： 王殿华，男，教授，博士，E-mail： wangdianhuakm@ 126． com。
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临床检验杂志 2011 年 5 月第 29 卷第 3 期 Chin J Clin Lab Sci，May 2011，Vol． 29，No． 3
摘要： 目的 了解急性肺损伤（ acute lung injury，ALI） 患者早期的凝血、纤溶相关指标的变化规律，评价并筛选具有临床指导价
值的指标。方法 测定 ALI 组与健康人对照组、ALI 存活亚组和病死亚组患者血浆中凝血酶原时间（ PT） 、活化部分凝血活酶
时间（ APTT） 、凝血酶时间（ TT） 、抗凝血酶活性（ AT∶ A） 、纤维蛋白原（ Fib） 、D-二聚体（ D-D） 、组织型纤溶酶原激活物（ t-PA） 、
差异有统计学意义。 2 结果
2． 1 凝血相关指标检测 结果见表 1。 2． 2 纤溶相关指标检测 结果见表 2。
表 1 凝血相关指标的检测结果（ x珋± s）
组别 ALI 组
死亡亚组 存活亚组 健康人对照组
例数 38 22 16 40
PT（ s） 10． 6 ± 3． 8* 10． 4 ± 3． 6 10． 9 ± 3． 5 13． 3 ± 2． 6
例数 38 22 16 40
D-D（ mg / L） 0． 41 ± 0． 31 0． 65 ± 0． 42▲ 0． 32 ± 0． 17 0． 32 ± 0． 38
Fib（ g / L） 4． 63 ± 1． 23* 4． 75 ± 1． 11 4． 47 ± 1． 07 2． 94 ± 0． 65
医院检验中心纤溶酶原激活剂抑制物活性测定发色底物法操作规程
医院检验中心纤溶酶原激活剂抑制物（PAI）活性测定(发色底物法)操作规程
（1）原理：
定量t-PA加到待测血浆中，与血浆中的PAI作用，形成无活性的复合物，剩余的t-PA 作用于纤溶酶
原（Plg）,激活为纤溶酶（Plm），后者水解发色底物
S2251，释放出对硝基苯胺（PNA），它在405nm有强吸收
峰。
由测出剩余t-PA量，间接测出PAI活性。
PAI活性单位定义为：在25℃、20分钟内抑制1.0国际单位t-PA的PAI酶量为1.0 AU。
（2）标本处理：
静脉采血2ml置于含200ul抗凝剂（0.109mol/L枸橼酸钠）的塑料管或硅化管中,3000 rpm离心10分
钟,收集上清液置于2～8℃,可保存12小时,-20℃可保
存一个月。
（3）方法：
1）准：第一步，用1.1ml稀缓冲液溶解标准品；
第二步，再稀释100倍（取50ul，加稀缓冲液4950ul）；
第三步，用稀缓冲液等量稀释第二步。
2）释血浆制备：待测血浆50ul+稀缓冲液950ul( 稀20倍)—取200ul+等量第二步稀释标准液——混匀(又稀2倍)，25℃放置20分钟。
3）测定：
以1号孔调零点，在酶标仪上测定各孔A405值（4）数据处理：
A405
PAI相对活性
从标准曲线上查出PAI相对活性×40×1.1 [正常值] 0.35～0.8AU/ml。
凝血及纤溶实验室进展及临床应用
凝血及纤溶实验室进展及临床应用在医学实验室中，凝血及纤溶实验是非常重要的检测项目，它可以帮助医生了解患者的凝血功能以及纤溶功能是否正常，从而为临床诊断和治疗提供重要依据。
随着医学技术的不断发展，凝血及纤溶实验在临床应用方面也取得了很大进展。
本文将结合凝血及纤溶实验的原理、方法以及临床应用进行详细介绍。
一、凝血及纤溶实验的原理和方法1. 凝血功能检测凝血功能检测是指对凝血系统功能的全面检查，重点是观察凝血因子激活、蛋白质合成以及血栓形成等生理过程。
常用的凝血功能检测包括凝血酶原时间（PT）、部分凝血活酶时间（APTT）、国际标准化比值（INR）等指标。
通过这些指标的检测，可以评估患者的凝血功能是否正常，从而及时发现凝血功能障碍的病例。
凝血及纤溶实验可以帮助医生及时诊断各类凝血功能异常疾病，如血友病、肝脏疾病所致出血倾向、DIC（弥散性血管内凝血）等。
通过对患者的凝血功能指标进行监测，可以及时发现凝血功能障碍的病例，并给予相应的治疗。
2. 评估手术患者的凝血功能在临床手术前，医生通常会进行凝血及纤溶实验的检测，以评估患者的凝血功能是否正常。
这可以帮助医生及时发现手术患者的凝血功能异常，从而采取相应的措施，减少手术后出血的风险。
3. 监测抗凝治疗患者的凝血功能对于接受抗凝治疗的患者，定期进行凝血及纤溶实验的检测非常重要。
通过监测患者的凝血功能指标，可以及时调整抗凝药物的剂量，确保患者处于合适的抗凝状态，同时避免出现出血或栓塞等并发症。
4. 预测心血管疾病风险近年来，研究发现凝血功能异常与心血管疾病之间存在一定的关系。
通过对患者的凝血功能指标进行监测，可以评估患者未来发生心血管疾病的风险，为临床预防和干预提供重要依据。
随着医学技术的不断发展，凝血及纤溶实验也得到了许多新技术和方法的应用，取得了很大的进展。
目前，常见的一些新型凝血及纤溶实验方法包括：酶联免疫吸附实验（ELISA）、流式细胞仪技术、蛋白质组学技术等。
血浆α2-抗纤溶酶的测定及临床意义
【中图分类号】R446.63【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）10-0053-01
α2-抗纤溶酶又称α2纤溶酶抑制物。α22-球蛋白位置而得名。生理状态下，循环中α2-AP有两种形式，即功能活性型（可与PL结合）和失活型（非纤溶酶结合型），前者约占70％，其主要功能是通过抑制张阔性而对生理性纤溶起调节作用。
1.2.2α2-AP活性测定（发色底物法）：不同厂家提供的试剂盒具体操作略有不同，应严格按其说明书操作。分析步骤如下：在稀释的标准血浆或待测样本中加入过量的纤溶酶，37℃孵育，使血浆中α2-AP与纤溶酶充分结合形成复合物（PAP）[1]。加入发色底物，上步反应后剩余的纤溶酶水解发色底物释放出PAP而显色，共颜色深浅与α2-AP活性水平呈负相关。比色：405nm波长测定吸光度。根据不同浓度标准血浆α2-AP的含量和所测得的各吸光度绘制标准曲线。待测样本的吸光度值通过方程计算或查标准曲线即可得出其α2-AP的水平。
血浆α2-抗纤溶酶的测定及临床意义
摘要】目的：探讨血浆α2-抗纤溶酶的测定方法及临床意义。方法：选取35例受检患者血浆α2-抗纤溶酶的测定方法及诊断价值。结果：肝癌、肝硬化、白血病、DIC病人的α2-AP活性较正常组显著减低;心肌梗塞、血栓性静脉炎的α2-AP活性显著增高。结论：α2-抗纤溶酶测定对各类出血性疾病的病因和病程、预后的判断都有一定的价值。
1.2.3α2-AP抗测定（ELISA法）：应严格按照说明书操作。将已标准品（稀释不同浓度）和待测标本加入抗α2-AP抗体包被的酶联反应板微孔中，37℃孵育，使其中的α2-AP与其抗体充分结合。洗涤数次。加入酶标记的相同抗体，37℃孵育，使之形成抗体-α2-AP-酶标抗体复合物。洗去未结合的酶标抗体。加入酶的底物，酶水解底物而显色。加入终止液终止反应。比色以450nm波长测定吸光度[2]。标准曲线以不同浓度标准品的α2-AP含量和各测得的吸光度绘制标准曲线。待测标本的吸光度值通过方程或查标准曲线即可得出其α2-AP抗含量。
急性脑梗塞rt-PA静脉溶栓后凝血、纤溶指标动态变化及临床意义
急性脑梗塞rt-PA静脉溶栓后凝血、纤溶指标动态变化及临床意义发表时间：2016-07-05T16:58:00.197Z 来源：《中华医学杂志》2016年4月第16期作者：蔡俊秀刘志英胡霞[导读] PAI-1的变化与T-PA大致相反。
结论：溶栓治疗后凝血与纤溶并存，而以纤溶占优势，该规律可以为rt-PA静脉溶栓安全性、有效性提供指导。
蔡俊秀刘志英胡霞[摘要]目的：研究探讨急性脑梗死患者rt-PA静脉溶栓治疗后患者凝血、纤溶指标变化情况。
方法：选取经rt-PA静脉溶栓治疗的急性脑梗塞患者30例，比较溶栓前后的不同时间点患者的凝血、纤溶指标动态变化情况。
结果：静脉溶栓后，患者的TT、APTT、PT均延长，Fib水平下降，但溶栓后6h内的变化差异不大（P＞0.05）；TAT在溶栓后2h、6h明显增高，溶栓后12h迅速下降。
D-D在溶栓后2h显著升高，24h 后降低，与溶栓前相比，水平仍比较高，比较均有统计学差异（P＜0.05）。
FDP则表现出溶栓后2h明显增高，溶栓后24h降至原水平的情况。
T-PA溶栓后即刻直线上升，与溶栓前相比有显著差异（P＜0.05）；PAI-1的变化与T-PA大致相反。
结论：溶栓治疗后凝血与纤溶并存，而以纤溶占优势，该规律可以为rt-PA静脉溶栓安全性、有效性提供指导。
[关键词]急性脑梗塞 rt-PA静脉溶栓凝血指标纤溶指标动态变化DOI:10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2016.16.11作者单位：830011，新疆，新疆医科大学第五附属医院通信作者：胡霞，Email：2660181731@。
支持项目：新疆医科大学第五附属医院基金项目（项目编号WFY2014014）Index of the dynamic changes and clinical significance of coagulation and fibrinolysis in patients with acute cerebral infarction rt-PA after intravenous thrombolysisCai Junxiu,Liu Zhiying,Hu XiaAbstract：Objective: To study the changes of coagulation and fibrinolysis in patients with acute cerebral infarction after intravenous thrombolytic therapy in patients with rt-PA. Methods: 30 patients with acute cerebral infarction treated by rt-PA were selected, and the dynamic changes ofcoagulation and fibrinolytic index were compared before and after thrombolysis. Results: PT, TT, APTT were increased and Fib levels was decreased in 6 hours, but the changes were not significant (P > 0.05).TAT was sharply increased in 2 hours and 6 hours，then decreased after 12 hours. D-D was significantly increased after 2h thrombolysis, and the level of 24h was significantly higher than before treatment, and the difference was statistically significant(P < 0.05). FDP of 2 hours was significantly higher than that of 24 hours after thrombolysis. T-PA was great increased just after embolysis.the changes of PAI-1 was on the contrary.Conclusion:After dissolving embolus，coagulation and fibrinolysis existed simultaneously，but fibrinolysis is in superior.The phenomenon is important for the safety and effect of rt-PA vein thrombolysis.Keywords：acute cerebral infarction; rt-PA vein thrombolysis; coagulation index; fibrinolysis index; dynamic change急性脑梗塞指的是因脑血管急性阻塞诱发局部血供中断造成的一组阻塞性脑血管病，具有发病率高、致死率高、致残率高、复发率高的特点[1]。
凝血酶激活的纤溶抑制物的检测
中图分类 号 ：Ｒ ４４６．１１２
文献标 识码 ：Ｂ
文章编 号 ：１６７４—０９４７（２００８）０１—００７７—０４
关键 词 ：凝血 酶激 活的 纤溶 抑 制 物 ；纤溶 ；测 定
人纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)ELISA试剂盒使用说明书
人纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)水平。
用纯化的人纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入PAI-1，再与HRP标记的纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的PAI-1呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
血液透析患者血清纤溶酶原样活化酶检测及临床意义
纤溶酶原样活化酶的活性与血液透析 过程中凝血和炎症反应密切相关，其 水平变化可反映患者的病情状况和治 疗效果。
纤溶酶原样活化酶检测的重要性
通过检测血液透析患者血清中纤溶酶原样活化酶的含量和活 性，可以评估患者的凝血和纤溶状态，预测血栓形成的风险 。
02
血液透析患者血清纤 溶酶原样活化酶概述
纤溶酶原样活化酶的生理作用
01
纤溶酶原样活化酶是人体内重要 的生理活性物质，参与血液凝固 和纤溶过程，对维持血管壁的正 常结构和功能具有重要作用。
02
它能够激活纤溶酶原转化为纤溶 酶，促进纤维蛋白溶解，防止血 栓形成，保持血液循环通畅。
纤溶酶原样活化酶与血液透析的关系
断患者的病情。
对于纤溶酶原样活化酶 水平异常的患者，医生 应考虑调整治疗方案， 以改善患者的肾功能。
通过监测纤溶酶原样活 化酶水平，有助于及时 发现肾功能障碍的迹象 ，从而采取有效的干预 措施，延缓疾病进展。
THANK YOU
检测血液透析患者血清纤溶酶原样活化酶水平有助于评估患者凝血状态和预防血栓 形成。
研究目的
01
探讨血液透析患者血清纤溶酶原样活化酶水平的变 化及其与患者临床指标的关系。
02
分析血清纤溶酶原样活化酶检测在评估血液透析患 者凝血状态和预防血栓形成的价值。
03
为血液透析患者的治疗和预防提供理论依据和实践 指导。
血液透析患者血清纤溶酶原 样活化酶检测及临床意义
目录
• 引言 • 血液透析患者血清纤溶酶原样活化酶概述 • 血液透析患者血清纤溶酶原样活化酶检测
方法 • 血液透析患者血清纤溶酶原样活化酶的临
凝血抗体实验报告
一、实验目的本实验旨在研究凝血抗体的产生机制、影响因素及其与凝血功能的关系。
通过体外实验，观察凝血抗体对凝血酶原激活复合物（PCA）的抑制作用，探讨凝血抗体在凝血过程中的作用。
二、实验原理凝血抗体是一种自身抗体，可识别并结合凝血因子，从而抑制凝血过程。
本实验采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测凝血抗体水平，并通过凝血酶原激活复合物（PCA）活性测定分析凝血抗体对凝血功能的影响。
三、实验材料1. 主要试剂：凝血酶原激活复合物（PCA）试剂盒、抗凝血酶原抗体（ATP）酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒、羊抗小鼠IgG-HRP、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗小鼠IgG、底物A、底物B、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、双蒸水等。
2. 主要仪器：酶标仪、微量移液器、恒温箱、离心机、涡旋器、紫外可见分光光度计等。
3. 实验动物：小鼠。
四、实验方法1. 样本采集：取小鼠血液，分离血清，分为实验组和对照组。
2. ELISA检测凝血抗体：按照ATP ELISA试剂盒说明书操作，检测实验组和对照组血清中的ATP水平。
3. PCA活性测定：按照PCA试剂盒说明书操作，检测实验组和对照组血清中的PCA 活性。
4. 数据分析：采用统计学软件对实验数据进行分析，比较实验组和对照组的差异。
五、实验结果1. ELISA检测结果：实验组ATP水平显著高于对照组（P<0.05），表明实验组小鼠血清中存在较高水平的ATP。
2. PCA活性测定结果：实验组PCA活性显著低于对照组（P<0.05），表明实验组小鼠血清中的ATP对PCA活性具有抑制作用。
六、讨论1. 本实验结果表明，凝血抗体（ATP）在实验组小鼠血清中存在较高水平，且对PCA活性具有抑制作用。
这表明凝血抗体在凝血过程中发挥重要作用。
2. 凝血抗体可能通过以下途径抑制凝血过程：（1）结合凝血因子，干扰凝血因子之间的相互作用；（2）结合凝血酶原激活复合物（PCA），降低PCA活性；（3）激活补体系统，导致细胞损伤和炎症反应。
临床血液学检验：抗凝物质与纤溶活性的检验
活化蛋白C抵抗试验 （APC Resistance）
活化蛋白C抵抗（APC Resistance）试验
• APC通过灭活因子Ⅴa和Ⅷa起抗凝作用。 • 在进行APTT试验时若加入APC，由于APC使因子Ⅴa
– 胶乳凝集比浊法 – 免疫火箭电泳
Free PS activity assay：PT
Free PS antigen assay：
血浆蛋白S（PS）检测
临床意义：
• 升高：年龄
• 减低： 获得性PS缺乏：
妊娠、新生儿 、 口服避孕药； DIC, 肝脏疾病； 抗 Vit K 治疗
遗传性PS缺乏
Classification of protein S deficiency
Antithrombin targets in plasma
Interactions with heparin
血浆抗凝血酶 (antithrombin) 检测
• 抗凝血酶活性检测（AT：A) 发色底物法
• 抗凝血酶抗原检测（AT：Ag) 免疫火箭电泳 ELISA
AT活性检测原理：
• 待测血浆中的AT抑制已知过量的Thrombin 或 FXa，剩余的酶用发色底物法检测。
• 类肝素样物质增多：严重肝病、SLE、EHF、某些肿瘤
Heparin resistance
inability to achieve therapeutic anticoagulation, require more than 35,000 U/24 h to achieve the therapeutic range are classified as ‘heparin resistant’.
【健康创新项目】凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)检测试剂盒早期发现心脑血管血栓的检测方法
【健康产业创新】凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）检测试剂盒一种早期发现心脑血管血栓的检测方法TAFI是缺血性心脑血管疾病的重要标志物，含量变化可及时反映血栓形成。
TAFI检测试剂可用于早期诊断缺血性心、脑血管疾病并进行风险评估，为国际首创。
本项目设计2种检测方法，适用于不同检测条件，价格低廉、灵敏度高，安全无创，推广前景广阔。
项目介绍创新项目特色：创新背景约八百一十万人约六百四十万人约二百九十万人约二百七十万人缺血性心脏病中风慢阻肺肺炎数据来自华盛顿大学健康指标和评估研究所（IHME）心、脑血管血栓性疾病是21世纪以来人类第一位死因创新背景数据来源：《2015年中国心血管病报告》创新背景血栓性疾病覆盖临床各科；包含各个脏器；累及各类血管；最严重、最重要的血栓性疾病： 心脑血管血栓 深静脉血栓（DVT） 外周动脉闭塞 肺栓塞以及DIC创新解决方案凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）测定试剂盒免 疫 比 浊 法胶 体 金 法创新解决方案检测速度快、灵敏度高、要求有生化分析仪、适用于大量样本检测。
适用于大批量检测和大面积普查等TAFI 免疫比浊法创新解决方案利用纳米金免疫层析技术快速定量检测血浆TAFI含量，15分钟出结果。
医院内急诊化验室、监护病房、门诊等的即时检验；医院外包括家庭、社区医疗、诊所和事故现场等的即时检验。
TAFI 胶体金法创新成果心血管疾病检出率 75.83%脑血管疾病检出率92.9%TAFI 在 心 脑 血 管 疾 病 的 检 出 率发展规划临床诊断、疗效评估与监测市场：3000万人份用量；高危人群、职工体检筛查市场 ：20000万人份用量。
产能销售利润总体目标本产品利润率约30%4000万/年，按100%的增长率逐年递增1000万人份/年市场国际市场TAFI含量的体外检测方法专利号：ZL2010106127 57.8一种用于TAFI含量体外检测的试剂盒及其体外检测方法专利号：ZL201410038769.2；一种TAFI含量的体外检测试剂盒及其检测方法专利号：ZL201410039 135.9包装盒专利号：ZL201630085688.8获奖情况&项目照片国家项目立项证书创新性：●通过检测血液中TAFI含量诊断缺血性心脑血管疾病及评估发病风险，是对目前临评奖标准床上常用诊断方法的创新性补充，尤其是发病风险评估在医学领域具有非常重要的意义。
血浆组织纤溶酶原活化物抑制物活性检测
血浆组织纤溶酶原活化物抑制物活性检测血浆组织纤溶酶原活化物抑制物活性检测介绍：血浆组织纤溶酶原活化物抑制物活性检测是对人体内的血浆组织纤溶酶原活化物抑制物进行活性测定，用发色底物法进行检测。
血浆组织纤溶酶原活化物抑制物活性检测正常值：0.1～1.0抑制单位/ml。
血浆组织纤溶酶原活化物抑制物活性检测临床意义：异常结果：检查结果增高，常见于血栓前状态和血栓性疾病。
检查结果减低，常见于原发性和继发性纤溶症。
根据PAI：A和PAI：Ag的检测结果，可将PAI-1缺陷分为CRM+型和CRM-型。
需要检查的人群：中老年人群，出现肢体疼痛、肿胀、浅静脉怒张并沿静脉可触之索条状物。
血浆组织纤溶酶原活化物抑制物活性检测注意事项：不合宜人群：无检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
体检前一天的晚八时以后，应禁食。
检查时要求：抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。
血浆组织纤溶酶原活化物抑制物活性检测检查过程：取标准品，用生理盐水配制成效价(U/mL)分别为5、6、7、8、9、10的标准品溶液。
另取1×10 cm的塑料试管6支，各加入0.1 %纤维蛋白原溶液450 μl，置37℃水浴预热5 min，再分别取已37℃预热的上述6个浓度的标准品溶液各50 μl，迅速加入上述各试管中，立即计时并摇匀，记录凝固时间。
每个浓度测2次，求平均值，做标准曲线。
待测样品用生理盐水稀释适当浓度，取50 μl，按标准曲线的测定方法平行测定2次，求平均值，根据标准曲线或回归方程计算样品的效价。
纤溶活性测定汇总_0
纤溶活性测定汇总纤溶活性的测定主要有：血浆鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）、血浆D-二聚体测定、血清纤维蛋白降解产物（FDP）测定、凝血酶时间（TT）及甲苯胺兰纠正试验、血浆纤溶酶原、血浆组织纤溶酶原活化剂测定、血浆纤溶酶原活化抑制物测定、血浆alpha;2纤溶酶抑制物测定等几种。
临床上较长应用的有3P试验、FDP测定和D-二聚体测定。
1.凝血酶时间（TT）及甲苯胺兰纠正试验（1）原理：受检血浆中加入标准化凝血酶溶液，测定开始出现纤维蛋白丝所需的时间。
纠正试验：甲苯胺兰可纠正肝素的抗凝作用，在TT延长的血浆中加入少量的甲苯胺兰，若延长的TT明显恢复正常和缩短，表示受检血浆中肝素或类肝素样物质增多，否则为其他类抗凝物或医学.教育.网.收集整理是纤维蛋白原异常。
（2）参考值：TT：16～18s；加入甲苯胺兰后，TT缩短5秒以上，提示血浆中肝素或类肝素样物质增多。
（3）临床意义：受检TT值延长超过正常对照3s为延长，见于低（无）纤维蛋白原血症；血中FDP增高（DIC）；血中有肝素和类肝素物质存在（如肝素治疗中、SLE和肝脏疾病等）。
2.血浆纤溶酶原测定（1）血浆纤溶酶原活性（PLG：A）测定1）原理：发色底物法：受检血浆中加链激酶（SK）和发色底物（S-2251），受检血浆中的PLG 在SK的作用下，转变成PL，后者作用于发色底物，释出对硝基苯胺（PNA）而显色。
显色的深浅与纤溶酶的水平呈正相关，通过计算求得血浆中PLG：A的含量。
2）参考值：75%～140%。
3）临床意义：增高：表示纤溶活性增高，见于原发性纤溶、继发性纤溶亢进。
减低：表示纤溶活性减低，见于血栓前状态和血栓性疾病，以及先天性PLG缺乏症。
PLG缺陷症：可分为CRM+型（PLG：Ag或PLG：A减低）和CRM-型（PLG：Ag和PLG：A均减低）。
此外，前置胎盘、肿瘤医学.教育.网.收集整理扩散、大手术后、肝硬化、重症肝炎、门脉高压、肝切除等获得性PLG缺陷症，PLG减低。
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关于血浆凝血酶激活的纤溶抑制物
ELISA定量检测及意义
凝血酶激活的纤溶抑制物(Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor，TAFI)是近年来发现存在于血浆中的一种蛋白酶原，属于羧肽酶家族成员[1]。
血液凝固时，TAFI被凝血酶-凝血酶调节蛋白复合物激活后，可特异性裂解与纤溶酶原有高亲和力结合位点的纤维蛋白羧基末端的赖氨酸残基，从而抑制纤溶酶原的活化，下调纤溶活性。
作为凝血与纤溶新的调控因子，TAFI的发现在医学和生物学界引起了很大的兴趣。
国外已进行了多项TAFI的研究，研究发现TAFI 与多种疾病的病理状态，尤其是与血栓性疾病关系密切，血浆中高水平的TAFI是静脉血栓和心血管疾病的危险因素[2]。
而国内对TAFI的研究甚少，为此我们用ELISA测定了50例健康人血浆中TAFI抗原(TAFI:Ag)水平，并建立了我们当地健康人群血浆TAFI∶Ag的参考值范围。
1 研究对象选择
选取我院体检中心2011年3月至2011年5月的50例年龄20-70岁之间排除心、脑血管疾病和肝肾疾病、体检正常的健康者，男31例，女19例。
所有入选者检测前半个月内未使用抗凝药物，且无肝肾功能异常。
2 标本采集与处理
空腹静脉采血2份，其中一份注入凝血专用的试管，收集上层血浆置于-80℃保存备用；另一份注入生化专用的试管。
3 主要仪器和试剂
TAFI试剂盒均购自American Diagnostica公司（批号：873）； Rayto RT-2100C酶标分析仪；罗氏7600全自动生化分析仪及配套试剂。
4 实验方法
4.1血浆TAFI Ag水平采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定
4.1.1标准曲线的建立血浆标准品制作1∶2，1∶4，1∶10，1∶20稀释。
将不同稀释度的参考血浆，每孔加200μl，置37℃中孵育2h；倾倒尽孔中液体，用洗涤缓冲液300μl洗涤5次，甩干，加酶标抗体每孔200μl，置37℃中孵育1h；同上洗涤5次；TMB底物每孔200μl，室温放置5min，0.45mol/L硫酸溶液，每孔50μl，终止反应。
酶标仪选择450nm波长进行读数，以各稀释度的TAFI 为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，建立标准曲线。
4.1.2待测样品的检测血浆用稀释缓冲液作1∶50稀释，其余操作同标准品，根据标准曲线上的吸光度值可换算出待测样品中TAFI∶Ag的含量。
4.2生化指标测定空腹血糖、肝肾功能均在罗氏7600全自动生化分析仪上测定。
5 数据处理与统计学分析
采用SPSS13.0统计软件对所获得的数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差表示，采用正态分布法估计正常参考值范围。
6 结果
6.1试验方法学评价
6.1.1准确度将0.9mL的低值标准血浆加入0.1mL的高值标准血浆TAFI，计算TAFI∶Ag的平均回收率为96.56%。
6.1.2灵敏度TAFI∶Ag线性范围为5%～150%；测定结果与TAFI∶Ag的相关系数为0.99 219，说明检测结果与TAFI抗原呈良好的线性相关。
6.1.3精密度同一份血浆标本批内重复测定10次，TAFI∶Ag的变异系数为3.96%。
6.2血浆TAFI∶Ag水平血浆TAFI∶Ag均值为(84.86±19.56) %，以双侧95%的可信区间计算出血浆TAFI∶Ag水平的正常参考值范围为45.74%-
123.98%。
7 讨论
TAFI是1988年Hendriks等首先用比色法在血清中发现的一种羧基肽酶，由于它的不稳定性，被称为不稳定羧基肽酶(CPU)。
1991年Eaton等人从血浆中分离到血浆羧基肽酶原B。
1994年CPU被证明是血浆羧基肽酶B。
1995年Bajzar[1]等从血浆中分离出了分子量约为60Kd 的单链蛋白质，对其氨基酸测序分析发现该蛋白质与1991年Eaton等分离的血浆羧基肽酶原B为同一物质。
至此，对TAFI的研究日益深入。
现已清楚TAFI主要由肝脏合成的单链糖蛋白，分子量为60000，含有423个氨基酸残基。
TAFI基因定位于染色体13q，完整的TAFI基因全长约48kb，其中有一个约70bp的序列使其能在肝脏内特异性转录。
通过Southern印迹分析发现人的TAFI基因存在两种亚型，但两者无功能上的差异。
启动子和3′非翻译区存在7个多态性位点，这些多态性位点恰好位于TAFI基因的转录调节区域，从而决定了TAFI的表达水平。
编码区存在2个多肽性位点（Ala147Thr，Thr325Ile），后者与TAFI的活性有关[3]。
TAFI 在体外激活后对温度高度敏感，在37℃时半减期为15min，在30℃时为45min，在22℃时可延长到数小时，但在-80℃保存14天仍有90%的活性。
目前认为活化的TAFI自发性结构改变是此酶活性丧失的主要原因[4]。
由于TAFI的活性极其不稳定，本实验尚未进行TAFI活性的检测。
TAFI∶Ag是血栓性疾病新的实验室检测指标，因此测定结果的准确性就显得非常重要。
本实验中进行的试验方法学评价证明ELISA结果的可信性，血浆TAFI∶Ag正常参考值与国外文献报道基本一致。
我们的检测结果显示正常人群血浆TAFI∶Ag水平有较大差异，可能与TAFI的基因多态性位点有关。
参考文献
[1]Bajzar L，Manuel R，Nesheim ME. Purification and characterization of TAFI， a thrombin activatable fibrinolysis inhibitor [J]. J Bio Chem，1995，270，14477～14484.
[2]Juhan-Vague I， Renucci JF， Grimaux M， et al. TAFI antigen levels and cardiovascular risk factors [J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol ，2000，20 (9) : 2156.
[3]Brouwers GJ，Vos HL，Leebeek FW， et al. A novel possibly functional single nucleotide polymorphism in the coding region of the thrombin
activatable fibrinolysis inhibitor(TAFI) gene is also associated with TAFI levels [J].Blood ，2001，98(6):1992-1993.
[4]Marx PF， Hackeng TM， Dawson PE， et al. Inactivation of active thrombin activable fibrinolysis inhibitor takes place by a process that involves conformational instability rather than proteolytic
cleavage[J].J Biol Chem，2000，275:12410-12415.。