植物RNA提取步骤
RNA试剂盒提取步骤
常规植物样品总RNA小量抽提1. 植物样品的研磨。
�收集植物样品并尽快浸泡到液氮中以防止RNA 的降解。
使用研钵、研磨棒和液氮将植物样品研磨成尽量细小的粉末。
RNA 的产量取决于样品类型和研磨效果。
注：研磨后的植物粉末可直接保持于-70°C。
�快速称取50-100mg 的研磨好的植物样品至1.5ml 预冷的离心管中。
注：在加入裂解液之前，不要让样品解冻。
初次使用时，推荐先使用50mg，待取得理想结果后，再酌情提高用量。
2. 立即加入500µlBuffer RL/β-ME混合液至样品中。
立即于最高速度涡旋30-60 秒充分打散样品，室温静置3-5 分钟让样品充分裂解。
注：使用前分装适量的Buffer RL，每1ml Buffer RL 加入20µl β-疏基乙醇(β-ME)或2M DTT。
若植物用量增加超过100mg，按比例增加Buffer RL/2-ME 的用量。
3. 室温下，14,000 x g 离心5 分钟。
4. 把gDNA 过滤柱装在2ml 收集管中。
把第三步的上清液转移至gDNA过滤柱中。
14,000 x g 离心1 分钟。
5. 弃去gDNA 过滤柱。
加入0.5倍体积无水乙醇(~250µl)至滤液中。
用移液枪吸打3-5次混匀。
6. 把HiPure RNA Mini Column 装在2ml 收集管中。
转移第5 步的混合液至RNA柱子中。
10,000 x g 离心30-60 秒。
7. (可选)这一步可插入DNase 进行膜上消化。
(请另外订购DNase On Column Kit 进化膜上DNase 消化)。
8. 倒弃滤液，把柱子装在收集管中。
加入500µl Buffer RW1 至柱子中。
10,000 x g离心30-60 秒。
9. 倒弃滤液，把柱子装回收集管中。
加入600µl Buffer RW2 (已用乙醇稀释)至柱子中。
10,000 ×g 离心30-60 秒。
植物RNA提取方法
RNA提取方法1、在超净工作台中取500uL裂解液RLT加入到1.5mL的离心管中，加入5uL β-巯基乙醇，60uL PLANTaid混匀备用；2、在95%乙醇擦过的桌面上用液氮研磨适量植物组织，取50mg 细粉转入上述装有RLT和PLANTaid的离心管中，立即剧烈震荡2-3min充分裂解，将裂解物13000rpm常温离心10min。
3、在新的离心管中加入新开封的无水乙醇250uL，按1:2的比例加入上清液500uL，用移液枪慢慢混匀，13000rpm常温离心60s。
4、每个吸附柱RA中加入750~800uL的上清液，静置后13000 rpm 常温离心1min，弃废液。
可以2管或3管合并到一个吸附柱RA 中。
5、向吸附柱RA中加入350~400uL的去蛋白液RWL，放置5min，12000 rpm常温离心30~60s，弃废液，将吸附柱放回到收集管中。
6、向吸附柱RA膜中央加入50uL DNase I工作液（DNase I 5uL，buffer5uL，无RNase 水40uL），37℃烘箱放置30min。
7、向吸附柱RA中加入350~400uL的去蛋白液RWL，放置5min，12000 rpm常温离心30~60s，弃废液，将吸附柱放回到收集管中。
该步骤可再重复一次。
8、加入漂洗液RW（请先检查是否已加入污水乙醇）500uL，静置后12000 rpm常温离心30s，弃掉废液；加入500uL漂洗液RW，重复一次。
9、将吸附柱RA放回空收集管中，12000 rpm常温离心30s，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留的乙醇抑制下游反应。
10、取出吸附柱RA，放入一个新的RNase free离心管中，加入25uL 灭菌后的RNase free water（事先在80℃水浴中加热），室温放置2min，12000 rpm常温离心1min；将试管中的溶液吸出后再次加到吸附柱中，室温放置2min，12000 rpm常温离心1min。
植物总RNA提取步骤
植物RNA提取(FOREGENE试剂盒)使用前请现在Buffer PSL2和Buffer PRW2中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1、取500ul Buffer PSL1于2ml l离心管中，加入10ul β-巯基乙醇（需自备），混匀待用.2、取适量的新鲜植物叶片或组织，尽量剪碎，置于预冷的研钵中，加入液氮充分研磨.3、迅速称取50mg研磨好的新鲜植物叶片粉末，转移至Buffer PSL1中，剧烈震荡混匀，室温静置5min.注意：组织量不要超过50mg，否则会导致RNA的质量下降。
在植物叶片粉末融化之前迅速转移，细胞破碎后，在无冷冻环境中，RNA极容易发生降解4、向上述液体中加入100ul Buffer PS，轻柔混匀.5、（可选步骤）如果发现组织裂解后的溶液中有比较明显的组织碎片或者溶液过于黏稠，12,000rpm （~13400xg）常温离心2-5min，取上清液进行下一步操作；如若没有此现象，可忽略.6、将所有上清液转移至DNA-Cleaning Column（DNA离心柱）放入收集管中，13,300rpm（~17000xg）离心2min.移除DNA-Cleaning Column（DNA离心柱）,保留收集管内的上清液.注意：植物组织裂解比较黏稠，在转移液体时可以将枪头尖端剪掉，便于取样，虽然大部分的细胞碎片被截留在DNA-Cleaning Column（DNA离心柱）膜上，但还是会有一些微量的细胞碎片通过DNA-Cleaning Column （DNA离心柱），在收集管底部以沉淀形式存在。
小心地将上清液移至干净的离心管中在进行步骤7，切勿将沉淀吸入上清液中.7、小心转移经过DNA-Cleaning Column离心过滤的上清液到2ml的RNase-Free离心管（需自备）中，向其中（体积应为600ul上清液）加入1.5倍（约900ul）体积Buffer PSL2(已加入无水乙醇）。
CTAB法提取RNA
CTAB法提取植物总RNA一、操作步骤：1.先在65o C水浴中预热适量的CTAB提取液（加入2% B—巯基乙醇）;2.液氮中迅速研磨新鲜的（或—70o C保存的）植物组织样品,充分研磨成均匀的粉末后取0.05-0。
1g置于1。
5mL离心管中（离心管中预先加入1mL CTAB 提取液), 迅速涡旋混匀30-60s, 然后65o C水浴4—5min；3.加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1）涡旋混匀,10000x g 离心15min沉淀蛋白质；4.将上清液转移至新的离心管，重复抽提一次，沉淀蛋白质;5.将上清液转移至新的离心管，加入等体积的4mol/L LiCl，4o C条件下沉淀2 h以上使RNA变性.6.4o C， 12000x g离心10min沉淀RNA，弃上清去除DNA，然后分别用500 uL 70％和100％的乙醇洗涤沉淀除去杂质;7.倒掉乙醇，瞬时离心，吸干离心管中的液体,超净工作台晾干沉淀,10 min。
Tips:缓缓倒掉乙醇，避免倒掉沉淀.尽量吸干残留液体，适当调整晾干沉淀的时间，确保乙醇完全挥发.晾干沉淀的时间不宜过长，否则不利于RNA的溶解.8.加入50 μL mixture(44 μL DEPC—H2O，5 μL 10 × DNaseⅠbuffer，1 μLDNaseⅠ）,37 °C孵育30 min。
Tips：配置mixture时应先加DEPC—H2O，再加buffer，最后加DNaseⅠ，配制好的mixture应充分混匀后再分装。
样品较多时，应计算好mixture的需求量,并适当增加配制量，因为分装mixture时会有损耗。
9.加入500 μL DEPC—H2O稀释RNA样品,加入200 μL氯仿/异戊醇（24/1）,缓慢摇匀10min。
Tips:需稀释RNA样品，以利于在氯仿/异戊醇抽提后转移上清液。
10.4 °C，12000 × g,离心10 min。
实验 一RNA提取及检测
RNA浓度检测过程
（1）取少量待测RNA样品，用DEPC 水稀释100倍。
（2）用DEPC 水做空白，在260 nm、280 nm、230 nm处调节 紫外分光光度计的读数至零。 （3）加入待测RNA样品在三个波长处读取OD值。 RNA纯品的OD260/OD280的比值为2.0，故根据OD260/OD280 的比值可以估计RNA的纯度。若比值较低，说明有残余蛋白质 存在；比值太高，则提示RNA有降解。 OD260/OD230比值应≥ 2.0，若比值较低说明盐分过高。
(1) 研钵加液氮数次至足够冷，加入样品，研磨至粉末。 加入Trizol（每100mg组织加1ml的Trizol），充分研磨， 放在室温下解冻。 (2) 除不溶性物质：2～8ºC下12000g离心10min，不溶性 物质沉淀，将RNA的上清移入1.5 ml离心管中。 (3)相分离：在15～30℃下放置5min，使核蛋白复合物完 全解离。加0.2ml氯仿，剧烈振荡15 sec，室温下温浴 2～3min。2～8℃下，≤12000g离心15min，RNA全部溶解 于上层水相中，把水相移入另一1.5ml离心管中。
RNA提取得率低 1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低： 不同细胞和组织中RNA的丰度不同，如肝脏，胰腺，心脏等 是高丰度组织(总RNA含量2-4μ g/mg)，脑，胚胎，肾脏，肺， 胸腺，卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μ g/mg)，膀胱， 骨，脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μ g/mg)。 2. 组织起始量太少或者太多：
(4) 氯仿再次去杂：加0.5ml氯仿，剧烈振荡15sec，室
温下温浴2～3min；2～8℃下，≤12000g离心15min，把 水相转入1.5ml离心管中。 (5) RNA沉积：加入0.5ml异丙醇，15～30℃温浴10min； 2-8℃下，≤12000g离心10min，RNA沉积在离心管的底 部及侧壁。
提植物总RNA及去DNA和反转录标准方法(会给实验室一大笔提取试剂盒的经费)
Trizol法提取植物总的RNA及反转录可用于RT-PCR【中文版】一、植物总RNA 的提取抽提RNA 所用的研钵酒精灼烧5-10min或灭菌.，器皿均高温高压灭菌，以去除RNA 酶，所有试剂都保证没有RNA 酶污染。
1) 1.5ml 离心管,取0.1g 组织在液氮中研磨至粉末, 立即加入1ml Trizol，涡旋充分混匀后放置2min。
2) 加0.2体积（氯仿Chloroform），剧烈振荡15s（vortex），室温放置3min（或不放置，直接离心）。
3) 4℃，12000rpm 离心5min，样品会分成3 层，取上层水相，取上清。
4) 加等体积的异丙醇，混匀，4℃放置10min以上。
或可以-80℃过夜。
5) 4℃，12000rpm 离心20min，4℃弃上清，管底管侧形成胶状沉淀（可看到白色沉淀）。
6) 加1ml 75%乙醇，充分溶解沉淀。
4℃，12000rpm 离心5min。
倒掉上清，用移液器吸干。
7) 晾干约10 min。
(不要晾太长时间，看不到水就可以加灭菌水)8) 加50μl灭菌的超纯水，65℃溶解，-20℃（最好-80℃）保存。
（注：要是处理DNase就不能加这么多水。
可以加5μl）整个提取步骤最好咋在4℃或冰上完成二、DNase I 处理消化植物总RNA 中的基因组DNA1) 将上述全部提取的植物总RNA 5μl，然后顺序加入1μl 10×缓冲液，1μl DNase，3μl RNase-free水，总体积10μl，充分混匀后，37℃温育30 min。
2）加入300ul 灭菌水提高体积，然后加入300ul PCI，vortex；4℃，12000rpm 离心5min；3) 加入1/10 体积3M 醋酸钠(autoclaved) pH 5.2, 和2倍体积的100% EtOH；（-20℃，10-30min或可以-80℃过夜）4) 4℃，12000rpm 离心15min，6)75% EtOH, 300ul, 12000 rpm 5min7) dry （10-15min）and add 30-50 ul of ddH2O三、反转录cDNA1) 在上述总体积为11μl 反应液中加入1μl Oligo(dT)18 引物4μl 5×缓冲液，2 μl dNTP，1μl 反转录酶，1μl RNase 抑制剂，总体积20μl，充分混匀后，42℃温育1-1.5hr。
CTAB法提取植物DNA和RNA
1)取0.1~0.2 g幼叶片放入液氮预冷的研钵液氮种研磨成粉。
加入含有65℃预热的1 000 μl CTAB裂解液和20 μlβ-巯基乙醇的2 ml离心管中，65℃水浴裂解40~60 min，每隔10min颠倒混匀一次。
然后常温12 000 r/min离心10 min。
2)取上清，加入2 ml离心管中，加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀，4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
重复这一步骤至界面清晰。
3)取上清，加入到1. 5 ml离心管, 加入两倍体积-20℃预冷的无水乙醇和1/10体积3M的NaAc(pH=5.2), 小心颠倒均匀，-20℃沉淀10~30 min。
4)4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
弃上清，用70%的乙醇洗2~3次。
室温干燥30 min。
5)加入1μl 10 mg/ml RNase，37℃温浴30-60 min去除RNA。
6)溶于40μl灭菌的ddH2O，琼脂糖凝胶检测。
注：无水乙醇、NaAc、70%的乙醇预冷7)取0.1~0.2 g植物材料放入液氮预冷的研钵液氮种研磨成粉。
加入含有65℃预热的1 000 μl CTAB裂解液和20 μlβ-巯基乙醇的2 ml 离心管中，65℃水浴裂解40~60 min，每隔10min颠倒混匀一次。
8)加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀静置3 min，4℃, 12 000r/min, 离心10 min。
9)取上清800 μl于2 ml离心管中，加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀冰上静置3 min，4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
10)取上清600μl，加入1/30体积的NaAc（3M，pH=5.2）和1/10体积的无水乙醇（均预冷），混匀，在冰上静置10 min，再加入等体积氯仿：异戊醇(24：1)，4℃，12 000 r/min, 离心10 min。
CTAB法提取植物总RNA
CTAB法提取植物样本RNA一．实验原理CTAB是阳离子去污剂，低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖，高离子（7MNaCl）强度溶液中沉淀蛋白、多聚糖。
破碎裂解细胞后，去除与RNA结合的蛋白质以及多糖，DNA等大分子，沉淀RNA,去除盐类及有机溶剂，溶解得到纯化的RNA。
二．实验试剂2% CTAB：CTAB 10g+NaCl 40.91g+1M Tris-HCl PH8.0 50ml+0.5M EDTAPH8.0 20ml，先用200ml水溶解，然后定容至500ml灭菌。
巯基乙醇, 氯仿：异戊醇=24:1，异丙醇，75%乙醇（-20℃预冷），RNaseFree ddH2O，DNaseI三．实验仪器及耗材移液器，水浴锅（或金属浴），振荡器，高速微量离心机，制冰机，2mL无RNA酶离心管，研钵，石英砂，液氮，吸水纸四．实验步骤1）2mL无RNA酶离心管中，加入980uL CTAB和20uL巯基乙醇，混匀65℃预热。
2）样品处理：样品取200mg（不超过），置于研钵中，加入少量石英砂，液氮研磨成粉，快速将粉末转移至上述液体1)中。
混匀，此时溶液为粘稠状。
3）65℃水浴10-30min，期间颠倒混匀几次。
4）加入等体积即1ml氯仿：异戊醇=24:1，混匀，12000rpm离心10min，取上清约900uL 至新离心管中5）重复4）2次6）加入等体积的异丙醇900uL，置于冰上10min或在冰箱中-20℃15min7）4℃离心20min 弃去上清，留沉淀8）75%乙醇（-20℃预冷）900ul漂洗1次，12000rpm离心5min8）移液枪吸去上清，离心管倒置在吸水纸上，干燥约20min9）用RNaseFree ddH2O 100uL溶解除去基因组DNA的步骤20uL体系：18ul RNA，1ul DNA酶，1ul buffer，0.25ul DNA酶抑制剂。
用PCR仪设置37℃30min，85℃5min。
提取植物组织RNA的准备工作和操作规范
提取RNA前的准备工作1、提取RNA操作全程及配制RNA提取试剂必须穿实验服，戴口罩和一次性手套，触摸皮肤（例如面部）、门把手及实验室其他未处理过RNase的普通物体表面后立即更换手套。
2、器具干烤：需要干烤的器具包括金属和玻璃制品，如研钵、钥匙、镊子、剪刀、试剂瓶（200mL、500mL、1L）、量筒（50mL、100mL）、烧杯，即所有在配制RNA提取试剂过程中需要用到的玻璃器皿均需要干烤处理。
所有干烤的器具均用锡箔纸包住，如研钵、钥匙、镊子、剪刀和匀浆器，容器用锡箔纸封口，如试剂瓶、量筒和烧杯。
180℃干烤6h后放入RNA专用柜中备用。
3、DEPC水的处理：用于处理枪头、试剂瓶盖和离心管等塑料制品的0.1%的DEPC水可以在烧杯中配制，磁力搅拌器上搅拌过夜，搅拌过程中用锡箔纸封口。
用于配制RNA提取试剂的DEPC水需要在干烤过的试剂瓶中配制，盖上瓶盖搅拌过夜后121℃灭菌20min。
4、枪头、离心管和试剂瓶盖用0.1%DEPC水过夜处理后用报纸包好高温灭菌，移液器必须是专用的，用之前用DEPC处理的水配制的75%酒精擦拭整个移液器，特别是枪杆。
超净台的处理：用DEPC处理的水配制的75%酒精擦拭干净后，用氯仿快速擦拭，再用75%酒精擦拭，将提取所需的物品放入超净台，并用75%酒精擦拭，另放置一个废物缸，表面喷酒精，上述完成后，超净工作台紫外灯照射15-20min。
试剂配制过程中所用的枪头也必须是DEPC水处理过并高温灭菌的。
5、提取过程中用新开封的氯仿和异丙醇，用DEPC水处理过的15mL离心管分装，每管分装10mL并于4℃保存，最后溶解RNA沉淀的DEPC处理过的水用处理过的1.5mL离心管分装并于-20℃保存。
6、用专用的电泳槽电泳RNA，用DEPC处理的水配制50×TAE缓冲液，每次电泳前用DEPC处理的水配制1×TAE缓冲液进行电泳，电泳前用去污剂将电泳槽、制胶板和梳子清洗干净，DEPC水配制的75%乙醇擦拭，最后用DEPC处理的水冲洗干净。
植物总RNA的提取(异硫氰酸胍法)
植物总RNA的提取（异硫氰酸胍法）
1．取1.2g绿叶，液N中研磨成冻粉，装入预冷的50ml离心管中，置冰上，加4ml 4M的异硫氰酸胍，混匀后加3ml Tris饱和酚，混匀后加0.3ml 2M的NaAc（pH4.8），0.6ml 三氯甲烷（CHCl3），混匀后振荡，置冰上30min。
2．取出离心管，于4℃ 8000rpm离心13min，上清液移于另一50ml离心管中，加2倍体积的无水乙醇混匀，4℃放置1h。
3．取出离心管，再于4℃ 8000rpm离心13min，沉淀用1ml 4M LiCl溶解（可用枪头慢慢吸和冲），转入1.5ml离心管，置冰上2h（或过夜）。
4．取出离心管，于4℃ 13000rpm离心15min，沉淀加400μl 0.1%DEPC水溶解（可用枪头慢慢吸和冲），再加400μl CHCl3充分混匀约10min。
5．4℃ 13000rpm离心6min，吸出上清约350μl于另一1.5ml离心管中，加1/10体积的3M NaAc （pH5.0—5.2），加2倍体积的无水乙醇，-20℃放置30min（或1—2h）。
6．4℃ 13000rpm离心13min，沉淀用70%的乙醇洗两次（可不离心），风干后，用100μl 0.1%DEPC 水溶解。
7．取3μl电泳检测，取3.5μl稀释至350μl测定RNA浓度，剩余RNA于-20℃保存备用。
rna提取实验步骤
RNA提取实验步骤如下：
●匀浆处理：
●组织：将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆
仪进行匀浆处理。
●单层培养细胞：直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即
3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。
●细胞悬液：离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107
细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。
加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。
一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。
每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
2-8℃10000×g离心15分钟。
收集上清液。
使用酒精洗涤RNA，以去除离心管内残留的试剂和盐。
最后利用2-甲基硫氰酸盐（MECT）溶液进行脱水，使RNA干燥而不影响RNA的完整性。
此外，如果是从动物组织中提取RNA，还需要使用DNase I处理RNA，以去除残留的DNA。
如果是从细菌中提取RNA，需要先进行细菌的裂解和细胞壁的破碎。
同时需要注意，整个提取过程需要严格控制RNA酶的污染。
植物RNA提取步骤
一、RNA提取（RNAiso Plus 试剂盒）实验原理：植物幼嫩组织的细胞处于旺盛的分裂阶段，核较大而胞质较少，核酸浓度高，且内含物少、次生代谢产物少，蛋白质及多糖类物质相对较少，在提取缓冲液存在时，经机械研磨，使细胞破裂并释放出内含物，提取的RNA产量高，纯度好。
RNase存在于所有的生物中，并且耐沸腾、蒸煮，所以在提取RNA 的过程中要防止RNA酶污染，用具如枪头、离心管、水、药品等需保持干净、无RNA 酶污染（或焦碳酸二乙酯，即DEPC处理，然后高压灭菌20 min以灭活DEPC）。
RNA定量分析可用紫外光谱分析，原理是RNA分子在260 nm处有特异的紫外吸收峰，且吸收强度与其浓度成正比，纯RNA样品的OD260大约为2.0。
实验试剂：RNA提取缓冲液、氯仿、75%乙醇（0.1% DEPC灭菌水配制）。
实验用品：研钵、枪头（1000ul、200ul、10ul）、离心管（2ml、1.5ml）、PCR 管[以上均在0.1%的DEPC水中浸泡一天]。
操作流程：1、取1ml RNAiso Plus 试剂于2ml RNAase free 的离心管中。
2、液氮磨样：将样品置于研钵中，倒入液氮，用研杵研磨至粉末状。
3、取适量研磨后的样品于RNAiso Plus 溶液中，室温静置加入1/5体积的氯仿，振荡混匀后室温静置5min，后4℃ 12000r/min 离心10min。
4、可选步骤：将上清转入新的2ml离心管中，加入等体积的氯仿重复步骤3一次。
5、将上清转入新的RNAase free的1.5ml离心管中，加入等体积的异丙醇，振荡混匀后室温静置10min以沉淀RNA，4℃ 12000r/min 离心10min。
6、弃去上清，向沉淀中加入500ul预冷的75%酒精（DEPC水配制）悬浮沉淀，以洗脱盐分。
7、弃去酒精，待沉淀干燥后加入适量RNase Free dH2O溶解沉淀。
8、取2ul RNA溶液电泳检测其质量，剩余的RNA可直接用于反转录或置于-80℃保存备用。
提取植物rna的步骤及原理
提取植物rna的步骤及原理嘿，咱今儿就来讲讲提取植物 RNA 的那些事儿！这可是个有趣又神奇的过程哦。
你想想看，小小的植物细胞里，居然藏着 RNA 这么重要的东西。
那要怎么把它给弄出来呢？首先啊，得把植物材料准备好，就像要做菜得先准备好食材一样。
然后呢，就得用一些特别的试剂啦，就像厨师的调料一样，能让 RNA 乖乖地现身。
第一步呢，就是把植物细胞给破碎掉，让里面的东西都跑出来。
这就好比拆礼物，得把包装纸撕开，才能看到里面的宝贝嘛。
破碎细胞的方法有很多种，可以用一些专门的仪器，或者用一些化学试剂，就像用锤子砸开或者用剪刀剪开一样。
接下来，就该把 RNA 和其他的杂质分离开啦。
这可不容易哦，就好像在一堆沙子里找金子一样。
但是咱有办法呀，通过一些特殊的步骤和试剂，就能让 RNA 脱颖而出。
这其中的原理呢，其实也不难理解。
RNA 有它自己的特点呀，咱就利用这些特点来抓住它。
就像你知道一个人的喜好，就能根据这个来找到他一样。
比如说，有些试剂能和 RNA 结合，而不和其他东西结合，这样不就把 RNA 给挑出来了嘛。
然后呢，把分离出来的 RNA 洗一洗，就像洗干净刚挖出来的土豆一样，让它干干净净的。
再之后，就是把 RNA 给浓缩一下啦。
这就好比把一大锅汤熬成一小碗精华，让 RNA 变得更纯更浓。
最后，你就得到了纯净的植物 RNA 啦！哇塞，是不是很神奇？这就像是从一个大宝藏里找到了最珍贵的宝贝一样。
提取植物 RNA 的过程虽然有点复杂，但是只要你一步一步来，认真细心，就一定能成功。
就像搭积木一样，一块一块地往上搭，最后就能搭出漂亮的城堡。
而且呀，当你成功提取出 RNA 的时候，那种成就感，简直没法形容！就好像你自己做出了一道超级美味的大餐一样。
所以啊，别害怕，大胆去尝试提取植物 RNA 吧！说不定你会发现更多有趣的事情呢！反正我觉得这是个超级有意思的事儿，你也一定会喜欢的啦！。
提取植物rna的步骤及原理
提取植物rna的步骤及原理答案：一、实验目的通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法二、实验原理RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA，必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。
高浓度强变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，所以RNA从细胞中释放出来时不被降解。
细胞裂解后，除了RNA，还有DNA、蛋白质和细胞碎片，通过酚、氯仿等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA。
三、仪器、药品与试剂配方(一) 仪器1．低温离心机2．分光光度计3．琼脂糖胶电泳系统，用前先用1% Na OH溶液浸泡过夜，之后再用DEPC水浸泡冲洗。
4．高压灭菌锅5．研钵、剪刀、一次性手套等(二) 药品1.焦碳酸二乙酯(DEPC)2.吗啉代丙烷磺酸(MOPS)3.异硫氰酸胍4.醋酸钠(NaAc)5.氯仿6.苯酚7.甲醛8.乙醇9.乙二胺四乙酸(EDTA)10.琼脂糖11.异丙醇(三) 试剂配方1．0.1% DEPC水0.1 ml DEPC 加入100 ml三蒸水中，振摇过夜，再湿热灭菌。
2.2 mol/L NaAc、0.5 mol/L EDTA、4 mol/L异硫氰酸胍、4 mol/L LiCl等均用DEPC 水配制。
3.5ΧMOPS 电泳缓冲液(pH 7.0)MOPS 0.1 mol/LNaAc 40 mmol/LEDTA 5 mmol/L四、实验步骤（一）总RNA的提取（方案一）1.实验前10天左右播种水稻种子，在3-4叶期，剪取1.2 g幼叶。
放入研钵，在液氮中研磨成粉末状，移入10 mL离心管。
加入4 mol/L异硫氰酸胍4 mL苯酚3 mL2 mol/L NaAc (pH 4.8) 0.3 mL氯仿0.6 mL混匀，冰浴放置30 min。
2.4℃，8000 r/min，离心13 min。
3.弃沉淀，取上清至另一干净无菌离心管中。
4.加入2倍体积无水乙醇，-70℃，0.5 h。
植物rna提取方法
植物rna提取方法
植物RNA的提取方法可以分为以下几个步骤：
1. 组织采集：选择适当的组织部位，如叶片、茎、花等，使用无菌工具采集样品，并迅速转移到液氮中保存。
2. 细胞破碎：将采集的组织样品放入液氮中或使用研钵将样品研磨成细胞浆。
3. 细胞破碎液的配制：在-80C保存的异丙醇中加入等体积的冷高盐缓冲液（主要成分为0.1M Tris-HCl pH 8.0、0.1M LiCl、1% SDS），混匀后在4C条件下保存。
4. 细胞破碎液的加入：将细胞破碎液加入研钵中的细胞浆，迅速混匀，转移到离心管中。
5. rRNA的酶解：向离心管中加入SDS、EDTA和酶RNase A，使细胞骨架和蛋白质颗粒发生变化。
6. RNA的提取：使用酚/氯仿提取法将RNA提取出来。
将等体积的酚和砂糖溶于RNA提取液中，将提取液加入到离心管中，混匀后进行离心。
7. RNA沉淀：将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀后放
置于-20C冰箱中沉淀RNA。
8. RNA的洗涤和溶解：将沉淀的RNA用70%乙醇洗涤，最后将RNA溶解在RNase-free water中即可得到纯净的RNA。
此外，还可以使用商业化的RNA提取试剂盒进行植物RNA提取，根据试剂盒说明书进行操作即可。
植物总RNA提取步骤
植物总RNA提取步骤1.实验前准备：-准备适当的植物材料，如叶片、茎等。
- 准备含有RNA酶抑制剂（RNase inhibitor）的提取缓冲液。
-将所有实验用具消毒。
-预先将磨杯、琼脂糖凝胶和RNA电泳仪等设备进行灭菌处理。
2.材料粉碎：-将植物组织用液氮快速冷冻并粉碎。
-将粉碎好的材料转移到预先冷却的磨杯中。
3.细胞破碎：-加入足量的提取缓冲液。
-使用磨杵快速研磨，以破碎细胞壁。
4.除去DNA和蛋白质：-将细胞破碎液转移到离心管中。
-加入等体积与细胞破碎液的冷背离心缓冲液。
-室温下离心10分钟，以去除碎屑和细胞核。
5.总RNA沉淀：-将上清液转移到新的离心管中。
-加入等体积的1:1异丙醇：丙酮的混合液，并轻轻颠倒混匀。
-室温下沉淀10分钟，使RNA沉淀到底部。
-以1万×g离心10分钟，以沉淀RNA。
6.RNA洗涤：-弃上清液，加入70%的乙醇进行洗涤。
-轻轻颠倒离心管，使沉淀的RNA与乙醇充分接触。
-以1万×g离心5分钟，将洗脱的RNA沉淀到底部。
-弃乙醇，将离心管倒置在纸巾上，使其自然风干。
7.RNA溶解：-加入适量的DEPC水（二甲基亚砜）或没食子酸钠进行RNA的溶解。
-使用微量离心把沉淀的RNA溶解均匀。
8.RNA质量检测：-使用紫外光谱仪检测RNA的浓度和纯度。
-使用琼脂糖凝胶电泳检查RNA的完整性。
总结起来，植物总RNA提取的步骤包括材料粉碎、细胞破碎、除去DNA和蛋白质、总RNA沉淀、RNA洗涤、RNA溶解和RNA质量检测。
这些步骤需要仔细操作，以保证提取到高质量的总RNA样品。
提取到的总RNA 可用于后续的RT-PCR、实时荧光定量PCR、Northern blot等分子生物学实验。
植物RNA提取步骤
植物RNA提取步骤1.植物样本的采集和处理首先，选择合适的植物材料进行采集，例如叶片、茎、花朵等。
样本应该新鲜、健康，并且尽量避免受到外界环境因素的污染。
将采集的植物样本迅速置于液氮中冷冻保存，以防止RNA降解。
2.细胞破碎将冷冻的植物样本放入液氮中研磨。
根据样本的不同性质，可以选择不同的破碎方法，例如研钵研磨、搅拌器破碎或者机械破碎等。
破碎过程中需要保持样本的冷冻状态，以减少RNA降解的可能。
研磨完毕后，将样品粉末迅速转移到无菌离心管中。
3.细胞裂解加入适量的裂解缓冲液，如三甲基氯化铵（CTAB）缓冲液，含有SDS和DTT等试剂，以使细胞膜破裂，并溶解核蛋白。
均匀混合后，样品应该在65℃水浴中孵育一段时间，一般为30分钟至1小时。
4.蛋白质和DNA的除去加入等体积的氯仿进行液-液相分离，离心使两相分离。
RNA会分布在上层的水相中，而DNA和蛋白质主要存在于有机相中。
将上层水相转移至新的离心管中，重新加入等体积的氯仿进行再次分离，以彻底去除DNA。
再次离心，收集上层水相，将其转移到新的离心管中。
5.RNA的沉淀加入等体积的冷褐咖啡酸钠溶液，使RNA沉淀。
倒置管子轻轻旋转几次，然后在-20℃的冰箱中静置20分钟，使RNA充分沉淀。
之后通过高速离心将沉淀下来的RNA分离并收集。
6.RNA的洗涤加入70%的乙醇溶液洗涤沉淀下来的RNA，可彻底去除残余的盐和其他杂质。
加入乙醇后轻轻摇晃管子，然后通过低速离心收集RNA。
重复此步骤至少一次，以确保RNA的纯度和净化。
7.RNA的溶解和储存用去核酸酶的水溶解RNA，使其完全溶解。
可以通过测量其浓度和纯度，如使用比色法或者使用纳米光谱仪进行分析。
将提取到的RNA用无菌的离心管分装，存放在-80℃的冰箱中。
综上所述，植物RNA提取是一项繁琐而重要的实验技术。
根据不同的实验目的和植物样本的性质，可能需要进行一些步骤的优化或调整。
正确的提取方法和技巧对于后续的基因表达研究非常关键。
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS （溶液均需用DEPC处理过的水配制）。
操作步骤：1. 匀浆处理a. 植物组织:以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.，大约100mg 叶片使用1 ml Trizol.b. 动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg 组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.c. 单层培养细胞.直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次.注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染.d.细胞悬液:离心取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。
加Trizol 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。
e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10min，10 000rpm 离心1min。
弃上清，收集白细胞沉淀。
每1ml 血液收集的白细胞沉淀中加入1ml Trizol。
2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤:4 ℃10 000rpm离心10min，取上清。
如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。
处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。
取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
4. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min。
植物叶片总RNA提取
植物叶片总RNA提取一、前期准备1.仪器灭菌、烘干（高温灭菌锅、烘箱）研钵、棒杵、勺子、剪刀、镊子，洗净用报纸包好枪头：10 uL, 200 uL, 1000 uLPCR管、2 mL PE管、 ddH2O2.用新开起的无水乙醇，稀释至75%，将实验台、移液枪、离心机等全部杀菌消毒。
3.提前预热仪器：冷冻离心机4℃、恒温器56℃、水浴锅70-90℃。
4.试剂盒：Aidlab RN38 EASY spin Plus 植物RNA快速提取试剂盒二、提取步骤1.500裂解液RLT+50 PLAN Taid 于1.5EP管中，用手轻轻震荡；2.研钵中先加入液氮，充分冷却后用剪刀剪取植物叶片组织，加入液氮进行充分研磨；3.研磨后的细粉称取50mg 于EP管中，立即用手振荡20S(非常关键)，再用涡旋震荡20S 充分裂解；4.在56℃恒温器中温育3分钟；5.将裂解物置于离心机13000 rpm 离心10min6.取上清液480 uL转入1.5mLEP管中，加入上清液0.5倍体积（240 uL）无水乙醇，立即混匀吹打，不用离心。
7.将混合物加入一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中）13000 rpm离心5min ,弃废液；为确保离心后液体全部弃去，弃废液后再离心1min;8.将基因组DNA清除柱放入新2EP管中，并加入500 uL裂解液RLT Plus 13000 rpm，30s,收集滤液（RNA在滤液中）。
9.收集滤液约480 uL于2 mLEP管中，加入0.5倍体积（240 uL）无水乙醇，立即吹打混匀。
10.立即将混合物（约750 uL）加入一个吸附柱RA中（吸附柱放入收集管中）13000 rpm离心2 min,弃掉废液。
11.加700 uL去蛋白液RW1,室温放置1分钟，13000 rpm离心30S,弃废液。
12.加入500 uL漂洗液RW（请检查是否加入无水乙醇）13000 rpm 离心30S,弃废液，再次加入500 uL漂洗液RW，重复一遍。
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植物RNA提取步骤（附图）
实验步骤
1. 在eppendorf管中加入700ul 提取液（配方见后面）和10 ul巯基乙醇（在有褐化现象的时候再加就行，否则推荐不加），65度预热（可选）。
2. 研钵液氮预冷，取适量材料加入过量液氮，迅速研磨成均匀的粉末（有滑腻感），加入到预热的eppendorf管中水浴6min（可选）.取出后加入氯仿、酚各350ul，振荡20min。
3. 4℃13000rpm 离心15min，同时在另外的eppendorf管加入氯仿、酚各350ul。
4. 吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10 min。
5. 4℃13000rpm 离心8min。
同时在另外的eppendorf管加入氯仿700ul。
6. 吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10min。
7. 4℃13000rpm 离心8min。
同时在另外的eppendorf管加入350ul的75％乙醇、350ul的8MLiCl。
8. 吸取上清，加入到上述离心管中，－20℃沉淀30min，13000rpm离心20min。
9. 弃上清，75％乙醇清洗两次。
溶于30ul 的水（DEPC水），直接进行测定浓度和电泳，CTAB结果如下(左侧四个）：0.155ug/ul 260/280=2.11 260/230=2.20 SDS结果如下（右侧四个） 0.102ug/ul 260/280=1.78 260/230=2.05
电泳结果如下：
加入DNase和buffer（promega）,37度消化30min,氯仿抽提两次,用1/10体积NaAc 和二倍体积无水乙醇沉淀15min,13000rpm离心10min.75%酒精洗两次, 溶于30ul 的水（DEPC水）中.
提取液配方：
CTAB提取液：CTAB 2% m/v，四硼酸钠-硼酸缓冲体系0.0025mol/l（PH=8.0）NaCl 1.4mol/l
SDS提取液：SDS 2% m/v，四硼酸钠-硼酸缓冲体系0.0025mol/l（PH=8.0）NaCl 1.4mol/l
CTAB和SDS都不必说了，这里用四硼酸钠-硼酸缓冲体系的原因是Tris和DEPC起反应。
NaCl 的作用是提高盐浓度防止RNA降解。
如降解严重可选加EDTA二钠或减少水浴时间。
如提取杂质过多可选加PVP。
例如松树。
适用范围：各种常见树类如杨树等，草本类皆可。
以上的图片左侧四个泳道都为CTAB，右侧四个泳道为SDS。
提取杂志残留量：
CTAB水浴<CTAB未水浴<SDS水浴<SDS未水浴
而易降解程度正好相反，所以请酌情使用。