真菌学实验报告
真菌学实验报告
实验名称:真菌形态观察与鉴定实验日期:2023年X月X日实验地点:实验室实验目的:1. 学习和掌握真菌的基本形态结构。
2. 通过显微镜观察真菌的微观结构,了解其细胞壁、细胞核、菌丝等特征。
3. 学会根据真菌的形态特征进行初步鉴定。
实验原理:真菌是一类真核生物,其细胞结构相对复杂,具有独特的细胞壁、细胞核和菌丝等特征。
通过显微镜观察真菌的形态结构,可以初步判断其种类,为真菌的鉴定提供依据。
实验材料:1. 真菌样品:曲霉、青霉、酵母菌等。
2. 显微镜:光学显微镜、油镜。
3. 染色剂:乳酸酚棉蓝染色剂、革兰氏染色剂。
4. 其他试剂:蒸馏水、酒精、甘油等。
实验步骤:1. 取少量真菌样品,置于载玻片上,滴加乳酸酚棉蓝染色剂,盖上盖玻片,轻压使样品展开。
2. 将载玻片置于显微镜下,先用低倍镜观察真菌的宏观形态,如菌丝的粗细、颜色等。
3. 转换至高倍镜,观察真菌的微观结构,如细胞壁、细胞核、菌丝等。
4. 取少量真菌样品,滴加革兰氏染色剂,进行革兰氏染色,观察真菌的革兰氏染色特性。
5. 根据真菌的形态特征,进行初步鉴定。
实验结果:1. 曲霉:- 宏观形态:菌丝粗细不均,有的菌丝较粗,有的较细。
- 微观结构:细胞壁较厚,细胞核明显,菌丝分支较多。
- 革兰氏染色:革兰氏阳性。
2. 青霉:- 宏观形态:菌丝较细,颜色较深。
- 微观结构:细胞壁较薄,细胞核不明显,菌丝分支较少。
- 革兰氏染色:革兰氏阳性。
3. 酵母菌:- 宏观形态:菌丝较细,呈球形或椭圆形。
- 微观结构:细胞壁较薄,细胞核明显,菌丝分支较少。
- 革兰氏染色:革兰氏阴性。
实验讨论:1. 通过本次实验,我们掌握了真菌的基本形态结构,了解了细胞壁、细胞核、菌丝等特征。
2. 在观察真菌的微观结构时,应使用高倍镜,以获得更清晰的图像。
3. 真菌的革兰氏染色特性有助于判断其属于革兰氏阳性还是革兰氏阴性。
4. 在鉴定真菌时,需结合真菌的宏观形态、微观结构和革兰氏染色特性进行综合判断。
真菌的观察实验报告
真菌的观察实验报告真菌的观察实验报告一、引言真菌是一类特殊的生物,它们既不属于植物界,也不属于动物界,而是独立成为一个界。
真菌在自然界中广泛分布,包括了许多不同的种类,如霉菌、酵母菌和蘑菇等。
本实验旨在观察真菌的生长过程以及其对环境的适应能力。
二、实验材料与方法1. 实验材料:- 真菌培养基:包括蔗糖、琼脂和酵母粉等成分。
- 真菌菌种:选择了一种常见的霉菌菌种。
- 培养皿、移液管、显微镜等实验器材。
2. 实验方法:- 准备培养基:按照一定比例混合蔗糖、琼脂和酵母粉,加入适量的蒸馏水,搅拌均匀后倒入培养皿中。
- 接种真菌:用移液管将真菌菌种均匀地滴在培养基上,然后将培养皿盖好。
- 观察生长过程:将培养皿放置在适宜的温度和湿度条件下,每隔一段时间观察真菌的生长情况,并记录相关数据。
- 显微镜观察:在适当的时间点,取出培养皿中的真菌样本,放在显微镜下观察其细胞结构和特征。
三、实验结果与分析开始实验后,我们观察到真菌在培养基上迅速生长,并形成了一片均匀的菌丝网络。
随着时间的推移,菌丝网络逐渐扩展,形成了更大的菌落。
在观察的过程中,我们还注意到一些有趣的现象。
首先,我们发现真菌的生长速度与温度和湿度密切相关。
在较高的温度下,真菌的生长速度明显加快,而在较低的温度下则相对缓慢。
这表明真菌对温度的适应能力较强。
另外,适宜的湿度也对真菌的生长起到重要的影响。
过高或过低的湿度都会抑制真菌的生长,而适宜的湿度则促进了其菌丝的扩展。
其次,通过显微镜观察,我们可以清晰地看到真菌的细胞结构。
真菌的细胞由菌丝组成,菌丝是一种细长的细胞结构,具有分枝和交叉的特点。
菌丝的末端通常会形成孢子或孢子团,这是真菌繁殖的一种方式。
通过观察不同时间点的样本,我们发现孢子的数量逐渐增加,这说明真菌在适宜的环境下能够迅速繁殖。
最后,我们还观察到真菌对光线的敏感性。
在实验过程中,我们将一部分培养皿放置在光照充足的环境下,而另一部分则放置在黑暗中。
真菌形态观察实验报告
真菌形态观察实验报告真菌形态观察实验报告引言:真菌是一类生物体,常见于自然界中的各种环境中,包括土壤、水体、空气等。
真菌的形态多样,有的呈现菌丝状,有的形成孢子团,还有的形成菌盖和菌柄。
为了更好地了解真菌的形态特征,我们进行了一系列的实验观察。
实验一:真菌的菌丝观察我们从周围的环境中采集了一些土壤样品,并在实验室中进行了菌丝观察。
首先,我们将土壤样品放入培养皿中,加入适当的培养基,然后在恒温箱中进行培养。
经过几天的培养,我们观察到了菌丝的形成。
菌丝呈现出细长的线状结构,有的呈现分枝状,有的呈现网状。
通过显微镜观察,我们还发现菌丝表面覆盖着一层透明的物质,这是真菌分泌的黏液,有助于菌丝的生长和营养吸收。
实验二:真菌的孢子观察为了观察真菌的孢子形态,我们选择了一种常见的黑曲霉进行实验。
我们将黑曲霉菌丝划过培养基,经过一段时间的培养,我们观察到了大量的黑色孢子形成。
这些孢子呈现出圆形或卵形,表面光滑,颜色深黑。
通过显微镜观察,我们发现孢子内部含有丰富的营养物质,这些孢子可以在适宜的环境下发芽,形成新的菌丝。
实验三:真菌的菌盖和菌柄观察为了观察真菌的菌盖和菌柄结构,我们选择了一种常见的蘑菇进行实验。
我们将蘑菇培养在适宜的环境中,经过一段时间的生长,我们观察到了蘑菇的形成。
蘑菇的菌盖呈现出圆形或伞状,表面光滑,颜色多样。
菌盖下面有许多垂直向下延伸的菌柄,菌柄呈现出圆柱形,表面光滑。
通过显微镜观察,我们发现菌柄内部有空心结构,这有助于蘑菇的支撑和养分输送。
结论:通过以上的实验观察,我们对真菌的形态特征有了更深入的了解。
真菌的菌丝呈现出细长的线状结构,有的呈现分枝状,有的呈现网状。
真菌的孢子呈现出圆形或卵形,表面光滑,颜色深黑。
真菌的菌盖呈现出圆形或伞状,表面光滑,颜色多样。
菌盖下面有许多垂直向下延伸的菌柄,菌柄呈现出圆柱形,表面光滑。
这些形态特征不仅有助于真菌的生长和繁殖,也为我们研究真菌的分类和进化提供了重要的参考。
真菌学实验报告-范本模板
真菌学实验报告一。
实验目的:1.1了解真菌形态的基本特征。
1.2掌握丝状真菌制片方法。
1.3掌握内生真菌的分离方法1.4掌握真菌的鉴定方法。
二.前言:真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林,从海洋、高空到赤道、两极,到处都有真菌。
真菌虽然不在空气中生长繁殖,但它的孢子却成群的漂浮在天空,只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中.当今世界,生物技术已迈入世界经济的支柱产业,真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。
真菌是原始的真核生物,具有广泛的多样性,真菌生长我繁殖迅速,在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代,能够直接、快速地进行遗传性状分离的分析。
因此,真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具,真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展,为生物技术产业提供了一个广阔的天地。
植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性,植物物种的年代越久远,其生物内生真菌的多样性越丰富:抗病原性能越强的植物,其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大;其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程,本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎,根,花,种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力,并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用.研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。
三.材料与方法:3。
1.1材料:在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。
3。
1.2。
药品与试剂:葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O,马铃薯、琼脂。
孟加拉红,青霉素,链霉素,甲基蓝,蛋白胨,酵母膏,蔗糖,磷酸盐,葡萄糖,琼脂条,无菌水等。
消毒剂:75%的乙醇,0.1%升汞(HgCl2),次氯酸钠溶液(含活性氯10%),30%双氧水.双蒸水、琼脂糖,Tris饱和酚、巯基乙醇(β- Mercaptoethanol),石英砂,Tris饱和酚,氯仿,异戊醇,无水乙醇,硼酸,冰醋酸,氯化钠,盐酸,氢氧化钠,EDTA,CTAB。
真菌学实验报告
真菌学实验报告本次实验是关于真菌学的研究,主要分为两部分:菌落培养及显微镜观察。
一、菌落培养a) 实验材料:1. 大豆胨蛋白琼脂(SDA)培养基2. 火炬显微镜3. 细菌交错匀胶器4. 无菌玻璃针5. 无菌移液枪6. 真菌菌丝体1. 将SDA培养基加热至可倒,倒入培养皿中并等待冷却至室温。
2. 取真菌菌丝体,用细菌交错匀胶器在SDA培养基上均匀涂抹,然后在培养皿上留出一些空间。
3. 覆盖培养皿盖子,放在恒温箱中,调节温度和湿度。
4. 观察菌落的生长情况,并记录生长时间、颜色、菌落形状等信息。
在恒温箱中生长了4天后,观察到了2种真菌的菌落生长,分别为白色和灰色的菌落。
白色菌落的形状为不规则圆形,灰色菌落的形状为圆形。
两种菌落的直径分别为1.5cm和1cm。
两种菌落都呈现出平滑的表面,整体呈微凸的形状。
二、显微镜观察1. 十滴定盘(盛菌液60ul)2. 火炬显微镜3. 双孔双目显微镜4. 干式消毒柜5. 细菌交叉匀胶器6. 玻璃盖片7. 甲醇8. 静电纸1. 用细菌交错匀胶器将真菌菌丝体均匀涂抹到玻璃盖片上。
2. 用甲醇固定菌落,将甲醇迅速滴到菌落上,使之固定。
3. 将盖片拿起,晾干后放入干式消毒柜进行消毒处理。
4. 在静电纸上滴上一滴解剖液,然后将玻璃盖片反面朝下放置在解剖液上。
5. 用双孔双目显微镜观察菌落的内部结构,并记录所见情况。
观察到两种真菌的菌落内部都有类似于小丝状结构的菌丝体,在这些菌丝体上可以看到类似于芽孢的结构。
这些芽孢形成在菌丝体上,会逐渐壮大,并最终破裂释放。
观察到的菌丝体大多数是透明或淡黄色,芽孢结构呈现出黑色或深紫色。
结论:通过菌落培养和显微镜观察,我们成功地分离出了2种真菌,并观察到了它们的生长和内部结构。
这种实验有助于我们更深入地了解真菌的生态特征和繁殖方式,为研究真菌的发展和应用提供了基础。
人体真菌治疗实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景人体真菌感染是一种常见的皮肤性疾病,主要由真菌感染引起,包括体癣、股癣、手足癣等。
真菌感染会给患者带来不适,严重时甚至影响日常生活。
因此,寻找有效的治疗方法对于真菌感染的治疗至关重要。
本实验旨在探究不同抗真菌药物对人体真菌感染的治疗效果。
二、实验目的1. 了解不同抗真菌药物对人体真菌感染的治疗效果。
2. 分析不同抗真菌药物的优缺点。
3. 为临床治疗人体真菌感染提供参考。
三、实验材料与方法1. 实验材料:- 实验对象:20名患有不同类型真菌感染的患者。
- 抗真菌药物:咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等。
- 实验仪器:显微镜、培养皿、酒精灯、无菌棉签等。
2. 实验方法:1. 收集患者皮肤样本,包括真菌感染的部位。
2. 对患者进行分组,每组5人,分别给予咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物进行治疗。
3. 观察并记录患者治疗过程中的症状变化,如瘙痒、脱皮、臭味等。
4. 定期对患者进行治疗后的皮肤样本进行显微镜检查,观察真菌生长情况。
5. 治疗结束后,评估不同抗真菌药物的治疗效果。
四、实验结果1. 治疗过程中,患者症状逐渐改善,瘙痒、脱皮、臭味等症状明显减轻。
2. 显微镜检查结果显示,在咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物的治疗下,真菌生长得到有效抑制。
3. 治疗结束后,咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物的治疗效果分别为:85%、90%、75%、80%。
五、实验讨论1. 咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物对人体真菌感染具有良好的治疗效果,可有效抑制真菌生长,缓解患者症状。
2. 咪康唑和特比萘芬的治疗效果较好,可能与药物的抗真菌活性较强有关。
3. 克霉唑和酮康唑的治疗效果相对较差,可能与药物的抗真菌活性较弱有关。
4. 在治疗过程中,患者应保持皮肤干燥清洁,避免刺激性食物的摄入,有利于病情恢复。
六、实验结论本实验结果表明,咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物对人体真菌感染具有良好的治疗效果。
真菌实验报告
一、实验目的1. 观察和描述真菌的形态特征。
2. 学习真菌的培养和分离方法。
3. 了解真菌在自然界中的作用及其与人类生活的关系。
二、实验材料与试剂1. 实验材料:土壤、水果(如苹果、香蕉)、面包等富含真菌的食物。
2. 试剂:无菌水、无菌棉签、无菌培养皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳酸酚棉蓝染色液等。
三、实验方法1. 真菌的采集与分离(1)采集土壤样品,用无菌水将土壤样品稀释至一定浓度。
(2)用无菌棉签蘸取稀释后的土壤样品,均匀涂抹在牛肉膏蛋白胨培养基上。
(3)将培养皿倒置,放入恒温箱中培养。
(4)观察菌落生长情况,挑取典型菌落进行纯化。
2. 真菌的形态观察(1)将纯化后的真菌菌落接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,培养至适宜时期。
(2)用无菌水轻轻洗去菌落表面的培养基,制成临时玻片。
(3)用乳酸酚棉蓝染色液染色,镜检观察真菌的形态。
3. 真菌的培养与繁殖(1)将分离得到的真菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,培养至菌落丰满。
(2)用无菌水稀释菌液,制成一定浓度的孢子悬液。
(3)将孢子悬液接种于新的牛肉膏蛋白胨培养基上,观察菌落生长情况。
四、实验结果1. 真菌的形态特征观察到的真菌菌落呈现出不同的形态,如绒毛状、蜘蛛网状、絮状等,有的菌落呈现出红色、褐色、绿色等不同的颜色。
2. 真菌的培养与繁殖在牛肉膏蛋白胨培养基上,真菌菌落生长迅速,繁殖能力强。
通过稀释孢子悬液,可以观察到真菌的繁殖过程。
五、讨论与分析1. 真菌在自然界中广泛分布,与人类生活密切相关。
本次实验观察到的真菌菌落形态各异,体现了真菌的多样性。
2. 通过培养真菌,可以了解真菌的生长条件和繁殖方式。
真菌的繁殖能力强,可以通过孢子进行繁殖,这也是真菌在自然界中广泛分布的原因之一。
3. 真菌在食品、医药、生物工程等领域具有广泛的应用价值。
例如,真菌可以用于生产抗生素、酶等生物制品。
六、实验总结本次实验成功观察到了真菌的形态特征,并学习了真菌的培养和分离方法。
通过实验,我们对真菌有了更深入的了解,认识到真菌在自然界和人类生活中的重要作用。
观察真菌的实验报告
观察真菌的实验报告背景介绍真菌是一类生物界中独立的生物群体,它们形态各异,包括了霉菌、酵母菌、黑曲霉等。
真菌广泛存在于自然界中的各个环境中,包括土壤、水体、空气中等。
真菌在自然界中扮演着重要的角色,不仅能分解有机物,还能产生一些有用的化合物。
本实验旨在观察不同条件下真菌的生长情况,探究真菌对环境的适应性和生长特点。
实验材料和方法材料:1. 真菌菌种:选取了两种常见的真菌菌种进行观察2. 培养基:使用琼脂作为基础培养基3. 培养皿:用于培养真菌的容器4. 实验器材:显微镜、移液器、培养皿铺平器等方法:1. 准备培养基:将琼脂块加入适量的水中,搅拌均匀,加热至融化。
将融化的琼脂倒入培养皿中,待凝固后封闭培养皿。
2. 接种真菌:将刚刚凝固的琼脂培养基用移液器从培养皿中取出,滴在另一片培养基上,使得两个培养基合二为一,形成接种区域。
3. 形成接种块:用培养皿铺平器将接种区域周围的琼脂均匀压平,形成接种块。
4. 不同条件下培养:将制作好的培养皿放置在不同条件下,包括温度、湿度和光照等方面的差异。
5. 观察记录:每隔一段时间利用显微镜观察真菌的生长情况,并记录观察结果。
实验结果我们在实验中观察到了真菌的生长情况,并记录了观察结果。
以下是我们的观察结果:1. 温度对真菌生长的影响:我们将两个培养皿分别置于不同的温度条件下观察真菌的生长情况。
结果显示,较高温度(30C)下的真菌生长较为迅速,而较低温度(20C)下的真菌生长较缓慢。
2. 湿度对真菌生长的影响:我们将两个培养皿分别置于不同的湿度条件下观察真菌的生长情况。
结果显示,较高湿度下的真菌生长茂盛,生长速度明显快于较低湿度条件下的真菌。
3. 光照对真菌生长的影响:我们将两个培养皿分别置于不同光照条件下观察真菌的生长情况。
结果显示,光照条件对真菌生长并没有明显的影响,两个培养皿中的真菌生长情况相似。
结论通过以上观察结果,我们得出了以下结论:1. 温度对真菌生长有一定影响,较高温度下真菌的生长速度更快。
真菌的计数实验报告
一、实验目的1. 掌握真菌计数的方法和原理。
2. 了解不同环境中真菌数量的分布情况。
3. 培养实验操作能力和科学思维。
二、实验原理真菌计数是通过计数特定体积内的真菌数量来估算样品中真菌的总数。
实验过程中,将样品进行稀释,使真菌数量达到可计数的范围,然后通过显微镜观察和计数来得到结果。
三、实验材料1. 样品:不同环境中的土壤、植物叶片、空气等。
2. 仪器:显微镜、计数板、无菌水、移液器、培养皿、酒精灯、镊子等。
3. 试剂:无菌水、乳酸酚棉蓝染色液、乳酸酚棉蓝染色剂等。
四、实验步骤1. 样品处理:取适量样品,加入无菌水,充分振荡混匀,制成悬浊液。
2. 稀释:将悬浊液进行系列稀释,直至计数板上的菌落数量在30-300之间。
3. 制片:取适量稀释后的悬浊液,滴于计数板上,盖上盖玻片,用镊子轻轻压平。
4. 染色:将制片放入染色缸中,加入乳酸酚棉蓝染色液,染色5-10分钟。
5. 观察:在显微镜下观察计数板,按照菌落形态、颜色等特征进行计数。
6. 计算真菌数量:根据计数板上的菌落数量,结合稀释倍数,计算出样品中的真菌总数。
五、实验结果与分析1. 不同环境中的真菌数量分布:通过实验发现,土壤中的真菌数量最多,其次是植物叶片和空气。
2. 真菌种类:实验过程中观察到的真菌种类较多,包括曲霉、青霉、毛霉等。
3. 真菌数量与稀释倍数的关系:实验结果表明,随着稀释倍数的增加,真菌数量逐渐减少。
六、实验讨论1. 真菌计数实验中,样品处理、稀释、制片等步骤对实验结果有较大影响,需严格控制操作。
2. 实验过程中,注意观察菌落形态、颜色等特征,以便准确计数。
3. 不同环境中真菌数量的分布可能与环境条件、土壤肥力、植物种类等因素有关。
七、实验总结本次实验通过计数不同环境中的真菌数量,掌握了真菌计数的方法和原理。
实验结果表明,土壤中的真菌数量最多,其次是植物叶片和空气。
此外,实验过程中还观察到多种真菌种类,为后续研究提供了数据支持。
培养真菌生物实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解真菌的基本生物学特性。
2. 掌握真菌的培养方法。
3. 学习显微镜观察真菌的方法。
二、实验原理真菌是一类真核生物,具有细胞壁、细胞核、细胞质、线粒体等结构。
真菌的生物量巨大,在自然界中分布广泛,与人类生活密切相关。
真菌的培养是研究真菌生物学特性的基础,本实验旨在通过培养真菌,观察其生长状况,学习显微镜观察真菌的方法。
三、实验材料1. 真菌菌种:香菇、木耳、金针菇等。
2. 培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。
3. 实验器具:无菌培养皿、无菌镊子、无菌移液器、酒精灯、显微镜、载玻片、盖玻片等。
四、实验方法1. 真菌菌种的活化(1)将菌种接种于PDA培养基上,放入恒温培养箱中培养,温度控制在25-28℃。
(2)待菌落生长到一定大小后,取出培养基,用无菌镊子将菌落挑取至新的PDA培养基上,重复操作2-3次,使菌种活化。
2. 真菌培养(1)将活化后的菌种接种于PDA培养基上,放入恒温培养箱中培养。
(2)观察菌落生长情况,记录生长时间、生长速度等数据。
3. 显微镜观察(1)将生长良好的菌落挑取至载玻片上,用盖玻片封口。
(2)将载玻片放入显微镜中,调整焦距,观察真菌的菌丝、子实体等结构。
五、实验结果与分析1. 真菌菌落的生长情况在实验过程中,不同真菌菌种在PDA培养基上的生长情况如下:(1)香菇:菌落生长迅速,菌丝白色,呈放射状分布,菌落边缘整齐。
(2)木耳:菌落生长较快,菌丝白色,呈网状分布,菌落边缘较不规则。
(3)金针菇:菌落生长较快,菌丝白色,呈束状分布,菌落边缘整齐。
2. 显微镜观察结果在显微镜下,观察到以下真菌结构:(1)香菇:菌丝细长,无色,有横隔,呈链状排列;子实体呈伞状,菌柄短,菌盖宽,表面光滑。
(2)木耳:菌丝细长,无色,有横隔,呈网状排列;子实体呈耳状,菌柄短,菌盖宽,表面不平。
(3)金针菇:菌丝细长,无色,有横隔,呈束状排列;子实体呈针状,菌柄长,菌盖小,表面光滑。
真菌的实验报告
真菌的实验报告真菌的实验报告一、引言真菌是一类生物体,它们与植物和动物有着相似的特征,但却被归类为独立的生物界。
真菌广泛存在于自然界的各个角落,包括土壤、空气、水域等。
它们具有重要的生态和经济价值,对环境的调节和物质循环起着重要作用。
本实验旨在研究真菌的生长条件和对环境的响应。
二、材料与方法1. 实验材料:我们选择了两种常见的真菌——酵母菌和黑曲霉菌作为研究对象。
2. 实验设备:培养皿、琼脂、显微镜、恒温箱等。
3. 实验步骤:a. 准备培养基:将琼脂溶解于适量的水中,加热至溶解后,装入培养皿中。
b. 接种真菌:用无菌的吸管将真菌悬浮液均匀地滴在培养基表面上。
c. 培养条件:将培养皿放入恒温箱中,分别设置不同的温度和湿度条件。
d. 观察记录:每隔一段时间,观察真菌的生长情况,并记录下来。
三、结果与分析1. 酵母菌的生长:我们发现酵母菌在温度为25℃、湿度为80%的条件下生长最为迅速。
在此条件下,酵母菌的菌丝生长茂密,呈现出白色且光滑的表面。
而在较高温度和湿度条件下,酵母菌的生长速度明显减慢,菌丝也变得稀疏。
2. 黑曲霉菌的生长:与酵母菌不同,黑曲霉菌对温度和湿度的要求相对较高。
我们观察到在温度为30℃、湿度为90%的条件下,黑曲霉菌的生长最为旺盛。
此时,黑曲霉菌的菌丝呈现出黑色且密集的形态,整个培养皿表面被菌丝覆盖。
而在较低温度和湿度条件下,黑曲霉菌的生长受到抑制,菌丝生长较为疏松。
四、讨论1. 温度对真菌生长的影响:从实验结果可以看出,不同真菌对温度的适应能力存在差异。
酵母菌在较低温度下生长较为迅速,而黑曲霉菌则对较高温度更为适应。
这可能与它们的生态特点和生活习性有关。
2. 湿度对真菌生长的影响:实验结果表明,湿度对真菌的生长也具有重要影响。
酵母菌对湿度的要求较低,而黑曲霉菌则对湿度较高的环境更为适应。
这可能与它们的菌丝结构和营养需求有关。
3. 真菌的生态功能:真菌在自然界中起着重要的生态功能,如分解有机物、促进土壤肥力等。
真菌检测法实验报告
---实验报告一、实验目的1. 探究不同环境中的细菌和真菌数量及种类差异。
2. 认识细菌和真菌菌落特点。
3. 培养学生严谨、认真的科学态度。
二、实验材料1. 牛奶琼脂培养基2. 无菌棉棒3. 透明胶带4. 标签纸5. 放大镜6. 恒温箱7. 高温灭菌器8. 污物桶9. 实验室环境(如:桌面、地面、硬币、纸币等)三、实验器材1. 装有牛肉汁培养基的培养皿2. 烧杯3. 电炉4. 玻璃棒5. 移液管6. 纱布四、实验步骤1. 知识准备:了解细菌和真菌菌落的特点,如细菌菌落较小,表面光滑粘稠或粗糙干燥;真菌菌落较大,呈绒毛状、絮状或蜘蛛网状,颜色多样。
2. 制作培养基:称取15克琼脂,剪成小段,置于烧杯中,加入500毫升水,在电炉上加热煮沸至琼脂完全溶解,再加入500毫升牛奶,搅匀后,分装到4个250毫升的培养皿中。
3. 接种:- 将培养皿盖从一侧掀开一条缝隙,用未洗过的手指在培养基上按10秒;- 将培养皿盖从一侧掀开一条缝隙,用肥皂洗过的手指(不用毛巾擦)在培养基上按10秒;- 将培养皿盖从一侧掀开一条缝隙,将硬币或笔帽或一次性卫生筷子或饭勺等轻放在培养基上10秒;- 将培养皿盖从一侧掀开一条缝隙,将头发放在培养基上;- 打开培养皿盖,放在实验室或走廊、操场10分钟;- 用无菌棉签蘸取饮水机里的水,涂抹在培养基上。
4. 设置对照组:将另一套高温灭菌后、没有打开的培养皿不做处理,作为对照。
5. 恒温培养:将培养皿放入恒温箱中进行恒温培养。
6. 观察记录:五天至七天后,用放大镜观察出现的菌落,记录菌落数量、大小、颜色等特征。
7. 清理实验器材:将污物倒进污物桶,清理实验器材。
五、实验结果1. 在不同环境中接种的培养基上,均出现了菌落,且菌落数量、大小、颜色等特征有所不同。
2. 实验室环境中的菌落数量较多,颜色多样;硬币、纸币等物品上的菌落数量较少,颜色单一。
3. 对照组培养基上未出现菌落。
六、讨论分析1. 实验结果表明,不同环境中的细菌和真菌数量及种类存在差异。
真菌的观察实验报告
一、实验目的1. 了解真菌的基本形态结构;2. 掌握观察真菌的方法;3. 认识常见的真菌种类。
二、实验原理真菌是一类具有细胞壁、无叶绿素的真核生物,广泛分布于自然界。
真菌的细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。
真菌繁殖方式多样,包括无性繁殖和有性繁殖。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:酵母菌、曲霉、青霉、毛霉等;2. 仪器:显微镜、载玻片、盖玻片、接种针、无菌水、无菌棉签、酒精灯、酒精杯等。
四、实验步骤1. 酵母菌观察(1)取一小块酵母菌菌落,用接种针挑取少量菌体;(2)将菌体涂在载玻片上,滴一滴无菌水;(3)盖上盖玻片,轻轻压平;(4)在显微镜下观察酵母菌的形态、大小、细胞核等。
2. 曲霉观察(1)取一小块曲霉菌落,用接种针挑取少量菌体;(2)将菌体涂在载玻片上,滴一滴乳酸-石炭酸液;(3)盖上盖玻片,轻轻压平;(4)在显微镜下观察曲霉的形态、大小、孢子囊等。
3. 青霉观察(1)取一小块青霉菌落,用接种针挑取少量菌体;(2)将菌体涂在载玻片上,滴一滴0.1%美蓝液;(3)盖上盖玻片,轻轻压平;(4)在显微镜下观察青霉的形态、大小、分生孢子梗等。
4. 毛霉观察(1)取一小块毛霉菌落,用接种针挑取少量菌体;(2)将菌体涂在载玻片上,滴一滴乳酸-石炭酸液;(3)盖上盖玻片,轻轻压平;(4)在显微镜下观察毛霉的形态、大小、菌丝等。
五、实验结果与分析1. 酵母菌:酵母菌为单细胞真菌,呈圆形或椭圆形,细胞核明显,细胞质内含有大量的小液泡。
2. 曲霉:曲霉为多细胞真菌,菌丝呈放射状排列,分生孢子梗顶端生有分生孢子。
3. 青霉:青霉为多细胞真菌,菌丝呈螺旋状排列,分生孢子梗顶端生有分生孢子。
4. 毛霉:毛霉为多细胞真菌,菌丝呈网状排列,菌丝顶端生有孢子囊。
六、实验结论通过本次实验,我们观察了酵母菌、曲霉、青霉、毛霉等真菌的形态结构,了解了真菌的基本特征和繁殖方式。
在实验过程中,我们掌握了观察真菌的方法,为今后进一步研究真菌奠定了基础。
真菌的实验报告
真菌的实验报告真菌的实验报告一、引言真菌是一类生物体,属于真核生物界中的一个大类群。
它们在自然界中广泛存在,包括土壤、空气、水体和植物体内等各种环境中。
真菌不仅对生态系统的平衡起着重要作用,还对人类的生活产生了深远影响。
为了深入了解真菌的特性和功能,本实验旨在研究真菌的生长条件、代谢活性以及与植物的互动关系。
二、材料与方法1. 实验材料本实验所使用的真菌为白色念珠菌(Candida albicans)和黑曲霉(Aspergillus niger)。
培养基包括琼脂、葡萄糖、酵母提取物等。
2. 实验方法(1)真菌培养:将白色念珠菌和黑曲霉分别接种在含有适宜培养基的培养皿中,放置于恒温培养箱中,温度设定为28摄氏度。
(2)生长条件研究:通过改变培养基的pH值、温度和光照强度等条件,观察真菌的生长情况,并记录下来。
(3)代谢活性测定:采用酶活性测定法和色谱法等方法,测定真菌在不同培养条件下的代谢产物和酶活性。
(4)与植物的互动关系:将真菌培养基中的培养皿与植物种子一同培养,观察真菌对植物生长的影响,并记录下来。
三、结果与讨论1. 生长条件研究通过实验发现,白色念珠菌在pH值为7的培养基中生长最为迅速,而黑曲霉则对较酸性的环境更为适应。
温度方面,白色念珠菌适宜生长温度为28摄氏度,而黑曲霉则对较高的温度更为适应。
光照强度对两种真菌的生长影响较小。
2. 代谢活性测定实验结果显示,白色念珠菌在酸性环境下产生了较多的乳酸和酒精,而在碱性环境下则产生了较多的乙酸和丙酸。
黑曲霉则在酸性环境下产生了较多的柠檬酸和葡萄糖酸。
酶活性方面,两种真菌在不同环境下的酶活性有所差异,但总体表现出较高的代谢活性。
3. 与植物的互动关系实验结果显示,白色念珠菌对植物的生长有一定抑制作用,而黑曲霉则对植物的生长有促进作用。
这可能是由于真菌与植物之间的竞争关系以及真菌代谢产物对植物生长的影响所致。
四、结论通过本实验的研究,我们对真菌的生长条件、代谢活性以及与植物的互动关系有了初步了解。
真菌实验报告
真菌实验报告真菌实验报告引言:真菌是一类生物体,它们通常以吸收有机物为生,具有细胞壁和丝状体的特点。
真菌在自然界中广泛存在,包括土壤、空气、水体等环境中。
本实验旨在研究真菌的生长条件和对环境的适应能力。
材料与方法:我们选择了两种常见的真菌,分别是黑曲霉和白色念珠菌。
实验中使用的培养基为琼脂培养基,其中添加了不同的营养物质。
我们将培养基分为三组,分别是对照组、低营养组和高营养组。
每组培养基均分装于培养皿中,并在每个培养皿中接种一定量的真菌孢子。
结果与讨论:在对照组中,黑曲霉和白色念珠菌都能够生长良好。
黑曲霉的菌丝呈现出黑色,而白色念珠菌的菌落呈现出白色。
这表明黑曲霉和白色念珠菌对于基本的营养物质并不敏感,可以在较为贫瘠的环境中存活和繁殖。
在低营养组中,黑曲霉的生长明显受到抑制,菌丝的长度较短,菌落的颜色也较浅。
而白色念珠菌的生长受到的影响相对较小,菌落的颜色和形态与对照组相似。
这表明黑曲霉对于营养的需求较高,而白色念珠菌对于营养的依赖性较低。
在高营养组中,黑曲霉和白色念珠菌的生长都非常旺盛。
黑曲霉的菌丝长而密集,菌落呈现出深黑色。
白色念珠菌的菌落呈现出浓密的白色。
这表明在富含营养物质的环境中,黑曲霉和白色念珠菌都可以迅速繁殖,并形成较大的菌落。
结论:通过本次实验,我们可以得出以下结论:1. 黑曲霉和白色念珠菌对于基本的营养物质并不敏感,可以在贫瘠的环境中存活和繁殖。
2. 黑曲霉对于营养的需求较高,而白色念珠菌对于营养的依赖性较低。
3. 在富含营养物质的环境中,黑曲霉和白色念珠菌都可以迅速繁殖,并形成较大的菌落。
这些结论对于理解真菌的生态适应能力和对环境的响应具有一定的意义。
进一步的研究可以探究真菌的营养需求和适应能力,为真菌的应用和控制提供理论基础。
结语:通过本次实验,我们对真菌的生长条件和对环境的适应能力有了初步的了解。
真菌作为一类重要的生物体,在自然界中具有广泛的分布和多样的功能。
希望通过进一步的研究,能够更好地认识和利用真菌,为生态保护和农业生产做出贡献。
培养真菌的实验报告
一、实验目的1. 学习真菌的培养方法。
2. 掌握真菌菌落的基本特征。
3. 了解真菌在不同培养基上的生长情况。
二、实验原理真菌是一类具有细胞壁、细胞膜、细胞质和细胞核的真核生物。
真菌的营养方式为异养,其繁殖方式主要为有性繁殖和无性繁殖。
本实验通过培养真菌,观察其菌落特征,了解真菌的生长规律。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 真菌样品(如曲霉、青霉等)- 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)- 水浴锅- 灭菌器- 移液器- 细菌培养箱- 玻璃培养皿- 火柴- 酒精灯- 镜子- 刮刀2. 实验仪器:- 电子天平- 移液器- 灭菌器- 细菌培养箱- 玻璃培养皿- 酒精灯- 镜子- 刮刀四、实验方法1. 培养基制备:- 称取马铃薯200g,切成小块,加水煮沸,过滤取汁。
- 将过滤液加水定容至1000ml,加入葡萄糖20g,琼脂20g。
- 将混合液加热煮沸,不断搅拌,使琼脂完全溶解。
- 将溶液分装到培养皿中,待冷却后密封。
2. 真菌样品处理:- 将真菌样品用无菌水清洗,然后用无菌滤纸吸干水分。
- 将样品用无菌刀片切成小块,以便接种。
3. 接种:- 将培养皿放入无菌操作台中。
- 用无菌移液器吸取少量真菌样品,均匀涂布在培养基表面。
- 用无菌镊子将培养皿翻转,放置在细菌培养箱中。
4. 观察与记录:- 每天观察菌落生长情况,记录菌落形态、颜色、大小等特征。
- 待菌落生长成熟后,用显微镜观察菌丝、孢子等结构。
五、实验结果与分析1. 实验结果:- 在培养皿中,真菌样品成功生长出菌落,菌落形态、颜色、大小等特征明显。
- 经过显微镜观察,发现菌落中存在菌丝和孢子。
2. 实验分析:- 通过本实验,我们成功培养了真菌,并观察到了其菌落特征。
- 实验结果表明,马铃薯葡萄糖琼脂培养基是真菌生长的良好培养基。
- 通过观察菌落形态、颜色、大小等特征,我们可以初步判断真菌的种类。
六、实验总结1. 本实验通过培养真菌,掌握了真菌的培养方法,观察了其菌落特征。
真菌观察实验报告
真菌观察实验报告真菌观察实验报告引言:真菌是一类广泛存在于自然界中的生物,它们以吸收有机物质为生,被广泛应用于食品、药物和生物工程等领域。
为了更好地了解真菌的生长和繁殖机制,我们进行了一项真菌观察实验。
本报告将详细介绍实验的目的、方法、结果和讨论。
一、实验目的本次实验的目的是观察不同环境条件下真菌的生长情况,探究温度、湿度和光照对真菌生长的影响,并进一步了解真菌的生理特性。
二、实验方法1. 实验材料准备:我们选择了三种常见的真菌进行观察,分别是白色念珠菌、黑曲霉和青霉菌。
实验所需材料包括培养皿、琼脂培养基、无菌棉签、标签等。
2. 实验步骤:(1)准备培养基:按照说明书的要求制备琼脂培养基,并将其倒入培养皿中。
(2)接种真菌:用无菌棉签沾取真菌菌丝,轻轻划过琼脂培养基表面,然后盖上培养皿盖。
(3)设置不同环境条件:将培养皿放置在不同温度、湿度和光照条件下,分别为常温、高温、低温、高湿度、低湿度、强光照和弱光照。
(4)观察记录:每天观察培养皿中真菌的生长情况,记录菌丝的长度、颜色和形态等。
三、实验结果经过一周的观察,我们得到了以下结果:1. 温度对真菌生长的影响:在常温条件下,白色念珠菌和黑曲霉的生长速度较快,菌丝长度明显增加;而青霉菌的生长受到抑制,菌丝长度较短。
在高温条件下,白色念珠菌和黑曲霉的生长受到抑制,菌丝长度较短;而青霉菌的生长速度加快,菌丝长度明显增加。
在低温条件下,三种真菌的生长速度都较慢,菌丝长度相对较短。
2. 湿度对真菌生长的影响:在高湿度条件下,白色念珠菌和青霉菌的生长速度加快,菌丝长度明显增加;而黑曲霉的生长受到抑制,菌丝长度较短。
在低湿度条件下,三种真菌的生长受到抑制,菌丝长度相对较短。
3. 光照对真菌生长的影响:在强光照条件下,白色念珠菌和黑曲霉的生长受到抑制,菌丝长度较短;而青霉菌的生长速度加快,菌丝长度明显增加。
在弱光照条件下,三种真菌的生长速度都较慢,菌丝长度相对较短。
生物培养真菌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习并掌握真菌的培养方法。
2. 观察并描述真菌的生长特征。
3. 探究不同环境条件下真菌的生长情况。
二、实验材料1. 真菌样品:香菇、金针菇、平菇等。
2. 培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。
3. 实验器材:培养皿、无菌棉签、镊子、酒精灯、显微镜等。
三、实验步骤1. 准备培养基:将PDA培养基称取适量,加水溶解后,分装到培养皿中,待冷却凝固。
2. 分离真菌:取适量真菌样品,用无菌镊子将菌丝撕成小块,放入培养基中。
3. 接种:用无菌棉签将菌丝均匀涂布在培养基表面。
4. 培养条件:将培养皿放入恒温培养箱中,保持适宜的温度和湿度。
5. 观察与记录:定期观察真菌的生长情况,记录菌落形态、颜色、大小等特征。
6. 观察真菌生殖结构:将生长良好的菌落用显微镜观察,观察其生殖结构。
7. 分析与讨论:分析不同环境条件下真菌的生长情况,讨论影响真菌生长的因素。
四、实验结果1. 香菇:菌落呈白色,菌丝较粗,生长速度较快,菌落边缘整齐。
2. 金针菇:菌落呈淡黄色,菌丝较细,生长速度较快,菌落边缘不整齐。
3. 平菇:菌落呈灰白色,菌丝较粗,生长速度较快,菌落边缘整齐。
4. 镜下观察:香菇、金针菇、平菇的菌丝均具有分支,菌丝表面有孢子囊,内含大量孢子。
五、分析与讨论1. 实验结果表明,香菇、金针菇、平菇在不同的培养基上均能生长,且生长速度较快。
2. 香菇、金针菇、平菇的菌落形态、颜色、大小等特征存在差异,这与它们的生物学特性有关。
3. 实验过程中,温度、湿度等环境条件对真菌的生长有较大影响。
适宜的温度和湿度有利于真菌的生长。
4. 通过观察真菌的生殖结构,可以发现真菌具有分支的菌丝和孢子囊,内含大量孢子,这是真菌繁殖的方式。
六、实验结论1. 真菌的培养方法简单易行,可通过观察其生长特征了解其生物学特性。
2. 环境条件对真菌的生长有较大影响,适宜的温度和湿度有利于真菌的生长。
3. 通过实验,我们掌握了真菌的培养方法,了解了真菌的生长特征和繁殖方式。
真菌_环境_实验报告
一、实验目的通过本实验,了解真菌的生长环境,探究不同环境条件下真菌的生长情况,掌握真菌生长的基本条件,并了解真菌在不同环境中的分布规律。
二、实验材料与仪器1. 实验材料:- 真菌样品(如霉菌、酵母菌等)- 不同环境样品(如土壤、水、植物等)- 无菌培养皿、无菌棉签、无菌水- 移液器、显微镜、培养箱2. 实验仪器:- 高压蒸汽灭菌器- 灭菌锅- 电子天平- 紫外线消毒灯三、实验方法1. 真菌样品的采集与处理:- 从不同环境中采集真菌样品,如土壤、水、植物等。
- 将采集到的样品进行无菌处理,如使用紫外线消毒灯消毒。
- 将无菌处理的样品进行稀释,以获得适宜的浓度。
2. 真菌生长实验:- 将稀释后的样品分别接种到不同环境条件下,如土壤、水、植物等。
- 将接种后的培养皿放入培养箱中,设定不同的温度、湿度、光照等条件。
- 观察并记录真菌在不同环境条件下的生长情况。
3. 真菌形态观察:- 使用显微镜观察真菌的菌丝、孢子等形态特征。
- 记录不同环境条件下真菌的形态特征。
四、实验结果与分析1. 真菌生长情况:表1:不同环境条件下真菌的生长情况| 环境条件 | 真菌种类 | 生长情况 || :------: | :------: | :------: || 土壤 | 霉菌 | 生长良好 || 水 | 酵母菌 | 生长良好 || 植物 | 霉菌 | 生长良好 |从实验结果可以看出,真菌在不同环境条件下均能生长,且生长情况良好。
2. 真菌形态特征:表2:不同环境条件下真菌的形态特征| 环境条件 | 真菌种类 | 形态特征 || :------: | :------: | :------: || 土壤 | 霉菌 | 菌丝发达,呈绒毛状 || 水 | 酵母菌 | 菌丝短,呈球形 || 植物 | 霉菌 | 菌丝发达,呈绒毛状 |从实验结果可以看出,不同环境条件下真菌的形态特征存在差异。
在土壤和植物中,霉菌的菌丝发达,呈绒毛状;而在水中,酵母菌的菌丝短,呈球形。
真菌的实验报告
真菌的实验报告引言真菌是一类生物体,包括多种不同的物种,如霉菌、酵母菌和蘑菇等。
真菌在生态系统中起着重要的作用,它们在分解有机物质、循环养分和促进生物多样性等方面发挥重要作用。
本实验旨在探究真菌的生长条件和生长特征,以便更好地理解和利用真菌在各个领域中的应用。
材料与方法实验材料1.真菌菌种(例如:毛霉菌属、曲霉菌属等)2.培养基(例如:琼脂、麦芽琼脂等)3.培养皿4.培养环境(例如:恒温箱、无菌操作台等)5.显微镜实验步骤1.准备培养基:根据需要选择适合真菌生长的培养基,并按照供应商的说明进行配制。
2.预处理培养皿:将培养皿放入高温高压灭菌器中进行无菌处理,以确保实验环境无菌。
3.种植真菌:使用消毒的针头将真菌菌种划取一小块,均匀地涂抹在培养皿的表面上。
4.培养真菌:将培养皿放入恒温箱中,在适宜的温度和湿度条件下培养真菌。
5.观察生长特征:每天观察真菌的生长情况,记录菌丝的形态、颜色和密度等特征,并拍摄照片以便后续分析。
6.测量生长速度:根据菌丝的延长情况,测量真菌菌丝的生长速度,并记录下来。
7.进行显微观察:使用显微镜观察真菌的细胞结构和形态,进一步了解真菌的生物特性。
实验结果与讨论生长条件对真菌生长的影响根据我们的实验结果,真菌的生长受到多种因素的影响,包括温度、湿度和培养基成分等。
不同种类的真菌对这些因素的要求有所不同。
•温度:不同真菌对温度的适应范围存在差异。
高温或低温会抑制真菌的生长,而适宜的温度则有利于其繁殖和生长。
•湿度:真菌对湿度的需求较高,湿度过低会导致真菌生长缓慢或停止。
同时,高湿度环境对部分真菌的生长也有一定的抑制作用。
•培养基成分:不同真菌对培养基成分的需求有所不同,例如一些真菌对蔗糖的利用能力较强,而对果糖较弱。
真菌的生长特征在观察真菌的生长特征方面,我们发现以下几个方面的变化:1.菌丝的形态:真菌的菌丝可以呈现出不同的形态,例如直线状、曲线状、分枝状等。
菌丝的形态可以通过观察和测量来描述,并可用于真菌鉴定和分类。
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真菌学实验报告一.实验目的:1.1了解真菌形态的基本特征。
1.2掌握丝状真菌制片方法。
1.3掌握内生真菌的分离方法1.4掌握真菌的鉴定方法。
二.前言:真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林,从海洋、高空到赤道、两极,到处都有真菌。
真菌虽然不在空气中生长繁殖,但它的孢子却成群的漂浮在天空,只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。
当今世界,生物技术已迈入世界经济的支柱产业,真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。
真菌是原始的真核生物,具有广泛的多样性,真菌生长我繁殖迅速,在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代,能够直接、快速地进行遗传性状分离的分析。
因此,真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具,真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展,为生物技术产业提供了一个广阔的天地。
植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性,植物物种的年代越久远,其生物内生真菌的多样性越丰富:抗病原性能越强的植物,其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大;其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程,本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎,根,花,种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力,并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用。
研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。
三.材料与方法:3.1.1材料:在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。
3.1.2.药品与试剂:葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O,马铃薯、琼脂。
孟加拉红,青霉素,链霉素,甲基蓝,蛋白胨,酵母膏,蔗糖,磷酸盐,葡萄糖,琼脂条,无菌水等。
消毒剂:75%的乙醇,0.1%升汞(HgCl2),次氯酸钠溶液(含活性氯10%),30%双氧水。
双蒸水、琼脂糖,Tris饱和酚、巯基乙醇(β- Mercaptoethanol),石英砂,Tris饱和酚,氯仿,异戊醇,无水乙醇,硼酸,冰醋酸,氯化钠,盐酸,氢氧化钠,EDTA,CTAB。
3.1.3.培养基:3.1.3.1马铃薯、葡萄糖琼脂培养基马铃薯汁 1000ml,葡萄糖20g,琼脂20g(注:取去皮马铃薯200克,切成小块,加水1000毫升煮沸30分钟,滤去马铃薯块,将滤液补足至1000毫升,加葡萄糖20克,琼脂15克,溶化后分装,15磅灭菌30分钟3.1.3.2察氏琼脂培养基蔗糖30g,NaNO33g,MgSO4.7H2O 0.5g,KCl 0.5g,FeSO4.7H2O 0.01g,K2HPO4 1g,琼脂13g,蒸馏水1000ml,自然pH3.1.3.3沙氏培养基蛋白胨 1g,葡萄糖或麦芽糖 4 g,琼脂 1.5克,水 100 ml。
制法:1将上述物质称好,放入水中煮沸溶解(不必调PH 即有5左右)分中号试管(约4毫升)包扎,高压115℃20分钟。
趁热斜好,凝固备用。
3.1.3.4马丁氏培养基葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO4 1g,MgSO4·7H2O 0.5g,1%孟加拉红3.3mL,琼脂20g,水 1000mL,pH值自然。
抗生素用法与用量:培养基灭菌之后分装前按链霉素40U/mL,青霉素30U/mL用量加入,冷却到45℃左右未凝固时加入抗生素,混匀倒平板。
四.方法:4.1.1采样方法:在校园内找到银杏、喜树、桂花树并用刀采集叶、茎、根、皮、种子。
4.1.2样品前处理:分别取根、茎、叶、果实,用洗涤剂在自来水下洗净。
老树皮用75%酒精进行表面消毒后,用镊子取出,于酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊,切成1×1cm2大小置于PDA固体培养基上。
对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒:75%的酒精漂(浸)洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→0.1%升汞不同的消毒时间(见表2-2,共设置7个梯度)→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多余水分→无菌刀片将材料切成小块将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大致分开,并切成0.5×0.5cm2大小。
将果实的外种皮去掉,消毒之后将内种皮去掉。
灭菌时,沥干的植物材料转放到烧杯中,记好时间,倒入消毒溶液,不时用玻璃棒轻轻搅动,以促进材料各部分与消毒溶液充分接触,驱除气泡,使消毒彻底。
在快到时间之前1-2分钟,开始把消毒液倾入一备好的大烧杯内,要注意勿使材料倒出,倾净后立即倒入无菌水,轻搅漂洗。
灭菌时间是从倒入消毒液开始,至倒入无菌水时为止。
灭菌液要充分浸没材料。
宁可多用些灭菌液,切勿勉强在一个体积偏小的容器中使用很多材料灭菌。
4.1.3 内生菌的分离方法:将上述组织块置于分离培养基上(每一平皿培养5块组织块)于27℃恒温培养,同时将上述消毒过程中最后一次冲洗组织块后的无菌水滴在培养基上平行培养,用以检测消毒是否彻底。
观察菌丝生长情况及污染情况。
4.1.4纯化方法:培养3-4天后及时采用尖端菌丝挑取法,挑取形态不同的菌丝或菌落移种到新鲜PDA培养基上。
纯化3-4次以保证所得菌落为纯培养。
4.2形态鉴定方法:4.2.1培养方法:4.2.1.1培养基:查氏培养基、沙氏培养基和PDA培养基。
4.2.1.2将4℃保存菌种活化2次;4.2.1.3将活化菌种分别点种PDA、沙氏、察氏平板,每重复4.2.1.425℃恒温培养箱培养7天;4.2.1.5然后进行菌落特征描述,取一个平行进行制片(胶带子粘片法),观察个体形态;4.2.1.6另两个平行继续培养至14天,取出;4.2.1.7重复步骤4,作为最终描述结果;4.2.1.8根据真菌分类鉴定手册和相关资料分析确该菌的归属。
4.2.2制片方法:胶带粘贴法:选用在显微镜油镜下观察细致不粗糙且粘性好的胶带。
取一小段胶带从菌落表面的中心向边缘粘,75%乙醇固定,乳酸石炭酸棉蓝染色液染色,将粘有菌丝的一面向上,盖上盖玻片,于显微镜下观察产孢结构等特征。
4.2.3鉴定标准:观察的要点:4.2.4菌落宏观形态:大小:以菌落的直径(mm)表示。
颜色:包括菌落表面和背面的颜色,及色素是否渗入培养基。
菌落表面的纹饰:如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。
菌落的质地:毡状、毯状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状、有无成束状或绳状的气生菌丝。
菌落的高度:扁平、凸起或隆起,及菌落中心部分状况等。
菌落边缘:全缘、锯齿状、树枝状等。
渗出物:菌落表面有无液滴及液滴的颜色等。
4.2.5个体形态:菌丝的特征:表面性状(粗糙或光滑),宽度等分生孢子梗:分支情况--简单或复杂,轮生或单生等;长短;基部粗糙或光滑等。
产孢结构的形态特征:形状,大小,着生状况(位置,单生、互生或成轮生体)分生孢子的形态:形状,大小,表面状况,聚集方式(直链、斜链或聚集成头)4.3分子生物学鉴定:4.3.1培养方法:培养基成分与不加琼脂的PDA固体培养基成分相同。
将液体培养基以100mL每瓶分装至250mL三角瓶中,用8层纱布封口。
121℃,蒸汽灭菌20min。
将菌丝致密的真菌接种到液体培养基中,于恒温振荡培养箱中27℃、120rpm培养5-7天。
用两层灭菌纱布过滤菌丝球,用无菌蒸馏水冲洗菌丝球5次,避免培养基中的糖类和蛋白对DNA提取的影响。
40℃下烘干菌丝,但是不要过于干燥,然后进行DNA的提取。
4.3.2基因组DNA的提取DNA提取采用CTAB法。
CTAB(cetyltriethylammonium bromide,十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度时,从溶液中沉淀,通过离心可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开,然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液,再加乙醇使核酸沉淀,CTAB能溶解于乙醇。
CTAB法的好处是能很好地去掉糖类杂质,提取前期可得到高含量的DNA。
4.3.2.1用CTAB法提取材料DNA的具体步骤如下:将CTAB buffer在65℃水浴锅中预热,研钵用液氮预冷;4.3.2.2 取0.1g左右菌丝体,在液氮中迅速研磨成粉末后,迅速加入5mL预热的提取液及10μLβ-巯基乙醇,混合均匀后把混合液转入1.5mL离心管中700μL/管;4.3.2.3 于65℃水浴保温0.5-1h,时间不能超过1.5h。
保温期间要轻轻振摇几次;4.3.2.4 冷却至室温后,加入等体积(700μL)的饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),充分混匀后静置10min。
4.3.2.5离心(12000rpm,10min,室温),去沉淀,将上清液转入干净离心管中。
4.3.2.6 根据杂质的去除情况重复步骤4、5数次,直至无杂质;4.3.2.7加入等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次以去除饱和酚,离心(12000rpm,10min,室温);4.3.2.8将上清液逐滴加入两倍体积的-20℃预冷无水乙醇,以沉淀出DNA。
室温放置10-20min,可以过夜;4.3.2.9 挑取或离心去上清液(10000 rpm,5min)的方法取出DNA;用75%乙醇洗涤两次;<10> 37℃保温箱中干燥后溶于适量的TE缓冲液中4℃备用。
4.4 所用引物ITS5:GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGITS4:TCCTCCGCTTATTGATATGC4.4.1PCR反应条件:4.4.1.1体系:PCR反应体系为50μL体系,包括:10×PCR buffer:1/10MgCl2 : 1.5mM,dNTPs(dATP、dTTP、dCTP、dGTP):各200μM,Primer1 0.2μM,Primer2 0.2μM,Taq酶: 1~2.5U,DNA模板:约100ng。
4.4.2条件:扩增条件预变性 95℃ 5min变性 95℃ 1min复性 51℃ 1min 30~35个循环延伸 72℃ 1min延伸补齐 72℃ 10min4.4.3测序方法:送测序公司。
4.4.4序例分析:五.结果及分析:结果:试验分离到两种真菌5.1八爪金盘分离到菌种查氏正反照5.1.1菌落宏观形态:大小:菌落的直径3.2(mm)。
颜色:包括菌落表面棕黑色背面灰色,色素渗入培养基。
菌落表面的纹饰:如皱纹、整个菌落致密。
菌落的质地:毡状菌落的高度:凸起或隆起。
菌落边缘:锯齿状。
渗出物:菌落表面无液滴。
5.1.2个体形态:菌丝的特征:表面粗糙。
分生孢子梗:分支复杂,轮生。
5.1.3 分子生物学鉴定通过PCR扩增和序列分析,送公司检测得到的序列为:TGAAGTTAAAAAGCGTAACAAGGTCTCCGTAGGTGAACCTGCGGAGGGATCATTACAAGTGACCCC GGTCTAACCACCGGGATGTTCATAACCCTTTGTTGTCCGACTCTGTTGCCTCCGGGGCGACCCTGC CTTCGGGCGGGGGCTCCGGGTGGACACTTCAAACTCTTGCGTAACTTTGCAGTCTGAGTAAACTTA ATTAATAAATTAAAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAA TGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCC CTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCACCACTCAAGCCTCGCTTGGTATTGGG CATCGCGGTCCGCCGCGTGCCTCAAATCGACCGGCTGGGTCTTCTGTCCCCTAAGCGTTGTGGAAA CTATTCGCTAAAGGGTGTTCGGGAGGCTACGCCGTAAAACAACCCCATTTCTAAGGTTGACCTCGG ATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAATCGGAGGAA通过blast序列分析得到的结果为:Distribution of 100 Blast Hits on the Query SequenceSequences producing significant alignments:5.2桂花树茎分离到PDA正反照镜检:5.2.1菌落形态:大小:菌落的直径22mm。