微生物遗传学
微生物遗传育种学
微生物遗传育种学一、名词解释（3*5）1、pcr:聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定dna片段的核酸合成技术。
2、操纵子：操纵子(operon)：原核生物能mRNA出来一条mrna的几个功能有关的结构基因及其上游的调控区域，称作一个操纵子（operon）。
3、启动子(promoter)：真核基因启动子是rna聚合酶结合点周围的一组转录控制元件，包括：至少一个转录起始点及一个以上的功能组件。
4、冈崎片段:冈崎片段就是由于解链方向与激活方向不一致，其中一股子链的激活，Gondrecourt母链求出足够多长度才已经开始分解成引物接着缩短。
这种不已连续的激活片段就是冈崎片段。
5、营养缺陷型：指某一菌株在诱变后丧失了合成某种营养成分（生长因子）的能力，使其在基本培养基上不能生长，必须加入相应物质才能生长的突变体。
6、准性生殖：就是一种类似有性生殖但比它更为完整的一种生殖方式。
可使同一种生物的两个相同来源（即为同种相同株）的体细胞经融合后，不通过有丝分裂而引致高频率的基因重组。
准性生殖常见于某些真菌，尤其就是半知菌中。
7、限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease):识别并切割特异的双链dna序列的一种内切核酸酶。
8、密码的自旋性：密码的自旋性就是多个密码子编码同一个氨基酸的现象。
9、转座子(transposons):转座子是可以从一个染色体位点转移至另一个位点的分散的重复序列。
转座子也包括含有两个反向重复序列的侧翼，内有转座酶基因，并含有抗生素耐药基因等其他基因。
10、微生物繁育：人为地使用物理、化学的因素，引致有机体产生遗传物质的突变，经选育成为新品种的途径。
二、是非题（2*5）三、选择题（3*5）1、限制性内乌酶的种类、辨识位点、功能、区别根据酶的亚单位组成、识别序列的种类和是否需要辅助因子，限制与修饰系统主要分成三大类。
ⅱ型酶所占到的比例最小，相对来说最简单，它们辨识回文等距序列，在回文序列内部或附近研磨dna。
《微生物遗传》课件
04
自然选育
利用自然变异选择有益的变异体，通过遗传稳定性和生产性状的鉴定，培育出新的菌种。
微生物遗传学应用
05
工业发酵是微生物遗传学应用的重要领域之一，通过利用微生物的遗传特性，实现大规模生产各类发酵产品，如酒精、醋酸、酵母、抗生素等。
工业发酵中，通过遗传育种和基因工程手段改良微生物菌种，提高发酵效率和产物质量，降低生产成本。
详细描述
总结词
介绍基因表达的概念、基因表达的调控机制以及基因表达的改变对微生物的影响。
详细描述
基因表达是DNA中的遗传信息转录为RNA并翻译为蛋白质的过程。基因表达受到多种因素的调控，包括DNA的甲基化、染色质构象以及转录和翻译水平的调控。基因表达的改变可能影响微生物的生长、代谢和致病性等方面。
微生物基因突变与重组
19世纪末期
遗传学奠基人摩尔根提出基因概念，为遗传学的发展奠定了基础。
20世纪初期
DNA双螺旋结构发现，开启了分子生物学时代。
20世纪50年代
人类基因组计划启动，推动了基因组学的发展。
20世纪70年代
微生物遗传物质基础
02
介绍DNA的基本结构，包括碱基、磷酸和脱氧核糖，以及DNA的双螺旋结构。
总结词
工业发酵的微生物菌种通常具有特殊生理功能和代谢途径，通过研究其遗传机制，有助于发现新的发酵产品和工艺。
生物制药是利用微生物或其代谢产物作为药物成分，治疗和预防人类疾病的领域。
通过遗传工程手段，可以改良微生物细胞工厂，高效表达具有药效的蛋白质或其他活性分子。
生物制药中，对微生物的遗传特性和表达调控机制的研究，有助于发现和开发新的药物候选分子。
生物环保是利用微生物的降解和转化能力，处理和治理环境污染的领域。
微生物的分子遗传学研究
微生物的分子遗传学研究微生物是指体积小，单细胞或多细胞的微小生物。
微生物通常指细菌、真菌、病毒和原核生物等。
微生物的分子遗传学主要涉及DNA、RNA和蛋白质等分子的遗传学研究，包括遗传信息的编码、复制、转录、翻译以及相关的调控机制等。
微生物的分子遗传学研究具有广泛的应用价值，可以应用于基因工程、生物技术、医学和环境保护等领域，为人类社会的发展做出了重要的贡献。
一、微生物的分子遗传学研究进展随着分子生物学技术的不断发展，微生物的分子遗传学研究日益深入。
主要包括基因组学、转录组学、蛋白组学、蛋白质互作网络和代谢组学等研究领域。
这些技术的集成为微生物分子遗传学研究提供了全面准确的遗传信息和相关的调控机制数据。
基因组学研究主要涉及微生物基因组或部分基因组的解读。
通过基因组研究可以发现微生物的基因数目、内含子和外显子的结构，以及基因在基因组中的位置和分布情况等。
转录组学研究主要涉及对微生物转录组内基因表达的调控机制进行分析。
转录组研究可以发现在不同生物学过程中微生物基因的表达水平变化，以及此过程的调控机制。
蛋白组学研究主要涉及微生物蛋白质的定量和鉴定。
通过蛋白质组学研究可以了解微生物蛋白质的种类、数量和分布情况等，为深入了解微生物功能提供重要的信息。
蛋白质互作网络研究主要涉及微生物蛋白质之间相互作用的网络关系。
通过蛋白质互作网络研究可以了解微生物中蛋白质之间的关联关系，这对于揭示微生物生命活动的调控机制和功能意义具有重要意义。
代谢组学研究主要涉及微生物代谢产物的定量和鉴定。
通过代谢组学研究可以了解微生物合成产物的种类、数量和分布情况等，为深入了解微生物代谢过程和功能提供有力支持。
二、微生物的分子遗传学应用微生物的分子遗传学研究为生物技术、医学和环境保护等领域提供了广泛的应用价值。
（一）基因工程微生物的基因工程是通过利用分子遗传学技术来改变微生物的代谢和生长特性，实现对微生物功能的调控。
基因工程可以制备具有特定功能的微生物代谢产物，解决工业生产中的问题，如合成抗生素、生产化学品等。
微生物遗传学的研究与应用
微生物遗传学的研究与应用微生物遗传学是研究微生物性状遗传和分子机制的学科，是生物学、生物技术和微生物学的交叉学科。
微生物遗传学的发展，对于解决医学、工业、环境以及农业等重要问题，具有极其重要的意义。
本文将探讨微生物遗传学的研究与应用。
一、微生物基因组研究微生物是非常重要的遗传材料来源之一，研究微生物基因组，可以揭示微生物的基本生理和代谢过程，预测微生物在环境中的作用，以及为微生物的应用提供重要的遗传资源。
目前，科学家们已经完成了许多微生物的基因组测序，例如大肠杆菌、链球菌、酵母菌等。
这些研究为微生物的病原性、代谢过程、生长环境、适应性等方面提供了深入理解的理论依据。
二、微生物生物合成的研究许多有用的生物产品是由微生物生物合成的，例如人类胰岛素、生长激素、抗生素等。
微生物遗传学的研究可以帮助科学家们深入了解这些产品的生物合成过程，进而提高生产效率和产品质量。
研究人员可以利用基因转移技术，将某些微生物愈合基因引入新的生产细胞中，从而提高生产质和效率。
此外，研究还可以揭示生长条件和生产方法之间的相互作用，进一步优化微生物的生产条件。
三、微生物基因工程技术微生物基因工程技术是微生物遗传学的一个重要分支，目的是通过基因的改变，改变微生物特性，以达到工业、医疗等领域的应用。
例如，利用基因工程技术改变细菌的代谢途径，可以生产出新的化学品；利用基因编辑技术改变病原微生物的生长特性，可以治疗疾病。
四、微生物的环境修复微生物在环境修复中有着重要的应用价值。
在生物肥料、臭氧层保护、土地重金属污染控制和水污染处理等方面，微生物都发挥了重要作用。
例如，通过利用基因工程技术改变微生物能力，使其分解环境中的不良物质，可以实现效果更佳的污染治理。
五、微生物工业的应用微生物可以用于制备食品、化工产品、药品等各种产品，其生物合成技术的高效性、低成本和环保性，使得微生物被广泛应用于工业生产中。
除此之外，微生物也在工业废水处理，环境污染控制、新能源发展等领域起到了重要的促进作用。
第八章 微生物遗传学笔记
杂交育种的优点：①由于杂交育种选用了已知性状的供体菌和受体菌作为亲本，故在方向性和自觉性方面，均比诱变育种前进了一大步。②利用杂交育种可以消除某一菌株在经过长期诱变处理后所出现的产量上升缓慢的现象
杂交育种的缺点：杂交育种的方法较复杂，目前还没有得到普遍的推广和使用，尤其在原核生物的领域中，应用转化、转导或接合等重组技术来培育可应用于生产实践上的高产菌株的例子还不多见。
2.转导：通过完全缺陷或部分缺陷噬菌体的媒介，把供体细胞的DNA小片段携带到受体细胞中，通过交换与整合，使后者获得前者部分遗传形状的现象。获得新遗传形状的受体细胞称为转导子（transductant）
3.接合（conjugation）：供体菌通过性菌毛传递不同长度的单链DNA给受体菌，在后者细胞中发生交换、整合，从而使后者获得供体菌的遗传性状的现象。获得新性状的受体细胞称为接合子。
移码突变（frame-shift mutation）指诱变剂使DNA分子中的一个或少数几个核苷酸的增添（插入）或缺失，从而使该部位后面的全部遗传密码发生转录和转译错误的一类突变。
染色体畸变（chromosomal aberration）某些理化因子，如X射线等的辐射及烷化剂、亚硝酸等，除了能引起点突变外，还会引起DNA的大损伤——染色体畸变，包括以下两个方面：染色体结构上的缺失、重复、易位和倒位染色体数目的变化。
6.降解性（代谢）质粒
如假单胞菌属中发现。它们的降解性质粒可为一系列能降解复杂物质的酶编码，从而能利用一般细菌所难以分解的物质做碳源。这些质粒以其所分解的底物命名。
7.隐秘质粒：不显示任何表型效应，只能通过物理的方法检测的质粒。如酵母菌的2um质粒。
二.转座因子
插入（IS）序列、转座子(Tn)、特殊病毒（Mu噬菌体）
微生物遗传学的研究进展与应用
微生物遗传学的研究进展与应用微生物遗传学是一门研究微生物遗传的学科，随着分子生物学等技术的不断发展，微生物遗传学的研究不断取得新的进展和突破。
本文就微生物遗传学的研究现状和应用领域进行探讨。
一、微生物遗传学的主要研究对象微生物是指形态小、复杂度低的单细胞或多细胞有机体的总称。
微生物种类众多，包括细菌、古菌和真菌等。
在微生物中，细菌是最为常见的一类。
细菌是一种典型的单细胞生物，其体积很小，但与其他生物一样具有基因表达、蛋白质合成等生物特性。
因此，细菌是微生物遗传学的主要研究对象之一。
二、微生物遗传学的主要研究内容微生物遗传学的主要研究内容包括基因转移、基因表达、突变和基因组的进化等方面。
1.基因转移基因转移指DNA在不同细胞之间的传递。
微生物中普遍存在基因转移现象，主要是通过基因传递介体（如质粒、细菌噬菌体、转座子等）来实现的。
不同于有机体的遗传，微生物的基因转移具有重要的科学及应用价值。
通过对基因转移的研究可以促进疾病的治疗，增强微生物代谢效率等。
2.基因表达基因表达是指基因转录和翻译的过程。
在细菌细胞中，基因表达过程的速度和效率非常快，这与细菌体积小和基因组简单有关。
通过研究细菌基因表达机制，可以深入了解细菌的生命活动过程，特别是对于蛋白质表达的研究有着广泛的应用前景。
3.突变突变是指基因组中发生的变异现象。
细菌的基因组相对较小，且具有高度可变性。
在细菌的繁殖过程中，它们会不断发生基因突变，并且可以在短时间内积累足够多的突变，形成不同的基因型和表型。
由于其基因组的简洁性，细菌基因突变或变化所产生的影响更加明显，其研究和应用前景十分广泛。
4.基因组的进化基因组进化指基因组中有关分子生物学方面的各种事件，包括基因重排、重复、基因家族扩张和重读、可移动元件的插入和删除等。
微生物基因组进化研究可以为微生物进化的机理和规律提供重要的理论依据。
三、微生物遗传学的应用领域微生物遗传学在各个领域中都有进一步的发展和应用。
微生物遗传学的研究现状与趋势
微生物遗传学的研究现状与趋势微生物遗传学研究现状与趋势微生物遗传学是指研究微生物的遗传基础和遗传机制的学科。
随着科技的发展，微生物遗传学也在不断地发展和深入。
在微生物遗传学研究中，很多人都会想知道微生物的遗传特点以及它们在生命系统中所扮演的角色。
那么，微生物遗传学的研究现状与趋势是什么呢？微生物遗传学的研究现状微生物遗传学的研究在解决一系列实际问题方面发挥重要作用。
一方面，可以通过微生物遗传学探讨细菌的抗药性、传染性等问题；另一方面，也可以通过研究微生物基因来调节产业菌株的生长与发育，以达到产量、质量的优化。
微生物遗传学研究的过程中，分子遗传学是必不可少的领域。
通过分子遗传学的研究，可以探讨细菌膜、抗菌素等方面的问题。
同时，还需要进一步研究微生物受到细胞自我保护机制、环境的影响，以及更为复杂的宿主感染等特性。
另外，近年来研究发现，细菌的基因组含有许多的非编码RNA，这些非编码RNA为研究细菌生命周期、病原机制以及抗药制备等方向提供了重要的参考依据。
因此，基于非编码RNA的研究成为了微生物遗传学的重要研究方向。
微生物遗传学的研究趋势随着技术的发展，微生物遗传学的研究方向也在不断的拓展和丰富。
未来微生物遗传学的发展趋势主要体现在以下几个方面：1. 基因组测序现在，微生物基因组测序技术越来越成熟，这种高通量的方法可以快速地获取微生物的基因信息。
因此，在微生物遗传学中使用基因组测序来研究微生物的功能、病原性、代谢、生理和与其他生命体的相互作用等方面将成为未来的重点方向。
2. 单细胞技术运用单细胞技术，可以通过分析单个微生物细胞的DNA、RNA及代谢产物等，以探究微生物群体内个体间的差异、基因转录水平的变化、细胞代谢和功能等方面，可以为微生物遗传学研究带来一个全新的视野和机会。
3. 宏基因组学宏基因组学主要用于研究微生物群体中的所有生物，这是通过分析DNA序列和群体基因组中基因功能的技术手段。
通过宏基因组学的研究方法，可以探究微生物群体之间的生态相互作用，发现微生物生态系统中隐藏的种群、功能、代谢物质和生物学随机性的可能性，并探讨微生物群体的转录调控和代谢特征等，是微生物遗传学中的一个重要的方向。
微生物遗传学基础
遗传型 + 环境条件 •
发育
表型
表型（ ）：指生物体所具有的一切外表特征和内 表型（phenotype）：指生物体所具有的一切外表特征和内 ）： 在特性的总和;------是一种现实存在，是具一定遗传型的生 是一种现实存在 在特性的总和 是一种现实存在， 物在一定条件下所表现出的具体性状。 物在一定条件下所表现出的具体性状。
变异(variation):生物体在外因 或内因的作用下 ， 遗传物 生物体在外因或内因的作用下 变异 生物体在外因 或内因的作用下， 质的结构或数量发生改变。变异的特点： 质的结构或数量发生改变。 变异的特点：a.在群体中以 极低的几率出现， 一般为10 极低的几率出现 ， （ 一般为 10-6 ～ 10-10 ） ； b. 形状变化 的幅度大； 变化后形成的新性状是稳定的， 的幅度大 ； c. 变化后形成的新性状是稳定的，可遗传 的。 饰变（ 饰变（modification）：指不涉及遗传物质结构改变而只 ） 发生在转录、转译水平上的表型变化。 特点是： a. 几乎 发生在转录 、 转译水平上的表型变化 。 特点是 ： a.几乎 整个群体中的每一个个体都发生同样的变化； b.性状变 整个群体中的每一个个体都发生同样的变化 ； b. 性状变 化的幅度小； 因遗传物质不变 故饰变是不遗传的。 因遗传物质不变， 化的幅度小 ； c.因遗传物质不变 ， 故饰变是不遗传的 。 引起饰变的因素消失后，表型即可恢复。 引起饰变的因素消失后，表型即可恢复。 例如：粘质沙雷氏菌： 例如：粘质沙雷氏菌：在25℃下培养，产生深红色的灵 ℃下培养， 杆菌素； 杆菌素；在37℃下培养，不产生色素；如果重新将温度 ℃下培养，不产生色素； 降到25℃ 又恢复产色素的能力。 降到 ℃，又恢复产色素的能力。
微生物分子遗传学的基本原理
微生物分子遗传学的基本原理微生物分子遗传学是研究微生物遗传的基本原理和机制的学科，主要涉及到微生物的基因组学、表观遗传学和功能基因组学等方面。
微生物分子遗传学的研究对于了解微生物的演化和发展，以及微生物与环境的交互关系具有重要的意义。
本文将从微生物基因的结构、调控机制和遗传变异等方面探讨微生物分子遗传学的基本原理。
一、微生物基因的结构微生物的基因是由DNA组成的，其基本结构与其他生物的基因相似，包括启动子、转录起始位点、编码区和终止位点等。
微生物基因的长度和复杂度因菌种的不同而有所差异，大部分基因的长度在数百到数千个碱基对之间。
微生物基因的编码区通常由连续的密码子组成，每个密码子编码一个氨基酸，以组成蛋白质。
此外，在基因的编码区之间也会存在一些不编码的序列，这些序列的功能是参与转录、翻译或调控等生物过程。
二、微生物基因的调控机制基因的调控是指调整基因表达水平的过程。
在微生物中，基因的调控主要通过转录因子和RNA polymerase等分子间的相互作用来实现。
转录因子是一种负责调控基因表达的蛋白质，可以结合到启动子附近的区域，并与RNA polymerase一同构成转录复合物。
RNA polymerase则负责将DNA转录成为RNA，进而合成相应的蛋白质。
微生物基因的调控可以分为两类：正向调控和负向调控。
正向调控是指转录因子与启动子结合后促进RNA polymerase的结合并提高基因表达水平。
而负向调控则是指转录因子与启动子结合后阻碍RNA polymerase的结合并降低基因表达水平。
此外，基因的表达还受到许多外界因素的影响，包括细胞内外的信号、环境因素、营养状态等。
三、微生物基因的遗传变异微生物基因的遗传变异包括两类：突变和基因重组。
突变是指DNA序列在复制或重组过程中发生的不同类型的突然变化。
微生物的突变可以包括点突变、插入突变、删除突变等各种不同形式。
这些突变可能会破坏基因的功能，也可能会导致一些新的表型特征出现。
微生物的遗传和育种
微生物育种的社会和经济影响
社会影响
随着微生物遗传和育种技术的不 断发展，人们需要关注相关的伦 理、安全和环境问题，以确保技 术的可持续发展和应用。
经济影响
微生物育种技术的发展有望为工 业、农业、医药等领域带来巨大 的经济效益，同时也需要关注技 术的成本和商业化前景。
感谢您的观看
THANKS
土壤修复
微生物育种技术可用于土壤修复领域，通过改良土壤中微生物的种 类和数量，改善土壤质量，提高土壤肥力。
空气净化
某些微生物具有降解空气中有害物质的能力，通过微生物育种技术 可以改良这些微生物的降解能力，用于空气净化。
05
未来展望
基因编辑技术的发展
基因编辑技术
随着CRISPR等基因编辑技术的发展， 科学家们能够更精确、高效地修改微 生物基因，从而改良微生物的性状和 生产性能。
代谢工程育种
代谢途径分析
对微生物的代谢途径进行分析， 了解各代谢途径之间的相互关系 和调控机制。
代谢流量调控
通过调节代谢途径中的关键酶活 性或改变代谢流量的方向，以提 高目标产物的合成效率。
细胞工厂构建
通过基因工程技术对微生物进行 改造，构建具有特定代谢特征的 细胞工厂，实现目标产物的定向 生产。
基因编辑的应用
基因编辑技术有望在医药、农业、工 业等领域发挥重要作用，例如用于生 产新型药物、改良农作物、提高微生 物产物的产量和品质等。
合成生物学在微生物育种中的应用
合成生物学
合成生物学是一门新兴的交叉学科，旨 在通过设计和构建人工生物系统来改良 和优化生物功能。
VS
微生物育种中的应用
合成生物学在微生物育种中具有广阔的应 用前景，例如通过设计和构建人工微生物 来生产燃料、化学品、药物等，同时也有 助于解决环境问题和粮食安全问题。
遗传学知识：微生物的遗传和抗生素
遗传学知识：微生物的遗传和抗生素微生物的遗传和抗生素随着人类对微生物的研究逐渐深入，我们发现了微生物在遗传学和抗生素方面的独特性。
这对于我们深入了解微生物，并在医学、农业等方面应用微生物具有重要的意义。
在本文中，我们将探讨微生物的遗传和抗生素。
微生物的遗传微生物的遗传是指微生物在自然条件下传递和维持遗传物质，包括基因突变、水平基因转移、嵌合病毒等多种遗传方式。
1.基因突变基因突变是微生物进化中最常见的遗传方式之一。
期间发生的单个核苷酸的改变，如碱基替换、插入、缺失等会影响基因表达和蛋白质编码，可能会导致微生物的繁殖不佳，或是让微生物对一些农药以及抗生素产生抗药性。
基因突变研究帮助人们理解抗生素抗药性的发生和发展，这种现象对医学卫生工作产生了重要的影响。
2.水平基因转移水平基因转移是指把遗传物质从一个细胞移动到另一个细胞的过程，是微生物进化和适应环境的最主要途径之一。
它包括转化、转导、共轭等多种方式，其中共轭是最普遍的水平基因转移方式。
共轭是常见的细菌间基因转移方式，它利用细菌质粒（plasmid）在不同菌株间进行基因信息交换，导致的结果是很多细菌耐受抗生素、产生致病因子等进行进化适应。
3.嵌合病毒嵌合病毒是一种在病原微生物中广泛存在的一种DNA或RNA分子。
它们可以在物种间传递，几个病毒或细菌之间产生“重组”现象，就像人类DNA产生突变一样。
而这种嵌合可以导致一些病原微生物对抗生素的抗药性。
微生物遗传学的研究有助于人们更深入地了解微生物在抗药性和感染等方面的演变历程，以便更好地对抗它们。
抗生素抗生素是指一类具有抑制、破坏或杀死细菌、真菌、原虫等微生物的药物。
抗生素的发现和使用已经对人类健康产生了深远的影响。
但是抗生素不是万能药，其中一个重要的原因就是因为微生物抗药性的发展和加强。
现在的医学专家都强调过度使用抗生素可能会带来严重的后果，例如一些菌株的抗药性会逐渐增强，这种情况可能导致严重的流行病而无法治愈。
微生物学-第六章微生物的遗传
2，T2噬菌体感染实验
用 32P 标 记 病 毒 的 DNA ， 35S 标 记 病 毒 的 蛋白质外壳。然后将这两种不同标记的病毒
分别与宿主大肠杆菌混合，结果发现：用含 有35S蛋白质的T2噬菌体感染大肠杆菌时，大 多数放射性留在宿主细胞的外边，而用含有 32PDNA的T2噬菌体感染大肠杆菌时，32PDNA 注入宿主细胞，并产生噬菌体后代，这些T2 噬菌体后代的蛋白质外壳的组成、形状大小
• 2) 如果转导DNA不能进行重组和复制，其上的基 因仅经过转录而得到表达，就成为流产转导 （abortive transduction），其特点是在选择培养 基平板上形成微小菌落。DNA不能复制，因此群 体中仅一个细胞含有DNA，而其它细胞只能得到 其基因产物，形成微小菌落。
• 3）被降解, 转导失败，在选择平板上无菌落形成。
大肠杆菌基因组特点：
1，遗传信息是连续的。
2，功能相关的结构基因组成操纵子结构， 有些功能相关的RNA基因也串联在一起。4100 个 基 因 ， 2584 个 操 纵 子 ， 16SrRNA 基 因 ---23SrRNA基因----5SrRNA基因串联在一起。
3，结构基因在基因组中多为单拷贝。rRNA 基因多拷贝，7个rRNA操纵子。
将待测样品与从老鼠肝脏抽提的酶混合在 一起适当保温后，用直径约2~3mm的圆形滤纸 片吸取待测样品，放置在含有鼠伤寒沙门氏细 菌组氨酸缺陷型突变株的基本培养基平板中央， 370C培养16~24小时。如有诱变作用，则在滤纸 片周围即可长出回复突变的菌落，由于试验纸 片的化学药剂向四周扩散而形成自然的浓度梯 度，故在浓度最高即离试验纸片近的地方，细 菌会全部被杀死，因而无菌落形成；而离试验 滤纸片较远的适宜地方形成回复突变的菌落最 多。
微生物遗传学课件
基因组学定义
基因组学是研究生物体基因组的学科，包括基因的发现、基因组结构、基因表达调 控以及基因组进化的研究。
基因组学研究旨在揭示生物体的遗传信息，以及这些信息如何影响生物体的表型和 功能。
基因组学研究对于理解生命的本质、疾病的发生和发展机制以及新药的研发等方面 具有重要意义。
基因组学研究方法
基因组测序
生物修复
生物修复
利用微生物对环境污染进行治理和修复的 技术，具有处理效果好、成本低等优点。
生物修复的应用
在土壤、水体、空气等污染治理领域广泛 应用，有效解决了许多环境问题，改善了
人类生存环境。
生物修复的原理
通过微生物对污染物的降解、转化和富集 等作用，将污染物转化为无害或低毒性的 物质，降低其对环境和人体健康的危害。
程，涉及到多种酶的参与。
转座重组
指DNA分子内部的转座元件在不 同位置之间移动的重组过程。转 座重组需要转座酶的催化，实现 DNA片段在不同位置的复制和移
动。
Hale Waihona Puke 突变与重组在微生物遗传学中的应用
基因工程
通过突变和重组技术，可以对微 生物进行基因敲除、敲入和基因 修饰，实现基因表达的调控和代
谢途径的改造。
微生物遗传学课件
目 录
• 微生物遗传学概述 • 微生物基因组学 • 微生物突变与重组 • 微生物基因表达调控 • 微生物进化与系统发育 • 微生物遗传学应用
01 微生物遗传学概述
微生物遗传学定义
微生物遗传学定义
微生物遗传学是一门研究微生物遗传、变异和演化的科学，主要关注微生物的基因组结构 、基因表达调控、基因突变与进化等基本问题。
通过调节翻译起始和翻译过程 来控制蛋白质的合成，如核糖 体结合位点的选择和mRNA的 稳定性等。
微生物遗传学研究及其在医学中的应用
微生物遗传学研究及其在医学中的应用微生物是一类非常小而简单的生物，它们具有极强的适应能力和巨大的繁殖能力。
为了生存和繁殖，微生物需要不断地适应环境和适应宿主体内的免疫系统。
这就导致微生物在进化过程中发生了非常多的基因变异和基因重组。
微生物遗传学研究就是探究微生物的基因变异和基因重组机制，以及这些变异和重组对微生物的适应性和致病性的影响。
微生物遗传学的研究方法主要包括基因组学、转座子学、重组学和突变学等。
基因组学是分析微生物基因组组成和基因编码信息的研究方法，这种方法被广泛应用于微生物分子生物学、微生物生态学、微生物进化学等领域。
转座子学则是研究转座子对微生物基因组进化和表达的影响。
转座子是可以在基因组内移动的遗传元件，它们可以导致基因组内多种基因的重组、转移和重排。
突变学研究的是微生物的基因突变和这些突变对微生物生命活动的影响，而重组学则涉及基因重组的过程及效果。
微生物遗传学研究的应用非常广泛，特别是在医学领域中。
微生物的适应性和致病性受到其基因组的影响，因此深入研究微生物的基因组组成和演化，可以帮助我们预测和防治微生物致病。
比如，微生物的毒力一般是由几个关键因素所决定的，如果我们能够知道这些因素的基因组成和调控机制，就可以通过基因工程手段抑制这些因素的表达，降低微生物的致病能力。
微生物遗传学还可以帮助我们研究微生物感染、药物疗效和免疫耐受性等方面。
另外，微生物遗传学研究还可以帮助我们开发新型抗菌药物。
目前，由于过度使用抗生素和微生物快速进化的作用，导致一些微生物对抗生素产生了多种耐药性。
这使得常用的抗生素越来越失效。
因此，开发新型抗菌药物是当务之急。
微生物遗传学的研究可以揭示微生物耐药性的基因机制，为新型抗菌药物的发现和设计提供指导。
综上所述，微生物遗传学研究在医学领域中的应用远远不止于此。
它还可以在生物工程、环境保护、农业生产等方面发挥巨大的作用。
随着技术的不断发展和研究方法的不断创新，微生物遗传学研究的前景也非常广阔。
微生物遗传学和表观遗传学——微生物遗传多样性和表观基因组
微生物遗传学和表观遗传学——微生物遗传多样性和表观基因组微生物遗传学和表观遗传学是两个新兴的学科，它们可以为我们深入了解微生物的遗传多样性和表观基因组提供重要的帮助。
微生物遗传学主要探究微生物的遗传物质传递、重组和突变等基本遗传现象，而表观遗传学则关注生物基因组中的化学修饰和蛋白质结构变化等非核苷酸序列变化。
本文将分别从微生物遗传多样性和表观基因组两个方面展开探讨。
一、微生物遗传学：微生物界的大繁荣微生物是指单细胞或少细胞的微小生物体，包括细菌、古细菌、真菌、原生动物以及病毒等。
虽然它们有着微小的体积，但其数量和种类却是相当庞大，被誉为“微生物界的大繁荣”。
微生物是地球上最古老、最原始的生命形式之一，具有极其丰富的遗传多样性。
微生物之所以能够在如此恶劣的环境下存活，主要得益于它们的遗传多样性。
1、微生物的遗传多样性微生物的遗传多样性主要表现在以下几个方面：1）基因重组：微生物具有丰富的基因重组方式，包括转移、重组、重排和水平基因转移等，从而增强了自身的基因组多样性。
2）基因组大小：微生物的基因组大小在几百万到几千万碱基对之间变化，因此不同微生物基因组的组成、结构和大小也有很大不同。
3）单核苷酸多态性（SNP）：微生物的SNP相对较高。
SNP是常见的一种突变形式，即一个碱基对变成另一种碱基对的现象。
4）基因副本数：微生物中某些基因具有多个副本，这些副本可以不同程度地参与转录、翻译和表达，从而增加这些基因的多样性。
5）组合注释：微生物基因组中同一个基因周围固有多种不同的序列，比如调控元件、启动子和嵌合子等，这些注释元素可以改变基因表达的强度和速率，从而导致细胞间的不同表现型。
2、微生物遗传多样性的应用微生物遗传多样性的深入研究对人类健康、环境保护和生命科学研究等领域有着广泛的应用。
以下是一些应用案例：1）微生物遗传工程：微生物遗传工程技术可以实现对微生物基因的定向改造，操作方法通常包括基因表达、调控、剪切、粘贴等。
微生物遗传学及其作用机制
微生物遗传学及其作用机制微生物遗传学是研究微生物基因的总体结构、变异、表达和传递等遗传学现象的学科。
微生物是生态环境中最为重要的组成部分之一，其生活方式、代谢和作用等都和其基因密切相关。
因此，微生物遗传学的研究对于深入了解微生物的基本生物学特性以及为人类正常生活和健康的维护提供了重要的科学支撑。
微生物基因的变异是微生物遗传学的关键研究问题之一。
微生物基因变异发生的主要原因包括突变、垂直遗传、水平遗传等。
突变是指遗传物质在复制过程中发生的不可避免的拷贝错误，造成遗传信息的改变。
垂直遗传是指在生殖过程中父母基因的遗传方式，即由一代传向下一代。
水平遗传是指不同个体之间通过共享遗传信息改变其表现或适应性，其中包括转移元件、质粒和噬菌体等因素。
这些三种形式的遗传变异使得微生物在环境适应、代谢关系、疾病传播等方面能够发挥广泛和多样化的作用。
在遗传变异基础上，微生物表达机制也成为了微生物遗传学另一重要的研究内容。
微生物的表达规律及表达调控机制对于单细胞生物的生存、发育、适应能力等方面的影响是极为重要的。
微生物表达机制指微生物内部遗传信息的编码、转录、翻译等规律和过程。
微生物表达规律包括RNA和蛋白质的合成，以及调控过程中的信号传递等。
微生物表达调控包括终止、调节、介导和降解等过程，这些都是决定微生物生存能力和适应环境的重要因素。
微生物遗传学研究涉及到了微生物的多个方面，包括代谢关系、致病性和环境适应力等。
在代谢方面，微生物利用其独有的代谢途径和合成酶来将环境物质转化为必要的功能分子。
在致病性方面，微生物在感染宿主过程中通过基因编剧、进化和新基因的增加等机制来使自身的致病特性得以优化，在维持其生存的同时使其对宿主产生危害。
在环境适应力方面，微生物通过基因表达和转移等策略适应特殊的环境条件，例如抗药、生长抑制物、温度和盐度等。
微生物遗传学的研究对于生物发育、传染病防治、资源开发和利用等多个领域都具有重要的意义。
通过对微生物的基因变异和表达调控机制的探究，我们可以更好地了解微生物在生态系统中的作用微观机制，发展新的新能源、新药和新基因治疗等领域，改善人类生活质量。
微生物遗传学的研究与应用
微生物遗传学的研究与应用微生物遗传学是指对微生物的遗传信息进行研究的科学，包括微生物染色体的结构、功能和特性等方面的基础研究以及微生物在生产、环境保护和医疗卫生等领域的应用研究。
微生物遗传学的研究和应用在现代生命科学领域中具有非常重要的地位，近年来受到越来越多的关注和重视。
一、微生物的遗传信息微生物是指体积小、形态单一或单细胞的生物，包括细菌、病毒、真菌等。
微生物的遗传信息主要存在于染色体和质粒两个载体上。
微生物染色体的大小和形态各不相同，一些细菌的染色体只有一条，而有些细菌的染色体数量则是多重的。
相对于细菌，病毒的遗传物质则是DNA或RNA，没有染色体的概念。
在微生物遗传信息的研究中，人们主要关注染色体的DNA序列和基因的组成。
微生物染色体上的基因组成了微生物的遗传信息库，能够控制微生物的生产、代谢和适应环境的能力。
还有一些微生物通过质粒进行基因交换的形式，具有非常强的适应能力和变异能力。
二、微生物遗传学的研究微生物遗传学的研究内容主要包括：微生物基因组的结构、功能及特性；微生物基因的表达和调控机制；微生物基因的遗传变异和进化等方面。
这些研究内容对于深入了解微生物的生命过程、提高微生物在生产和环境治理等方面的应用，都具有非常重要的意义。
1.微生物基因组的结构与功能微生物基因组的结构与功能是微生物遗传学研究的核心内容之一。
通过对微生物基因组的研究，我们能够深入了解微生物基因的组成、排列和分布等信息，为微生物的进化和群体分布规律的研究提供基础数据。
此外，我们还可从微生物基因组中发现新的基因并探索其功能和作用机制，为微生物在工业、医疗及生物技术等方面的应用提供新的途径和可能性。
2.微生物基因的表达和调控微生物基因的表达和调控是微生物遗传学的另一个重要研究领域。
在这个过程中，研究者主要关注微生物基因的启动子、转录因子和调控元件等方面。
研究基因的表达和调控是为了深入了解基因在微生物生命过程中的作用和机制，进而为微生物的应用研究提供方向和思路。
微生物遗传学
微生物遗传学微生物遗传学是研究微生物的遗传现象、遗传变异以及遗传信息传递的科学领域。
微生物遗传学对于理解微生物的进化、适应能力以及对疾病和环境的响应至关重要。
本文将介绍微生物遗传学的基本概念、重要实验方法，以及在微生物研究和应用中的意义。
一、微生物遗传学概述微生物遗传学是遗传学学科中的一个重要分支，主要研究微生物的遗传变异、基因传递以及基因调控等现象。
微生物遗传学与人类和其他生物的遗传学类似，但由于微生物的特殊性，研究方法和技术也有一些独特之处。
微生物包括细菌、真菌、病毒和原生动物等单细胞或少细胞的微小生物。
不同的微生物具有不同的遗传特征和基因组结构，因此微生物遗传学的研究对象非常广泛。
微生物遗传学的发展不仅能够深化对微生物多样性和进化的理解，还对药物的研发、疾病的治疗以及环境的保护等方面有着重要的应用价值。
二、微生物遗传学的重要实验方法1. 转化（Transformation）转化是一种常用的基因传递方式，通过外源DNA片段的吸收和整合，使细菌或其他微生物细胞的遗传信息发生改变。
转化可以导入一些有益的基因，提高微生物的生物合成能力或抗生素产生能力；也可以导入一些抗菌基因，提高微生物对抗生物胁迫的能力。
2. 转座子（Transposon）插入转座子是一类可以在基因组中移动的DNA片段，转座子插入是一种特定的基因突变方式。
通过转座子插入实验，可以研究特定基因的功能、表达模式以及基因组的结构和稳定性。
转座子插入还可以用于菌株的遗传修饰，通过插入转座子来改变目标基因的表达水平。
3. 基因工程基因工程是一种利用遗传技术对微生物进行定向改造的方法。
通过重组DNA技术，可以将外源的基因导入微生物细胞中，使其表达所需的特定蛋白质。
基因工程在微生物制药、农业生产以及环境修复等领域有着广泛的应用。
三、微生物遗传学的意义和应用1. 微生物进化和多样性研究微生物遗传学研究可以揭示微生物的进化路径和多样性。
通过对不同微生物菌株和基因组的比较，可以了解它们的亲缘关系以及与环境的关联性，进一步推测微生物的进化历史和适应策略。
微生物遗传学的研究方法
微生物遗传学的研究方法微生物遗传学是指研究微生物的遗传现象和基因功能的学科，对于了解生命体系的分子生物学、基因工程等方面都有着重要的意义。
那么，微生物遗传学的研究方法主要有哪些呢？1. 基于重组DNA技术的分子克隆分子克隆是微生物遗传学的一个常用方法。
它通过重组DNA技术，将DNA片段插入到质粒、合成质粒等载体上，使其在宿主微生物中被产生、表达。
基于重组DNA技术的DNA克隆技术成为了现代分子生物学中的核心技术。
DNA克隆技术一般包括以下步骤：DNA片段的产生、切割、连接、转化、筛选等过程。
最终从中筛选出目标DNA片段。
2. 基因敲除技术基因敲除技术是指通过改变或部分剥夺某一基因的功能，以达到推测出基因功能的目的。
这种技术是微生物遗传学的另一种研究方法。
基因敲除技术还有以下两个局限：①染色体插入敲除后，不能确定是否将基因完全删除。
例如，有些穿插个体可能由于染色体重组而产生形态上看来像缺失的基因乘积。
如果是这种情况，有些重要的信息也可能被删除。
②除非某些非常有限的特殊条件下，不可以将插入染色体与目标基因以一个更高的产率区分开。
3. 基于RNA干扰技术的基因沉默RNA干扰技术又称基因沉默技术，是指使用RNA干扰的原理对目标基因进行有针对性地沉默，以分析其遗传功能的一种技术。
RNA干扰的机制是，RNA干扰分子特异性的结合到目标mRNA上，并使其特异性降解，从而达到沉默基因的目的。
4. 基于突变体筛选的遗传分析还有一种常用的微生物遗传学研究方法就是基于突变体筛选的遗传分析。
这种方法是指对生物个体的某些基因进行随机突变，通过之后的筛选过程选取出突变体，并进行功能分析来揭示该基因遗传信息及其相关的生物学过程。
总之，微生物遗传学作为现代分子生物学的一个重要分支，已经成为了科学家们探索生命奥秘的一个重要工具。
在微生物遗传学的研究中，各种机启发人们了对于微生物世界的认知，也让我们对于未来在生物科技、优化微生物工业等多个领域发展中有着更高更远的憧憬。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
从图3可以看出,ADH在pH值为7.0时较为稳定。
酶的最适作用温度
将酶液与底物分别在20℃、25℃、30℃、35℃、37℃、 40 ℃、 45 ℃、50℃、 55℃下反应一段时间 , 测定 ADH 酶活力 , 结果见图4。
从图4可以看出,温度为37℃时ADH酶活力最高。
酶的热稳定性
将酶液分别经30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、 60℃热处理30 min,测定剩余酶活力,结果见图5。
酶的最适作用pH值
在pH值为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0 的缓冲溶液中进行酶活力的测定,结果见图2。
从图 2 可以看出 ,ADH 的最适作用 pH值在 7.0～ 10.0,pH值 约为8.0时酶活力最大。
酶的pH值稳定性
将 ADH置于pH值分别为4.0、5.0 、6.0 、7.0、 8.0、9.0、 10.0、 11.0 的缓冲溶液中 ,30℃保温 2h,测定剩余酶活力 ,结 果见图3。
乙醇脱氢酶乙醇氧化体系是在肝脏中代谢酒精的一条主 要途径。乙醇脱氢酶氧化体系包括醇脱氢酶 (ADH) 和醛脱氢 酶(ALDH)。参与体内乙醇代谢，是重要的代谢酶。 乙醇在人体内的代谢主要靠体内的两种酶 , 一种是乙醇 脱氢酶,另一种是乙醛脱氢酶。前者使乙醇转化为乙醛 ,后者
使乙醛进一步转化为乙酸 ,最终分解为二氧化碳和水,由此可
b
双水相沉淀
双水相系统是指某些高聚物之间或高聚物与无机盐之间
在水中以适当的浓度溶解会形成互不相溶的两水相或多水相 系统。
双水相萃取法近年来已用于对生化物质的分离，其利用
生化物质在互不相溶的两相中的分配系数不同，而使目标分 子浓缩在一相中从而达到纯化的效果。
M.C.Madhusudhan 等采用硫酸铵及双水相法共同沉淀蛋白 质来纯化ADH。他们通过建立两个体系来比较酶活回收效率。 第一个体系 第二个体系
SO3H Cl N O NH NH N SO3H NH SO3H N
从结构上看，Cibacron Blue 的结构和NAD的结构相似，它 和蛋白质的亲和性类似于蛋白质对核苷酸或蛋白质对辅酶 NAD基 团的识别性。
作者名
Chuanul hidayat
配体选择
亚氨基二酸做配体
回收效果
其动力学结合能力为569 U/ml，ADH的纯化因子和回 收率分别为8.8、93.5% 回收率为57%
后得出使用锌离子时可得最高的 ADH回收率且洗脱时使用的 EDTA
量最少的结果。
b 染料亲和层析
染料亲和层析是 1968 年英国科学家 Haeckel 和德国科学家 Kopperschlager 分别偶然发现的。他们发现蓝染料和磷酸化激 酶有专一性作用，并成功地应用于纯化酵母中磷酸激酶。之后 许多研究者研究了用活性染料纯化蛋白质，常见的活性染料有 O NH2 ：活性蓝染料。
乙醇脱氢酶的初步分离
酶的最适作用pH值
酶的最适作用pH值
酶的最适作用温度
酶的热稳定性
乙醇脱氢酶的初步分离
将离心后的上清液用饱和度分别为10%、20%、30%、40%、 45%、 50%、55%、60%、 65%、 70%、80%的硫酸铵溶液分段盐 析,离心收集沉淀物,结果见图1、表1。
从图 1 可以看出 ,ADH 不出现沉淀的最大硫酸铵饱和度约为 45%,ADH完全沉淀的最小硫酸铵饱和度约为60%。因此,沉淀分离 操作应选择的硫酸铵饱和度范围在45%～60%,二次沉淀采用50% 的硫酸铵盐析。二次沉淀后,ADH比活力从粗酶液的0. 464U·mg-1提高到1.198U·mg-1,纯化倍数为2.582。
B
亲合层析柱分离纯化
20世纪80年代末出现了亲和色谱技术。以亲和力为基础
的生物分离技术是将可逆结合的配基与不溶性的载体偶联 ,
形成具有特异亲和性的分离介质 , 并用其来选择性地吸附生 物活性物质，再通过洗脱来分离所需要的物质。
a 金属亲和层析
固定化金属亲和离子介质的合成主要是要在介质中引入
能够和金属离子产生螯和作用的基团，以实现金属离子的固
a
硫酸铵沉淀
当硫酸铵加入酶溶液时，由于硫酸铵对水分子的亲和力 大于酶，于是酶分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时， 硫酸铵加入后，由于离子强度发生改变，酶表面电荷大量被 中和，更加导致溶解度降低，使酶分子之间聚集而沉淀。
以不同饱和度的硫酸铵分段盐析沉淀经热处理步骤后的 酶液，测定盐析上清液及沉淀的蛋白质浓度及酶活性，得到 最佳盐析范围 40%~60% 硫酸铵饱和度，表明分段盐析对乙醇 脱氢酶的纯化效果非常显著。
首先用（NH4）2SO4沉淀之后， 先用聚乙二醇（PEG） 操作过程 将沉淀置于缓冲液中，最后采 沉淀之后，再将上 用双水相萃取。 清液用双水相萃取。 各个过程的参数如聚合物的分子量、浓度以及中性 盐的影响都作了相应的考察，以便提高ADH的回收率。 酶活回收 ADH回收率为90%， ADH回收率为85%，纯化因子4.2 效率 纯化因子6.6倍 考虑参数
乙醇脱氢酶的研究进展
乙醇脱氢酶
乙醇脱氢酶（简称ADH），大量存在 于人和动物肝脏、植物及微生物细胞之中， 是一种含锌金属酶，具有广泛的底物特异 性。 在人和哺乳动物体内，乙醇脱氢酶与 乙醛脱氢酶(ALDH)构成了乙醇脱氢酶系, 乙醇脱氢酶与体内乙醇代谢，是人和动物 体内重要的代谢酶。作为生物体内主要短 链醇代谢的关键酶，它在很多生理过程中 起着重要作用。它是一种广泛专一性的含 锌金属酶。
产酶单因素实验
初始pH对ADH酶形成的影响
通气量对ADH形成的影响
培养温度对ADH形成的影响
接种量对ADH酶形成的影响
初始pH对ADH酶形成的影响
将20mL产酶培养基的初始pH分别调至3、4、5、6、7、8、9、10，按 前述方法接种，培养16h后，测定生物量及ADH 的酶活，结果见表 1。
温度为37℃时ADH酶活力最高。
ADH在温度为30～40℃时较稳定。
乙醇脱a、硫酸铵沉淀 b、双水相沉淀
B、亲合层析柱分离纯化
a、金属亲和层析
b、染料亲和层析
A
沉淀法分离纯化ADH
沉淀法是通过改变酶的溶解性，从而使不同的酶从溶液
中析出。常用的沉淀方法有无机盐沉淀、有机溶剂沉淀、 PEG 沉淀、双水相沉淀等，其中最常用的就是无机盐沉淀中 的硫酸铵沉淀。
从表2中可以看到，氧气对于产酶是必需的。通气量越大，菌体生长越好， 总产酶量相应的也高，但通气量过大时，产ADH酶的比活反而有所下降。
培养温度对 ADH 形成的影响
20mL的产酶培养基，按前述方法接种，在不同温度下 培养16h，其它条件不变，测定生物量后，收集菌体，破菌 测定ADH的酶活，结果见表3。
从图5可以看出,ADH在温度为30～40℃时较稳定,温度超
过40℃后酶活力急剧下降。
ADH的初步分离及酶学性质
初步分离 作用pH值 作用温度
热稳定性
沉淀分离操作应选择的硫酸铵饱和度范围 在45%～60%,二次沉淀采用50%的硫酸铵盐 析。
pH值约为8.0时酶活力最大。
pH值稳定性 ADH在pH值为7.0时较为稳定。
理为：固定化金属离子亲和层析通过螯合作用，将金属粒子结合 在固定相（琼脂糖衍生物）表面，常用的金属粒子为镍锌铜等。 金属粒子能够与氧、氮配体形成复合物。在 ADH 中含有若干组氨 酸，所以能很好地与金属粒子结合。结合之后的洗脱分为三步： 首先降低体系的pH值，其次添加如咪唑或组氨酸等竞争剂，最后 加入强螯合剂如EDTA。通过对锌、镍、铜分别进行实验比较，最
从表3可以看出，酵母菌是一个中温菌，30℃左右是其生长和产ADH 酶的最适温度。
接种量对ADH酶形成的影响
选用不同的接种量，加在20mL的产酶培养基中，在30℃、 200r/min 的摇床上培养 16h ，测定生物量后，收集菌体，破 菌测定ADH的酶活，结果见表4。
从表4可以看出，接种量越大，细胞生物量越大，当接种量为5%时， 乙醇脱氢酶的总活性和比活力最高。这可能是因为接种量越大，生长快 的菌体较早进入产酶的下降期所致。
定化。欲分离的物质与金属离子形成共配位复合物而结合， 再通过降低pH、加入竞争物(如咪唑、组氨基酸等)、使用螯 合剂(如乙二胺四乙酸)等方法洗脱。常用于蛋白质的纯化分 离，如用镍离子螯合柱亲和层析纯化带有 6 个组氨酸短肽的
重组蛋白质。
N.A.Willoughby采用膨胀床金属亲和层析来纯化ADH。其原
液体培养基
种子的培养
于石英比色皿中加入3mL0.05mol/L Tris－HCl 缓冲液，40μ L0.05mol/L NAD溶液， 40μ L17mol/L C2H5OH溶液后混匀，再加入一定 ADH活性的测定 量的酶液，快速混匀后立即在340nm处测定吸 光度变化值，计算酶活力。定义每分钟A340nm增 加0.001为1活力单位(U)
由表1的结果可知，初始pH在4～6之间时菌体的生长最佳，初始pH对菌体 生长和总产ADH酶量的影响较大，但对比活的影响不是很大。
通气量对ADH形成的影响
在总容量为100、150、200、250、300mL的锥型摇瓶中分 别装入20mL的产酶培养基，按前述方法接种，培养16h后，测 定生物量，收集菌体，破菌测定ADH的酶活，结果见表2。
M. NEGORO 和 游离的对羟基苯乙酮做配体 I.WAKABAY ASHI
陈翔
采用三嗪活性染料制备的亲和层 析柱分离纯化ADH。在琼脂糖凝胶 上，分别偶联三嗪活性染料, 制 成染料亲和层析柱。将面包酵母 经超声破碎、高速离心、硫酸铵 分级沉淀、透析、冰冻干燥等步 骤得到脱氢酶粗品, 再经染料亲 和层析柱进一步纯化。
产酶正交实验
根据以上各产酶单因素实验结果，以培养温度、接种量、初始pH、 通气量为影响菌体产酶的主要因素，选用4因素3水平L9(34)正交表进行 正交实验。