HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量

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高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量注意事项

高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量注意事项
1. 样品制备：样品制备过程中要保持卫生，避免污染。

可采用加乙醇或加水加热提取的方法提取样品，提取次数可根据实际情况确定。

2. 色谱柱选择：色谱柱的选择要考虑分离度、效率、稳定性等因素，一般可选择C18色谱柱，柱长为250mm，内径为4.6mm。

3. 色谱条件：在色谱操作中要维持一定的流速，避免色谱柱内压力的过高和过低。

采用梯度洗脱过程中需要注意洗脱液的比例和流速，选择合适的洗脱液组成、洗脱液流速和梯度温度等。

4. 标准品选择：芦丁的标准品选择应根据需测定的范围确定，从而确保测定范围、灵敏度和准确度。

5. 验证方法：为了确保测定结果的准确性和可重复性，在测定前应先进行方法的验证，如方法的特异性、线性、精密度、稳定性等，以及对样品中其他可能存在的干扰物质的筛查。

6. 数据处理：对测定结果进行再计算，确保结果的准确性。

在出现异常结果时应及时进行检查、重复操作或重新测定。

RP-HPLC法测定新疆不同产地药桑叶中芦丁、异槲皮苷的含量

RP-HPLC法测定新疆不同产地药桑叶中芦丁、异槲皮苷的含量阿合买提江·吐尔逊;赵文惠;孙莲;王岩;张煊;古丽江·马合苏提汗【摘要】目的考察新疆不同产地、不同采摘时间药桑叶中芦丁、异槲皮苷的含量变化.方法采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),以大连依利特 Hypersil ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,进样量20 μl,流动相为乙腈(A)-水(B)-0.2%磷酸溶液(pH=4.8)(C),梯度洗脱[0 min,A-C(18:82);4 min,A-C(21:79);10 min,A-C(8:92)],流速1.0 ml/min,检测波长为358 nm,柱温为25℃.结果不同产地、不同采摘时间的药桑叶中芦丁和异槲皮苷的含量均有一定的差异,喀什地区、5～6月份二者含量较高.结论药桑叶中芦丁和异槲皮苷的含量与产地和采摘季节等有关,尤其以季节的影响大.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2010(033)010【总页数】4页(P1194-1197)【关键词】药桑叶;芦丁;异槲皮苷;反相高相液相色谱法【作者】阿合买提江·吐尔逊;赵文惠;孙莲;王岩;张煊;古丽江·马合苏提汗【作者单位】新疆医科大学药学院分析/药分教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院分析测试中心,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院化学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院分析/药分教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院分析/药分教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院药学2006-2班,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R917桑叶为桑科(Moraceae)桑属(Morus L.)植物的叶，中国大部分地区均有栽培生产。

桑叶入药首见于《神农本草经》，列为中品。

HPLC法同时测定桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量

桑叶采摘于安徽医科大学校园区，经安徽中医学院彭华胜教授鉴定为桑科植物 Morus alba L．的叶。分别取一定量的鲜桑叶，于通风干燥处自然晾晒，干燥后称重得晒干样品; 置真空干燥箱中，以 60℃ 的温度烘干，称重得烘干样品。 2 方法与结果 2． 1 色谱条件色谱柱: Shim pack ODS 色谱柱( 250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，柱温 35℃ ; 流动相 A: 0． 4% 磷酸乙腈溶液，B: 0． 4% 磷酸水溶液; 梯度洗脱: 0 ～ 9 min A: 15% ，20 min A: 25% ，30 min A: 45% ，40 min A: 60% ; 检测波长 360 nm，流速 1． 0 ml·min － 1 ，进样量 20 μl。按照上述色谱条件进行测定，结果显示芦丁、异槲皮苷和紫云英苷三种黄酮与其他共存峰得到较好的分离，分离度均大于 1． 5，各成分理论塔板数均不低于 3 000。 2． 2 对照品溶液配制分别精密称取芦丁、异槲皮苷、紫云英苷置 50 ml 棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得芦丁 0． 048 0 g · L － 1 、异槲皮苷 0． 107 4 g · L － 1 、紫云英苷 0． 105 4 g·L － 1 的对照品贮备液。分别精密量取 1． 0 ml 芦丁、1． 0 ml 异槲皮苷、0． 5 ml 紫云英苷对照品溶液，置 10 ml 棕色容量瓶中，得到混合对照品溶液。 2． 3 供试品溶液制备将晒干桑叶( 含水量 6． 3% ) 、60℃ 烘干( 含水量 7． 5% ) 桑叶以及鲜桑叶( 含水量 68． 1% ) 分别于粉碎机中粉碎，精密称取晒干桑叶粉末和烘干桑叶粉末各约 0． 2 g、鲜桑叶浆末约 4． 0 g，分别置于 100 ml 棕色容量瓶中，加入甲醇 80 ml，超声 2 h，冷却至室温后，用甲醇定容至刻度，过 0． 22 μm 微孔滤膜，作为三种桑叶的供试液。 2． 4 线性关系考察将“2． 2”项下混合对照品溶液，用甲醇逐级稀释成系列浓度的混合对照品溶液，分别进样 20 μl，以峰面积为纵坐标，以对照品浓度( mg·L － 1 ) 为横坐标，绘制标准曲线。结果芦丁的回归方程为 Y = 32 665． 7X － 12． 4 ( r = 0． 999 3) ，异槲皮苷的回归方程为 Y = 42 782． 5X － 260． 7( r = 0． 999 3) ，紫云英苷的回归方程为 Y = 55 208． 9X + 620． 1( r = 0． 999 9) ，其线性范围分别为 0． 076 ～ 1． 920，0． 086 ～ 2． 148 和 0． 042 ～ 2． 108 mg·L － 1 。 2． 5 稳定性实验取晒干桑叶供试品溶液分别于 0，3，6，12 h 进样，进样体积 20 μl，记录峰面积，根据当天随行标准曲线，计算样品各成分含量。样品中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷含量的 RSD 分别为 2． 1% 、3． 0% 、2． 1% ，表明样品溶液在 12 h 内基本稳定。

基于高效液相色谱法的桑葚芦丁含量测定

化工设计通讯Chemical Engineering Design Communications研究与开发Research and Development第45卷第7期2019年7月基于高效液相色谱法的桑奁芦丁含量测定刘昕（大连理工大学化工与环境生命学部，辽宁大连116024）摘要：针对桑甚中的芦丁成分测定进行了相关研究，利用反相高效液相色谱法测走桑菩中芦丁成分的含量。

结果显示芦丁标准溶液在0.464~2.32pg时的线性回归方程为Y=21200X+13697,平均回收率为99.4%。

实验表明该方法快捷且准确度高。

为芦丁提取，条件优化和其他过程的选择提供了理论依据，为提取芦丁原料提供了实验依据，为桑树的质量评价和桑檯的药用价值研究提供了参考。

关键词：反相高效液相色谱法；桑套；芦丁；含量测定中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1003-6490(2019)07-0143-02Determination of Mulberry Rutin Based on HighPerformance Liquid ChromatographyLiu Xin-yuanAbstract:The main research on the determination of rutin in mulberry was carried out.The content of rutin in mulberry was determined by reversed-phase high performance liquid chromatography.The results showed that the linear regression equation of the rutin standard solution in the range of0.464-2.32u g was Y=21200X+13697>and the average recovery was99.4%.Experiments show that the method is fast and accurate.This study provides a theoretical basis for n.iin extraction,condition optimization and other process selection,and provides experimental basis for people to extract rutin raw materials,which provides a reference for the quality evaluation of mulberry and the medicinal value of mulberry.Key words:reversed-phase high performance liquid chromatography；mulberry；rutin；determination高效液相色谱是色谱的重要分支。

高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量

高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量
一、实验原理
芦丁是一种常见的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。

本实验采用高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量。

二、实验步骤
1. 粉碎采样
取适量桑葚样品，去除杂质，将其均匀粉碎并过筛，取其中约2克的粉末备用。

2. 超声提取
将2克桑葚粉末加入50 mL的50%乙醇，超声提取30分钟，再过滤，将提取液收集入50 mL瓶中。

加入足量50%乙醇使其体积达到标线，摇匀备用。

3. 色谱条件设置
在高效液相色谱仪上设置如下条件：
色谱柱：Agilent Poroshell C18（4.6mm×250mm, 5μm）
流动相：20% 乙腈-80% 水（含0.1% 的磷酸二氢钾，pH 2.5，用磷酸调节）
流速：1.0 mL/min
检测波长：350 nm
4. 样品测定
取一定体积的上述提取液，通过过0.45 μm的滤膜滤过后注入色谱柱中，利用UV-Vis检测器检测样品的峰面积与标准品的峰面积相比较，从而测定芦丁的含量。

5. 统计分析
按照芦丁的质量浓度标准曲线计算样品芦丁的含量。

三、实验注意事项
1. 所有仪器必须严格按照说明书操作。

2. 色谱柱上必须不断充填流动相以保持流动速度。

3. 芦丁标准品的制备要严格按照操作说明进行。

4. 桑葚样品粉末应保持细腻均匀。

5. 提取液要在避光条件下保存，避免有机溶剂挥发。

高效液相色谱法测定桑叶中芦丁含量

高效液相色谱法测定桑叶中芦丁含量
测定样品：桑叶样品
仪器设备：高效液相色谱仪、色谱柱、加样器、移液器、电子天平、pH计等。

试剂：甲醇、磷酸二氢钾、三乙胺、芦丁标准品。

操作步骤：
1、将桑叶样品粉末状，称取0、5g，加入50 ml甲醇中，超声提取15分钟，静置，离心，将上清液过滤。

2、取上清液10 ml，加入8 ml磷酸二氢钾(0、2 mol/L)中，pH 调节至4、5，加入适量三乙胺中和至pH值为7、0左右。

3、将上述溶液过滤，进样至高效液相色谱仪中。

4、据芦丁标准曲线，计算样品中芦丁的含量，并作相应的校正。

结果计算：芦丁含量（mg/g）= （样品进样量x 芦丁标准品浓度）/样品质量
注意事项：
1、样品须充分搅拌均匀，以保证提取效率和准确性。

2、溶液pH值应根据实际情况进行调节，以达到较好的色谱分离效果。

3、标准品浓度适宜，不宜过高或过低，以避免出现测定值偏差。

4、操作过程中应严格遵守实验室安全规定，避免操作失误。

高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量

高效液相色谱法测定桑葚中芦丁含量一、实验原理芦丁是一种黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎和抗癌等作用，常被应用于医疗、化妆品、保健品等领域。

本实验采用高效液相色谱法对桑葚样品中芦丁含量进行测定。

二、实验仪器高效液相色谱仪、分光光度计、电子天平、移液器、手动剪切器、1 mL量筒、色谱柱、色谱柱前锋过滤器、溶解器、离心机。

三、实验药品和试剂标准品：芦丁（纯度高于98%）。

对照品：芦丁（纯度高于98%）。

试剂：无水甲醇（HPLC级）、乙酸（分析纯级）、去离子水（电阻率大于18 M Ω/cm）。

四、实验步骤1. 样品制备精确称取5 g桑葚样品，加入50 mL无水甲醇中，以超声波方式进行提取10 min，过滤后将提取液置于50 mL体积瓶中，用无水甲醇补足至刻度线。

2. 色谱分析将样品液经过前处理，用移液器取20 μL进样于色谱柱中，洗脱剂为甲醇-乙酸-水（70:1:29），流速为1.0 mL/min，检测波长为353 nm。

用标准品进行校正和定量。

5. 数据处理计算出桑葚中芦丁的含量（mg/kg），计算公式：C = （A / B）* （a *1000 / w）其中，C为芦丁含量（mg/kg），A为样品的浓度（mg/L），B为标准曲线回归方程的斜率，a为取样量（g），w为样品稀释液的体积（L）。

六、实验注意事项1. 实验操作需穿戴实验服和手套，注意个人安全。

2. 样品过多、过浓会影响色谱分析的精度，应注意控制样品的量和浓度。

3. 样品提取和前处理应严格按照步骤操作，避免误差的发生。

4. 实验中所用仪器和试剂应按照使用说明操作和管理。

5. 实验结束后，应彻底清洗和消毒仪器和场地，避免交叉污染。

HPLC同时测定桑叶中绿原酸_芦丁_异槲皮苷_紫云英苷_槲皮素含量

HPLC 同时测定桑叶中绿原酸、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素含量邸学，谷丽艳，王海波，许亮，包琳琳( 辽宁中医药大学，辽宁大连11660)［摘要］目的: 建立桑叶中绿原酸、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素含量的方法，对不同来源的桑叶药材质量进行评价。

方法: HPLC 同时测定Therm o OD S色谱柱( 4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，柱温35 ℃，流动相为磷酸乙腈溶液( 0. 1% ，A)和磷酸( 0. 16% )-三乙胺( 0. 18% )水溶液( B)梯度洗脱，流速1. 0 mL·min －1，检测波长360 nm。

结果: 桑叶中绿原酸、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素5 种活性成分在60 min 内分离效果理想，线性范围分别为0. 32 ～13. 73 μg ( r = 0. 999 6) ，0.05 ～3. 13 μg ( r = 0. 999 8) ，0.03 ～9. 50 μg( r = 0. 999 4) ，0.03 ～5. 60 μg ( r = 0. 999 5) ，0.001 ～0. 05 μg ( r = 0. 999 7) ; 帄均加样回收率在99. 61%～106. 09%，ＲSD≤2. 8%。

结论: 该方法操作简单，结果准确，专属性强，可为桑叶药材的质量控制标准提高提供参考。

［关键词］桑叶; 绿原酸; 芦丁; 异槲皮苷; 紫云英苷; 槲皮素［中图分类号］Ｒ284. 1［文献标识码］ A［文章编号］ 1005-9903( 2014) 15-0092-04［d oi］ 10〃 13422 / j〃 cnki〃 s yf j x〃 2014150092Simultaneous Determination of Chlorogenic Acid，Ｒutin，Isoquercetin，Astragalin and Quercetin in Mori Folium by HPLCDI X ue，GU Li-yan，WANG H ai-bo，XU Liang，BAO Lin-lin( School of Pharmaceutical Sciences，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600)［A b s t rac t］Ob j ective: To establish HP LC method f or simultaneous determination of chlor ogenic acid，rutin，isoquercetin and astragalin quercetin in M ori Folium〃Method: A HP LC equipped w ith a T herm o OD S［收稿日期］ 20130715( 007)［第一作者］邸学，硕士，实验师，从事中药品种鉴定评价研究，E-mail:di x_email@ 163〃c o m檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶［5］廖玉麟〃中同动物志棘皮动物门海参纲［M］〃北京:［参考文献］［1］南京中医药大学〃中药大辞典〃下册［M］〃上海:上海科学技术出版社，2006: 2724.［2］Sév erine V D， Pasca l G， Patrick F〃 Qualitati v e and quantitati v e sap o nin c o ntents in f i v e sea cucumbers f r o mthe Indian Ocean［J］〃M arine Dru g s，2010，8( 1): 173. ［3］张淑瑜，汤海峰，刘世君，等〃海参中海参烷型皂苷的研究进展［J］〃药学实践杂志，2008，26( 5): 321.［4］ Xia o qian Hu，Y umin g W an g，J in gf en g Wan g，e t al〃D ietar y sap o nins of sea cucumber alle v iate o r o ticacid- induced f att y li v er in rats v ia PPAＲαand SＲEBP-1c si g nalin g［J］〃 Lipid s in H ealth and Disease，2010，9 ( 1): 25.科学出版社，1997: 108.［6］刁小琴，田晓菊，关海宁，等〃以齐墩果酸为标准品测定大豆皂甙的研究［J］〃中国油脂，2009( 11): 53.［7］张小鸿，吴杨峥，徐先祥〃不同显色剂对牛膝总皂苷含量测定的影响［J］〃中国实验方剂学杂志，2013，19( 21): 113.［8］董帄〃革皮氏海参皂苷化合物的分离鉴定、结构修饰及活性研究［D］〃青岛:中国海洋大学，2008.［9］董帄，薛长虹，盛文静，等〃海参中总皂苷含量测定方法的研究［J］〃中国海洋药物杂志，2008，27( 1): 28.［责任编辑顾雪竹］( 4.6mm×250mm，5μm) column and UV detection w as used〃 T he column temperature w as at35℃and the f l ow rate1.0m L·min－1 〃 T he mobile phase w as consisited of phosphoric acid in acetonitrile ( 0.1%，A) and phosphoric acid ( 0.16% ) and triethylamine ( 0.18% ) in w ater ( B ) w ith gradient elution〃T he detection w avelength w as set at360nm〃Ｒes u l t: T he good saperation of f ive f l avo noids w as achieved w ithin60min〃 L inear calibration curves w ere obtained w ith0.32-13.73μg ( r=0.9996) ，0.05-3.13μg ( r=0.9998) ，0.03-9.50μg ( r = 0. 999 4 ) ，0. 03-5. 60 μg ( r = 0. 999 5 ) ，0. 001-0. 05 μg ( r = 0. 999 7 ) ; the average recovery was 99.61%-106.09%，ＲSD≤2.8%〃Con cl u si on: T he proposed method is simple，accurate，repeatable，and can be used f or qualit y control as w ell as a pow er f ul t ool t o evaluate the processing of M ori Folium〃［K ey w ords］Mori Folium; chlorogenic acid; r utin; isoquercetin; astragalin; quercetin桑叶始载于《神农本草经》，为桑科植物桑Morus a l ba L〃的干燥叶。

HPLC测定新疆药桑叶中绿原酸、芦丁、异槲皮苷和槲皮素

Center, Urumqi 830054, China) ABSTRACT: OBJECTIVE An HPLC method was established for the simultaneous determination of Chlorogenic Acid, Rutin, Isoquercitrin and Quercetin in drug Mulberry Leaves of Xinjiang. METHODS The chromatographic separation was carried out on a Yilite Hypersil BDS (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) with a mobile phase composed of acetonitrile (A) and 0.01 mol·L1 ammonium acetate(pH=4.8) (B) with gradient elution [0 min, A-B (8∶92)；30 min, A- B (30∶70)] . The flow rate was 1.0 mL·min-1, the detection wavelength was set at 350 nm and the column temperature was 25 ºC. RESULTS The linear ranges of Chlorogenic acid , Rutin, Isoquercitrin, and Quercetin were between 1.052 05.067 9 μg(r=0.999 3), 1.029 45.031 7 μg (r=0.999 8), 1.076 85.065 5 μg (r=0.999 0) and 1.075 05.055 0 μg (r=0.999 1), respectively. The average recoveries of Chlorogenic Acid, Rutin, Isoquercitrin and Quercetin were 102.2% (RSD=1.3%), 104.6% (RSD=0.9%), 104.0% (RSD=1.9%), 104.7% (RSD=1.2%). The detection limits were 0.160, 0.081, 0.033, 0.640 μg·mL1(S/N=3), respectively. CONCLUSION The method is simple, rapid, sensitive and accurate. Therefore it is applicable for the determination of Chlorogenic Acid, Rutin, Isoquercitrin and Quercetin in drug Mulberry Leaves of Xinjiang. KEY WORDS：drug mulberry leaves; chlorogenic acid; rutin; isoquercitrin; quercetin; HPLC

HPLC测定桑叶中绿原酸、芦丁和木犀草苷含量

HPLC测定桑叶中绿原酸、芦丁和木犀草苷含量
HPLC测定桑叶中绿原酸、芦丁和木犀草苷含量
郑娟;茅纯;邹耀华
【期刊名称】《中国现代应用药学》
【年(卷),期】2014(031)002
【摘要】目的建立同时测定桑叶中绿原酸、芦丁和木犀草苷含量的方法.方法样品用70％乙醇溶液提取,采用Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)分离;流动相:0.1％磷酸-乙腈,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:348 nm.结果绿原酸、芦丁、木犀草苷分别在3.048～152.4,1.059～52.96,1.437～71.85 μg·mL-1内具有良好的线性关系;加标回收率分别为100.4％,98.3％,98.7％; RSD分别为1.7％,2.0％,1.9％(n=9).结论该方法简单易行,准确性和重复性好,可用于桑叶的质量控制.
【总页数】4页(218-221)
【关键词】高效液相色谱法;桑叶;绿原酸;芦丁;木犀草苷
【作者】郑娟;茅纯;邹耀华
【作者单位】杭州市药品检验所,杭州310017;杭州市药品检验所,杭州 310017;杭州市药品检验所,杭州 310017
【正文语种】中文
【中图分类】R917.101
【相关文献】
1.HPLC法同时测定桑叶药材及其炮制品中绿原酸、芦丁和异槲皮苷的含量[J], 程聪梅; 毛菊华; 余乐
2.桑叶中绿原酸和主要黄酮苷含量的RP-HPLC测定 [J], 吴好好; 蒋惠娣; 高处。

RP—HPLC梯度洗脱法测定桑叶中芦丁和绿原酸的含量

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５・７
维普资讯
广东微量元素科学ＧＩＡ］）ＧＷＥＬＡＡＮＳＫＥＵＥ『ＮＧＤＮＩＩＮＧＹＵ（ＵＸ
第１４卷第５期
Ｗａｅｓｔｒ高效液相色谱仪（１５５型泵，２９６型光电二极管阵列检测器，７２Ｉ９７５型进样阀，Ｅｏｒｍｐｗｅ中文色谱工作站）Ｏ—ＭＢ一１Ｄ型高纯水机（州永洁达膜分离设备厂）Ｐ２５，Ｒ０杭，Ｃ２Ｄ型分析天平（国Ｓｒｏｉｓ司）ｗ０德ａｔｒ公ｕ，Ｆ１０型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）０，２２—２Ａ６型数显电热恒温干燥箱（海阳光实验仪器有限公司）上，ＫＳ一１０５０型超声提取仪器（宁波科盛仪
为０６４５８６ｇ：０９９７．５～．８，ｒ．９，样品的平均加样回收率为９．，ＲＤ１１；绿原酸线性范８２Ｓ．
围为０６４ பைடு நூலகம்８６ｇ一０９９７．５～．８，ｒ．９，样品的平均加样回收率为９．，ＲＤ１５。该法快速简８２Ｓ．
便，专属性强，重复性好，可作为桑叶中芦丁的定量分析方法。
关键词：桑叶；高效液相色谱；光电二极管阵列检测器；梯度洗脱；绿原酸；芦丁
中图分类号：Ｏ６７７５．２文献标识码：Ａ

实验九 HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量

实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量一、实验目的1 ．理解反相色谱的原理和应用。

2 ．掌握外标定量方法。

二、实验原理芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。

高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。

三、实验试剂、仪器及设备仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。

样品:桑叶、芦丁标准品。

试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。

四、实验内容1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。

数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μg) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。

2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。

3. 色谱测定用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定性，确定芦丁色谱峰，并记录锋面积。

五、实验过程原始记录1 .记录色谱条件:色谱柱Agilent XDB-C18 色谱柱(4.6mm ×250 mm ,5 μm) ;流动相甲醇:水 = 50∶50 ; 柱温为30℃;流速1 mL/min ;检测波长254nm ;进样量20μL 。

HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量

228第12卷第5期 2010 年 5 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 12 No. 5 May，2010桑叶为桑科桑属植物桑Morus alba L.的干燥叶，味苦甘、寒，归肺、肝经，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目之功能，用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花等症。

在《中华人民共和国药典》2005版中[1]，桑叶中芦丁的含量测定采用的是HPLC 法梯度洗脱，其操作重复性差，对实验设备要求相对较高，旨在建立以等度洗脱，采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量。

1 仪器试剂和药材1.1 仪器高效液相色谱仪（岛津LC-10A，日本），KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂为分析纯。

1.3 药材桑叶经辽宁中医药大学植物教研室王冰教授鉴定为桑科桑属植物桑Morus alba L.的干燥叶。

2 实验方法2.1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-醋酸-水（15：10：2.6：72.4）为流动相，检测波长为358nm，流速：1mL·min -1。

理论塔板数按芦丁计算应不低于3000。

芦丁与相邻成分色谱峰的分离度应不小于1.5。

见图1~2。

图1 芦丁对照品溶液HPLC色谱图图2 桑叶供试品溶液HPLC 色谱图2.2 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品10.32mg，置100mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL 含0.1032mg 的溶液，作为芦丁对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备精密称定桑叶1g, 置25mL 容量瓶中，甲醇超声提取30min，放冷，加甲醇至刻HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量周美环1，赵书楷1，陈淼2，张东方3（1.沈阳东北大药房连锁店，辽宁沈阳 110023；2.神威药业有限公司，辽宁沈阳 110003；3.中国医科大学药学院，辽宁沈阳 110001）收稿日期：2009-10-05作者简介：周美环（1975-），女，辽宁大连人，工程师，学士，主要从事药品质量管理。

HPLC法测定桑叶中芦丁、绿原酸和槲皮素

HPLC法测定桑叶中芦丁、绿原酸和槲皮素戴开金;罗奇志;侯连兵【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2009(29)3【摘要】目的建立同时测定桑叶药材中芦丁、绿原酸和槲皮素的含量测定方法.方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱;流动相为乙腈:甲醇:0.01 mol/L醋酸铵液(100 ml中含0.2 ml三乙胺,用冰醋酸调pH至3.50±0.05);流速1.0 ml/min;柱温为25 ℃;检测波长为350 nm.结果芦丁线性范围为0.196~1.960 μg,r=0.9998,样品的平均加样回收率为97.0%,RSD 2.69%;绿原酸线性范围为0.158~1.580 μg,r=0.9995,样品的平均加样回收率为96.9%,RSD 2.10%;槲皮素线性范围为0.0848~0.848 μg,r=0.9992,样品的平均加样回收率为96.2%,RSD 2.90%.结论该法简便,准确,可作为桑叶中芦丁、绿原酸、槲皮素的含量测定.【总页数】2页(P579-580)【作者】戴开金;罗奇志;侯连兵【作者单位】南方医科大学产业管理处,广州,广东,510515;南方医科大学分析测试中心,广州,广东,510515;南方医科大学南方医院药学部,广州,广东,510515【正文语种】中文【中图分类】R971【相关文献】1.HPLC 法同时测定宣木瓜中绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量 [J], 丁姗姗;吕凌;张毅;崔颖;王辉;陈师农2.HPLC双波长法同时测定药桑中芦丁、异虎皮苷、槲皮素和绿原酸的含量 [J], 杨梅;李新霞;热娜·卡斯木;赵东升3.RP-HPLC法同时测定刺五加叶中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量 [J], 吴高松;匡海学;王知斌;杨炳友;刘华;孟永海;姜海;王振月4.RP-HPLC梯度洗脱法测定桑叶中芦丁和绿原酸的含量 [J], 邹盛勤;肖建辉5.HPLC法测定蓖麻叶中槲皮素、绿原酸、蓖麻碱3种活性成分的含量 [J], 李梦茜; 甘国源; 林琳; 张振旺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

桑叶中芦丁方法确认

桑叶中芦丁含量检查方法学确认方案
1.确认目的
采用HPLC法对桑叶中芦丁含量检测方法进行方法学确认，确保方法的准确性和可行性。

2. 确认依据
1）中国药典2015年版四部9101《药品质量标准分析方法验证指导原则》
3. 确认中使用的材料信息
3.1 对照品
3.2. 供试品
3.3 仪器
3.4 色谱柱
3.5试剂
4.拟定分析方法
照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。

供试品溶液：
对照品溶液：
系统适用性溶液：
色谱条件：
系统适用性要求：
测定法：
含量方法学确认结果概要
5. 确认实施内容
5.1线性及范围
取一定量芦丁对照品进样6个进样点，测定响应值与试样中被测进样量呈比例关系的程度，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标做线性回归方程，结果见下表：
芦丁线性试验结果
芦丁线性图
结论：
5.2 精密度试验
（1）进样精密度
照桑叶标准含量项下操作方法，配制对照品溶液，连续进样6针，要求峰面积RSD≤2.0%，保留时间≤1.0%，结果见下表：
进样精密度结果
（2）重复性
照桑叶标准含量项下操作方法，配制6份供试品溶液，份对照品溶液，考察该方法重复性，要求6份供试品溶液按外标法以峰面积计算RSD≤1.0%，结果见下表
重复性试验结果
结论：
5.3溶液稳定性
照桑叶标准含量项下操作方法，配制供试品溶液，在常温条件下，于不同时间考察供试品溶液的稳定性。

结果见下表：
供试品溶液稳定性试验结果
结论：
6.确认评价及结论
7．代表性图谱
附后：。

RP-HPLC法测定桑叶中的芦丁和异槲皮苷含量

RP-HPLC法测定桑叶中的芦丁和异槲皮苷含量贾冬冬;李淑芬;杨鸿玲【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2008(029)008【摘要】目的:建立HPLC法测定桑叶中芦丁、异槲皮苷含量的定量分析方法.方法:HPLC外标法.采用色谱柱:Agilent TC-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相;乙腈-甲醇-水-磷酸(100:10:340:0.3,V/V);检测波长365nm;流速1.0ml/min;进样量20μl;柱温:室温.结果:在上述色谱条件下,芦丁、异槲皮苷获良好分离,浓度分别在7.5～150μg/ml(R2=0.9995)、7.1～142μg/ml(R2=0.9998)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.79%、99.01%,RSD分别为3.37%、2.43%,重复性实验RSD分别为0.0133%和0.0214%.结论:该方法分离度好,简便快速,为桑叶生药及其制剂的质量控制提供可借鉴的分析方法.【总页数】3页(P499-501)【作者】贾冬冬;李淑芬;杨鸿玲【作者单位】天津大学化工学院,绿色合成与转化教育部重点实验室,天津,300072;天津大学化工学院,绿色合成与转化教育部重点实验室,天津,300072;天津大学化工学院,绿色合成与转化教育部重点实验室,天津,300072【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.2种罗布麻叶中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷含量比较研究 [J], 冯春艳;卿德刚;倪慧;孙宇;张娟;贾晓光;徐建国2.HPLC法同时测定桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量 [J], 严安定;袁野;吴亮;马陶陶;谢晋;张群林3.毛细管电泳法测定罗布麻叶中芦丁、异槲皮苷和槲皮素的含量 [J], 李芳;马晓丽;孙莲;孟磊4.RP-HPLC法测定新疆不同产地药桑叶中芦丁、异槲皮苷的含量 [J], 阿合买提江·吐尔逊;赵文惠;孙莲;王岩;张煊;古丽江·马合苏提汗5.RP-HPLC梯度洗脱法测定桑叶中芦丁和绿原酸的含量 [J], 邹盛勤;肖建辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法测定桑麻丸中芦丁的含量

HPLC法测定桑麻丸中芦丁的含量
方雯雯
【期刊名称】《现代中药研究与实践》
【年(卷),期】2010(024)006
【摘要】目的建立桑麻丸中芦丁的含量测定方法 .方法采用高效液相色谱法,色谱柱:C18色谱柱,甲醇为流动相A,0.5%磷酸溶液为流动相B,进行梯度洗脱,检测波长358 nm.结果芦丁在0.0768mg·mL-1～0.179 2 mg·mL-1内线性关系良
好,r=0.9992,平均回收率99.77%,RSD为1.07%.结论该方法操作简单、快速、灵敏、准确,可作为桑麻丸的质量控制标准.
【总页数】3页(P80-81,74)
【作者】方雯雯
【作者单位】黄山市中医院,安徽黄山245000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.HPLC法测定雪莲浸膏粉中绿原酸、芦丁、槲皮苷的含量 [J], 马庆东;严俊仓;于乾;唐雪君;王新宇;杨璐;王金辉
2.HPLC法测定针叶樱桃提取物中芦丁的含量 [J], 周朋;石美丽;周倩;林凤辉;秦晋颖;刘志刚
3.HPLC法测定楚雄本地苦蒿中芦丁的含量 [J], 高垚;郭向群
4.HPLC法测定不同产地无花果中芦丁的含量 [J], 刘莹;陈烁晨;闫舒;裴丹;梅阳;张
碧月
5.HPLC法测定唇香草中迷迭香酸与芦丁的含量 [J], 毛丽旦·阿扎提;王莹;兰卫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定桑叶中的芦丁

高效液相色谱法测定桑叶中的芦丁孙莲;张丽静;孟磊;陈坚【期刊名称】《内蒙古中医药》【年(卷),期】2004(023)002【摘要】目的:测定新疆不同地区桑叶中芦丁的含量.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为ZORBAX-ODS(5μm.125mm×4.6mm i.d.)柱,甲醇:0.4%的磷酸溶液(体积比为45:55)为流动相,检测波长为360nm.结果:在上述色谱条件下芦丁的峰面积与其质量浓度ρ在0.029～0.406μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=2757.25x+3.10,r=0.9998,平均回收率为96.6%,RSD=1.06%(n=8).实验证明吐鲁番地区的桑叶中芦丁的含量最高.结论:本法简单、快速,结果准确.【总页数】2页(P27-28)【作者】孙莲;张丽静;孟磊;陈坚【作者单位】新疆医科大学化学教研室,830054;新疆大学理化测试中心,830054;新疆医科大学化学教研室,830054;新疆医科大学化学教研室,830054【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.反相高效液相色谱法测定不同采集期银杏叶中芦丁的含量 [J], 刁全平;侯冬岩;回瑞华;郭华;姜显光2.高效液相色谱法测定青海小叶黑柴胡茎叶中芦丁的含量 [J], 黄鹤慧;蔡光明;金光洙;刘鄂湖;周伟;熊晗晖3.高效液相色谱法测定不同时期的日本楤木叶中芦丁含量 [J], 翁喜娇;茹丽叶;张长玉;于蕾;赵前飞;陈曦;李德生4.反相高效液相色谱法测定不同产地桑叶中芦丁的含量 [J], 郑雪花;刘塔斯;陈迪钊5.用反相高效液相色谱-紫外检测法测定桑叶中芦丁、槲皮素和1-脱氧野尻霉素的含量 [J], 吴秋生;王俊;吴福安;吴倩;刘利;陈明胜;赵璐璐;程嘉翎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

对市售桑叶药材中芦丁的含量调查

对市售桑叶药材中芦丁的含量调查
曾森;刘虹;张德芹;刘韦鋆;朱晓月;郝彧
【期刊名称】《中医药导报》
【年(卷),期】2010(16)4
【摘要】目的:考察并分析桑叶药材的质量现状。

方法:采用HPLC法分别对10份市售药材样品的芦丁含量进行测定。

采用高效液相色谱法,Phenomsil
C18(250mm×4.6mm)为色谱柱,以甲醇-0.5%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检
测波长为358nm,柱温为24℃。

结果:10份样品的芦丁含量均未能达到《中国药典》(2005年版)的含量标准。

结论:桑叶中芦丁含量普遍较低。

【总页数】2页(P87-88)
【关键词】桑叶;芦丁;含量测定
【作者】曾森;刘虹;张德芹;刘韦鋆;朱晓月;郝彧
【作者单位】天津中医药大学中医药研究院教育部方剂学重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.高效液相色谱法比较巴西桑叶与中国桑叶中芦丁含量 [J], 艾则孜江·艾尔肯;田志浩;李莉;徐文英;高山山;韩丽;赵百孝;刘春生;马长华
2.HPLC法同时测定桑叶药材及其炮制品中绿原酸、芦丁和异槲皮苷的含量 [J],
程聪梅;毛菊华;余乐
3.不同提取方法对桑叶中芦丁含量的影响研究 [J], 何晶;钱斐莹;邹培;孙艳涛
4.不同灭菌方法对桑叶超微粉中芦丁含量的影响 [J], 蒋振华;李胜容;王贤英
5.市售荷叶药材中荷叶碱含量调查 [J], 朱晓月;刘虹;郝彧;曾森;张德芹;吴帅
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