【精品课件】细菌生理生化反应
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糖发酵试验
一.在肠道细菌的鉴定上尤为重要 二.细菌可发酵的基质
糖(葡萄糖、蔗糖、乳糖) 醇(甘露醇) 糖苷(甘油) 发酵后产生的有机酸 乳酸、醋酸、丙酸等 发酵后产生的气体 甲烷、氢、二氧化碳等
葡萄糖发酵试验 乳糖发酵试验
乳酸、醋酸、丙酸
葡萄糖/乳糖
pH<5.2, 溶液由清亮紫色变为浑浊黄色
甲烷、氢、二氧化碳
细菌生理生化反应
一.目的要求
学习并掌握细菌分类鉴定中常用的 生理生化反应。
实验原理
细菌的代谢与呼吸,主要取决于酶的催化作 用,各种细菌具有不同的酶系统。
一.不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白 质和脂肪的能力不同,所能发酵的类型和 终产物也不一样。
二.细菌代谢类型的多样性,具体表现在生化 反应多样性,因此在细菌分类鉴定中,常 利用其生理生化反应作为重要依据。
徳汉氏小管内有气泡,产气漂浮
指示剂:溴甲酚紫(变色范围pH5.2-6.8, pH<5.2黄色,pH>6.8紫色)
安装倒立的徳汉氏氏小管(内充满液体)
乙酰甲基甲醇试验(V.P.试验) 甲基红试验(M.R.试验)
一.细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖, 所产生的丙酮酸,可被进一步代谢。
二.细菌体内丙酮酸代谢途径的不同, 可通过V.P. 和M.R. 这一对实验进行 鉴别。
大肠杆菌
产气肠杆菌
对照 (管数)
不接种
不接种
(三)反应结果鉴定
葡萄糖/乳糖发酵试验
直接观察。
VP试验:去塞,加40%KOH 10滴,再加
等量5%α-奈酚,用力振荡,37℃培养 30min,观察。
吲哚试验:加1ml乙醚(作用是萃取出吲
哚)。振荡,静止片刻使分层,沿管壁慢 慢加入吲哚试剂10滴,观察。
V.P.反应阳性途径:
吲哚产生试验
判断细菌是否(含色氨酸酶)能利用 色氨酸。
实验材料
1. 大肠杆菌 (Escherichia coli)
2. 产气肠杆菌
(Enterobacter aerogenes ) 3. 普通变形杆菌(Proteus vulgaris)
实验方法与步骤
(一)液体培养基的制备与灭菌
3)葡萄糖蛋白胨培养基:
一.葡萄糖
0.5 g
二.蛋白胨
0.5 g
三.K2HPO4
0.2 g
四.H2O
100 mL
分装2管
试验名称
(二)接种培养
被接菌种1(管数) 被接菌种2(管数)
1.葡萄糖发酵 2.乳糖发酵 3. VP试验
大肠杆菌 大肠杆菌 大肠杆菌
普通变形杆菌 普通变形杆菌 产气肠杆菌
4.吲哚试验
1)蛋白胨培养基:
一.蛋白胨
4.0 g
二.NaCl
2.0 g
三.H2O
400 mL
调pH 7.6,分出2管,然后加0.5ml 1.6
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% 溴甲酚紫乙醇溶液,溶液呈浅紫色;
分装到装有倒立的德汉氏小管的试
管中(6管)
2)10%葡萄糖溶液,10%乳糖溶液各 20ml 112度,30分钟灭菌
3支德汉氏管中加葡萄糖溶液各1ml 3支德汉氏管中加乳糖溶液各1ml