血细胞分析仪检测技术及临床应用

该技术采用检测三种光学信号(前向散射光、 侧向散射光、侧向荧光)进行白细胞分类的测 定。
前向散射光：细胞大小信息。所采集的前向散 射光信号用于对WBC/BASO的测定。 侧向散射光：反映细胞核及颗粒的信息(主要 是颗粒的复杂性) 。所采集的侧向散射光信号 用于WBC/BASO和WBC/DIFF的测定。 侧向荧光：通过对核酸(DNA和RNA)进行染色， 荧光信号提示细胞核酸的信息。所采集的侧向 荧光信号用于WBC/DIFF 的测定。
过氧化氢酶含量:嗜酸粒细胞＞中性粒细 胞＞单核细胞. 淋巴和嗜碱粒细胞无
由于酶反应阳性程度不同,通过激光束时 的吸光度也就不同,加上光散射及特殊溶 血剂的作用可进行五分类.
5.核酸荧光染色技术
利用聚次甲基荧光染色液对有核细胞的核酸 (DNA/RNA)进行荧光染色。采用半导体激光流 式细胞检测，获得WBC/DIFF散点图并得到新 的检测参数IG和OTHER。通过对散点图的分析， 可获得LYMPH、MONO、EOS、NEUT+BASO 及NRBC和Ret的测定结果。最早的全自动网织 红分析仪R-1000TM，用荧光染料碱性槐黄； 最新采用的是聚次甲基染料，用来进行WBC四 分类、网织红细胞测定、有核红细胞测定，该 染料被红色半导体激光（波长为633nm）激发 后发出660nm或更高波长的红色荧光。
细胞的三分群：
各种细胞在溶血剂中，经溶血剂中表面 活性剂对细胞膜表面的脂蛋白作用后而 分群，由于RBC膜表面的脂蛋白含量最少 而易被破坏溶解,白细胞的细胞浆漏出， 仅留下核与颗粒并使细胞缩小，原来最 大的单核细胞经溶血剂作用后，体积就 落在了小的淋巴和大的中性粒细胞之间， 这样就按照溶血剂作用后体积大小，将 白细胞分成三群。
血细胞分析仪检测是临床诊断工 作中最常用的实验方法之一
40年代后期美国库尔特先生 (W.H.Coulter)发明了粒子计数技 术(电阻抗法),50年代初期应用于 血细胞计数
血细胞分析仪检测原理
一.电阻抗法(库尔特原理)
1.血细胞具有非传导性质(不良导体) 2.E=I x R→脉冲信号 3.脉冲信号大小与细胞体积成正比 4.脉冲信号的多少代表细胞数量
直方图:表示细胞群体分布情况的图形
纵轴：一定体积大小范围内的细胞频率 横轴：体积（fL） 横坐标为体积，纵坐标是血细胞的相对数量
计算机将白细胞体积从 35—450fl 分为 256 个通道，每个通道 1.64fl，样本中的白细胞依 照大小被分别放在不同的通道中，由此，就产 生了按照大小、数量绘制的直方图，将各个通 道的峰值点用曲线相连产生白细胞直方图。
RBC及相关参数的检测
RBC检测→电阻抗原理
脉冲信号高度的叠加→HCT
单个脉冲信号高度的均值→MCV
RBC:36—360fL区间分析
RDW:仪器将不同大小的脉冲信号分别贮 存在不同通道,计算出相应的体积和数目, 再统计处理得到RDW,用RBC体积的CV或 SD表示.
RBC计数中WBC含量可忽略不计,但在白 血病或WBC异常增高时则对RBC及其相 关参数有明显影响.
浮动界标技术
1.RBC/PLT :
为便于识别，
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在RBC/PLT通道一般把体积大于30f1的细
胞计为红细胞(RBC)，而把体积小于30f1 的细胞计为血小板(PLT)。一般的血细胞 分析仪，PLT和RBC的分界点是固定的(例 如30f1处)，这种情况属于固定界标。但
也有例外的情况，有些公司的血细胞分
第二个高峰地点）作为界标线，并以此
为依据进行判读，由于设计理念的不同，
稀释液和溶血剂对细胞的作用不同于固
定界标，因此，浮动界标的wbc直方图很
少有能超过350fl的横坐标。直方图每次
的结果是不一样的，因此界标线的位置
也是不一样，这就形成界标线的移动，
就是浮动界标
Hb检测:与WBC一起被检测
SLS-HGB检测血红蛋白：
电导法可辨别体积相同而性质不同的两 个细胞群（如；小淋巴和嗜碱）
3。射频技术； 在测量小孔的内外电极装有直流和高
频两个发射器，因此在小孔周围产生直 流和射频两种电流，直流电仅能测量细 胞大小，而射频可透入细胞内，测量核 的大小及颗粒的多少。
利用阻抗+射频技术可将淋巴、单核、 粒细胞区分。
4.过氧化物酶染色技术
PLT检测:电阻抗原理 PLT和RBC一起同时被检测 PLT体积分布:2—28fL,不同仪器的PLT直
方图 范围不一. MPV:是PLT体积分布直方图的产物 MPV与PLT成非线性负相关 PCT参考范围是一不恒定参数 PDW:是PLT体积分布直方图的产物 PLCR:＞12fL的PLT比率
析仪，可以把PLT和RBC的分界点人为地 设置在5-30f1的范围内，在实测样本时， 仪器根据PLT和RBC的分布曲线，自动在
所设定的范围内寻找最低点，以得到正
确的PLT. RBC及相关参数的结果，这就
是浮动界标.
2.WBC :
当直方图出来后，
由软件程序自动判别并寻找直方图上三
个区域的起止点（即第一个高峰起止和
光散射特别具有对细胞颗粒的构型和 颗粒质量的区别能力，从而将三种粒细 胞区分。
利用高低角度光散射可同时对PLT和 RBC进行计数.高角(5-15°)测量RBC数, 检测PLT内容物.低角(1-3°)检测 RBC\PLT体积.
2。电导法
根据细胞壁能产生高频电流的性质采用 高频电磁探针，测量细胞内部结构、核 浆比、细胞内颗粒大小和密度。
测定原理：亚铁血红素中的Fe2+离子被 十二烷基磺酸钠氧化，形成SLS-HGB衍 生物，在550nm波长进行比色测定。
SLS-Hb法测定与ICSH的参考方法相比， 具有非常高的相关性(r=0.999)。
二.血细胞检测技术的发展（五分类）
1。光散射法(Scatter):
来自激光光源的单色光束在10°-70°对细胞进行扫描,提供细胞结构、形 态的光散射信息。
淋巴细胞：35-90fl; 中间细胞：90-160fl; 粒细胞>160fl
依照三群细胞在白细胞体积分布的直方 图上所分布区域的面积，计算得出每群 细胞的百分比，并依照白细胞计数总数， 求得每群细胞的绝对值。
注意:各厂家的溶血剂配方不完全相同,对 白细胞膜的作用程度不同,而各厂家对仪 器的各类WBC区分设置也不尽相同.