推荐-超高效液相色谱(UPLC)课件
高效液相色谱法 PPT课件
键合硅胶 ②流动相:水为基础溶剂,加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇-水、乙腈-水等 应用:最广。非极性至中等极性的组分,(还有 有机酸、碱及盐等极性组分)
1. 保留机制:
疏溶剂理论 (solvophobic theory)
(二)紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理: 朗伯-比尔 (Lambert-Beer) 定律,响应信号 (吸光度)与浓度成正比A=εCl
2.特点: 灵敏度较高(10-6—10-9 g/ml),噪音低,线性 范围宽,稳定性好,适于梯度洗脱,不破坏样品, 应用广(分析、制备)。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法(partition chromatography) 吸附色谱法(adsorption chromatography) 离子交换色谱法(IEC) 空间排阻色谱法(SEC)
(二)流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性(强度) 正相色谱:溶剂极性越强,洗脱能力越强 反相色谱:极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂,分子间的作用力不同,故 选择性不同
混合溶剂(二元或多元流动相)
以反相色谱流动相的选择为例:
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
色谱分析(中国药科大学)超高效液相色谱(UPLC)
超高效液相色谱(UPLC)超高效液相色谱技术(ultra performance liquid chcromatography,简称UPLC)是一种综合了小颗粒填料、非常低系统体积(死体积)及快速检测手段等全新的检测技术。
在全面提升HPLC的速度、灵敏度及分离度的同时,保留其原有的实用性及原理。
基于小颗粒技术的UPLC,并非普通HPLC系统改进而成。
它不但需要耐压、稳定的小颗粒填料(可达1.7µm),而且需要耐压的色谱系统(>15,000psi)、最低交叉污染的快速进样器、快速检测器及优化的系统体积等诸多方面的保障,以充分发挥小颗粒技术优势。
这就需要对系统所有硬件和软件的进行全面创新。
世界第一个商品化UPLC产品是Waters ACQUITY UPLC TM超高效液相色谱系统,它于2004年3月投入市场。
图1:填料技术的沿革1.小颗粒填料改善分离的理论与科学基础液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。
颗粒大小的改变直接影响到柱效,从而对分离结果产生直接影响。
由上图可知:随着颗粒度的不断降低,色谱分离度不断提高。
事实上,上述规律的理论基础是著名的Van Deemeter方程。
Van Deemeter方程是色谱科学家预测颗粒度变化而引起的色谱变化的根本依据。
Van Deemeter曲线(见图2)预测最佳柱效与相应的流动相流速。
由Van Deemeter方程得知:随着颗粒度减小,相应的理论塔板高度(HETP)也下降,得到的柱效会更高。
还应该注意到1.7 µm颗粒的HETP最小值区域扩大了(见图2),这表明可以在比大颗粒更宽的流量范围内得到最高的柱效,结果可以不损失高分离度的同时来适当提高流动相的流速(分析速度)。
小颗粒填料为色谱分离带来如此的高柱效和速度优势,使得利用小颗粒技术成为色谱科学家梦寐以求的目标。
然而HPLC系统的设计,一直难于发挥出最小颗粒的优点。
小颗粒技术的运用,不但要求仪器在超出目前限度(6000 psi/ 400 bar)的压力下工作,同时要求仪器系统的死体积要更小,以便不影响梯度性能,而且还要检测器能高速检测出峰宽只有几秒的色谱峰。
超高效液相色谱法PPT课件
• 3、 高温分析
•
柱温最高达150℃;高温促使新技术的应用,比如绿色色谱法
(Green LC)。
4、 高速LCMS分析
•
与超快速LCMS、LCMS-2020相结合。
第35页/共49页
头发中烟碱和可替宁的超高效液相色谱测 定
• 烟碱( nicotine)是烟草中的主要生物碱, 是导致
吸烟成瘾的物质动因, 也是评价人体摄入烟草烟
第24页/共49页
• 此技术可保证可靠、重现的进样;在自动进样器内,可安置96 位或384位样品盘。每个位置可放置2或4mL样品瓶。新型的样 品组织器可接受21个样品盘的编程。
第25页/共49页
• 与传统的HPLC相比,UPLC的速度、灵敏度及 分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。
• 因此其在蛋白质、肽、代谢组学分析及其它一 些生化领域里将会得到广泛应用。另外,在天 然产物的分析方面,使用UPLC与质谱检测器连 接,会对天然产物分析,特别是中药研究领域 的发展是一个极的促进。
第47页/共49页
第26页/共49页
• 在提到“蛋白组学”或“代谢组学”时,与 没有“组”的差别从分析的角度说就是样品量 极大,需要在短时间分析成千上万的样品。 UPLC不损失分离度的高速度优点在里就能充分 体现。多生化样品及天然产物都十分复杂,
第27页/共49页
第28页/共49页
Waters UPLC 超高效液相色谱
• 3 μm是15 cm长普通色谱柱颗粒大小的极限。这是在色谱柱达 到最佳流速而又不超出市售仪器(使用任何配比的甲醇-水混 合溶剂)的压力限制范围的条件下,运行系统所能使用的最小 颗粒大小。(注意:迄今为止,用于HPLC的最小颗粒是0.67 μm
高效液相色谱PPT教学课件
机制 作用与阿片受体,产生镇痛,镇咳,镇静作用。
本品具有成瘾性,属麻醉性镇痛药。
半合成镇痛药 (结构修饰产物)
HN HO
CH2 HCl 2H2O
HO
O
O
盐酸纳络酮
(熟悉)
是吗啡受体的jiekangji ,临床上主要用作吗啡过量 解毒剂
合成镇痛药
分类(掌握)
吗啡喃类
{ 苯吗喃类 哌啶类 氨基酮类 其他类
pulse; 方法保存:Save, Save as 5、方法连接:方法名-Set-Ideal 6、 进样 7、检测器关闭-管路的清洗、色谱柱的更换与保管、流
动相及废液的处理-色谱泵关闭 8、数据计算与处理 9、结果打印-工作站、计算机、关闭
第六节 液相色谱分析举例
有机酸分析 色谱柱:Shim-Pack SCR-102H, 80mm30cm 流动相:pH 2.1 高氯酸溶液
〉2000 空间排阻色谱
根据组分的溶解性选择分离方法
类型 水溶 离解 异辛 苯溶 二氯 异丙
烷
甲烷 醇溶
溶
离子 交换
★
★
吸附
★★
正相
★★★
反相
★
第四节、流动相的选择
选择流动相须考虑的因素: 1、纯度:分析纯、色谱纯 2、避免使用柱效损失或者保留特性变 化的溶剂; 3、溶解度:对试样有一定的溶解度; 4、溶剂的粘度:要小。
利用样品中多组分具有不同疏水作用的性质进行分离的 方法。
应用:分离蛋白质 固定相:表面为疏水作用基团的物质,其疏水性仅为反
相色谱的1/10-1/100。 流动相:高离子强度的盐 影响因素: (1)固定相的疏水性:过大会引起不可逆性吸附。 (2)离子强度:大的洗脱能力强、峰形尖锐 (3)酸度: (4)温度:升温会增加保留时间,但会降低蛋白质的溶
色谱分析(中国药科大学)超高效液相色谱(UPLC)
超高效液相色谱(UPLC)超高效液相色谱技术(ultra performance liquid chcromatography,简称UPLC)是一种综合了小颗粒填料、非常低系统体积(死体积)及快速检测手段等全新的检测技术。
在全面提升HPLC的速度、灵敏度及分离度的同时,保留其原有的实用性及原理。
基于小颗粒技术的UPLC,并非普通HPLC系统改进而成。
它不但需要耐压、稳定的小颗粒填料(可达1.7µm),而且需要耐压的色谱系统(>15,000psi)、最低交叉污染的快速进样器、快速检测器及优化的系统体积等诸多方面的保障,以充分发挥小颗粒技术优势。
这就需要对系统所有硬件和软件的进行全面创新。
世界第一个商品化UPLC产品是Waters ACQUITY UPLC TM超高效液相色谱系统,它于2004年3月投入市场。
图1:填料技术的沿革1.小颗粒填料改善分离的理论与科学基础液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。
颗粒大小的改变直接影响到柱效,从而对分离结果产生直接影响。
由上图可知:随着颗粒度的不断降低,色谱分离度不断提高。
事实上,上述规律的理论基础是著名的Van Deemeter方程。
Van Deemeter方程是色谱科学家预测颗粒度变化而引起的色谱变化的根本依据。
Van Deemeter曲线(见图2)预测最佳柱效与相应的流动相流速。
由Van Deemeter方程得知:随着颗粒度减小,相应的理论塔板高度(HETP)也下降,得到的柱效会更高。
还应该注意到1.7 µm颗粒的HETP最小值区域扩大了(见图2),这表明可以在比大颗粒更宽的流量范围内得到最高的柱效,结果可以不损失高分离度的同时来适当提高流动相的流速(分析速度)。
小颗粒填料为色谱分离带来如此的高柱效和速度优势,使得利用小颗粒技术成为色谱科学家梦寐以求的目标。
然而HPLC系统的设计,一直难于发挥出最小颗粒的优点。
小颗粒技术的运用,不但要求仪器在超出目前限度(6000 psi/ 400 bar)的压力下工作,同时要求仪器系统的死体积要更小,以便不影响梯度性能,而且还要检测器能高速检测出峰宽只有几秒的色谱峰。
超高效液相色谱
色谱泵及控制器
数据处理及控制
色谱柱 检测器
Waters 486
进样器
概念
超高效液相色谱技术(ultra performance liquid chcromatography,简称UPLC )是一种综合了小颗粒填料、 非常低系统体积(死体积)及快 速检测手段等全新的检测技术 。在全面提升HPLC的速度、 灵敏度及分离度的同时,保留 其原有的实用性及原理。
2.2中药药品分析
Waters公司合成了1.7 p.m颗粒度的Acquity UPLC填料, 减少了固定相表面残余硅羟基,因而在分析生物碱类样品时, 流动相中只加入酸抑制剂,不需添加有机胺即可使其获得良 好的分离。由于在流动相中避免了有机胺及盐的加入,可以 在一定程度上降低质谱噪音、减少对质谱的污染,且使用的 流速适合与质谱直接联用,无需分流,可以进一步提高检测 灵敏度,为中药分析提供良好的平台。
1.2食品添加剂分析检测中的应用
随着食品品种和添加剂种类的增加、多种添加剂的复配使用, 迫切需要建立多种添加剂同时快速检测的方法。目前,HPLC 技术是食品添加剂检测的最常用方法;而较这一传统方法而言 ,在技术性能上拥有优势的UPLC 得到了更突出的应用。药物Biblioteka 发领域2.1化学药品分析
在针对药物合成的分析方面,UPLC可实现随时快速准确检 测合成过程中的中间体、副产物或降解产物等。
超高效液
相色谱及 其应用
演讲人:孙硕 ppt制作:宋云龙
材料收集:
任苏瑜 石君
环境科学 班第五组
前言
随着科学技术的进步,对液相色谱技术的要求也不断 提高,单从技术角度的改进已经不行。这就需要同时 从科学与技术的角度出发,或者说从理论高度对液相 色谱重新认识。因此,UPLC(超高效液相色谱)概 念得以提出,将HPLC的极限作为自己的起点。
高效液相色谱法培训课件
8
第二节 高效液相色谱仪
高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置 和压力表 等组成。
1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑 料制成,容量为1到2 L,用来贮存足够数量、符合要求的流 动相。
2.高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部 件之一,其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连 续不断地送入液路系统,使样品在色谱柱中完成分离过程。 由于液相色谱仪所用色谱柱径较细,所填固定相粒度很小, 因此,对流动相的阻力较大,为了使流动相能较快地流过
送,所用的固定相柱效低,分析周期长。而现代液相色谱法 引用了气相色谱的理论,流动相改为高压输送(最高输送压 力可达4.9107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料 填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数 可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可 对流
1
第一节 概 述
11
第二节 高效液相色谱仪
合,再输至柱系统。 梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度,来调
整混合样品中各组分的k值,使所有谱带都以最佳平均k值通 过色谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的 程序升温,所不同的是,在梯度洗脱中溶质k值的变化是通 过溶质的极性、pH值和离子强度来实现的,而不是借改变温 度(温度程序)来达到。
9
第二节 高效液相色谱仪
色谱柱,就需要高压泵注入流动相。 对泵的要求:输出压力高、流量范围大、流量恒定、无
脉动,流量精度和重复性为0.5%左右。此外,还应耐腐蚀, 密封性好。
高压输液泵,按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类。 恒流泵是能给出恒定流量的泵,其流量与流动相粘度和 柱渗透无关。 恒压泵是保持输出压力恒定,而流量随外界阻力变化而 变化,如果系统阻力不发生变化,恒压泵就能提供恒定的流 量。
超高效液相色谱UPLC课件
UPLC的发展趋势与展望
REPORTING
提高仪器性能与稳定性
更高的分离效能
通过改进泵、柱温箱等关键部件,提高仪器的分离效能,缩短分 析时间。
更高的灵敏度
采用新型检测器技术,提高检测器的灵敏度和响应速度,降低检测 限。
更高的重现性
优化仪器内部流路设计,减少流体不稳定性和交叉污染,提高仪器 重现性。
存过程中的变化情况,为制剂的有效期提供依据。
2023
PART 06
UPLC在食品安全检测中 的应用
REPORTING
食品中农药残留的检测
农药残留检测
UPLC技术可以快速准确地检测出食品中农药残留的种类和浓度 ,确保食品的安全性。
优势
UPLC具有高分离效能、高灵敏度、高分析速度等优点,特别适 合于复杂基质中微量、痕量农药残留的检测。
2023
PART 05
UPLC在药物分析中的应 用
REPORTING
药物成分的分离与检测
分离复杂药物混合物
UPLC具有高分离效能,能够将药物混合物中的各个成分进行有效 分离,为后续的检测提供基础。
检测灵敏度高
UPLC的检测器具有高灵敏度,能够检测出低浓度的药物成分,满 足药物分析中对痕量成分的检测需求。
开发新型固定相材料
1 2
新型硅胶基质
研发具有更高稳定性、更低成本和更环保的硅胶 基质固定相材料。
新型有机高分子固定相
开发具有优异分离性能、高选择性和高稳定性的 有机高分子固定相材料。
3
混合固定相
将硅胶基质和有机高分子固定相结合,制备出具 有优异分离性能的混合固定相材料。
拓展应用领域
环境样品分析
利用UPLC的高分离效 能和灵敏度,拓展其在 环境样品分析领域的应 用。
UPLC超高效液相色谱入门指南沃特世
首先,导入采集到的色谱数据;其次,进行基线校正以消除背景干扰;接着,进行峰识 别与积分以确定各色谱峰的保留时间和峰面积;最后,根据标准曲线进行定量分析,得
到各组分的浓度信息。
结果解读与报告生成
结果解读
根据处理后的色谱数据和定量分析结果, 可以解读出样品中各组分的含量和相关信 息。需注意检查数据的合理性和准确性。
妥善处理。
核实实验室是否遵守环保法规 和相关标准,如废水、废气、 噪声等排放是否符合环保要求。
个人防护措施和应急处理能力培训
对实验人员进行个人防护知识培训,包括如何正确佩戴和使用个人防护装备,如防护服、护目镜、手 套等。
提供应急处理能力培训,包括如何应对实验过程中可能出现的突发情况,如化学品泄漏、火灾等。
避免污染和交叉污染措施
使用高质量的试剂和溶剂, 减少杂质和污染物的引入。
对于不同性质的样品,要 采用不同的进样器和色谱 柱,避免交叉污染的发生。
ABCD
定期清洗进样器、色谱柱 和检测器等部件,避免残 留物对后续分析的影响。
在更换样品或溶剂时,要 彻底清洗相关部件,确保 无残留物对后续分析造成 干扰。
生物分析
要点二
食品分析
UPLC可用于生物样品(如血液、尿液等)中生物标志物的检 测和分析。
UPLC可用于食品添加剂、营养成分等的检测和分析。
沃特世UPLC技术特点
高品质色谱柱
先进的仪器设计
沃特世提供多种类型的高品质色谱柱,满足 不同分离需求,确保分析结果的准确性和可 靠性。
沃特世UPLC仪器设计先进,操作简便,具有 高度的稳定性和可靠性,确保长时间运行的 稳定性和准确性。
分离系统
即色谱柱,是实现样品中各组分分离的关 键部分。
超高效液相色谱法(uplc)检测防腐剂和色素
1.柠檬黄 2.苋菜红 3.胭脂红 4.日落黄 5.诱惑红 6.赤藓红
订购电话:
18103820566
1.苯甲酸 2.糖精钠 3.山梨酸
*以上实验数据来源于北京市疾病预防控制中心
UPLC 法检测色素及防腐剂相关产品信息:
货号 名称 样品前处理 37177 37180 针头式过滤器 Nylon 针头式过滤器 Nylon 色谱柱及保护柱 87003 超高效液相色谱(UHPLC)专用柱 Endeavorsil C18 标准品 56-03322-25MG 56-87612-25MG 56-18137-25MG 56-68775-25MG 56-38213-25MG 56-87613-25MG 46615 51-47839-1G 46613 酒石黄/柠檬黄[1934-21-0] 苋菜红[915-67-3] 胭脂红[2611-82-7] 日落黄[2783-94-0] 诱惑红[25956-17-6] 赤藓红/藻红[16423-68-0] 苯甲酸[65-85-0] 糖精钠[82385-42-0] 山梨酸[110-44-1] HPLC溶剂缓冲盐离子对试剂 50101
乙腈 HPLC 级
2 上海:021-6126 3966 天津:400-633-6606 南京:025-8347 9007
4L
广州:020-8559 3520 青岛:0532-8372 5230 石家庄:0311-6668 6220
50138
乙酸铵 HPLC 级 通用色谱产品 瓶架/蓝色 瓶架/白色 样品瓶(棕色/螺纹) 样品瓶盖/含垫(已经组装) HPLC 进样针
订购电话: 北京:400-608-7719 沈阳:024-2294 3513 成都:028-8661 2625
规格 13 mm,0.22 μm 100/pk 13 mm,0.45 μm 100/pk
超高效液相色谱(UPLC)课件
AU AU
对流出时间接近的色谱峰有更好的分离度及更高的灵敏度
2.理论基础
在高效液相色谱速率理论中, Van Deemter方程式的简
化表达式:
如果仅考虑固定相的粒度 对 的影响,其简化方程式可表 达为:
更小的颗粒度……
van Deemter 曲线带来的承诺
如果填料的颗粒继续演变……
填料颗粒尺寸的演变
AU
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50 M inutes
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
0.012 0.010 0.008 0.006
0.004 0.002 0.000 -0.002 0.00
UPLC™ 1.7µm
0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 M inutes 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00
3.1 超高效液相色谱的C18色谱柱
固定相粒度 直径可达
dp
1.7µm 色谱柱长可 达3-5cm
3.1.1 色谱柱颗粒化学
改善了高pH稳定性
改善了硅胶的柱效和反压
改善了低pH稳定性
在杂化的碳-硅基质内具有桥式乙烷的1.7µm颗粒 三官能团键合C18配体
3.1.2 色谱柱硬件
筛板、柱管和连
HPLC
45.05 41.22 43.13
%
10.57 9.68
12.91
16.58 17.78 22.96 19.16
1.68 3.26
5.99
0 H040114A_RP_ESI+_002AB 100
28.88 32.91 45.23 25.60
色谱分析(中国药科大学) 超高效液相色谱(UPLC)
色谱分析(中国药科大学)超高效液相色谱(UPLC)超高效液相色谱(UPLC)超高效液相色谱技术(ultra performance liquid chcromatography,简称UPLC)是一种综合了小颗粒填料、非常低系统体积(死体积)及快速检测手段等全新的检测技术。
在全面提升HPLC的速度、灵敏度及分离度的同时,保留其原有的实用性及原理。
基于小颗粒技术的UPLC,并非普通HPLC系统改进而成。
它不但需要耐压、稳定的小颗粒填料(可达 1.7µm),而且需要耐压的色谱系统(>15,000psi)、最低交叉污染的快速进样器、快速检测器及优化的系统体积等诸多方面的保障,以充分发挥小颗粒技术优势。
这就需要对系统所有硬件和软件的进行全面创新。
世界第一个商品化UPLC产品是Waters ACQUITY UPLC TM超高效液相色谱系统,它于2004年3月投入市场。
图1:填料技术的沿革1.小颗粒填料改善分离的理论与科学基础液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。
颗粒大小的改变直接影响到柱效,从而对分离结果产生直接影响。
由上图可知:随着颗粒度的不断降低,色谱分离度不断提高。
事实上,上述规律的理论基础是著名的Van Deemeter方程。
Van Deemeter方程是色谱科学家预测颗粒度变化而引起的色谱变化的根本依据。
Van Deemeter曲线(见图2)预测最佳柱效与相应的流动相流速。
由Van Deemeter 方程得知:随着颗粒度减小,相应的理论塔板高度(HETP)也下降,得到的柱效会更高。
还应该注意到1.7 µm颗粒的HETP最小值区域扩大了(见图2),这2表明可以在比大颗粒更宽的流量范围内得到最高的柱效,结果可以不损失高分离度的同时来适当提高流动相的流速(分析速度)。
小颗粒填料为色谱分离带来如此的高柱效和速度优势,使得利用小颗粒技术成为色谱科学家梦寐以求的目标。
然而HPLC系统的设计,一直难于发挥出最小颗粒的优点。
超高效液相色谱(UPLC)
高通量实验室始终要求在单位时间内提供更 多的信息和处理更多的样品并保证提供高质 量的数据。 较小的颗粒能超乎寻常地提高分析速度而不降低分离度。
L N∝ dp
颗粒度减小后,柱长可以按 比例缩短而保持柱效不变
1 颗粒度越小,最佳流速也越 最佳流速∝ —— 大,进而可以通过提高流速 dp
来进一步加快分离速度
如果仅考虑如果只关心理论塔板高度(H)与流速 (线速度;u)及填料颗粒度(dp)之间的关系, 其简化方程式可表达为:
在相同线速度下,填料粒径(dp)越小,理论塔板 高度越小,柱效越高。
超高分离度
k2 N 1 α பைடு நூலகம் Rs = ( ) ( ) ( ) k2 + 1 α 4 1 L
N∝
dp
随着dp的降低,N值会增加;而 N值增加,则Rs值增加
理论基础
UPLC保持了传统HPLC的基本原理,但其分离效能和分 析速度却得到了全面提升,这归功于其独特的小颗粒色 谱填料技术。
在高效液相色谱速率理论中, Van Deemter方程式的简 化表达式:
A、B、C均为常数,其中: A—涡流扩散项系数 B—分子扩散项系数 C—传质阻力项系数 各项均与固定相粒度(dp)相关
ACQUITY UPLCTM 系统: 1.7 μm 颗粒提供 的柱效比5 μm颗粒提高了3倍。1.7 μm颗粒 的分离度比5 μm颗粒提高了70%。
UPLCTM用1.7 μm颗粒提高了分离能力,可以分离 出更多的色谱峰,从而对样品提供的信息达到了一 个新的水平。
UPLCTM与HPLC:分离度比较
超高速度
高效液相色谱法培训PPT课件
注意事项与常见问题解答
样品处理注意事项
01
避免样品污染、损失或变质,确保处理过程的准确性和可重复
性。
常见问题及解决方法
02
针对样品处理过程中可能出现的问题,如回收率低、干扰物质
多等,提供相应的解决方法。
安全与防护
03
注意有毒有害试剂的使用安全,做好个人防护和环境保护工作。
04 方法开发与优化策略
梯度洗脱程序设计思路
初始比例确定
根据待测组分的极性差异,选 择合适的初始流动相比例。
梯度斜率设置
根据组分的分离情况,调整梯 度斜率,使各组分在合适的保 留时间内洗脱出来。
梯度时间设置
确保梯度洗脱过程中,各组分 能够充分分离,同时避免过长 的分析时间。
梯度曲线类型
根据实际需求选择合适的梯度 曲线类型,如线性梯度、凹形
梯度或凸形梯度等。
方法验证内容及标准
精密度
准确度
通过添加回收率试验,验证方法 的准确度,确保测定结果可靠。
考察方法的重复性和中间精密度, 确保测定结果的稳定性。
线性范围
确定方法的线性范围,确保待测 组分浓度在该范围内时,测定结 果准确可靠。
专属性
考察方法对待测组分的选择性, 确保其他共存物质不干扰测定。
长期稳定性
考察样品在规定的储存条件下放置一定时间后的稳定性,以确定 样品的保质期和储存条件。
方法学考察
对分析方法本身进行稳定性考察,包括方法的耐用性、重复性和 中间精密度等指标的评估。
质量控制图绘制和应用
质量控制图绘制
根据长期稳定性考察数据,绘制质量控 制图,包括平均值、标准差和控制限等 指标。
VS
发展历程及应用领域
高效液相色谱系统ppt讲解共55页
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人,倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢!
55
▪
26、要使整个人生都过得舒适、愉快,这是不可能的,因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
▪
27、只有把抱怨环境的心情,化为上进的力量,才是成功的保证。——罗曼·罗兰
▪
28、知之者不如好之者,好之者不如乐之者。——孔子
高效液相色谱系统ppt讲解
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法, 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现,法律就是这样 一种的 网,触 犯法律 的人, 小的可 以穿网 而过, 大的可 以破网 而出, 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏,庇 护着我 们大家 ;它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
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7
Minutes
恒定柱长时;UPLC™的灵敏度提高1.7倍(170%)!
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恒定L/dp时;UPLC™的灵敏度提高三倍(300%)!
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5.0 µm
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可看到更多
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的样品信息
0.010
1.7 µm
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Minutes
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使用1.7µm颗粒度的填
0.008 0.004
料增加灵敏度
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1.70 1.80 1.90 2.00 2.10 2.20 2.30 2.40 2.50 2.60 Minutes
8
AU
Ultra Performance LC™
速度、灵敏度与分离度的结合
60% 更快
0.050 0.040
30% 更灵敏
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70% 更高分离度
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15.00
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如果填料的颗粒继续演变……
12
填料颗粒尺寸的演变
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0.00
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一分钟以内!
前景: 2.1×100mm色谱柱 1.7µm杂化填料颗粒
可达到15,000psi 通常有每米200,000理论 塔板数的柱效
速度、灵敏度及 分离度的完美结合
13
3.UPLC仪器介绍
检测器:
• 光学及/或质谱检测器 • 可调紫外或光电二极管矩阵 • 为UPLC™专门优化的流动池 • 高速检测
样品管理器:
• 低扩散XYZZ’形式 • 快速进样周期 • 低交叉污染 • 样品盘及/或样品瓶 • 可选样品组织器
色谱柱管理:
• 创新的枢轴转动设计 • 置色谱柱出口直接到检测器
在杂化的碳-硅基质内具有桥式乙烷的1.7µm颗粒
三官能团键合C18配体
16
3.1.2 色谱柱硬件
17
筛板、柱管和连 接件,可在超过 140MPa压力下 装填,保证色谱 柱高柱效和长寿 命。
18
eCord 装置
可记录进样次数、最大反 压及温度 智能芯片自动下载关键参 数到色谱柱历史文件 信息不可删除 含有该色谱柱独特的分析 证书
两元溶剂管理:
• 高压混合 • 两元梯度 • 四溶剂选择 • 在线脱气 • 低扩散设计 • UPLC的耐压能力
14
3.1 超高效液相色谱的C18色谱柱
固定相粒度
直径可达
dpLeabharlann 1.7µm色谱柱长可
达3-5cm
15
3.1.1 色谱柱颗粒化学
改善了高pH稳定性 改善了硅胶的柱效和反压 改善了低pH稳定性
0.030
AU
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0.010
1.7 µm
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1.00
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5.00
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Minutes
在改进获得信息质量的前提下提高分析速度
9
Ultra Performance LC™
速度、灵敏度与分离度的结合
生产力:每次实验得到更多信息
AU AU
0.012 0.010 0.008 0.006 0.004 0.002 0.000 -0.002
超高效液相色谱
1
目录
1
绪论
2
理论基础
3
仪器介绍
4
应用和展望
2
1.绪论
3
超高效液相色谱的发展
站在当今世界科技前沿的液相色谱用户现在又有了新的 需求。首先是改进生产力的需求,因为大量的样品需要在很 短的时间内完成;其次是在生化样品及天然产物样品的分析 中,样品的复杂性对分离能力提出了更高的要求;第三是在 与质谱等检测技术联用时,也提出了更高的要求。
5.00 5.00
HPLC 3.5µm
UPLC™ 1.7µm
对流出时间接近的色谱峰有更好的分离度及更高的灵敏度
10
AAUU
2.理论基础
在高效液相色谱速率理论中, Van Deemter方程式的简 化表达式:
如果仅考虑固定相的粒度 对 的影响,其简化方程式可表 达为:
11
更小的颗粒度……
van Deemter 曲线带来的承诺
0.00
0.012 0.010 0.008 0.006 0.004 0.002 0.000 -0.002
0.00
0.50 0.50
1.00 1.00
1.50 1.50
2.00
2.50 Minutes
3.00
2.00
2.50 Minutes
3.00
3.50 3.50
4.00 4.00
4.50 4.50
因此,对液相色谱技术的要求也不断提高,单从技术
角度的改进已经不行,或者说必须从理论高度对液相色谱重
新认识。由此,UPLC(超高效液相色谱)概念得以提出,
将HPLC的极限作为自己的起点。
4
超高效液相色谱技术的实现,主要是依靠以 下几个方面的进步:
(1)小颗粒、高性能微粒固定相的出现; (2)超高压输液泵的使用; (3)高速采样速度的灵敏检测器; (4)使用低扩散、低交叉污染自动进样器, 配备了针内进样探头和压力辅助进样技术; (5)仪器整体系统优化设计:色谱工作站配 备了多种软件平台,实现超高效液相分析方法与 高效液相分析方法的自动转换。
1.50
2.00
2.50
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
5.50
6.00
UPLC™
0.20
样品的组份数:5
1.7µm颗粒度
完全分离的时间:0.60分钟
0.10
增加了样品 的通量
0.00
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60
5
超高 效液 相色 谱的 优点
分析速度快 灵敏度高
分离度好
6
UPLC的速度提高了!
AU AU
1. z0n.oelz0nue4een6ne-e-0-.01.08.1203878 5. hexylbenzene - 0.360
1. Thiourea - 0.430 2. toluene - 1.034
3. propylbenzene - 1.742 4. butylbenzene - 2.413 5. hexylbenzene - 5.058
0.24
UPLC™
0.20
0.16
0.12
HPLC
样品的组份数:5 5µm颗粒度 完全分离时间:6.00分钟
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0.50
1.00