流动相的选择
液相色谱流动相的选择依据及使用注意事项
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。
其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。
一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。
一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。
溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。
在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。
一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。
2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。
甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。
水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。
3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。
在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。
2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。
3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。
二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。
这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。
2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。
这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。
流动相的选择
流动相的选择•采用“HPLC” 级溶剂•避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂•对试样有适宜的溶解度•溶剂粘度要小•与检测器相匹配水的等级–纯化水–蒸馏水–去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物溶剂的等级–HPLC级–优级纯–分析纯都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质溶剂的过滤滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。
醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。
尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。
再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形3）检测器中的气泡产生基线波动脱气的目的防止由气泡的产生引起的故障防止由溶解（在液体中的）气体量的变动引起的检测不稳定程度1）示差折射率检测器*使折射率变化2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收3）荧光检测器*溶解氧气有消光作用脱气的方法1. 超身波脱气法2. He清除法3. 使用氟树脂膜的减压脱气法梯度洗脱法梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。
梯度洗脱：优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度梯度洗脱法的注意点●溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差●梯度混合的溶剂互溶性要好●梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）●查看空白实验的数据。
●遵守分析周期。
简述液相色谱中流动相的选择
简述液相色谱中流动相的选择
液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 中的流动相，也叫做溶
剂或移动相，是指样品在色谱柱中流动的溶液。
液相色谱的分离效果受到流动相的选择和配比的影响，因此流动相的选择是液相色谱分离技术中十分重要的一环。
液相色谱中常用的流动相包括有机溶剂、水、酸、盐酸/氢氧
化钠、醋酸/乙酸盐以及缓冲液等。
不同类型的溶剂或混合溶
剂可以用来分离不同性质的化合物：
1. 极性化合物的分离一般采用水和一些极性有机溶剂（如甲醇、乙醇、乙腈等）的混合物作为流动相。
2. 非极性化合物的分离则需要使用非极性有机溶剂（如正己烷、甲苯、乙酸乙酯等）或者混合有机溶剂（如乙醚和正己烷的混合物）作为流动相。
3. 酸类化合物和有机酸类化合物的分离用含有少量酸的水溶液（如醋酸溶液等）作为流动相。
4. 离子性化合物的分离则需要使用缓冲液作为流动相。
如果需要可逆电渗析检测器，则流动相需要含有离子对。
需要注意的是，在选择流动相时，不仅要考虑其相容性、带电性、缓冲效应等因素，还要考虑其挥发性、毒性和成本等因素。
因此，流动相的选择应该根据需要的分离效果、性质、成本和实验条件等综合因素进行考虑和选择。
亲和色谱流动相选择
亲和色谱流动相选择
选择亲和色谱流动相的关键因素包括以下几个方面：
1. pH值：流动相的pH值对于亲和色谱的选择性有重要影响。
不同的亲和色谱介质对于pH值有不同的要求，需要根据具体
的实验材料来选择合适的pH值。
2. 缓冲剂的选择：缓冲剂可以影响流动相的离子强度和离子种类，从而影响样品与固定相的相互作用。
常用的缓冲剂包括Tris、MES、HEPES等。
3. 配平离子：在某些情况下，添加适量的金属离子、亚金属离子或其他离子可以增强某些亲和色谱介质的选择性和增强吸附效果。
4. 有机溶剂的选择：有机溶剂可以用来调节流动相的极性和溶解性，从而改变样品和固定相的相互作用。
常用的有机溶剂包括甲醇、乙醇等。
5. 温度：温度可以影响样品分子与固定相的相互作用力，从而影响色谱分离的选择性。
一些亲和色谱介质对于温度较为敏感，需要在适当的温度下进行实验。
综上所述，选择合适的亲和色谱流动相需要综合考虑这些因素，并对具体的实验材料进行优化。
高效液相色谱流动相选择
高效液相色谱流动相选择流动相流动相的性质要求：一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
④粘度要低(应<2cp)。
高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
⑤对样品的溶解度要适宜。
如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
⑥样品易于回收。
应选用挥发性溶剂。
流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。
流动相的选择技巧
流动相的选择技巧
一、关于流动相的选择
1.1合适的流动相类型
(1)气体：气体液体混合体可用于多组份溶剂及中等温度、中等压力的重金属的测定。
(2)液体：液体可以用于溶解有机物、金属离子和微量的有机物，以及溶质有特殊极性的物质，液体还可以溶解重金属、有机污染物等物质。
(3)溶液：液相色谱常用溶液来作为流动相，其中常用的溶剂有水和甲醇等，也可以使用乙醚、氯仿等极性溶剂，也可以使用正己烷、乙腈等非极性溶剂。
(4)固体杂质：固体杂质是液相色谱的主要流动相，固体杂质可以形成可溶性的悬液，可以促进待测试样品的分离和层析。
(5)介质：介质可以用于空气、水、酸和碱以及金属溶液中的分析。
(6)表面活性剂：表面活性剂可以用于增强溶剂效果，并可以用于高精度的分析。
1.2合理的流动相组合
流动相的组合非常重要，在多组份溶剂中，各组分的浓度是否合理及其组合是否正确是影响液相色谱试验结果的关键。
有些溶剂可以共存，但其相容性可能不高。
流动相的选择
1、对于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流动相。
甲醇/水作流动相时，如果得到的色谱图出的峰分的不完全，可以加大水的比例。
如果出的峰太靠后而分离效果又不错，可加大甲醇的比例，可使出峰变早。
对于一些难分离的物质，要选用乙腈/水作流动相。
2、秘诀1:由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2:三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3:粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
3、含缓冲盐的流动相最好当天用完，不要留置过夜，用不完也要倒掉，这是为了保护好机子起见，流动相的保存期限与缓冲盐的浓度有关系，越浓越不宜保留，总之，我认为缓冲盐溶液都不宜保留超过24小时，HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
流动相选择的原则
流动相选择的原则
流动相是指在化学反应或物质分离中，与固定相相对应的可流动的液体或气体。
正确选择流动相对于分离和纯化目标物质具有重要的影响，以下是流动相选择的原则：
1. 与固定相相容性好：流动相与固定相必须相容性好，避免两者之间的反应和不良影响。
2. 具有良好的挥发性：流动相应具有良好的挥发性，有利于分离和纯化目标物质，并有助于使分离过程更快速和高效。
3. 具有良好的溶解度：流动相必须具有良好的溶解度，以便能够完全溶解样品中的目标物质。
4. 具有良好的稳定性：流动相应具有良好的稳定性，避免在使用过程中流动相的性质变化或降解，影响分离和纯化的质量和效率。
5. 经济实用：流动相的选择应考虑成本和可用性，以确保流动相的经济实用性和可持续性。
在选择流动相时，需要根据不同的分离和纯化目标物质的性质和条件，综合考虑上述原则，确定最适合的流动相，以提高分离和纯化的效率和质量。
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如何选择流动相
流动相的调节是搞液相分析最重要的环节，也是液相水平高低的度量，每一种液相都有影响它的主要因素，抓住主要因素，问题就容易解决。
欢迎大家讨论。
一则可以为新手传播知识，二则大家相互学习共同提高！先开个头：常用的是化学键合相色谱，分离中性化合较简单，主要是调节溶剂强度，可从有机相的比例合种类两个方面入手，例如：有机相占的比例大，出峰就早。
分离酸碱化合物就就复杂一点，增加了添加剂，明白了添加剂的作用，然后从溶剂，酸碱性，添加剂等方面入手。
问题就容易解决。
液相色谱采用键合硅胶可以分离绝大多数的分析物质，针对不同化学性质的单体采用不同的键合硅胶，现在有什么十八烷、氨基柱、氰基、苯基太多了，再加上不同流动相也就是加入不同的抑制剂可以测许多成分，比如：酸性的可以用十八烷加入酸，加缓冲盐；碱性物质可以加缓冲盐，以个人来讲用离子对的形式较多，并且效果也很好，现在分析生物碱是比较难做的，我现在就有一个难题，就说盐酸水苏碱吧，在低波长的吸收，UV是不行了，用蒸发光检测器，但是分离又成了问题，我试了十八烷，氨基柱、氰基、都不理想，并且用过日本的shodex（C 18）柱PH9-10不好。
不好做呀，在郁闷中…………………如用反相色谱柱时，一般先改变有机相与水相的比例；再考虑改变pH值，酸性物质将pH值调低，碱性物质将pH值调高；如两者都无效，可考虑加入离子对试剂，如庚烷磺酸钠用于（碱性药物）我觉得溶剂过滤器抽滤时抽走一部分有机相使保留时间相差较大。
其实流动相的调节也是很难的，一个条件下来是非常的不易呀，从查文献到，条件成熟，有一次我做麻黄就是二个月呀，最后才定下来，现在的水苏碱又是一个大头，现在为什么生物碱这样的难做呢，柱前衍生我是考虑过，但对柱子是有影响的，同时处理也麻烦。
对于流动相的抽滤对测定是没什么影响的，一个稳定的条件，是不计较那一点损失的，如果抽滤对于测定的影响非常之大这个条件是不稳的。
现在的流动相在检验所比例是可调的，但酸碱不变，所以我个人认为在一定的比例范围内，耐用性一定要好。
高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，其流动相的选择对分离效果至关重要。
常用的流动相分为以下几种：
1. 甲醇：甲醇是一种常用的有机溶剂，具有良好的溶解性和极性。
在反相色谱中，甲醇常与水混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。
2. 乙腈：乙腈是一种有机溶剂，具有较高的极性。
与甲醇类似，乙腈也可以与水混合作为流动相，用于反相色谱中对极性物质的分离。
3. 水：水是一种无机溶剂，具有良好的极性。
在正相色谱中，水常与有机溶剂（如甲醇、乙腈等）混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。
4. 乙酸乙酯：乙酸乙酯是一种有机溶剂，具有较弱的极性。
在正相色谱中，乙酸乙酯可以与水混合作为流动相，用于分离弱极性物质。
5. 庚烷：庚烷是一种非极性有机溶剂，适用于分离非极性物质。
在反相色谱中，庚烷可以与甲醇或乙腈混合作为流动相。
6. 混合溶剂：根据被测物的极性和分离需求，可以选用两种或多种溶剂混合作为流动相。
例如，甲醇与水混合用于反相色谱，乙腈与水混合用于正相色谱等。
流动相的选择应考虑以下因素：
1. 被测物的极性：根据被测物的极性选择相应的流动相，以实现良好的分离效果。
2. 固定相的选择：根据固定相的极性，选择与之匹配的流动相。
3. 检测器的要求：某些检测器对流动相的极性有要求，需根据检测器类型选择合适的流动相。
4. 实验条件：如流速、柱温等实验条件，也会影响流动相的选择。
在高效液相色谱法中，常用的流动相包括甲醇、乙腈、水、乙酸乙酯、庚烷等，具体选择需根据被测物的极性、固定相、检测器要求等因素综合考虑。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种将混合物分离成单一组分的有效工具。
为了实现这种分离，高效液相色谱需要两种相：固定相和流动相。
其中，流动相是高效液相色谱仪中至关重要的组成部分之一，因为它决定着分离效果和分离时间。
因此，选择正确的流动相对于分离的精度和效率来说非常重要。
流动相简介流动相是指在柱床中连续流动的溶液。
在高效液相色谱中，流动相主要由溶剂和缓冲液组成。
溶剂是用于将样品分离的液体，在高效液相色谱仪中通常采用多种溶剂的混合物，称为流动相溶剂或者移动相溶剂。
缓冲液是在溶剂中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值，缓冲液的作用是保持样品成分的稳定性和防止封堵柱床。
流动相的选择取决于样品的特性、分离要求和分析环境的条件。
因此，选择合适的流动相是高效液相色谱仪分离分析的关键因素之一。
流动相的分类根据溶剂的极性，流动相可分为两种类型：有机相和水相。
具体分类如下：有机相有机相通常由疏水性的有机溶剂组成，这些有机溶剂的极性比水低。
主要有以下三类：•极性较小的有机溶剂：含有醚、酮或者类似于苯、四氢呋喃等非极性有机溶剂的混合物。
•极性中等的有机溶剂：含有乙腈、甲醇、乙醇等极性有机溶剂的混合物。
•极性较大的有机溶剂：如乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等。
水相水相是由水和缓冲液组成的混合物。
水是极性溶剂，本身具有良好的溶解性和稳定性。
缓冲液是在水中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值。
流动相的选择原则在选择流动相时，需要考虑分析的目标和样品的特性。
下面列举几种常见的流动相选择原则：根据分析目标选择流动相首先，需要根据分析目标选择流动相。
如果需要分离极性物质，则应选择相对极性较强的水相，如果需要分离非极性物质，则应选择相对极性较弱的有机相。
如果需要同时分离多种溶质，则可以选择相组合。
根据样品的特性选择流动相如果样品是非极性的，则应选择相对极性较弱的有机相，例如乙酸乙酯-甲醇体系。
质谱流动相选择
质谱流动相选择
质谱流动相是在质谱分析中用于输送样品分子到质谱仪的介质。
选择合适的质谱流动相对于样品的分析非常重要，因为它可以决定分析结果的灵敏度、分辨率以及背景信号的影响程度。
常用的质谱流动相包括气体相、液体相和超临界流体相。
1. 气体相：气体相通常用于气相质谱分析（Gas Chromatography-Mass Spectrometry, GC-MS）。
气相质谱分析
将样品通过色谱柱分离后，气体相将分离的化合物传送到质谱仪中进行检测。
常用的气体相包括氢气、氦气和氮气等。
2. 液体相：液体相通常用于液相质谱分析（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS）。
液相质谱分析
将样品通过液相色谱柱分离后，液体相将分离的化合物传送到质谱仪中进行检测。
常用的液体相包括甲醇、乙腈和水等。
3. 超临界流体相：超临界流体相是高压、高温下的物质，在这种条件下，物质的密度和粘度类似于液体，但具有气体相的扩散性质。
超临界流体相通常用于超临界流体色谱质谱分析（Supercritical Fluid Chromatography-Mass Spectrometry, SFC-MS）。
常用的超临界流体相包括二氧化碳等。
选择适合的质谱流动相应考虑到样品的化学性质、分析的目标、分析的条件以及仪器的兼容性等因素。
需要根据具体的实验要求和样品特性进行选择，并进行优化和验证。
HPLC方法开发——流动相的选择
HPLC方法开发——流动相的选择高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于各个领域的分析和质量控制。
在HPLC方法开发中，流动相的选择是非常重要的一步，它直接关系到分析物的分离和检测的灵敏度。
在选择流动相时，需要考虑以下几个因素：1.溶解性：流动相应具有较好的溶解性，以溶解待测样品，保证样品能够均匀地进入和流出色谱柱，并使分离柱表面保持通透性。
2.酸碱性：流动相的pH值对于分离和保护色谱柱都有一定的影响。
如果待测物具有弱酸或弱碱性，应选择酸性或碱性流动相，以提供足够的离子态物质，促进待测物与色谱柱的相互作用。
3.性能物质：流动相中的性能物质可分为有机和无机两类。
有机性能物质通常用作有机试剂，如甲醇、乙酸乙酯等。
无机性能物质通常用作缓冲剂，如磷酸二氢钠、草酸钠等。
4.流动相比例：流动相比例指的是有机相和水相的比例。
比例的选择应该根据待测样品的特性、分析目的以及色谱柱的类型和性能来确定。
一般来说，比例的选择应该尽量保证样品在色谱柱中保持均匀分布。
5.流速：流动相的流速直接影响色谱柱的分离效果和分析时间。
一般来说，流速越快，分离效果可能越差，但分析时间会缩短。
因此，在流速选择时需要在分离效果和分析时间之间做一个权衡，使得两者达到一个较好的平衡。
在选择流动相时，还需要考虑其他可能的影响因素，如温度、压力等。
温度对于很多分析物的分离效果有重要影响，通常来说，提高温度可以加快分离速度，但也可能导致一些物质不稳定。
压力对于色谱柱的分离效果和寿命有一定影响，高压可以提高分离速度，但也可能损坏色谱柱。
综上所述，流动相的选择在HPLC方法开发中是非常重要的一步。
通过合理选择溶剂、酸碱性、性能物质、比例和流速，可以得到一个合适的流动相组合，以获得较好的分离效果和检测灵敏度。
在选择过程中还需要考虑其他可能的影响因素，以确保色谱分析的准确性和可靠性。
高效液相流动相的选择
高效液相流动相的选择 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020高效液相色谱流动相选择流动相1.流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
④粘度要低(应<2cp)。
高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
⑤对样品的溶解度要适宜。
如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
⑥样品易于回收。
应选用挥发性溶剂。
流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
流动相选择方式
流动相选择方式流动相选择方式1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
液相色谱分析条件选择的大体原那么在液相色谱分析进程中，咱们常常碰到的问题要紧有二种，一种与液相色谱仪器本身因素有关，如液相色谱的阀门、混合器、检测器的光源和其它的一些硬件设备。
显现这种问题后，若是能找出问题本源，解决起来一样很简单，而且这种问题能够通过对仪器的精心保护来幸免；而另一类问题那么是分析方式本身造成的问题，如显现色谱峰形状不行、峰与峰之间不能分开、基线飘移等等。
不幸的是，若是显现这种问题，看起来似乎很明显，可是要找出缘故并解决这种问题却超级困难。
为了减少显现这一类型的问题，就必需在分析之前，认真研究并选择一个好的分析方式，有了一个好的分析方式，就很容易取得理想的分离成效，而且在显现问题是也很便于找出缘故。
要选择一个好的分析方式，就必需对液相色谱分析的一些大体原那么要有一个很深的了解。
下面是咱们实验室对色谱分析人员进行技术培训的一些大体知识。
一：分析方式选择的大体原那么假设你想做一顿丰盛的晚餐，第一必需看一下食谱，然后检查一下你所需的东西是不是齐全，若是少了配料还必需去商店购买，如此你才可能做出一顿可口的晚餐。
一样进行液相色谱分析时，也必需依照必然的程序进行，第一你必需要有专门的仪器和试剂，然后有目的地选择分析方式，如此你才可能取得好的分析结果，幸免走一些弯路。
二：柱子的选择在液相色谱分析方式中最重要的确实是色谱柱的选择，色谱分析人员面对几百种色谱柱，你从何入手呢？我采取的方式确实是定阅LCGC亚太版中Ron Majors 的“色谱柱观看”这一专栏，自１９８４年第一期以来，Ron Majors在这一专栏中介绍许多新柱子、色谱柱新技术、色谱柱利用方式等方面的信息。
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本人最近在做三甲基－喹噁啉二羧酸，但在用甲醇和水（水分别含5％和10％的甲酸），乙肼水做流动相，都没有分开，峰形呈严重拖尾，都是这样，各位大侠能否给点建议，最好应有点依据。
谢谢！
分析一个样品，不是一拿来就试着用各种流动相来分离，而是首先要分析样品着手。
是否为高分子化合物、粘度大、具有生物活性的生物分子、有些或全部的样品成分是否可电离(根据这样条件可选择色谱柱、流动相、柱温、流速、离子对试剂、是否需要预处理等等)......
具体分析：首先应了解样品的溶解性质，判断样品分子量的大小以及可能存在的分子结构及分析特性，最后再选择HPLC的分离模式，以完成对样品的分析。
样品的溶解度，由样品在有机溶剂中溶解度的大小，初步判断样品是非极性化合物还是极性化合物，进而推断用非极性溶剂戊烷、己烷、庚烷等，还是极性溶剂二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙腈等来溶解样品，并通过实验判断。
若样品溶于非极性溶剂，表明样品为非极性化合物，通常可以选吸附色谱法或正相分配色谱法、正相健合色谱法进行分析。
苦样品溶于极性溶剂或相混溶的极性溶剂，表明样品为极性化合物，通常选用反相分配色谱法或更为广泛应用的反相键合相色谱法进行分析。
若样品溶于水相，可首先检查水溶液的pH值，若呈中性为非离子型组分，常可用反相（或正相）键合相色谱法进行分析。
若pH呈弱酸性，可采用抑制样品电离的方法，在流动相中加入硫酸、磷酸调节pH=2～3，再用反相键合相色谱法进行分析。
若pH呈弱碱性，则可向流动相中加入阳离子型反离子，再用离子对色谱法进行分析。
若pH呈强酸性或强碱性，则可用离子色谱法进行分析。
由于除去固定相中的离子对试剂较慢，当改变流动相时，有时需要长时间的平衡；再由于离子对试剂纯度问题，使离子对中的基线波动问题和干扰问题现象比较常见。
优化条件在于最终色谱图中能产生出最多可分开的谱峰。
了解化合物的化学结构，知道是否存在酸或碱，当流动相的pH值=混合物的平均pKa值或接近时,可能会使分离较好。
先优化K；随着容量因子的增加，谱峰会展宽，峰形变矮。
(当所有谱峰符合1＜K；＜20的范围时，其流动相已接近最佳了；再α(≥1.05)；最后优化N，不同微粒的柱子均有一个最佳流速，流速再高会降低N值；如果降低流速，则会增加工作时间，但分离度会更好。
当流动相粘度增加时，N值也将降低；因此尽可能使用低粘度的溶剂。
用最小RS法，另加常识(数一下峰！)，在大多数情况下将是最佳方案。
至于谱峰拖尾影响因素是很多的，可解决的办法有：
在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留值重现性差和峰拖尾。
增加缓冲浓度（与样品大小相匹配）能大大改善此情况。
柱子变得严重拖尾，甚至出现双峰，通常是进口滤板发生了部分堵塞或柱进口处出现塌陷(可将空隙填满接着反相冲洗柱子)。
柱子出现峰展宽、拖尾则标志着样品中有保留性极强的“污物”在柱子的进口处堆集起来。
样品在柱子上超载能引起峰展宽、拖尾（或伸舌）。
通常减少进样量或提高检测器灵敏度。
早出的峰拖尾最甚是仪器存在柱外效应的最好佐证。
要排除柱外效应，这不用我来说了吧！
分析酸性或碱性组分，一般必须采用缓冲液流动相。
流动相中无缓冲液，样品组分在柱内形成谱带的哪一部分会引起流动相pH增加或降低，样品组分改变了电离程度，产生峰拖尾。
缓冲液除了能改变峰形外，还能改变峰的保留。
一般用中等偏高的浓度有利于减少峰拖尾(0.05～0.1mol/L)。
可加适量的修正剂！
反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。
极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。
一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。
但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外185~205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统。
在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。