铁皮石斛组织培养研究进展组织培养.
铁皮石斛的组织培养与快速繁殖
有效地 挽救 这一濒 临 灭绝 的珍 稀物 种 。
原 球 茎 分别 接 种 于 （ 、 ４） （ 、 ６） ３） （ 、 ５） （ 、
１ 材料 与方 法
１１ 试 验 材 料 ，
（ 培养基上 ， ３） 培养基 ６ 天后原球茎增 ７） （ 号 ０
铁皮石斛是附生植物 ， 野生状态在多湿森林 中的树上和林下岩石上 ， 特别是半 阴半阳的附有 苔藓植物的石灰岩上和树上 ， 以驯化栽培时采 所 用地栽方法是不能成活 的 ，必须采用适合 的基
０ ＋香蕉 泥 ２％。 ． ５ ０
１ 培 养条件 ． ４
上述培养基均加蔗糖 ３ ％、琼脂 ０ ％、Ｈ值 ． ｐ ７ ５、 ． 培养温度 ２ ￣左 右 、 ８ ５Ｃ 光照 １ ２小时 ／ 光 照 天、 强度 １０￣ ００ 、 ５ ０ ２０ ￣ 湿度 ７ ％。 ０
将 增 殖后 的胚 状 体 转 到 （ ） ８ Байду номын сангаас壮苗 ， 可提 高
１ ． 子萌发 培养 基 。（）Ｓ （）／ ＭＳ ． １种 ３ １Ｍ ， １ 。 ２ ２ １． ．２原球 茎增 殖 培养 基 。（）／ ＋ Ｍ２ ％（Ｍ ３ ３ｌ ＭＳ Ｃ ０ Ｃ ２ 为 椰 汁） ４１ ＋ 一 Ａ ０２ｍｇ （ 位 下 同） ，（）／ ＭＳ ６ Ｂ ． ／ 单 ２ Ｌ
２ 生长 与分化 情况
２１ 无 茵苗的获得 ．
质， 摸拟野生环境栽培。 移栽前 ， 先将试 管苗 练苗 ｌ ， 周 出瓶 时注意 不要伤及根茎部 ， 用流水洗去根部附着的培养基
后 ， 阴凉通风处晾根半天 ， 在 栽入盛锯木屑和塘 基兰石的穴盘中 ， 或者混合基质 （ 份 陶粒 ＋ 份 ２ １ 腐 叶 土 ＋ 份树 皮 ＋ 份锯 木 屑 ）（ 转第 １ １ １ ，下 ３页） ⑨
铁皮石斛组织培养技术研究进展
Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｐｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｎ Ｔｉ ｓ ｓ ｕ ｅ Ｃｕ ｌ ｔ ｕｒ ｅ ｏ ｆ Ｄｅ ｎｄ ｒ ｏ ｂ ｉ ｚ Ⅱ 丑ｏ ｆ ｔ Ｔ ｃ ｉ ｎａ ｌ ｅ
铁皮石 斛（ Ｄ ｅ ｎ ｄ ｒ ｏ ｂ ｉ ｕ ｍ ｃ ａ ｎ ｄ ｉ ｄ ｍ Ｗａ ｌ １ ． ｅ ｘ Ｌ ｉ ｎ ｄ） 属
多 的是 外 植 体 的 选 择 、 培养基组 成 、 ｐ Ｈ值 、 温 度 和 光照等 。
兰 科石 斛属 多年 生 附生 草本植 物 ， 具 有 极 高 的 观 赏价 值 、 药 用 价 值 和 经 济 价 值 。铁 皮 石 斛 种 子
姜 艳， 李泽生 ， 耿 秀英 ， 高 燕， 姚 春， 李 薇 莎
（ 云 南省 德 宏 热 带 农 业 科 学研 究 所 ， 云南 瑞丽 ６ ７ ８ ６ ０ ０ ）
摘要 ： 简述铁 皮石 斛 组 织培 养技 术研 究进展 ， 针 对 当前 石斛 产 业发 展 的 需 求 ， 提 出组培 技 术 需要 深入 解 决 的 问题 ， 为石斛 产 业的 有序 发展提 供 借鉴 和依 据 。 关键词 ： 铁 皮石 斛 ； 组 织培养 ； 研 究进展
一
２Ｏ 一
热 带 农 址 科 技 ２ ０ １ ５ ， ３ ８ （ １ ）
Ｔ ￣ ｏ Ｆ ｉ ｅ ａ ｔ Ａ ， ｔ ｃ “ ｃ ｔ “ ｔ ４ ｃ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ＆ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ￣ ， ｙ
◎
铁 皮石 斛 组 织 培 养技 术研 究进 展
铁皮石斛组培快繁技术的研究分析
铁皮石斛组培快繁技术的研究分析摘要：铁皮石斛的种子极为细小、无胚乳，自然条件下需要与某些真菌共生才能萌发，因此自然繁殖率很低，不易获得实生苗；而传统的分株、杆插等方式的繁殖率极低，加上人为的过度采挖和破坏生境，其资源已濒临灭绝，被国家列为重点保护的药用植物之一。
文章基于此，对铁皮石斛组培快繁技术进行综述性分析。
关键词：铁皮石斛；组培快繁；技术研究植物组织培养技术是20世纪初，以植物生理学为基础发展起来的一门新兴技术。
植物组织培养是指在离体条件下利用人工培养基对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使之生长、繁殖或长出完整植株的技术和方法。
目前，植物组织培养技术己经在科学研究以及实际生产上得到非常广泛的应用。
该技术不仅具有缩短育种年限、加快繁殖过程，改良品质，节省空间，减少劳力，并可全年进行生产，不受季节、气候等自然条件限制等特点，而且组培苗的体积不大，方便运输和资源交流。
在促进农林业现代化方面展现出了巨大的经济、社会和生态效益，被认为是一项很有潜力的高新技术。
铁皮石斛种子细如粉尘，一个果实内所含种子达100万粒之多，由于缺乏胚乳，种子需与真菌共生才能正常萌发，自然条件下萌发率非常低。
因此，虽然分布广，但生活环境狭窄，产量还不能满足目前药用需求，利用组织培养技术繁殖试管苗是解决铁皮石斛种苗的有效途径。
铁皮石斛的组织培养中有几个关键的时期：原球茎的诱导、原球茎的继代增殖、壮苗的培育。
根据这几个重要的时期及其组织培养的外界条件，我国研究人员在铁皮石斛组培快繁技术方面的研究取得了一定的进展。
在20世纪70年代谭文澄等就进行铁皮石斛组织培养研究并获得完整植株；何静波等尝试通过种胚培养繁殖铁皮石斛；左春芳等于1985年开始研究铁皮石斛的组织培养，并取得进展。
1外植体的选择在植物组织培养中，外植体的选择是十分关键的因素，不同的取材部位和时期，培养的结果也不一样。
目前，诱导铁皮石斛原球茎采用的外植体主要有种子种子、无菌苗幼苗茎段、根尖、不定芽、幼叶，及人工种子等。
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛的组织培养作者：黄子聪来源：《农家科技下旬刊》2014年第09期摘要：铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，为传统名贵中药。
由于对生境要求十分苛刻，加之人为过分采收，现已濒临灭绝，已被列为“濒危珍稀植物”。
对铁皮石斛的组织培养及人工栽培进行研究，实现保护野生铁皮石斛资源的同时满足人们的消费需求，具有重要的现实意义。
关键词：铁皮石斛；组培快繁一、铁皮石斛组培培养（一）材料与方法1.供试材料供试材料：果荚：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的铁皮石斛单株进行授粉，获得果荚。
茎段：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的、二年生的、具有20厘米以上的铁皮石斛，自上而下剪下15厘米左右，带回实验室，备用。
2.方法（1）消毒方法果荚的消毒方法：将生长了5个月的果荚用消毒的剪刀从植株上剪下，带到超净工作台下，用75%的酒精浸泡2分钟，然后用灭菌去离子水清洗两次，放在灭菌的空瓶中。
播种前，将要切开的部位及花朵着生位置在酒精灯下稍微过火，然后再将基切开，播种。
（2）种子无菌播种将灭菌的果荚在果荚蒂附近的位置上用灭菌的手术刀切开一个约1.5厘米的切口，然后直接将种子均匀地撒在培养基上。
放在培养架上进行光照培养。
培养基配方：Z0：MS+NAA0.1mg/L+土豆汁100g/L（3）原球茎的增殖及分化将转绿的原球茎转接到增殖分化培养基上，每瓶接种6个点，每个点5个原球茎，5瓶一个重复，设3次重复。
茎段的消毒方法：选取茎段特征明显的铁皮石斛单株，用消毒的剪刀从节间靠下的位置将优选单株剪下，然后将叶片摘除，在自来水下将表面的灰尘洗去。
接下来将茎段上的叶鞘撕掉，特别是底部与节相连接的位置要去干净，同时注意不要伤到休眠芽，再用洗洁精进行表面清洗，在自来水下将洗洁精清洗干净，带到超净工作台下，用75%酒精浸泡两分钟，期间不断地搅拌，再用灭菌去离子水清洗2两，切成每段3-5节，用0.1%升汞（加吐温20 2滴）浸泡9分钟，期间不断地搅拌，倒去升汞溶液，再用灭菌去离子水清洗6次，每次2分钟。
铁皮石斛的组织培养及快速繁殖
０ 前言
铁皮石斛 （ ｅｄ ｂ ｍ ｅ ｉ ｍ 系兰科石斛 Ｄ ｎｒ ｉ ａ ｄ ） ｏ ｕ ｄｕ 属多年生附生植物 ， 种子无胚乳需与某些真菌共
间有称其为“ 救命仙 草” 医学界称其为“ ； 药界大 熊猫 ” 由于资源 匮乏 ， ； 用途广泛 ， 价格 昂贵 曾被 植物界称为“ 植物界 的大熊猫” 。据资料报道 ， 现
在铁皮石斛的鲜株达到 ２００ ｋ 。为了保护 ０ ｇ
濒危植物 ， 迅速发展新 、 、 奇 特物种 。本试验取 材本地野生铁皮石斛 ， 运用植物组织培养快速繁
生才能萌发 ， 不能用种子进行繁殖…。而传统的
分株、 扦插等方式繁殖率很低 ， 生长速度缓慢 ， 加
上现在人为无节制 的采集和破坏 ， 自然资源 的蕴
Ｔｈ ｐ ｄ Ｐ ｏ ａ ａ ｉ ｎ ｏ ｎ ｒ ｂｕ ｃ ｎ ｉｕ ｅ Ｒａ ｉ ｒ ｐ ｇ ｔ ｆＤｅ ｄ ｏ ｉ ｍ ａ ｄｄ ｍ ｏ
Ｗ ａ１ ｅ ｎ ｌ ｎ Ｖｉ ｏ ｌ ｘ Ｌｉ ｄ ｔ ． ｉ ｒ
ＷＡ Ｇ Ｂ—ｉ， Ａ ｎｊｎ Ｎ ｉ ｎ Ｇ Ｉ － ｑ Ａ ｕ
Ａｂｔａ ｔＴ ｅｃｕｔ ｆ ｈ ｏｓ ｏｌ ｅｉｄ ｃｄｉ ｅｍ ｄｕ ｆ Ｓ＋ ｓ ｃ ：ｈ ｌｓ ｒ ｏｔ ｃｕｄｂ ｕ ｅ ｔ ｅ ｉｍ ｏ ｒ ｅｏ ｓ ｎ ｎｈ Ｍ ６一Ｂ ． ｓ Ｌ一 ｓ Ａ Ｏ ５ｍ ／ ２ｍ ／ Ｌ＋Ｎ Ａ ０ ２ ｓ Ｌ－ ． ／ Ｌ＆ ２ ４一Ｄ ０ ２ ｓ Ｌ ａ ｅｅｐａｔ ｏ ｅｄｏｉｍ ｃｎ ｉｕ Ａ ．５ ｍ ／ ０ ４ ｍｓ ． ． ５ｍ ／ ．ｓ ｈ ｘ ｌ ｓ ｆ ｎ ｒｂ ａｄｄ ｍ ｔ ｎ Ｄ ｕ
铁皮石斛 的组织培养及快速繁殖
王碧琴 盖安俊 ，
（． Ｉ江西省科学院生物资源研究所， 江西 南昌 ３０２ ；． ３０９２南昌工程学院， 江西 南昌 ３０２） ３０９
铁皮石斛的组织培植
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
铁皮石斛的组织培养技术
铁皮石斛的组织培养技术简介铁皮石斛（Scientific name: Dendrobium officinale），是一种珍贵的药用植物，在中医药中有着悠久的历史和广泛应用。
铁皮石斛的组织培养技术是指利用无菌培养方法，通过细胞分裂和再生，培育大量优质的植株，以满足人们对铁皮石斛的需求。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养技术的基本步骤和注意事项。
步骤1. 选择合适的外植体材料：铁皮石斛的外植体材料通常选取新鲜的茎段、叶片或花轴，并确保这些材料来自无病虫害的植株。
2. 表面消毒处理：将收集到的外植体材料进行表面消毒处理，常用的消毒剂包括漂白粉和酒精。
消毒时间和浓度应根据不同的外植体材料进行调整。
3. 建立无菌培养基：制备含有适当激素和营养物质的无菌培养基。
常用的基本培养基是MS培养基和B5培养基。
可以根据实验需要调整培养基的成分和浓度。
4. 培养和增殖：将表面消毒后的外植体材料放入含有适当培养基的培养瓶中，并置于暗室或恒温箱中进行培养。
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要因素，应根据植物的生长性进行调控。
5. 分化和再生：通过植物激素的投入和适当调控培养条件，促使外植体材料分化和再生成优质的铁皮石斛植株。
这一步骤往往需要持续几个月到数年的时间。
注意事项1. 保持无菌条件：组织培养需要在无菌条件下进行，以避免外源病原微生物的污染。
实验器具、培养基和操作环境必须经过严格的消毒和无菌处理。
2. 控制培养基成分和浓度：培养基的成分和浓度对植物的生长和分化起着重要的影响，需要根据不同的外植体材料和培养阶段进行合理的调整。
3. 确保适当的光照和温度：铁皮石斛对光照和温度有一定的要求，光照不足或温度过高都会影响植物的生长和分化。
应根据植物的生理特性，设置合适的光照和温度条件。
4. 定期检查和处理：组织培养过程中，应定期检查植株的生长状态和培养基的污染情况，并采取适当的措施处理。
需要及时除去培养瓶内的污染物，以保证植株的健康生长。
铁皮石斛组织培养
铁皮石斛的组织培养技术路线
外植体
培养基
丛生芽
生根发育
完整植株
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初代培养基的设计 诱导培养基
MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】
MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液：
BA10ml,NAA5ml
取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： NAA2~5ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g
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生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在 生根培养基中于适宜条件下培养，约1~2 周后即生根，以长成完整植株。
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用洗洁剂 清洗后置 流水下冲 20~30 min。
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在超净工作台上 用75%的酒精消 30s0.1%HgCl2 灭菌5min后，用 无菌水冲洗5~6 次，放入垫有干 无菌滤纸的培养 皿中，以吸去多 余水分，茎段两 端各切 0.2~0.3cm。
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接种实验
一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养
铁皮石斛 组织培养
B1小组准备素材
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铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生
于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上， 喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。 一般均能耐－5℃的低温。石斛可分为黄草、 金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极 品，它因表皮呈铁绿色而得名。
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铁皮石斛的组织培养
由于石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，加之人们掠夺性采挖，资源已严重枯竭。
而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题，故石斛药源一直处于紧张状态。
因此，组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大，甚为迫切。
石斛的组织培养，可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体，但以种子进行组培快繁的为多。
原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键，因此，研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。
特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗，是解决其种苗与发展生产的有效途径。
铁皮石斛的组织培养铁皮石斛，又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。
野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物（三级）。
由于其生长环境要求特殊，野生资源已濒临灭绝。
现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功，月出苗量50万瓶以上，为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。
1 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。
研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。
培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。
种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。
在实验中尚发现，石斛原球茎的增殖与胚龄相关，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45天以下，萌发率极低，萌发时间长；60天胚龄的胚具34个细胞，萌发率为6％；90天胚龄的胚细胞为74个，萌发率为87％；120天胚龄的细胞数为90个，萌发率95％以上。
铁皮石斛组培快繁技术研究进展
［ ４］郑丹 ．烤烟香气物 质的成 分及其影 响 因素 研究进 展 ［ ］ ．江 Ｊ 西农业学报 ，２０ ０ ９，２ ３ ：２ １（ ） ３—２ ． ６
［ ］任永浩 ，陈建军 ，马常力 ． ５ 不同根 际 ｐ Ｈ下烤烟 香气化学 成分
的研究 ［ ］．华南农业 大学学 报 ，１９ Ｊ ９４，１ （ ） ２ ５ １ ：１７—１２ ３． ［ ］ 中国烟草总公司郑州烟草研究院 ，中国农业科学院资源与农 业 ６ 区划研究所 ．中国烟草种植 区划 图册 ［ Ｍ］．陕西 ：西安 地图
２ 基本培养基及培养条件
铁 皮石 斛 组 织 培 养 主要 采 用 ＭＳ 、改 良 ＭＳ和 Ｂ ｜． １Ｈ为基 本培 养基 ；适 宜 光照 周期 为 １ ／ ｌ］ Ｉ ２ｈｄ ； １ ７
温度 以 （ ５±１ ℃最 适合 原球 茎 的生 长繁 殖 ，较 低 ２ ）
种源的重要基础。关于铁皮石斛 的组培快繁技术 已
参 考文 献 ：
［ ］ 白智 勇．１９ １ ９３～１９ ９ ８年世界 各 国烟 叶产量统 计 ［ ］．上 海烟 Ｊ
叶 ，１９ （ ） ５— ７ ９ ９ ２ ：５ ５ ．
出 版 社 ，２ ０ ． ０９
［ ］ 王丹林 ．不 同育 苗方式对 烟株生 长发育 的影 响 ［ ］．耕 作与 ７ Ｊ
［２ １］黄光荣 ． 同轮作方式对烤烟病虫害及产量品质的影响 ［］． 不 Ｊ
河 南 农 业 科 学 ，２０ （ ） ０— ２ ０ ９ ５ ：４ ４ ．
（ 责任 编辑 ：柯 文辉 ）
２ ６
琅 舛妓
２０ 第１ ０年 期 １
箱 ｔ 琅 舛艘
２ ５
铁 皮 石 斛 组培 快 繁 技 术研 究 进展
铁皮石斛原球茎组织培养研究进展
一••琴••零••零••琴••琴■■琴丨••琴丨■■琴••琴丨■■琴••琴••零••琴••琴丨■■琴••琴丨■■琴••琴••零••琴••琴••琴••琴••零••零■•零■•零■•零■•琴■•琴■•琴f文章编号：1002-0659 (2018) 02-0036-05I|铁皮石斛原球茎组织培养研究进展i专题综述t张鑫!(天津创世生态景观建设股份有限公司，天津南开300000)摘要：铁皮石斛是我国传统的名贵中药材，具有很高的药用价值，其所含的主要成分为石斛多糖和生 物碱。
由于长期的采挖，自然资源日益枯竭，现阶段铁皮石斛的种苗主要通过组织培养方法获得，但 在培养过程中存在诸多问题如出苗的成本过高，幼苗移栽成活率低，工厂化生产效率低等。
鉴于以上 问题，对于铁皮石斛原球茎的研究日益广泛，原球茎中含有同石斛苗相同的药用成分，通过大规模培 养来提取，同样可以满足药材市场对石斛的需求。
本文通过对相关文献的查阅，阐述了有关铁皮石斛 原球茎的组织培养方面的研究概况。
关键词：铁皮石斛；原球组织培养；多糖中图分类号：S682.1+9 文献标识码：A铁皮石斛（■O e/zdraW M m q^dna/e Kimura et Migo)是兰科（Orchidaceae)石斜属（Dendrobium)多年生附生草本植物，因其老基外呈黑色，又名为黑节草，是名贵中药，居“中华九大仙草”之首，所含的主要成分为石斛多糖及生物碱，另外，还 有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等。
现 代药理研究证明石斛多糖具有抗肿瘤、增强免疫 力的功能。
但由于铁皮石斛生长环境特殊，以及 长期采挖，自然资源日趋枯竭，已被国家列为重 点保护的野生药材。
从20世纪中期开始就有关 于铁皮石斛的研究，主要涉及组织培养方法、有 效成分含量和药理作用方面的研究。
随着研究的 深人，发现铁皮石斛在组织快繁过程中存在一些 问题，例如通过组培生产出苗的成本过高，幼苗 移栽成活率低，工厂化生产效率低。
铁皮石斛的研究进展
量的比较研究 ,采用提取总多糖后 ,用苯酚 - 硫酸法测定 ,结 类直接与疗效相关 。金蓉鸾等在 1981 年就对 11 种石斛的
果认为两类铁皮石斛所含总多糖无显著差异 ;表明组织培养 总生物碱测定方法进行了研究 。到目前为止 ,研究人员从 13
和人工栽培得到的铁皮石斛质量与野生 的 一 致 。王 世 林 种石斛中分离获得 29 个生物碱 ,其中有 5 种含有石斛碱类
石斛的最佳栽培季节为每年 3 - 6月和 9 - 11 月 ;施用外源 核的化合物 ,它们分别为 : 鼓槌菲 Chrysotoxene[17 ] 、毛兰菲
生长素对促进产量效果明显 ;共生菌对移栽苗提高成活率有 Confusarin[17 ] 、 EpheranthoB、 Denbinobin、 Moscatin、 2, 72
铁皮石斛常以铁皮枫斗的形式作为药材使用 。铁皮枫 斗是将铁皮石斛的茎 ,在烘烤干燥时手工双向扭曲成螺旋弹 簧状的传统药材 ,目的是将铁皮石斛表皮细胞外的角质层破 裂 ,使有效成分在煎煮时容易释出 。到 2006 年底全国有铁 皮石斛为原料的药品 2个品种 ,保健食品 79个品种 ;剂型有 颗粒剂 、胶囊剂 、软胶囊 、口服液 、丸剂 、茶 、饮料 、口含片等 。 1 组织培养研究
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通的是“敞开棚 ”; 如同蔬菜大棚那样密闭的是“密闭棚 ”。
为对比不同石斛中多糖的差异 ,李满飞等对的 25 种石
研究认为黑棚优于白棚 ,敞开棚优于密闭棚 。这是由于白棚 斛属植物 36个样品的多糖含量进行了测定 ,发现不同品种
遮阳效果差 ,密闭棚使环境温度高 ,而使铁皮石斛产生“疯 之间多糖含量的差别非常大 ;凡达到传统标准所说的“质重 ,
石斛组织培养研究进展
石斛组织培养研究进展张明夏鸿西朱利泉张玉进［摘要］目的：综述国内外对石斛组织培养进行的深入研究。
方法：系统查阅国内外近10年来的有关文献20余篇。
结果与结论：介绍了石斛组培的多种方法，对培养基、激素及多种条件对组培的影响作了论述，并提出了存在的问题及对策。
［关键词］石斛；组织培养［中图分类号］S567.035.3 ［文献标识码］A［文章编号］1001-5302(2000)06-0323-04石斛属Dendrobium为兰科第2大属，多年生草本植物，全球计有1 500种。
多生于树皮或岩石上，开花多，结果少，每果可含100万粒种子。
种子细如粉尘［1］，每粒重约0.3～0.4 μg。
种胚不超过球形阶段，即存在后熟现象。
由于缺乏胚乳组织，需与真菌共生(symbiotical)才能萌发，自然条件下发芽率一般不及5%。
石斛为合轴生长(sympodial)，分株是其繁殖的主要方式，对生长条件的要求较为苛刻。
石斛属植物中有不少是名贵中药，在《本草纲目》中石斛被列为上品。
我国76种石斛属植物中有近40种作药用［2］，著名的有D.nobile(金钗石斛)、D.candium(铁皮石斛)、D.huosanness(霍山石斛)等。
具有强阴益精、补肾益力、轻生延年等作用，其应用范围正迅速扩大。
石斛属植物约有四分之一可供观赏［3］，称为石斛兰D.orchids，以花艳丽而著称，近年作为观赏植物发展迅速，已形成独立产业。
集药用和观赏于一体的价值，加之过度的采伐利用和繁殖率低，造成了石斛供需之间的紧张状况，我国已将其列为濒于绝灭的受保护的中药品种之一。
自1960年法国人Gmorel利用石斛基尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来，石斛组织培养逐步走向深入化。
近年来，石斛组织培养的最佳条件，包括光照、温度、pH以及如何选用外植体，选用激素等取得长足进展，并利用组培技术研究种子萌发过程中的生理生化变化等，还获得了转基因石斛植株。
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养
铁皮石斛组织培养研究进展1、1种子萌发1.2基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6 , MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW、KundsonC , 1 / 2N6 White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS等14种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH、Kn、MS次之，I /2MS、1 / 2 Vw 最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH、改良N6、MS、KS、VW、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT培养基。
罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS培养基上所萌发的原球茎较大。
1.3激素在培养基中添加一定浓度的NAA可促进种子的萌发，浓度以0.2 —0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。
2,4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L时，对胚萌发和成苗起抑制作用。
ABA有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用, 但张铭等发现ABA能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。
1.4天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。
1.5炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 %蔗糖。
曾宋君等在改良N6 + NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2原球茎增殖2.1基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛组培技术
• • • • • • • • • • • 一 茎段培养 必要的培养条件 取材与消毒 诱导培养 增殖培养 生根培养 出瓶苗的过渡管理 二 种子培养（胚培养） 三 茎尖培养 四 原球茎培养 五 根尖培养
石斛生产基地
实训时，我们看到的批量的铁皮石斛的生产，以及 工作人员正在上盆，移栽石斛。由此，我们了解到 铁皮石斛生长缓慢，周期长。
组织培养的流程
培养基的流程
培养基配制 灭菌 接种 培养 驯化移栽
灭菌
•接种前我们应该做的灭菌工作： 1.在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫 外线灯； 2.接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿 拖鞋等； 3.上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然 后搽拭工作台面； 4.先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾 过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
铁皮石斛的组织培养
园艺3133 王冬玲 12号
目录
一 组织培养的概念 五 驯化移栽
二
组织培养的流程
六
铁皮石斛简介
三
灭菌
七
ห้องสมุดไป่ตู้
铁皮石斛的组培技术
四
接种
八
石斛生产基地
组织培养的概念
• 植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分 离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无 菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植 株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
接种
无菌接种的具体步骤： •将初步洗涤及切割的材料放入烧杯， 带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用 无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放 置在灭过菌的纱布上或滤纸上。 •．材料吸干后，一手拿镊子、一手 拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的 切割。 •用灼烧消毒过的器械将切割好的外 植体插植或放置到培养基上。
铁皮石斛组培苗研究进展
铁皮石斛组培苗研究进展作者：马赞留，戴云新，蔡红海，钱海云，崔成，华施云来源：《现代园艺·下半月园林版》 2015年第2期马赞留戴云新蔡红海钱海云崔成华施云（江苏世阳生物科技有限公司；江苏远鹏基因组研究院有限公司，江苏南通 226000）摘要：介绍了铁皮石斛的生物学特征，阐述了铁皮石斛组织培养技术和栽培技术研究概况，并总结发展中存在的问题和展望了发展前景。
关键词：铁皮石斛；组织培养；栽培1 铁皮石斛生物学特征铁皮石斛（Dendrobium candidum Wall.ex Lindl）是兰科石斛属多年生附生草本植物，俗称铁皮兰、黑节草，是我国名贵的传统中药材之一，位于“九大仙草”之首，同时也是一种重要的花卉植物[1]。
其生物学特征为：茎直立，圆柱形，通常长20～35cm，直径2～4cm；幼嫩茎长5～7cm，肥壮饱满，可粗达8mm；长茎着花时略弯垂。
叶3～5枚，生于茎上部节上，二列，矩圆状披针形，纸质，长3～4(～7)cm，宽9～11(～15)mm，先端钝。
花序生于无叶的茎上部节上，花序轴稍折曲，长2～4cm，2～3花：花直径1.5～2cm；萼片花瓣淡黄绿色或白色，唇瓣白色而在上部是1个紫红色大斑块，下部两侧是紫红色条纹；中萼片与花瓣相似，矩圆状披针形，长1.7～1.9cm，宽4～5mm；萼囊圆锥形，长5mm；唇瓣卵状披针形，长1.6cm；不明显3裂或不裂；唇盘上密被乳突状短柔毛，基部有1枚绿黄色胼胝体。
花期3～6月[2]，[3]，主要分布于西南和江南各省。
铁皮石斛的药用部分是新鲜或干燥茎，具有益胃生津、滋阴清热、润肺止咳和清热明目的功效，还具有增强人体免疫力和抗肿瘤等作用[4]。
铁皮石斛的种子极小、无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培[5]；而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低，同时由于长期不合理的开发利用，致使其野生资源日渐枯竭，甚至面临绝种的危险，被国家列为重点保护的药用植物之一。
铁皮石斛组织培养研究进展
铁皮石斛组织培养研究进展
周雅琴;余丽莹;谭小明
【期刊名称】《中国民族民间医药》
【年(卷),期】2012(021)001
【摘要】铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex lindl)又名黑节草、铁皮兰,为多年生附生型草本植物,属国家2级保护的名贵濒危药材[1],《神农本草经》列为上品[2],在《本草纲目》中也被收录.现代药理研究表明,石斛具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的功效[3].由于受特殊的生物学及生态学特性限制,其自然繁殖力极低、生长缓慢,不能满足日益增长的市场需求.因此,研究和开发铁皮石斛具有重要的意义.
【总页数】2页(P48-49)
【作者】周雅琴;余丽莹;谭小明
【作者单位】广西药用植物园,广西南宁530023;广西药用植物园,广西南宁530023;广西药用植物园,广西南宁530023
【正文语种】中文
【中图分类】R965.2
【相关文献】
1.铁皮石斛组织培养研究进展 [J], 李景云
2.铁皮石斛原球茎组织培养研究进展 [J], 张鑫
3.铁皮石斛组织培养技术研究进展 [J], 姜艳;李泽生;耿秀英;高燕;姚春;李薇莎
4.环境因子对铁皮石斛组织培养和大棚种植影响的研究进展 [J], 柳泽鑫;詹潮安;肖泽鑫;范镇贞
5.铁皮石斛组织培养研究进展 [J], 王睿;潘凌洁;柯旭波;詹妮;童霞秀;于超;王华森因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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铁皮石斛组织培养研究进展1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。
罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。
1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。
2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。
ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。
1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。
1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。
曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。
张治国等研究了6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明，l /2 MS 是原球茎增殖的适宜培养基。
2.2 激素适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。
唐桂香等以1 / 2 MS 为基本培养基，发现BA 1.0mg/L和NAAO.lmg/L有利于原球茎诱导增殖。
蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L比较适合嗓球茎的增殖。
蒋波等以1 / 2MS 为基本培养基.添加BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L或6 一BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L的激素，原球茎的增殖系数较大。
陈兆贵等认为原球茎增殖以MS + NAA1.0mg/L + 6 一BA1.0mg/L +KT1.0mg/L为最佳，35d 增殖倍数达到5 倍。
2.3 天然添加物椰子汁、苹果汁对原球茎的增殖有较好的效果，但香蕉汁对原球茎的增殖有抑制作用。
张治国等认为原球茎增殖时最好不添加任何天然提取物。
2.4 炭源添加活性炭能使原球茎的增殖量显著增加，这可能是活性炭吸附了某种不利于原球茎增殖的物质，蔗糖浓度0.5 ％~0.3 ％。
周根余等比较了不同炭源对铁皮石斛原球茎生长的影响，发现原球茎在蔗糖中生长最快，浓度3 % ，葡萄糖中其次，而乳糖中最慢。
3 原球茎分化3.1 基本培养基铁皮石斛原球茎分化可以1 / 2 MS，MS 等作为基本培养基。
张治国等比较了VW 、N6、l / 2MS 、B5、KC 等6 种基本培养基对原球茎分化的影响，发现6 种基本培养基附加马铃薯提取液和植物激素后，原球茎均可分化，但以1 /2MS 培养基作为原球茎分化的基本培养基最适宜，叶色浓绿，出苗整齐，这与刘瑞驹等困的报道一致。
3.2 激素培养基中添加BA 和NAA 后可加快原球茎分化的进程。
张治国等报道了BA 和NAA 不同的组合及浓度对原球茎分化的影响，在分化前期（40d ) ，高浓度的BA 和低浓度NAA 组合，加快原球茎分化进程，1 一2 片叶的分化苗占50 ％以上，以2mg/L BA 和0.2mg/L NAA 组合最好。
培养到60d 后NAA 浓度高的组合，分化苗整齐．尤其是0.2mg/LBA 和2mg/LNAA 组合，小苗生长发育快。
蒋波等报道以1 / 2 MS 为基本培养基，添加BA2.O mg/L + NAAO.2 mg/L或BA3.Omg/L十NAAO.2mg/L的激素，有利于原球茎的分化。
陈兆贵等以MS + NAA1.Omg/L + 6 一BAmg/L + KT1.0mg/L为培养基，45d 原球茎分化率达84 ％。
罗吉凤等认为原球茎分化适宜的培养基为1 / 2MS 十BA2mg/L+ NAA 0.2mg/L十IBAO.1mg/L＋蔗糖3%。
唐桂香等研究发现，BA 对原球茎诱导芽影响大，而NAA 对原球茎诱导芽影响小。
3.3 天然添加物土豆汁、马铃薯提取液能有效促进原球茎的分化，香蕉汁对原球茎的分化有抑制作用。
3.4 炭源培养基中加人活性炭能促进原球茎的分化际。
张治国等研究了蔗糖浓度对原球茎分化的影响，发现蔗糖为2 ％时，分化率为100 % ，此时原球茎的增殖率达最高，当蔗糖为3 ％时，原球茎不再分化，且增殖率随蔗糖浓度的增高而下降。
这可能是因为培养基的渗透压过高，抑制了原球茎的分化和生长。
故在原球茎分化中，蔗糖浓度以3 ％为分化的临界值，而蔗糖2 ％为原球茎分化的适宜浓度。
4 生根与壮苗4.1 基本培养基铁皮石斛试管苗生根壮苗常用的基本培养基有1/2 MS、MS、B5、N6等。
赵天榜等研究N6、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚苗生长的影响，以从最好，SH 、MS 次之，1 / 2MS 、1 / 2VW 最差。
张玲等比较了MS 、B5、N6 、KC 四种培养基对幼苗生长的影响，发现N6培养基最有利于幼苗的生长，其株高和根数都比其它培养基好，B5次之。
刘弊等比较了1 / 2 MS 、B5、VW 、KC 等4 种基本培养基对试管苗生长的影响，发现培养到120d 时，残培养基上的小苗生长最好，其次为l /2MS 培养基，而KC 和VW 培养基上的试管苗生长明显不如B5和1 / 2 MS 。
4.2 激素在基本培养基中添加NAA、IAA、IBA等激素有助于试管苗生根壮苗。
赵天榜等在1 / 2N6培养基内添加2mg/L或lmg/L NAA ，可提高石斛种胚苗分桑率6 . 00 一7.14 倍。
唐桂香等研究了不同NAA 含量对铁皮石斛苗成活率和生根的影响，结果表明NAA 有助于试管苗的生根，以0.5mg/L试管苗平均根数最多和平均根长最长。
4.3 天然添加物在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、孽葬汁、绿豆芽汁、苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。
4.4 炭源铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的生长，能使根系长得更加粗壮闭。
唐桂香等认为在培养基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的根数和根长影响小。
5 其他外植体的离体培养除种子作外植体外，以铁皮石斛的茎尖、茎段、幼叶、种胚苗、幼根为外植体，均可培育出组培苗。
以茎尖、茎段为外植体，培养途径为茎尖、茎段一诱导形成不定芽～不定芽增殖～不定芽分化～生根壮苗，形成完整试管苗。
关于铁皮石斛组织培养与栽培技术的报告1培养基1.1配方根据不同阶段，培养基配方有所差异。
如表1表1 各种培养基配方不同阶段培养基备注愈伤组织（原球茎）的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8幼株的生根壮苗 MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.61.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA（1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；（2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；（3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml 蒸馏水的烧杯，混合均匀；（4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀；（5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；（6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。
注意事项①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序；③煮沸时，小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
1.3灭菌1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；6）关闭电源，使之自动降温至0℃。
10min后，打开排气阀和锅盖；7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
表2 灭菌时间统计阶段单锅灭菌（耗时64min）多锅连续灭菌第一锅（耗时63min）第二锅（耗时46min）起始22:21 8:04 9:30排气22:41 8:23 9:43T=121℃22:50 8:32 9:50关闭电源23:10 8:52 10:10 气压降至023:259:0710:16注意事项①启动灭菌前，应检查水位、电源、排气阀、安全阀、排气管等，确保正常；②灭菌锅底部应铺垫一层报纸，以防培养瓶机械破损；③灭菌电压不宜超过220V，否则灭菌锅会剧烈摇晃，造成不必要的损害和安全隐患；④当温度达到121℃后，调节电压至135V，并且时不时注意温度的变化，确保温度介于121-122℃之间；⑤气压降至0后，不宜立即揭盖；最好在5-10min后揭盖，这样才能缓和内外“气压和温度差”；⑥揭盖5-10min后，再转移锅内培养基，以免烫伤。
⑦每锅只能灭菌18瓶2转接2.1转接前准备1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；2.2转接1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min；2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中；5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。