淡水生物调查规范.

宁波大学生命科学与生物工程学院2000 年 7 月一．浮游植物定量调查（一）采样点的选择由于水面大小、水深、水流等条件不同，不同水域的采集点选择也有差别，有条件时采样点可适当多设一些，一般情况下建议下列位置应设采样点：水库库心区、各湖区的中点、上游、下游、水库大坝附近及库（湖）湾等有代表的区域。

（二）采样层次、采水量及采样次数①凡水深不超过二米者，可于采样点水下0.5米处采水。

②水深2-10米以内,应于距库底0.5米处另采一个水样。

③水深超过10米时，应于中层处增采一个水样。

深水湖泊、水库可根据具体情况确定采样层次。

采样次数可多可少，有条件时可逐月采样一次，一般情况可每季采样一次，最低限度应在春季和夏未秋初各采样一次。

每一采样点应采水1000毫升，如系一般性调查，可将各层所采水样等量混合，取1000毫升水样固定；或者分层采水分别计数后取平均值。

分层采水可以了解每一采样点各层水中浮游植物的数量和种类。

采得水样后应立即加入15毫升碘液（即鲁哥氏液）固定（鲁哥氏液配制方法：将6克碘化钾溶于20毫升水中，待其完全溶解后，加入4克碘充分摇动，待碘全溶解后加入80毫升水即可）。

采水器，各种采水器均可，但一定要能分层采水，一般水深不超过10米可用1000毫升或1500的玻瓶采水器，水更深(如海洋)必须用颠倒采水器、北原式采水器或其它形式的采水器。

（三）沉淀与浓缩以采水器采得水样后，须经浓缩沉淀方适于研究和保存。

凡以碘液固定的水样瓶塞要拧紧，还要加入2-4%的甲醛固定液以利保存。

定量水样应放入1000毫升分液漏斗中，静置24-36小时后，用内径为30毫米的橡皮乳胶管，接上橡皮球，利用虹吸法将沉淀上层清液缓慢吸出（切不可搅动底部，万一动了应重新静置沉淀），剩下30-50毫升沉淀物，倒入定量瓶中以备计数。

为不使漂浮水面的某些微小生物等进入虹吸管内，管口应始终低于水面，虹吸时流速流量不可过大，吸至澄清液1/3时，应控制流速流量，使其成滴缓慢流下为宜。

采水时，每瓶上都应贴好标签，写明时间、地点、站号、样品号、水层、温度等内容，同时记录卡片以致备查。

（四）计数将浓缩沉淀后水样充分摇均后，吸出0.1毫升，置于0.1毫升计数框内（表面积最好20×20平方毫米）在400-600倍显微镜下观察计数，每瓶标本计数二片取其平均值，每片大约计算100个视野，但视野数可按浮游植物多少，而酌情增减；如果平均每个视野有十几个细胞，数50个视野就可以了；如果平均每个视野只有5-6个，就要数100个视野，如平均每个视野不超过1-2个时，要数200个视野以上，总之，每片计数的细胞总数应在1000-2000个以上，同一样品的二片计算结果和平均数之差如不大于其均数的15%，其均数视为有效结果，否则还必须测第三片，直至三片平均数与相近二数之差不超过均数的15%为止，这两个相近的值的均数，即可视为计数结果。

计数过程中常可碰到某些个体的一部分在视野中，而另一部在视野外，可规定在视野上半圈者计数，下半圈者不计数，此外，数量最好用细胞数表示，对不可用细胞数表示的群体或丝状体，可求出其平均细胞数。

计数时优势种类尽可能鉴别到种，其余鉴别到属。

注意不要把微型浮游植物当作杂质而漏计。

其他要求：1、校正计数框容积。

2、定量用的盖玻片应以碱水或肥皂水洗净备用，用前可浸于70%酒精中，用时取出以细绢拭干。

3、滴取样品以后最好用液体石腊封好计数框四周，以防计数过程中干燥。

4、以台微尺测所用显微镜一定倍数下的视野直径。

5、选取或自制好与计数框同样容积的吸管备用。

6、定量时应将浓缩标本水样充分摇匀，快吸快滴。

7、加上盖玻片后不应有气泡出现。

8、计数后的定量样品应保存下来。

一升水中的浮游植物的数量（N）可用下列公式计算：N= Cs/（ Fs×Fn）×V / U ×Pn式中：Cs---计数框面积（mm2）Fs---每个视野的面积Fn---计数过的视野数V---一升水样经沉淀浓缩后的体积（mL）U---计数框体积（mL ）Pn---每片计数出的浮游植物个数如果计数的显微镜固定不变，Fn、V、U亦固定不变，公式中Cs/（ Fs×Fn）×V / U 用常数K代替，上述公式可简化为N=K×Pn（五）生物量的换算因为浮游植物中不同种类的个体大小相差较悬殊，用个体数或细胞数都不能反映水体丰欠的真实情况，且浮游植物的个体极小，除特殊情况外无法直接称重，一般按体积来换算。

球形、圆盘形、圆锥形、带形等可按求体积公式计算。

纤维形、多角形、新月形以及其它种种形状可分割为几个部分计算。

由于浮游植物大都悬浮于水中生活，，其比重应近于所在水体水的比重即近于1。

因此体积值（立方微米）可直接换算为重量值（109立方微米=1毫克）。

由于同一种类的细胞大小可能有较大的差别，同一属内的差别就更大了，因此必须实测每次水样中主要种类的细胞大小并计算平均重量，其它种类可以参考附表1计算。

定量结果应列出总生物量，各门生物量和优势种属。

在条件许可时还可以用较简便的测定叶绿素法，来对照或代替生物量，但叶绿素法不能反应水体中的种类组成情况。

浮游植物的平均重量，优势种（属）和次优势种（属）最好实测，这时可以从每次采集的样品中随机抽查10-20个细胞或个体测定其大小。

一般种类可按附表1计算。

表中所谓“大”、“中”、“小”是按该种类平均大小换算的，如果无法判定所见种类属于那一级时，可按“中”的计算。

为了减轻镜视和计算时的工作量，避免在个别种属鉴定时的困难，对于种类很多而数量有限的微型浮游生物，也可以仅鉴定到门，再按下列大、中、小三级的平均重量计算生物量（单位：10-4毫克）：小的（如小球藻、小型栅藻细胞等等）-------------------------------------------------0.0005中的（如平裂藻群体、粉状微襄藻群体等等）----------------------------------------0.002大的（如衣藻细胞、栅藻群体等等）----------------------------------------------------0.005 很多浮游植物的定量数据精细到百位、十位甚至个位，这种按推算得来的数字并无实际意义，建议有效数字用万位（必要时加小数点）即可。

这样的数值与附表平均重量相乘即得出生物量的毫克数（免去10-4）。

二．浮游动物调查（一）采样点的选择同浮游植物。

（二）采样层次和采样次数同浮游植物（三）采样水量原生动物可用浮游植物采水器，采水一升即可，而轮虫、无节幼体、枝角类和桡足类则须用较大容积（2.5升）采水器，采10升水样用25号浮游植物过滤（亦可将此10升水样混合，先取出一升水样供浮游植物和小型浮游动物定量用，余者供过滤较大型浮游动物之用），定性水样可用13到18号定性浮游生物网，于采样点上进行水平拖曳，较大水体可将定性网缚于船上以慢速拖曳，时间一般为10-20分种，较小水体可将网缚于2米长的竹竿上，置网于水中，使网口在水下0.5米处作“∞”形拖曳以定性用。

采水器：同浮游植物采水器(四)沉淀与浓缩1．计算原生动物，所采的一升水样加入15毫升碘液，带回实验室后放入1000毫升分液漏斗中静置沉淀24小时，然后按照浮游植物的浓缩方法，浓缩到10-20毫升（也可将浮游植物标本再浓缩到10-20毫升使用）。

2．计算轮虫、无节幼体和甲壳动物（枝角类、桡足类）需采10升水样，于现场用25#浮游生物网过滤，浓缩样品集中于1000毫升的广品瓶中，并加入甲醛固定（每1000毫升样品中加入4毫升甲醛液）(五) 计数1.原生动物将标本充分摇匀，吸出0.1毫升或0.5毫升注入相应大小的计数框中，盖上盖玻片，在中倍解剖镜下进行全片计数，每份样品计数2片，然后按浓缩的倍数换算成一升水中的含量。

2.轮虫和无节幼体将标本充分摇匀，吸出0.5毫升注入相应大小的计数框中，盖上盖玻片，在中倍解剖镜下进行全片计数，每份样品计数2片，然后按浓缩的倍数换算成一升水中的含量。

3. 枝角类，桡足类计数时如果水样中二种生物数量不多（总数不超过几十个），可将全部浓缩样品进行计数。

如果样品中数量极大也可将全部浓缩样品摇匀，用大吸管吸容量的25%以上置计算框中在低倍镜下计算全片。

不过鉴于甲壳类沉淀极快，所以操作时须特别敏捷，否则影响计数。

计数具体要求:①校正计数框容积,②将浓缩为一定体积的样品充分摇匀，用一定容积的吸管，边摇吸取（吸管容积、管口应略大于浮游植物定量用吸管）③盖上盖片不应有气泡出现。

（六）工作要求1．各类浮游动物优势种尽可能鉴定到种。

2．参考附表2算出各类浮游动物（原生动物、轮虫、无节幼体、枝角类、桡足类）的生物量。

3．在计数原生动物、轮虫和无节幼体标本时，每份样品要求计数二片。

两次实测值与平均数之差不得大于其均数的15%，否则还必须测第三片，直至三片平均数与相近二数之差不超过均数的15%为止，这两个相近的值的均数，即可视为计数结果。

4．定量样品应保存下来，以备核查时使用。

表2 浮游动物各大类的平均重量（毫克）小型中型大型特大型原生动物0．00003轮虫0．0003 0．0008 0．005 0．02枝角类0．02 0．05 0．2 1．3桡足类0．01 0．03 0．09 0．2注：1、枝角类和桡足类小型指约0.5毫米，中型指约1毫米，大型指约1.5毫米的个体；2、桡足类无节幼体为0.004毫克（不在表内），桡足幼体则按小型计。

3、特大型轮虫心指晶襄轮虫等，枝角类和桡足类指2毫米以上种类。

三、底栖动物的定量调查（一）采样点的选定采样点应选择那些代表水域特性的地区和地带，如水库、江河流入内的库湾部分，水库的近坝区、消落区、沉入水下的旧河床淹没的其它地段。

要能反映整个水体中的基本状况，因此在选点之前，要根据湖泊、水库或水域的详细地形图，对其形成及环境进行了解，从而根据不同生境特点（如水深、底质、水生植物等等）设置断面和采样点，断面上设置采样点的多寡视环境而酌情增减，通常设断面必须考虑几个因素：如底质、水深、水生高等植物的组成，入水口、出水口、湖湾以及受污染地区等，一个水体究竟要设多少断面，多少采样点为适，是难以统一的，必须具体情况具体分析，每一断面以及断面上的每一采样点（如第五断面第五点用▽表示）的位置都需标在地形图上，采集时可按图上编号顺序进行。

5（二）样品的采集和处理鉴于底栖动物生长、繁殖的速度和浮游动物比较相对地慢，所以一般情况下每季采样一次，最低限度应在春季和夏未秋初各采样一次，有条件时可在生长期内每月一次。

底栖动物定量采集工具可以用以下二种：①带网夹泥器（面积为1/6平方米）是一种大型底栖动物夹网，用来采集软体动物的定量样品②蚌斗式采泥器（改良彼得生采泥器）（面积1/16或1/20平方米）用来采集昆虫幼虫和寡毛类以及小型软体动物。