植物NADPH酶联免疫分析(ELISA)

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植物NADPH酶联免疫分析ELISA

植物NADPH酶联免疫分析ELISA

植物NADPH酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中植物NADPH含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物NADPH水平。

用纯化的植物NADPH抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物NADPH,再与HRP标记的NADPH抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的植物NADPH呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物NADPH浓度。

试剂盒组成:标本要求:1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为120U/L,80U/L ,40U/L,20U/L,10U/L)。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。

考研植物生理学与生物化学(414)研究生考试试题及答案指导(2025年)

考研植物生理学与生物化学(414)研究生考试试题及答案指导(2025年)

2025年研究生考试考研植物生理学与生物化学(414)模拟试题(答案在后面)一、选择题(植物生理学部分,10题,每题2分,总分20分)1、植物光合作用中,能够吸收光能并转化为化学能的色素是:A、叶绿素B、类胡萝卜素C、叶黄素D、花青素2、在植物生物化学中,以下哪种物质是构成蛋白质的基本单位?A、氨基酸B、糖C、脂质D、核酸3、植物细胞中,以下哪种酶在光合作用的光反应阶段起关键作用?A、ATP合酶B、PEP羧化酶C、NADPH脱氢酶D、细胞色素c氧化酶4、光合作用中,负责将光能转化为电能的复合体是?A. 光系统I (PSI)B. 光系统II (PSII)C. 细胞色素b6f复合体D. ATP合成酶5、下列哪一种物质是植物细胞壁的主要成分?A. 纤维素B. 几丁质C. 蛋白质D. 脂肪6、在植物体内,蔗糖是如何从源器官输送到库器官的?A. 通过木质部自上而下运输B. 通过韧皮部自下而上运输C. 通过韧皮部从高浓度向低浓度运输D. 通过木质部从低浓度向高浓度运输7、植物细胞中的哪种物质是光合作用的直接产物?A、葡萄糖B、脂肪酸C、氨基酸D、ATP8、以下哪个选项描述了生物化学中的“酶促反应”?A、酶作为催化剂加速反应速度,但自身不发生变化B、酶与底物结合后,底物转化为产物,酶失去活性C、酶与底物结合后,底物转化为产物,酶被底物消耗D、酶作为反应物参与反应,最终消失9、以下哪种生物化学过程属于“信号转导”?A、蛋白质合成B、光合作用C、糖酵解D、DNA复制10、在植物光合作用过程中,光系统I(PSI)的主要功能是:A. 产生氧气B. 吸收红光并激发电子至更高能级C. 将NADP+还原为NADPHD. 固定二氧化碳二、实验题(植物生理学部分,总分13分)题目:实验证明光合作用过程中ATP和NADPH的生成与光反应的关系。

实验目的:1.观察并记录光合作用过程中ATP和NADPH的生成情况。

2.分析光反应对光合作用暗反应的影响。

酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量

酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量

酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量姓名:李希东专业:植物学学号:200808201 日期:09.5.10 成绩:一、实验目的:掌握间接法测定植物激素的原理和方法;了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。

二、实验原理:酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay,简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。

其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的,即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性;②酶的高效催化特性。

ELISA把这二者有机地结合在一起,即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应,然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性,从而达到定性或定量测定的目的。

间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上,然后加入待测植物激素和相应抗体,使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合,再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物),就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕,加入底物后就生成有色产物,测定其吸光率,可计算待测抗原的量。

如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定,并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量,那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制,因此待测抗原的量将与吸光率成反比。

图A表示间接酶联免疫方法的基本原理:A.间接酶联免疫原理示意图示反应板(固相载体)示激素特异抗体(一抗)示激素(抗原)示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法,则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应,它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体,H表示游离激素,HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。

ELISA操作流程及技术要点

ELISA操作流程及技术要点

编号 pg/mL
S7 2000
S6 1000
S5 500
S4 250
S3 125
S2 62.5
S1 31.25
S0 0
1. 2
洗液工作液
浓洗涤液按1:25倍用去离子水进行稀释。例如用量筒量取 240mL去离子水,倒入烧杯或其他洁净容器中,再量取10mL 浓洗涤液,均匀加入,搅拌混匀,在临用前配妥。浓洗涤 液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
2
重要提示
1、实验开始前,请提前配置好所有试剂。试剂或样 本稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。 2、用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心 数分钟,以便管盖和管壁上的液体集中到管底。 3、在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的 稀释液配制,不能混淆。 4、因实际装量多于标示装量,配制工作试剂请用精 准的计量工具(移液枪或量筒等)量取,切勿不经量 取直接使用。 5、标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物 酶标记亲和素工作液稀释前根据预先计算好的每次实 验所需的总量配制 ,实际配制时应多配制 0.1-0.4mL 。 请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工 作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 6、标准品的稀释请勿于板中进行,标准品应于临用 前 15 分钟内配制。为保证实验有效性,建议每次实验 使用新的标准品。若保存得当,溶解后的标准品 S7 可 在 2-8 ℃保存, 7 天内使用有效。
4 、温育:为防止样本蒸发或污染,温育过程中酶标板必须 覆上板贴,实验过程中酶标板应避免处于干燥的状态。温育 过程中应随时观察温箱温度是否恒定于37℃,及时调整。温 育过程中,温箱不易开启太多次,以免影响温度平衡。 5 、洗涤:洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。 (1)手工洗板方法:吸去(不可触及孔壁和孔底)或甩掉 酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下 用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液按 200μL/孔注入孔内, 浸泡2分钟。根据操作步骤中所述,重复此过程数次。 (2)自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用 到正式实验过程中。 6 、显色:为保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应 尽快加入终止液。可在加入底物溶液后每隔一段时间观察一 下显色情况以控制反应时间(比如每隔10分钟)。当肉眼可 见标准品前3-4孔有明显梯度蓝色,后3-4孔显色不明显时, 即可加入终止液终止反应,此时蓝色立刻变为黄色。终止液 的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 7 、底物溶液应为浅蓝色或无色,如果颜色严重变深则必须 弃用。底物溶液易受污染,请避光妥善保存。

植物激素的测定方法-精品文档

植物激素的测定方法-精品文档

二、免疫球蛋白的分子结构
免疫球蛋白的基本结构
• 四肽链结构 ,链间二硫键连接 • 两条重链(H)和两条轻链(L) • 氨基端和羧基端。
可变区与恒定区
• 根据氨基酸排列顺序的不同分为: 可变区(V)和恒定区(C) • 可变区(V区):氨基酸组成、排列顺序变化较 大 • 恒定区(C区):氨基酸数量、种类、排列顺序 及 含糖量都比较稳定
注意事项 :
( 1 )微量加液器应注意保养并定期校正,否则结果误差 较大,同时加样时不可出现气泡,以免反应物间不能充分 混匀反应。 ( 2 )洗涤时力求次数足够,且避免形成气泡,否则洗涤 不完全。 (3)温育时要力求受热均匀,同时避免液体蒸发。 ( 4 )比色时反应管内不能留有气泡,管底不能存有水滴, 否则出现较大误差。
测定标准物各浓度和各样品490nm
处的OD值。
数据分析
在波长 450nm 处分别读取各标准孔和样本孔 OD 值, 以 OD值为横坐标,“标样激素含量的对数”为纵坐
用酶标仪进行比色,以0 ng/ml标准孔为空白孔,
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ标,在半对数坐标纸上画出标准曲线,以测定孔的
利用反对数求得ABA的绝对含量。
OD值在标准曲线上查出待测样品的 ABA含量的对数。
植物激素的酶连免疫分析法
几种酶标分析仪
DNM-9602G酶标分析仪
DNM-9602A酶标分析仪
DNM-9602 标配酶标分析仪
操作步骤
包被---温育---洗涤---竞争--温育---洗涤---加二抗---温育--
-洗涤---显色---比色---计算
包 被
• 每小孔中加入100μl包被缓冲液,然后
植物激素的测定方法?
生物活性法 气相色谱(气-质联机) 液相色谱(液-质联机) 酶连免疫法( ELISA 法)

植物激素的酶联免疫吸附测定法(ELISA)

植物激素的酶联免疫吸附测定法(ELISA)

结果计算: 曲线的横坐标用激素标样各浓度(ng/ml )的自然对 数表示,纵坐标用各浓度显色值的logit值表示。Logit 值的计算方法如下: B/B0 B Logit(B/B0)=ln———— =ln———— 1-B/B0 B0-B 其中B0是0ng/ml孔的显色值,B是其它浓度的显色 值。 待测样品可根据其显色值的logit值从图上查出其所 含激素浓度(ng/ml)的自然对数,再经过反对数即可 知其激素的浓度(ng/ml)。 求得样品中激素的浓度后,再计算样品中激素的含量 (ng/g•fw)。
材料、试剂及设备
(1) 磷酸盐缓冲液(PBS):称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 •12H2O,用量筒加1 000 ml蒸馏水,pH为7.5。 (2) 样品稀释液:500 ml PBS中加0.5 ml Tween-20, 0.5g明胶(稍加热溶解)。 (3) 底物缓冲液:称取5.10g C6H8O7•H2O(柠檬酸), 18.43g Na2HPO4•12H2O,用量筒加1 000ml蒸馏水, 再加1 ml Tween-20,pH为5.0。 (4) 洗涤液:1000ml PBS加1mlTween-20。 (5) 终止液:2mol/L H2SO4。
实验步骤
一、竞争:即加标准物、待测样和抗体。 加标样及待测样: 取适量所给标样用样品稀释液配成: IAA标准曲线的最大浓度为100ng/ml。然后再依ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ2倍 稀释8个浓度(包括0ng/ml )。将系列标准样加入96孔 酶标板的前两行,每个浓度加2孔,每孔50μl,其余孔加 待测样,每个样品重复两孔,每孔50μl。 加抗体:在5ml样品稀释液中加入一定量的抗体,混匀 后每孔加50μl,然后将酶标板加入湿盒内开始竞争。 竞争条件37℃左右0.5h。

nadph测定原理

nadph测定原理

nadph测定原理摘要:一、引言二、NADPH的定义和作用三、NADPH测定的重要性四、NADPH测定的原理1.化学反应2.光电化学反应五、NADPH测定的方法1.酶联免疫吸附法2.高效液相色谱法3.荧光测定法六、NADPH测定的应用领域七、总结正文:一、引言ADPH(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)是一种重要的辅酶,广泛存在于生物体内,参与许多生物化学反应。

为了更好地了解NADPH在生物体内的作用和调控,研究其测定方法具有重要意义。

本文将介绍NADPH测定的相关原理和方法。

二、NADPH的定义和作用ADPH是一种含有一个磷酸基团的辅酶,全称为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。

它是生物体内的一种重要还原力,能够参与生物体内的氧化还原反应,调控许多生理过程,如能量代谢、细胞生长和物质合成等。

三、NADPH测定的重要性准确测定NADPH的浓度有助于研究其在生物体内的作用机制,进而对许多疾病的发生和发展进行调控。

此外,NADPH在生物体内的含量受到许多因素的影响,如营养状况、疾病状态和药物治疗等,因此对其进行测定有助于了解这些因素对生物体的影响。

四、NADPH测定的原理1.化学反应:NADPH的测定通常采用化学反应的方法,如与金属离子结合生成配合物,通过测定配合物的稳定性来推算NADPH的含量。

2.光电化学反应:NADPH具有还原性,可以通过光电化学反应进行测定。

例如,在光照条件下,NADPH可以将光敏剂还原,从而改变光敏剂的荧光强度。

通过测定荧光强度的变化,可以推算出NADPH的含量。

五、NADPH测定的方法1.酶联免疫吸附法:这是一种常用的NADPH测定方法,通过抗NADPH 抗体与NADPH结合,形成免疫复合物,然后通过测定免疫复合物的浓度来推算NADPH的含量。

2.高效液相色谱法:高效液相色谱法可以对NADPH进行定性和定量分析,通过比较不同浓度的标准品和待测样品中NADPH的峰面积,可以推算出待测样品中NADPH的含量。

植物法尼基焦磷酸 elisa

植物法尼基焦磷酸 elisa

植物法尼基焦磷酸 elisa
植物法尼基焦磷酸(FPP)是一种重要的植物生长调节物质,参与植物的生长发育和胁迫响应等多个生物学过程。

近年来,随着生物技术的不断发展,对植物法尼基焦磷酸的研究逐渐深入,特别是在其检测技术方面,研究者们不断探索新的检测方法以提高检测的灵敏度和特异性。

酶联免疫吸附法(ELISA)是一种常用的蛋白质检测技术,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。

近年来,将ELISA技术应用于植物法尼基焦磷酸的检测逐渐成为研究的热点。

在植物法尼基焦磷酸的ELISA检测中,通常采用多克隆抗体或单克隆抗体作为捕获抗体,将待测样本与酶标记的二抗结合,通过底物显色反应进行检测。

在植物法尼基焦磷酸的ELISA检测中,关键在于抗体的制备和标记。

多克隆抗体通常是通过免疫动物制备,而单克隆抗体则是通过杂交瘤细胞制备。

标记抗体常用的酶有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),其中HRP最常用。

在酶标记时,通常采用化学偶联法将酶与抗体结合,偶联比例需要根据实验结果进行优化。

在实际应用中,植物法尼基焦磷酸的ELISA检测可用于多种研究领域。

例如,在植物分子生物学研究中,通过检测法尼基焦磷酸水平可以了解植物的生长、发育和胁迫响应机制;在植物生理学研究中,可以了解植物在不同环境条件下的适应机制;在农业科学研究中,可以应用于植物新品种的选育和作物产量与品质的改良。

实验32酶联免疫吸附检测法(ELISA)测定植物激素含量

实验32酶联免疫吸附检测法(ELISA)测定植物激素含量

实验17 酶联免疫吸附检测法(ELISA)测定植物激素含量一、原理植物激素(planthormone)免疫定量主要有放射免疫分析(RIA)和酶联吸附免疫分析(ELISA),由于前者操作上欠安全等原因,目前常采用后一种类型。

在ELISA中,抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现,常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。

酶可直接标记激素分子,称为酶标植物激素,也可标记于第二抗体(识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白),称为酶标二抗。

这两类标记物分别用于固相抗体型和固相抗原型ELISA。

A.固相抗体型ELISA:将抗激素的单克隆抗体(Mab)与已吸附于固相载体上的兔抗鼠Ig抗体(RAMIG)结合,然后加入激素标准品或待测样品,使其与固相化的Mab结合,再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记激素(酶标激素)。

通过测定酶标激素的被结合量,可换算出未知样品中激素的数量。

B.固相抗原型ELISA:将“激素-蛋白”复合物(该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白)包被于固相载体,加入待测激素(样品或标准品)和抗IAA多克隆抗体(Pab)反应,进行竞争反应。

然后让HRP标记羊抗兔Ig抗体(HRP-GARIG)与结合在固相上的Pab反应,通过测定与固相结合的酶量,换算出未知样品中激素的含量。

二、材料、仪器设备及试剂(一)材料:高等植物、真菌、藻类等组织或器官。

(二)仪器设备:1. 酶联免疫检测仪;2. 高速冷冻离心机;3. 恒温箱;4. 连续进样器;5. 涡旋仪;6. 96孔微孔板;7. 离心管;8. 研钵或匀浆器;9. 试管。

(三)试剂1. 洗涤缓冲液:0.01mol/L pH7.4磷酸缓冲液(PBS),含0.05%Tween-0;2. RAMIG 溶液,或“激素-蛋白”复合物;3. 0.1%封闭蛋白(该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白);4. 抗激素Mab,或Pab;5. 激素标准品母液,及参比系列溶液(按双倍或四倍系列稀释);6. HRP标记激素,或HRP-GA RIG;7. 邻苯二胺(OPD)基质液:5mgOPD溶于12.5ml0.01mol/L pH5.0PBS,用前加入30%H2O212.5μl。

间接ELISA检测植物病毒

间接ELISA检测植物病毒

间接ELISA检测植物病毒一实验目的酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)是常用的检测病毒的方法,ELISA法有多种,本实验介绍最简便和常用的间接ELISA法,以加深对间接ELISA 试验原理和步骤的了解,掌握试验结果判断方法。

二实验原理间接ELISA的原理是将抗原连接到固相载体上,样品中待测抗体与之结合成固相抗原-抗体复合物,再用酶标二抗(如羊抗兔IgG抗体)与固相免疫复合物中的抗体结合,形成固相抗原-受检抗体-酶标二抗复合物,测定加底物后的显色程度,确定待测抗原。

三实验结果判断(1)酶标仪读数判断方法:当样品OD490值≥阴性对照OD490值的2倍,样品判断为阳性;(2)目测判断方法:当样品的颜色与阳性对照颜色一致或深于阳性对照,样品判断为阳性。

四检测材料CMV抗血清;系统感染病毒的植株(学生自己采的疑似感染病毒症状的样品,一人采一个样品);设置阳性和阴性及空白对照。

酶联板;洗瓶;微量取液器(40-200 μl可调,1000ul可调,20ul可调);包被缓冲液;洗涤缓冲液;IgG稀释缓冲液;底物溶液;邻苯二胺(OPD);过氧化氢(H2O2 );2M硫酸。

五. 配制缓冲液(1)抗原包被缓冲液(0.05M碳酸盐缓冲液,pH9.6) :Na2C03 1.59g;NaHCO3 2.93g;蒸馏水加至1升。

(2).洗涤缓冲液(0.02MPBS-吐温缓冲液,PBST,pH7.4):NaCl 8.0g ;Na2HPO4 '12H2O 2.93g;KH2PO4 0.2g;KCl 0.2g;蒸馏水加至1升后加Tween-20 0.5ml.(3).CMV抗血清稀释缓冲液(0.02MPBST,牛血清白蛋白溶液)取0.1g牛血清白蛋白溶于用灭菌蒸馏水配制的PBST缓冲液100ml中即成。

(4).底物溶液(邻苯二胺溶液)pH5.0柠檬酸2.55g ; Na2HPO4 .12H2O 9.2g加蒸馏水500ml称取40mg邻苯二胺(OPD),溶解后加上述缓冲液至100ml,临用前加30%H2O20.15ml 即成(注意邻苯二胺需现配现用).六实验步骤(1)加抗原用包被缓冲液将阳性对照、阴性对照及待测样品按一定比例进行稀释后,在酶标板上每孔加100μl,并设空白对照,于4 ℃冰箱中保湿过夜。

植物甜菜碱(Betaine)酶联免疫分析(ELISA

植物甜菜碱(Betaine)酶联免疫分析(ELISA

植物甜菜碱(Betaine)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中甜菜碱(Betaine)含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物甜菜碱(Betaine)水平。

用纯化的植物甜菜碱(Betaine)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入甜菜碱(Betaine),再与HRP标记的甜菜碱(Betaine)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的植物甜菜碱(Betaine)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物甜菜碱(Betaine)浓度。

试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:450pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存标本要求:1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

酶联免疫吸附分析法在植物病毒检测中的应用

酶联免疫吸附分析法在植物病毒检测中的应用
中 图分 类 号 :6 62 0 5 .2 文献标识码 : A
酶 联 免 疫 吸 附 分 析 ( nyl — Lne Ezn e i d k
I m n sretA sy E A)最 早 由 E ga & m u oo n s HS b a nvl l
疫等方面 , 已经成为许多 国家大规模监控植物 并 病毒病 的常规 方法 。
维普资讯
第O4卷第O月 21 0 2年 15期
化 学 研 究 与 应 用
C e c lR s ac n p l a o h mia e e rh a d A pi t n ci
V0 . 4. 1 1 No. 5 Oc . 2 0 t , O 2
敏感 性 , 又保 持 了抗 原 抗体 反应 的特 异性 , 因而极
1 E IA的 基本 类 型 LS
植 物 病毒 学 中用 到 的 E A可 分 为 两 大 类 , I 如果将 酶直 接 交 联 到 抗 病 毒 的 免 疫 球 蛋 白上 , 称
为直接法 ; 而将酶交联到一种用于检测抗病毒免
文章 编 号 :0415 (020—5 1 5 10—6620 )50 1— 0
酶 联 免 疫 吸 附分 析 法在 植 物病 毒 检 测 中的 应 用
孙 伟 , 焦 奎
( 岛化工学院应用化学系 , 青 山东 青岛 264 ) 602
摘要 : 结合作者工作 , 综述 了酶联免疫 吸附分析 法 ( LS ) E t 在植物 病毒 检测 中的应用 。对 EJ A的 基本 类型 , A IS 改进和提高 灵敏度的方法进行 了分 析 , 阐述 了该技术 的某些 发展趋势 。引用文献 2 篇 。 并 9 关键词 : 酶联免疫吸 附分析 技术 ; 物病 毒 ; 植 分析方法

ELISA法在植物检测中的应用研究及改进措施

ELISA法在植物检测中的应用研究及改进措施

ELISA法在植物检测中的应用研究及改进措施作者:张黎凤马天文曹海艳来源:《现代农业科技》2016年第24期摘要酶联免疫吸附法(ELISA)目前是酶联免疫技术中应用最广的方法。

详细分析了ELISA的基本原理,并对其基本类型及在植物病毒检测中的应用现状进行了研究。

最后在理论分析的基础上结合工作经验,从提高ELISA的灵敏度、保持ELISA检测的稳定性、特异性、检测的标准曲线方法等方面提出改进策略,并对其发展前景进行展望。

关键词酶联免疫吸附法;植物病毒检测;灵敏度;改进策略中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2016)24-0137-02早期植物病毒病的检测一般采用传统的生物学方法,而这种单一的生物学检测病毒的方法需要耗费大量的人力和物力,必须培育大量的接种植物,此法不仅费工费时,而且病毒症状表现的时间也较长。

因此,寻找灵敏度高、快速、可靠的植物病毒病检测方法迫在眉睫。

自从扇叶病毒向草本寄主转接获得成功后,免疫学技术开始蓬勃发展。

免疫学技术包括细胞免疫技术、免疫制备技术、免疫血清学技术,其中以血清学技术应用的最为普遍。

血清学方法检测植物病毒是利用血清反应原理实现的。

由于每一种植物病毒产生的抗血清都有各自的特性,因此通过已知病毒的抗血清可鉴定病毒种类。

酶联免疫吸附法(ELISA)是血清学技术中应用最为广泛的一种方法,并已渗透到各个研究领域,该方法是以酶催化的颜色反应来指示抗原抗体的结合[1-2]。

由于其具有灵敏、快速、特异性强、分析率高、花费少等优点,可用于大规模样品调查,因此成为检测植物病毒的关键技术。

1 酶联免疫吸附法的基本原理ELISA的基本原理是将酶标记同抗原或抗体物理性地吸附于固相载体表面与酶的催化作用结合,并保持其免疫活性。

酶标记的抗原或抗体既保留其反应的特异性,又保留了酶的活性。

在测定时,ELISA用固相载体吸附抗原或抗体,固相载体上形成的抗原抗体复合物通过洗涤的方式与液体中的其他物质分开,再加入通过酶标记反应而结合在固相载体上的抗原或抗体,酶结合物与相应的抗原或抗体结合后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,此时待测抗原或抗体与有色产物的量呈一定的比例[3-4]。

植物酶联免疫检测技术的发展和应用

植物酶联免疫检测技术的发展和应用

植物酶联免疫检测技术的发展和应用随着全球人口的不断增长,营养不良、疾病、环境污染等问题也随之加剧,对食品和生物领域的质量安全与环境监测提出了更高的要求。

为了解决这些问题,植物酶联免疫检测技术应运而生。

植物酶联免疫检测技术(Plant Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,简称PELISA)是指利用酶标记抗体或抗原分子特异性结合的能力,通过测定光学信号来检测分析样品中的特定成分。

与传统的检测方法相比,植物酶联免疫检测技术不仅具有快速、敏感、高通量等优点,而且不需要复杂的前处理步骤,可以直接应用于样品的检测。

PELISA 技术的发展始于 20 世纪 80 年代,其基本原理和酶联免疫检测技术类似,但是在抗体和抗原的选择、检测信号的放大等方面做出了相应的改进。

与其它酶联免疫技术相比,PELISA 有更广泛的应用领域,不仅可以用于植物病害和生长调节剂的检测,还可以用于环境监测、食品安全、医学诊断等多个领域。

在植物领域,PELISA 技术广泛应用于植物病原菌检测、转基因作物鉴定等方面,可以帮助农业科学家更好地控制植物疾病、提高作物产量。

同时,PELISA 技术还可以用于检测植物生长调节剂,如激素和植物抗逆性相关蛋白等,可用于揭示植物的生长和发育机制,为植物育种和改良提供科学依据。

在环境领域,PELISA 技术可以用于监测大气污染物、土壤中的重金属、农药等,与传统的监测方法相比,PELISA 具有更高的灵敏度和选择性。

此外,PELISA 技术还可以用于检测环境中的微生物、食品添加剂、工业废水等。

在食品领域,PELISA 技术可以用于检测食品中的各类有害物质,如致癌物质、致敏物质、抗生素残留等,有助于保障食品质量安全。

PELISA 技术检测速度快,效率高,已经成为目前食品监管机构的重要工具之一,在食品加工企业、餐饮服务等行业得到了广泛应用。

在医学领域,PELISA 技术可以用于检测血液中的抗体、细胞因子、肿瘤标志物等,有助于早期诊断和治疗疾病。

植物代谢产物大豆凝集素测定酶联免疫吸附法

植物代谢产物大豆凝集素测定酶联免疫吸附法

植物代谢产物大豆凝集素测定酶联免疫吸附法下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。

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人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPHelisa试剂盒使用说

人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPHelisa试剂盒使用说

人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)elisa试剂盒使用说明书Elisa kit规格:48孔配置/96孔配置标准品稀释液:1.5ml×1瓶酶标试剂:3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)【人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用计算:以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

试剂盒组成:封板膜:2片(48)/2片(96)说明书:1份密封袋:1个标准品:2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平。

用纯化的人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH),再与HRP标记的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

ELISA酶联免疫吸附(ELISA)法检测抗体的效价 华中农业大学免疫学基础及免疫学技术

ELISA酶联免疫吸附(ELISA)法检测抗体的效价 华中农业大学免疫学基础及免疫学技术
酶联免疫吸附(ELISA)法检测 抗体的效价
免疫标记技术
1.定义:
将抗原-抗体反应与标记技术相结合,用放射 性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原,通 过检测标记物,间接测定未知的抗原或抗体。
2.分类:
ü 放射免疫测定法:131I,32P ü 免疫荧光技术:FITC,PE ü 免疫酶测定法:HRP,AP
ü 洗涤液:含0.05% Tween 20的0.01M pH7.4 PBS(氯化钠 8.5g,十二水磷酸氢二钠2.85克或二水磷酸氢二钠1.13克, 氯化钾0.2克,磷酸二氢钾0.27克,蒸馏水1000毫升 )
ü 底物溶液:TMB溶液 ü 2M H2SO4 (市售浓硫酸为18.4M,根据要配制的2M硫酸体
酶联免疫吸附试验
(以间接性ELISA为例):
实验材料
ü 牛血清白蛋白(BSA)—— 抗原,2%(W/V)溶液,PBS 配制
ü 小鼠抗血清—— 待测样品,用PBST从1:1000开始倍 比稀释,连续稀释8个稀释度
ü HRP标记羊抗小鼠IgG —— 二抗(按说明书稀释使用, 用PBST稀释)
ü 包被缓冲液:0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液(NaHCO3 1.59克,NaHCO3 2.93克,加水至1L)
• 阳性:显色为黄色 • 阴性:无色
1 23 4
阴性 阴性 阳性 阳性
注意事项
• 洗涤彻底,避免交叉污染。 • 按顺序加样,孔底无气泡。 • 包被和温育在湿盒内进行。
12 34
空 阴阳待 白 性性测
3.加二抗:
甩干孔内液体 以洗涤液(200色:
各孔加入酶标二抗100μL/孔 37℃,保鲜膜包好,45min
甩干孔内液体 以洗涤液(200μL/孔)洗涤4次,3min/次
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植物NADPH酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中植物NADPH含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物NADPH水平。

用纯化的植物NADPH抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物NADPH,再与HRP标记的NADPH抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的植物NADPH呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物NADPH浓度。

标本要求:1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为120U/L,80U/L ,40U/L,20U/L,10U/L)。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。

在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

计算:在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

(此图仅供参考)试剂盒性能:1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围:5U/L -160U/L保存条件及有效期:1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月Plant NADPHDrug NamesGeneric Name:Plant NADPH ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of NADPH concentrations in Plant tissue ,cell and other samples.Principle of the assayT he kit assay Plant NADPH level in the sample,use Purified Plant NADPH antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add NADPH to wells, Combined NADPH antibody which With HRP labeled,become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of NADPH in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitSpecimen requirements1.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.2.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl t o the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and theeighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl fro m the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 120U/L,80U/L ,40U/L,20U/L,10U/L)2.add sample:Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to test ing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing:Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme:Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate:Operation with 3.8.washing:Operation with 5.9.color:Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction:Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay:take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4. if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.(×n×5).5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6. The substrate evade the light preservation .7. Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.8. All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.9. Do not mix reagents with those from other lots.CalculateTake the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.This chartis for reference onlyAssay range5U/L -160U/L Storage and validity 1.Storage:2-8℃. 2.validity:six months.。

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