水中大肠杆菌的检测方法
水中大肠杆菌的检测方法
水中大肠杆菌的检测方法一、方法概要本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在351 ℃、483小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水样所产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。
二、适用范围本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验。
三、干扰(一)水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。
(二)检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。
四、设备(一)量筒：100至1000 mL之量筒。
(二)吸管：有0、1刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。
(三)试管：大小约15015 mm之试管或有盖螺旋试管。
(四)发酵管（fermentation tube）：大小约229 mm 之玻璃管。
(五)稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。
(六)锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。
(七)采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。
(八)冰箱：温度能保持在42℃者。
(九)天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至0、01 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至0、001 g。
()培养箱：温度能保持在351℃者。
(一)高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2 或1、1 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。
(二)高温干热烘箱：如用于玻璃器皿等用具之灭菌，温度须能保持在160℃达2小时或170℃达1小时以上者。
(三)接种环：为白金或镍铬合金制，适用于细菌接种或移植，亦可使用无菌塑料制品。
(四)pH计：精确度达0、1 pH单位。
五、试剂(一)试剂水：蒸馏水或去离子水，导电度在25 ℃时小于2 μ mho / cm（μS / cm）。
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测一般采用以下方法：
1. 高级培养基方法：将取样的水样加入适当的营养培养基中，培养出细菌，并计数大肠菌群的数量。
常用的培养基有大肠杆菌培养基、MacConkey培养基等。
2. 荧光定量PCR方法：通过PCR技术检测水中大肠菌群的DNA，使用荧光探针结构标记大肠杆菌特异性基因，通过测定荧光信号进行定量分析。
3. 流式细胞仪方法：将水样进行染色，然后通过流式细胞仪分析计数大肠菌群的数量。
常用的染色方法有DAPI染色法、荧光活菌染色法等。
4. 基于微生物生物传感器的方法：利用微生物细胞对特定细菌的识别和响应能力，设计合成生物传感器来监测水中大肠菌群的存在和数量。
以上方法可根据实际需要选择使用，各自具有不同的优缺点。
在进行水环境监测时，可以结合多种方法进行检测，以获得准确和可靠的结果。
水中大肠杆菌mTEC培养基检验方法(滤膜法)
水中大肠杆菌mTEC培养基检验方法－滤膜法一、方法概要本方法系以0.45 μm孔径之滤膜过滤水样，检测水中大肠杆菌(Escherichia coli)。
水样过滤后置于mTEC培养基(modified membrane-Thermotolerant Escherichia coli Agar，缩写为modified mTEC Agar)上，于35±1℃培养2小时，再以44.5±0.5℃培养22~24小时，大肠杆菌会形成红色或紫红色菌落。
方法原理是培养基内含之色原(5-溴-6-氯-3-吲哚-β-D-尿甘酸，5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-D-glucuronide)被大肠杆菌之尿甘酸化酶(β-D-glucuronidase)催化而产生红色或紫红色菌落。
二、适用范围本方法适用于饮用水水质、饮用水水源水质、地面水体、地下水体、废水、污水、及海水等水样中大肠杆菌之检验。
但不适于高浊度及含有干扰物质水样之检测。
三、干扰（一）水样中含有抑制或促进大肠杆菌生长之物质时，会影响水样之检测结果。
（二）检验使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌生长之物质时，会影响水样之检测结果。
（三）悬浮微粒过高或含有胶体的水样易造成滤膜孔隙阻塞，或造成细菌菌落弥漫生长(Spreading)而影响水样检验结果之判读。
四、设备（一）量筒：一般使用100~1000 mL之量筒。
（二）吸管：一般使用1~10 mL之灭菌玻璃吸管或无菌塑料吸管，应有0.1 mL之刻度。
（三）稀释瓶：100~1000 mL能耐高压灭菌之有盖硼硅玻璃制品。
（四）三角锥瓶：250~2000 mL能耐高压灭菌之硼硅玻璃制品。
（五）采样容器：无菌之玻璃或塑料制有盖容器，使用市售无菌袋亦可。
（六）培养皿：硼硅玻璃或可抛弃式塑料制培养皿。
可使用60×15 mm、50×12 mm或其它适当大小者。
（七）过滤装置：能耐高温高压灭菌之玻璃、塑料、陶瓷或不锈钢等材质构成之无缝隙漏斗，以锁定装置、磁力或重力固定于底座。
显色荧光方法检测牛奶或水中大肠杆菌
变化 和荧 光现象 。 有蓝 紫 色荧光 产生 的培养基 说 明大 性 酶和特 异性底 物结合 后 ， 可导致 反应 物显 色或发光 肠杆 菌 的存 在 。 牛奶和 水 中大肠 杆菌 的标 准检 测方法
［ ４ 】
。
这 个 科学原 理被 成功地 应用 到对 大肠菌 群和 大肠
Ｌ Ｓ Ｔ 肉汤
１ 十 ＋
Ｂ ＧＬ Ｂ肉汤
＋
ＥＣ肉汤
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Ｅ ＭＢ平板
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革 兰 氏染色
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２ ３
４ ５
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６
＋ ＋ ＋ ຫໍສະໝຸດ ＋ ＋ ＋
附表 ２ 显色 荧 光 法和 标 准 方 法 的试 验 时 间 比较
显色 荧光 法 标准 方法 Ｌ Ｓ Ｔ 肉汤
１ ． ２ 方 法
法 进行 检测 ， 现 将结 果报道 如 下。
分 别使 用显色荧光 方法和标准方 法对稀释 牛奶和 水 样 品 中的大肠 杆菌 进行 检测 。 显色 荧光 法具 体为 ：
１材 料 和方法
附表 １显色荧光法和标准方法检测牛奶或水中大肠杆菌
样 品号 显 色荧 光法 标准 方法
分别 参 照相 关文 献进 行 。 最 后 的样 品为６ 个 分 别为 加 杆菌 的检测 中。 我们使 用的ＭＵＧ 培养基就符 合这一反
入标 准 菌株稀 释 液 的牛奶 样 品 （ １ 号样 品 ） 、 本地 不 同 应 原理［ ５ １ 。 我们 的检 测结果 显示 使用 显色荧 光法对 大 区域 的 自来 水样 品 （ ２ ， ４ ， ５ 号 样品 ） 、 加人标准 菌株稀 释 肠 杆菌检 测 的阳性率 和标准 方法相 同 。 使 用显 色荧光 液 的 自来 水样 品 （ ３ 号样 品 ） 、 标准 菌株 稀释液 （ ６ 号样 法对 牛奶 样 品进 行 的大 肠杆 菌最可 能数检 测 ， 结果 显
水中大肠杆菌的检测方法
附件水中大肠杆菌群检测方法－多管发酵法NIEA 一、方法概要本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ±1 ℃、48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水样所产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示 100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。
二、适用范围本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验。
三、干扰(一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。
(二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。
四、设备(一) 量筒：100至1000 mL之量筒。
(二) 吸管：有刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。
(三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。
(四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。
(五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。
(六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。
(七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。
(八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。
(九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至 g。
(十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。
(十一) 高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2或 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。
(十二) 高温干热烘箱：如用于玻璃器皿等用具之灭菌，温度须能保持在 160℃达2小时或170℃达1小时以上者。
(十三) 接种环：为白金或镍铬合金制，适用于细菌接种或移植，亦可使用无菌塑料制品。
水中大肠杆菌的检测方法终审稿)
水中大肠杆菌的检测方法文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-附件水中大肠杆菌群检测方法－多管发酵法NIEA E201.54B一、方法概要本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ± 1 ℃、48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水样所产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示 100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。
二、适用范围本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验。
三、干扰(一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。
(二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。
四、设备(一) 量筒：100至1000 mL之量筒。
(二) 吸管：有0.1刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。
(三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。
(四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。
(五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。
(六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。
(七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。
(八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。
(九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至0.01 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至0.001 g。
(十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。
(十一) 高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2或 1.1 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。
★水中大肠杆菌群检测方法-滤膜法
附件水中大腸桿菌群檢測方法－濾膜法NIEA E202.53B一、方法概要本方法係用濾膜檢測水中好氧或兼性厭氧、革蘭氏染色陰性、不產芽孢之大腸桿菌群（Coliform group）細菌。
該群細菌在含有乳糖的Endo培養基上，於35 ± 1℃ 培養24 ± 2小時會產生紅色色系具金屬光澤菌落。
所有缺乏金屬光澤的菌落，均判定為非大腸桿菌群。
二、適用範圍本方法適用於地面水體、地下水體、廢水、污水及海域水質及水源水質水樣中大腸桿菌群之檢測。
三、干擾(一) 水樣中含有抑制或促進大腸桿菌群細菌生長之物質。
(二) 檢測使用的玻璃器皿及設備含有抑制或促進大腸桿菌群細菌生長的物質。
(三) 濁度過高之水樣易造成濾膜孔隙阻塞，或造成細菌菌落瀰漫生長（spreading）而影響水樣檢驗的觀察及結果的判讀。
四、設備(一) 量筒：100至1000 mL之量筒。
(二) 吸管：有0.1 mL刻度之10 mL之無菌玻璃吸管或無菌塑膠製吸管，或無菌微量吸管（micropipet）。
(三) 稀釋瓶：100至1000 mL可滅菌、具螺旋蓋之硼矽玻璃製品。
(四) 錐形瓶：200至1000 mL可滅菌之硼矽玻璃製品。
(五) 採樣容器：容量100 mL以上無菌之硼矽玻璃或塑膠製有蓋容器，使用市售無菌袋亦可。
(六) 培養皿：硼矽玻璃製或可拋棄式塑膠製培養皿，大小為60 × 15 mm、50 × 12 mm 或其他適當大小。
(七) 過濾裝置：能耐高溫高壓滅菌的玻璃、塑膠、陶瓷或不鏽鋼等材質構成之無縫隙漏斗，以鎖定裝置、磁力或重力固定於底部。
(八) 抽氣幫浦：水壓式或吸氣式，壓力差最好在138至207 kPa者。
(九) 濾膜：使用材質為混合纖維素酯（mixed cellulose esters），直徑47 mm、孔徑0.45 μm且有格子記號的無菌濾膜。
(十) 鑷子：前端平滑、內側無波紋，使用前浸泡於95% 酒精再以火燄燃燒滅菌。
水中大肠杆菌mTEC培养基检验方法-滤膜法
水中大肠杆菌mTEC培养基检验方法-滤膜法水中大腸桿菌mTEC培養基檢驗方法－濾膜法NIEA E234.51C 一、方法概要本方法係以0.45 μm孔徑之濾膜過濾水樣，檢測水中大腸桿菌(Escherichia coli)。
水樣過濾後置於mTEC培養基(modified membrane- Thermotolerant Escherichia coli Agar，縮寫為modified mTEC Agar)上，於35±1℃培養2小時，再以44.5±0.5℃培養22~24小時，大腸桿菌會形成紅色或紫紅色菌落。
方法原理是培養基內含之色原(5-溴-6-氯-3-吲哚-β-D-尿甘酸，5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-D-glucuronide)被大腸桿菌之尿甘酸化酶(β-D-glucuronidase)催化而產生紅色或紫紅色菌落。
二、適用範圍本方法適用於飲用水水質、飲用水水源水質、地面水體、地下水體、廢水、污水、及海水等水樣中大腸桿菌之檢驗。
但不適於高濁度及含有干擾物質水樣之檢測。
三、干擾（一）水樣中含有抑制或促進大腸桿菌生長之物質時，會影響水樣之檢測結果。
（二）檢驗使用的玻璃器皿及設備含有抑制或促進大腸桿菌生長之物質時，會影響水樣之檢測結果。
（三）懸浮微粒過高或含有膠體的水樣易造成濾膜孔隙阻塞，或造成細菌菌落瀰漫生長(Spreading)而影響水樣檢驗結果之判讀。
四、設備（一）量筒：一般使用100~1000 mL之量筒。
（二）吸管：一般使用1~10 mL之滅菌玻璃吸管或無菌塑膠吸管，應有0.1 mL之刻度。
（三）稀釋瓶：100~1000 mL能耐高壓滅菌之有蓋硼矽玻璃製品。
（四）三角錐瓶：250~2000 mL能耐高壓滅菌之硼矽玻璃製品。
（五）採樣容器：無菌之玻璃或塑膠製有蓋容器，使用市售無菌袋亦可。
（六）培養皿：硼矽玻璃或可拋棄式塑膠製培養皿。
可使用60×15 mm、50×12 mm或其他適當大小者。
水质大肠杆菌检测标准
水质大肠杆菌检测标准水质大肠杆菌是一种常见的水污染指标微生物，其存在往往代表着水体受到了粪便污染，可能存在病原微生物，对人体健康构成潜在威胁。
因此，对水质中的大肠杆菌进行检测具有重要意义。
本文将介绍水质大肠杆菌检测的标准及相关内容。
一、样品采集。
1. 采样地点。
样品采集应根据实际情况选择合适的采样点，通常应选择水流平缓、水深适中的采样点，避免选择有明显污染源的地方进行采样。
2. 采样容器。
采样容器应为无菌容器，避免使用含有抗菌剂的容器，避免对样品造成影响。
3. 采样方法。
在采样时，应尽量避免接触手部或其他物体，避免污染样品。
采样时应尽量避开表层水体，直接将容器浸入水中采集样品。
二、样品保存与运输。
1. 样品保存。
采集后的样品应尽快送至实验室进行检测，若无法立即送检，应在4℃条件下保存，避免样品中微生物的生长。
2. 样品运输。
样品在运输过程中应避免剧烈晃动和温度变化，以免对样品造成影响。
三、检测方法。
1. 培养法。
培养法是一种常见的大肠杆菌检测方法，通过在含有培养基的平板上培养样品中的微生物，并通过特定的培养条件，观察培养基上是否有大肠杆菌的生长。
2. PCR法。
PCR法是一种分子生物学方法，通过特定的引物扩增样品中的DNA，再通过特定的检测手段，判断样品中是否存在大肠杆菌。
四、检测标准。
根据《水质污染物排放标准》（GB 3838-2002）的规定，水体中大肠杆菌的限量标准为每100毫升不得超过500个。
若水样中大肠杆菌数量超过此标准，则代表水质受到了污染。
五、检测结果的解读。
当检测结果显示水样中的大肠杆菌数量超过标准限量时，应立即采取相应的水质改善措施，避免对周围环境和人体健康造成潜在威胁。
同时，应对水源进行全面排查，找出污染源并进行治理。
六、结论。
水质大肠杆菌的检测标准对于保障水质安全具有重要意义，正确的采样和检测方法能够有效地保障水质的监测工作。
同时，检测结果的解读和后续处理也是非常重要的环节，需要引起足够的重视和关注。
水中大肠杆菌的检测实验报告
1. 掌握水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。
2. 了解水中大肠杆菌污染的严重性及预防措施。
3. 培养实验操作技能，提高对水质监测的认识。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种条件致病菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在水质监测中，大肠杆菌常作为粪便污染的指示菌。
本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌的检测，通过观察菌落特征，确定水中大肠杆菌的存在。
三、实验材料1. 实验器材：无菌试管、移液器、培养箱、酒精灯、无菌棉签、试管架、培养皿、显微镜等。
2. 实验试剂：伊红美蓝培养基、无菌水、水样、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等。
四、实验步骤1. 水样采集：采集待检测水样，用无菌容器盛装，避免污染。
2. 水样稀释：将水样进行适当的稀释，以便在培养基上形成单菌落。
3. 接种：取适量稀释后的水样，用无菌棉签均匀涂布于伊红美蓝培养基表面。
4. 培养：将接种后的培养基放入培养箱中，在37℃条件下培养24小时。
5. 观察：观察培养基上的菌落特征，如菌落大小、形状、颜色等，判断是否存在大肠杆菌。
6. 鉴定：对疑似大肠杆菌的菌落进行进一步的鉴定，如革兰氏染色、生化试验等。
五、实验结果与分析1. 菌落观察：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌菌落呈深紫色（黑色），边缘整齐，有金属光泽。
2. 鉴定结果：经革兰氏染色和生化试验，证实所观察到的菌落为大肠杆菌。
1. 大肠杆菌是水质监测中的重要指标，其存在表明水质可能受到粪便污染，存在健康风险。
2. 本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌检测，操作简便，结果准确。
3. 在实际水质监测中，还需结合其他指标，如粪大肠菌群、耐热大肠菌群等，全面评估水质状况。
七、实验总结1. 本实验成功检测了水中大肠杆菌，掌握了水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。
2. 通过实验，提高了对水质监测的认识，增强了环保意识。
3. 在今后的学习和工作中，将继续关注水质问题，为保护水资源、保障人民群众健康贡献力量。
饮用水中大肠杆菌标准
饮用水中大肠杆菌标准1.检测方法大肠杆菌的检测采用国家标准方法(GB5750.10∙2006)。
检测大肠杆菌的仪器和试剂包括显微镜、培养基、加热设备、无菌采样器等。
检测步骤包括采样、培养、显微镜观察和计数等。
2.卫生指标饮用水中的大肠杆菌数量是反映水质卫生状况的重要指标。
根据国家标准(GB5749-2006),生活饮用水中的大肠杆菌数量应不超过100CF∪∕m1o如超过此标准,表明水质存在污染，需要采取相应措施。
3.水质标准根据国家相关法规和标准，饮用水水质应满足以下要求：(1)水质清澈，无异臭、异味；(2)水中不含病原体，如大肠杆菌、病毒等；(3)水中营养物质含量符合要求；(4)水质稳定，不易受外界污染。
4.水处理过程为了保证饮用水的水质，需要进行水处理。
水处理过程包括沉淀、过滤、消毒等步骤。
沉淀过程去除水中的悬浮物和沉淀物；过滤过程去除更小的颗粒物和微生物；消毒过程杀死病原体，保证出水水质符合标准。
5.监测计划为了保证饮用水的水质，需要制定监测计划。
监测计划包括采样点、采样频率、采样方法、检测方法等内容。
采样点应覆盖整个供水区域，采样频率应根据季节和污染情况进行调整。
检测结果应及时向公众公开，同时存档备查。
6.违规处罚对于违反饮用水大肠杆菌标准的单位或个人，应进行相应的违规处罚。
违规处罚的方式包括罚款、责令停产整改、吊销证照等。
同时，应加强对违规行为的监督和管理，确保处罚的有效执行。
7.信息公开政府和相关部门应定期公开饮用水水质信息，包括大肠杆菌数量等指标，以便公众了解水质状况。
信息公开应通过官方网站、媒体等多渠道进行传播，确保公众能够及时获取相关信息。
信息公开不仅可以保障公众的知情权，还可以促进社会的监督和共同参与，提高饮用水水质。
8.科学研究为了更好地保障饮用水水质，需要对大肠杆菌标准和监测技术进行持续的深入研究。
科学研究可以包括新型检测方法的研究、水质标准的研究、水处理工艺的研究等。
通过科学研究，可以不断提高对大肠杆菌的认识，优化监测技术和方法，为保障饮用水水质提供更加科学和有效的支持。
实验十四水中总大肠杆菌的测定
实验十四水中总大肠杆菌的测定1 原理总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖，产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，求得水样中的总大肠菌群数，实验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
2 仪器2.1 高压蒸汽灭菌器。
2.2 恒温培养箱，冰箱。
2.3 生物显微镜，载玻片。
2.4 酒精灯，镍铬丝接种棒。
2.5 培养皿(直径100mm)，试管(5×150mm)，小倒管，吸管(1，5，10ml)，烧杯(200，500，2000ml)，锥形瓶(500，1000ml)，采样瓶。
3 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉浸膏、3g乳糖和5g氯化钠加热溶于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2－7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管（内有倒管）中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩蛋白胨溶液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法制备。
除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。
3.3 品红亚硫酸钠培养基3.3.1 贮备培养基的制备于2000mL烧杯中，先将20-30g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水补充到1000mL调节溶液pH至7.2-7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加10g乳糖，混匀，定量分装于250或500mL锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在121℃灭菌15min，贮存与冷暗处备用。
3.3.2 平皿培养基的制备将上法制备的贮备培养基加热融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按1：50比例吸取5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中；再按1：200比例称取无水亚硫酸钠，置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（灭菌）。
水中大肠杆菌检测实验报告
水中大肠杆菌检测实验报告水中大肠杆菌检测实验报告水是人类生活中不可或缺的资源，但是水中的污染物对人体健康造成了严重的威胁。
其中，大肠杆菌是一种常见的水质污染指标，其存在表明水体可能受到粪便污染。
本实验旨在通过检测水样中的大肠杆菌含量，评估水质的安全性。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 水样：从自然水源中采集的水样。
- 大肠杆菌检测试剂盒：包括培养基、试剂和培养皿等。
- 实验室设备：包括离心机、恒温培养箱等。
2. 实验方法：- 采集水样：在适当的采样点采集水样，保持样品的原始性。
- 准备培养基：按照检测试剂盒说明书的要求，准备好培养基。
- 培养大肠杆菌：将水样加入培养基中，经过适当的培养条件（如温度、时间等），使大肠杆菌得到生长。
- 检测大肠杆菌：根据检测试剂盒的指引，使用试剂对培养后的水样进行检测。
实验结果：经过实验，我们得到了水样中大肠杆菌的检测结果。
根据检测试剂盒的指示，如果水样中检测到大肠杆菌，说明水质存在潜在的健康风险；如果水样中未检测到大肠杆菌，说明水质相对安全。
讨论：本实验的目的是评估水质的安全性，通过检测大肠杆菌的存在与否来判断水样的卫生状况。
大肠杆菌是一类存在于动物和人类的肠道中的细菌，其存在于水中可能是由于粪便污染。
因此，水中大肠杆菌的检测是评估水质卫生状况的重要指标。
通过本实验，我们可以得出以下结论：1. 水样中未检测到大肠杆菌，说明水质相对安全，可以放心饮用或使用。
2. 水样中检测到大肠杆菌，说明水质存在潜在的健康风险，不宜直接饮用或使用。
然而，需要注意的是，本实验只是初步的水质评估方法之一，仅能提供关于大肠杆菌存在与否的信息，并不能全面评估水质的安全性。
在实际应用中，还需要综合考虑其他水质指标，如化学物质、重金属等的含量，以及水源的来源和处理情况等因素。
此外，本实验中使用的大肠杆菌检测试剂盒是一种常见的快速检测方法，其操作简单、结果迅速，适用于实验室和野外条件下的水质检测。
水中大肠杆菌的检测实验报告
水中大肠杆菌的检测实验报告水中大肠杆菌的检测实验报告一、引言水是人类生活中不可或缺的重要资源，然而，水中可能存在着各种微生物，其中包括一些对人体健康具有潜在威胁的病原菌。
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，其存在于水中可能意味着水源受到了污染。
因此，本实验旨在通过对水样中大肠杆菌的检测，评估水质的安全性。
二、实验方法1. 样品采集：在实验室中，我们选择了不同来源的水样进行采集，包括自来水、河水和湖水。
每个样品分别采集三个重复样品，以保证实验的可靠性。
2. 细菌培养基准备：我们使用了大肠杆菌培养基，并按照说明书的要求进行了制备。
3. 细菌培养：将采集到的水样分别接种到培养基中，然后在恒温箱中培养24小时。
4. 结果观察：观察培养皿中是否有大肠杆菌的生长，若有，则说明水样中存在大肠杆菌。
三、实验结果经过24小时的培养，我们观察到了以下结果：1. 自来水样品：在自来水样品中，没有观察到任何细菌的生长，说明自来水的水质符合卫生标准。
2. 河水样品：在河水样品中，我们观察到了一些培养皿中有大肠杆菌的生长，说明河水可能存在污染风险。
3. 湖水样品：在湖水样品中，几乎所有的培养皿中都观察到了大肠杆菌的生长，这表明湖水的水质存在严重污染。
四、讨论与分析1. 自来水的安全性：根据实验结果，我们可以得出结论，自来水的水质是安全的，不会存在大肠杆菌的污染。
这可能是因为自来水经过了严格的处理和消毒，以确保水质的安全性。
2. 河水的污染风险：由于河水样品中观察到了一些大肠杆菌的生长，说明该河水存在一定的污染风险。
可能是由于附近的人类活动或者其他因素导致了河水的污染，因此需要采取相应的措施来保护河水的水质。
3. 湖水的严重污染：湖水样品中观察到了大肠杆菌的大量生长，这表明湖水的水质存在严重的污染。
湖水是人们常用的水源之一，如果湖水受到污染，将对周围的环境和人们的健康造成严重影响。
因此，我们需要加强对湖水的保护和治理，以确保水质的安全性。
酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较
酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较背景介绍随着人口的不断加添和城市化的进程，水诘责题也越来越受到关注。
其中水中粪大肠菌群是判定水质是否达标的指标之一、因此，快速、精准地测定水中粪大肠菌群已成为保障公共卫生和水环境安全的紧要工作。
在测定水中粪大肠菌群时，目前紧要有三种方法：酶底物法、多管发酵法和纸片法。
本文将对这三种方法进行比较，以便选择适合的方法进行水质检测。
酶底物法酶底物法是利用粪大肠菌群分泌的β—D—半乳糖苷酶对其底物苯基—β—D—半乳苷（X—Gal）水解，产生可见的蓝色色素。
实在试验步骤如下：1.接受分光光度计，读取X—Gal水解产生的蓝色产物的吸取值。
吸取值越高，表明样品中粪大肠菌群的数量越多。
该方法具有快速、精准等优点，但存在确定的局限性，比如无法区分大肠杆菌和其他肠道菌，仅仅只能检测粪生源的水体样品。
多管发酵法多管发酵法是利用粪大肠菌群在固体培育基中进行培育，利用二氧化碳生成的压力变化判定粪大肠菌群的数量。
实在试验步骤如下：1.将含有气管的玻璃管一端紧贴于固体培育基上。
2.向不同的玻璃管中分别加入不同的水样，并进行固体培育。
3.通过察看玻璃管顶端气泡的产生和数量，判定样品中粪大肠菌群的数量。
该方法不仅可以检测含有粪便的水产品中的粪大肠菌群，而且适用范围广，可以检测非点源污染和净化污水等水产品中的粪大肠菌群，但操作多而杂、时间较长。
纸片法纸片法是将覆盖了0.5～1.0 ml水体样品的纤维素纸分别带入含有荧光素β—D—葡萄糖苷（MUG）的细菌培育基中，然后在黑暗中孵育后，通过紫外线灯照射MUG荧光显带样品，察看荧光显带情况，得出粪大肠菌群数量。
实在试验步骤如下：1.制备含有MUG的培育基。
2.将确定数量的水样加入到带有MUG的培育基中并进行培育。
3.在黑暗中察看培育基上产生的荧光显带情况，得出样品中粪大肠菌群的数量。
该方法具有灵敏度高、操作简便等优点，但也有局限性，例如无法检测混合大肠杆菌和其他的大肠杆菌感染和污染的水样。
水质大肠杆菌检测方法
水质大肠杆菌检测方法水质大肠杆菌是一种常见的水污染指标微生物，其存在表明水体可能受到了粪便或污水的污染。
因此，对于饮用水、游泳水、工业用水等不同用途的水体，检测水质中大肠杆菌的含量具有重要意义。
本文将介绍几种常用的水质大肠杆菌检测方法，以供参考。
一、培养基法。
培养基法是一种常见的大肠杆菌检测方法，其基本原理是将水样在含有大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上培养，然后观察培养基上是否有大肠杆菌的生长。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，通常需要24-48小时才能得到结果。
此外，培养基法对于大肠杆菌的特异性较差，可能会同时检测出其他肠道菌群。
二、膜过滤法。
膜过滤法是一种常用的水质微生物检测方法，其原理是将水样通过微孔膜过滤，然后将膜放置在含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数膜上的大肠杆菌落，可以得到水样中大肠杆菌的数量。
这种方法操作简便，结果准确，而且可以检测到低浓度的大肠杆菌。
但是，膜过滤法需要一定的实验室设备和技术支持。
三、分子生物学方法。
随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链式反应）和实时荧光定量PCR等分子生物学方法也被应用于水质大肠杆菌检测中。
这些方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出水样中的大肠杆菌。
此外，分子生物学方法还可以对大肠杆菌进行分子鉴定和基因分析，为进一步研究提供了有力的支持。
然而，分子生物学方法需要相对复杂的实验操作和昂贵的设备，对操作人员的技术要求也较高。
综上所述，针对水质大肠杆菌的检测，可以根据实际情况选择合适的方法。
培养基法操作简单，成本低，适合于一般的水质监测；膜过滤法准确性高，可以检测低浓度的大肠杆菌；而分子生物学方法则具有高度的特异性和灵敏度，适合于对水质中微生物的深入研究。
在实际应用中，可以根据需求和条件选择合适的检测方法，以保障水质安全和生态环境的健康。
水中大肠杆菌的检测方法
附件水中大肠杆菌群检测方法－多管发酵法NIEA 一、方法概要本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ± 1 ℃、48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水样所产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。
二、适用范围本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验。
三、干扰(一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。
(二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。
四、设备(一) 量筒：100至1000 mL之量筒。
(二) 吸管：有刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。
(三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。
(四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。
(五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。
(六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。
(七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。
(八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。
(九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至g。
(十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。
(十一) 高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2或Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。
(十二) 高温干热烘箱：如用于玻璃器皿等用具之灭菌，温度须能保持在160℃达2小时或170℃达1小时以上者。
(十三) 接种环：为白金或镍铬合金制，适用于细菌接种或移植，亦可使用无菌塑料制品。
实验6 水中大肠菌群
实验六水中大肠菌群(Coliform group)细菌的检测一、实验目的1.采用多管发酵法，以最近似数的方式测定水中大肠菌群数。
2. 掌握微生物实验中无菌操作技术方法。
二、实验原理如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原苗污染而引起肠道传染病。
由于肠道病原菌在水中数量较少，故从水中特别是自来水中分离病原菌常常非常困难。
大肠菌群细菌是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌，所以常常将其作为粪便污染的指示菌。
即根据水中大肠菌群细菌的数目来判断水源是否受粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
一般规定每1000ml自来水中大肠菌群细菌不得超过3个．大肠菌群细菌是指一类好氧或兼性厌氧，革兰氏阴性，无芽孢的杆菌，包括四种细菌：大肠埃希氏杆菌、枸椽酸盐杆菌、产气杆菌及副大肠杆菌。
它们有相似的生化反应，能发酵葡萄糖，产酸产气，但发酵乳糖的能力不同。
当将它们接种到含乳糖的远滕氏培养基上生长时，四种菌的反应不一样，大肠埃希氏杆菌的菌落呈紫红色带金属光泽；枸椽酸盐杆菌的菌落呈紫红或深红色；产气杆菌的菌落呈淡红色，中心色深；副大肠杆菌的菌落无色透明(因不利用乳糖所致)。
本试验采用多管发酵法，以最近似数的方式来记载，这一数字是根据概率公式来估算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减少偏差。
本法除了用于检测水样(淡水或海水)外，尚可用于泥浆、沉积物、污泥等的检测。
测定时先将这类固体或半固体样品预先称重，再加水稀释，可取50g 样品，置于盛有450ml灭菌磷酸盐缓冲液并装有玻璃珠、石英砂的锥形瓶中，振荡l~2min，便成10-1稀释，以用于检验。
三、实验材料1.培养基；1.1乳糖胆汁液体培养基：蛋白胨：20.0g， 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液：l ml，乳糖：5.0g，胆酸钠：5.0g将蛋白胨、乳糖、胆盐加热溶解于1000m1蒸馏水中，调pH值至7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液l ml，充分混匀，分装于有倒置杜汉氏小管的试管中，注意小管中不得有气泡，115ºC灭菌20min。
实验八 水中大肠杆菌的测定
三、实验材料和用具
1、培养基 复红亚硫酸钠培养基、乳 糖蛋白胨半固体培养基、乳糖蛋白胨 培养液、3倍浓乳糖蛋白胨培养液、伊 红美兰培养基。 2、仪器及用具 微孔滤膜（0.45um）、 滤器（500mL）、抽气设备、镊子、 发酵用试管、杜氏小管、培养皿、刻 度吸管或移液管、接种环、酒精灯。
四、操作步骤
（三）多管发酵法检测大肠菌群
1.取5支装有3倍浓乳糖蛋白胨培养基的初发酵管，每支分别 1.取 支装有3 加入水样10mL。另取5 加入水样10mL。另取5支装有乳糖蛋白胨培养基的初发酵 管，每支分别加入水样1mL。再取5 管，每支分别加入水样1mL。再取5支装有乳糖蛋白胨培养 基的初发酵管，每支分别加入按1 10稀释的水样1mL，均 基的初发酵管，每支分别加入按1：10稀释的水样1mL，均 贴好标签。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。 贴好标签。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。 2.取出培养后的发酵管，观察发酵液的颜色为黄色者记录为 2.取出培养后的发酵管，观察发酵液的颜色为黄色者记录为 产酸，杜氏小管内有气泡者记录为产气。将产酸产气和产 酸的两类发酵管分别划线接种于伊红美兰培养基上，在 37℃恒温箱中培养18~24h。挑选深紫黑色和紫黑色带有 37℃恒温箱中培养18~24h。挑选深紫黑色和紫黑色带有 或不带有金属光泽的菌落、或淡紫红色和中心色较深的距 离，将其一部分分别取样进行涂片和革兰氏染色观察
3.经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，者将它的另一 3.经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，者将它的另一 部分接种于装有倒置杜氏小管的乳糖蛋白胨培养 液的复发酵管中，每管接种菌落1~3个， 37℃ 液的复发酵管中，每管接种菌落1~3个， 37℃培 养24h，有产酸产气者为大肠菌群，记为阳性管。 24h，有产酸产气者为大肠菌群，记为阳性管。 4根据3个梯度（10mL、1mL、0.1mL）的5支中 根据3个梯度（10mL、1mL、0.1mL）的5 出现阳性管数，查表细菌最可能数，再乘以100 出现阳性管数，查表细菌最可能数，再乘以100 换算成1L水样中的大肠菌群数。 换算成1L水样中的大肠菌群数。
实验八 水中大肠杆菌的测定
3.经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，者将它的另一 部分接种于装有倒置杜氏小管的乳糖蛋白胨培养 液的复发酵管中，每管接种菌落1~3个， 37℃培 养24h，有产酸产气者为大肠菌群，记为阳性管。
4根据3个梯度（10mL、1mL、0.1mL）的5支中出 现阳性管数，查表细菌最可能数，再乘以100换 算成1L水样中的大肠菌群数。
2.取出培养后的发酵管，观察发酵液的颜色为黄色者记录为 产酸，杜氏小管内有气泡者记录为产气。将产酸产气和产 酸的两类发酵管分别划线接种于伊红美兰培养基上，在 37℃恒温箱中培养18~24h。挑选深紫黑色和紫黑色带有 或不带有金属光泽的菌落、或淡紫红色和中心色较深的距 离，将其一部分分别取样进行涂片和革兰氏染色观察
（三）多管发酵法检测大肠菌群
1.取5支装有3倍浓乳糖蛋白胨培养基的初发酵管，每支分别 加入水样10mL。另取5支装有乳糖蛋白胨培养基的初发酵 管，每支分别加入水样1mL。再取5支装有乳糖蛋白胨培养 基的初发酵管，每支分别加入按1：10稀释的水样1mL，均 贴好标签。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
三、实验材料和用具
1、培养基 复红亚硫酸钠培养基、乳 糖蛋白胨半固体培养基、乳糖蛋白胨 培养液、3倍浓乳糖蛋白胨培养液、伊 红美兰培养基。
2、仪器及用具 微孔滤膜（0.45um）、 滤器（500mL）、抽气设备、镊子、 发酵用试管、杜氏小管、培养皿、刻 度吸管或移液管、接种环、来水 将自来水龙头用火焰灼烧3min灭菌， 在拧开水龙头流水5min，以排除管道内积存的死 水，随后用已灭菌的三角瓶接取水样。
2.池水、河水、或湖水 将无菌的带玻璃塞的小口 瓶侵入距水面10~15cm深的水层中，瓶口朝上， 除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取 出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超 过24h。
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附件水肠杆菌群检测方法－多管发酵法NIEA E201.54B 一、方法概要本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ± 1 ℃、48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水样所产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示 100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。
二、适用围本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样肠杆菌群之检验。
三、干扰(一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。
(二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。
四、设备(一) 量筒：100至1000 mL之量筒。
(二) 吸管：有0.1刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。
(三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。
(四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。
(五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。
(六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。
(七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。
(八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。
(九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至0.01 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至0.001 g。
(十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。
(十一) 高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2或 1.1 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。
(十二) 高温干热烘箱：如用于玻璃器皿等用具之灭菌，温度须能保持在160℃达2小时或170℃达1小时以上者。
(十三) 接种环：为白金或镍铬合金制，适用于细菌接种或移植，亦可使用无菌塑料制品。
(十四) p H计：精确度达0.1 pH单位。
五、试剂(一) 试剂水：蒸馏水或去离子水，导电度在 25 ℃时小于2 μ mho / cm（μS / cm）。
(二) 培养基，应使用市售商品化培养基。
１、硫酸月桂酸胰化蛋白胨培养基（Lauryl sulfate tryptose broth，简称LST）1倍浓度LST培养基含有下列成份：胰化蛋白胨（Tryptose）20.0g乳糖（Lactose） 5.0g氯化钠（NaCl）5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75g硫酸月桂酸钠（Sodium lauryl sulfate）0.1g试剂水1L配成2倍浓度（取71.2 g LST培养基粉末溶于1 L试剂水），完全溶解后，分取10 mL注入装有倒置发酵管之试管，经121℃灭菌15分钟，冷却后备用，灭菌后培养基之pH值应在 6.8 ± 0.2。
灭菌后培养基若未当日使用，应保存在4 ± 2℃，保存期限为14天。
可根据检验需求量，依配方配制培养基。
２、煌绿乳糖胆汁培养基（Brilliant green lactose bile broth，简称BGLB）1公升的BGLB 培养基中含有下列成份：蛋白胨（Peptone）10.0g乳糖（Lactose）10.0g牛胆粉（Oxgall Powder）20.0g煌绿色试剂（Brilliant Green）0.0133g试剂水1L取40 g BGLB培养基粉末溶于1 L试剂水，完全溶解后，分取5至10 mL注入装有倒置发酵管之试管，经121℃灭菌15分钟，冷却后备用，其pH值应在7.2 ± 0.2。
灭菌后培养基若未当日使用，应保存在4 ± 2℃，保存期限为14天。
可根据检验需求量，依配方配制培养基。
(三) 无菌稀释液１、磷酸二氢钾储备溶液取3.4 g磷酸二氢钾（KH2PO4）溶于50 mL的试剂水中，俟完全溶解后，以1.0 N NaOH 溶液调节其pH值为7.2 ±0.1，然后加试剂水至100 mL，灭菌（过滤灭菌或121 ℃高温高压灭菌15分钟）后储存于冰箱中备用。
4 ± 2 ℃下保存期限为3个月。
２、氯化镁储备溶液取8.1 g氯化镁（MgCl2‧6H2O），先溶于少量试剂水，俟完全溶解后，再加试剂水至全量为100 mL，灭菌（过滤灭菌或121℃高温高压灭菌15分钟）后，储存于冰箱中备用。
4 ± 2 ℃下保存期限为3个月。
３、无菌稀释液分别取10 mL氯化镁储备溶液和2.5 mL磷酸二氢钾储备溶液再加入试剂水至2,000 mL，混摇均匀后，分装于稀释瓶中，经121℃灭菌15分钟，作为无菌稀释液备用。
如欲用于水样稀释，分装之无菌稀释液灭菌后体积须为90 ± 2.0 mL。
4 ± 2 ℃下保存期限为3个月。
六、采样与保存(一) 盛装水样检验微生物之容器，应使用清洁并经灭菌之玻璃瓶或无菌塑料容器或市售无菌采样袋，且于采样时应避免受到污染。
水样若含有余氯时，无菌容器中应加入适量之无菌硫代硫酸钠（采取加氯之废水时，每100 mL水样中加入0.1 mL、10%硫代硫酸钠可还原15 mg/L余氯。
采取含氯之饮用水水样时，每100 mL之水样如加入0.1 mL之3%硫代硫酸钠，可中和之余氯量约为5 mg / L。
）。
(二) 采样前应清洁手部，再行采水样，所采水样应具有代表性。
(三) 运送时水样温度应维持在小于10 ℃且不得冻结，而实验室保存温度应维持在4 ± 2 ℃。
(四) 水样应于采样后24小时完成推定实验之水样添加步骤（七、步骤(一)４、），并置入培养箱中培养。
(五) 水样量须以能做完所需检验为度，但不得少于120 mL。
七、步骤试验分两阶段进行。
首先进行推定试验，若推定试验结果为阳性反应，则继续进行第二阶段之确定试验，如结果仍是阳性反应则显示有大肠杆菌群存在。
各试验步骤如下述：(一) 推定试验１、慎选发酵管中没有气泡且未污染之10 mL、2倍浓度LST试管。
２、水样在进行检测或稀释之前必须剧烈摇晃25次以上，以使样品充分混摇均匀。
３、视水样中微生物可能浓度围进行水样稀释步骤，使用无菌吸管吸取10 mL水样至90 mL无菌稀释液中，形成10倍稀释度水样，混合均匀，而后自10倍稀释度水样以相同操作方式进行一系列适当之100、1000、10000倍等稀释水样，进行稀释步骤时，均需更换无菌稀释吸管，水样稀释步骤如图一所示（注1）。
４、以无菌吸管分别取各稀释度10 mL水样至含10 mL 2倍浓度的LST试管中，每一稀释度各作5支，小心混合均匀，混合后发酵管不可产生气泡。
５、在35 ± 1℃培养箱中培养48 ± 3小时，观察并记录发酵情形，若有气体产生则推定试验为阳性反应，若无气体产生则推定试验为阴性反应，但若培养液呈混浊状态，虽无产气，亦应进行确定试验。
(二) 确定试验若推定试验之发酵管中有气体或混浊产生时，则使用BGLB进行确定试验：１、慎选发酵管中没有气泡且未污染之BGLB试管。
２、利用无菌接种环自产生气体以及混浊之LST培养基试管中，接种一圈培养液至BGLB培养基试管中。
３、在35 ± 1℃培养箱中培养48 ± 3小时。
４、在48 ± 3小时，BGLB 培养基试管如有气体产生，则确定试验为阳性反应。
八、结果处理(一) 经确定试验确认BGLB试管为阳性反应后，应以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」计算及记录。
5支发酵管连续三种稀释度之MPN可查表一。
(二) 表一所示接种之水样量为10 mL、1.0 mL 及0.1 mL，若所用之稀释度有三种以上时，采用最具意义之三种稀释度，查表后再计算100 mL水肠杆菌群最大可能数。
稀释度之选取方式如下：１、先选取5管均呈阳性反应的最高稀释度（此时稀释度较低之各组试管必须全部呈阳性反应），再选取下两个稀释度（如表二水样别a）。
２、如果稀释度最低的一组并非5管均呈阳性反应，则选取稀释度最低的一组，再选取下两个稀释度（如表二水样别b、c）。
３、如果依据上述原则（１、及２、）选取3个稀释度后，下一稀释度试管组仍有阳性反应试管，则舍弃原先3组中稀释度最低的一组，纳入下一稀释度的数据（如表二水样别d）。
４、如果依据上述原则（１、至３、）选取3个稀释度后，更高稀释度之试管组仍有阳性反应试管，则把更高稀释度之阳性反应试管数加至原先3组中稀释度最高的一组（如表二水样别e）。
(三) 100 mL水肠杆菌群最大可能数（MPN/100 mL）之计算公式如下：结果小于100时，以整数表示（小数字数四舍五入），菌落数大于100以上时，只取两位有效数字：例如110以1.1 × 102表示，16,000以1.6 × 104表示。
(四) 检测纪录须注明采样时间、培养起始及终了时间、培养基名称、培养温度及各稀释度的数据等相关数据。
九、质量管理(一) 微生物采样人员及检测人员应具备微生物基本训练及知识。
(二) 每批次采样时应进行运送空白。
(三) 每批次或每10个水样需进行试剂空白实验。
(四) 新购入之培养基，每批号均须以大肠杆菌群阳性控制菌株（如E. coli、Enterobacter aerogenes、Citrobacter freundii）进行测试，以确保数据质量。
(五) 若一季期间水样均未检出大肠杆菌群，则须以大肠杆菌群菌株进行培养基测试，以确保数据质量。
(六) 本方法培养所得之细菌可能具有感染性，检测后之培养基及器皿应经高温高压灭菌处理。
十、精密度及准确度略十一、参考数据(一) APHA. 2005. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 21st Edition,Section 9221. American Public Health Association, Washington, D.C.(二) Difco & BBL Manual: Manual of Microbiological Culture Media. 2003. BD Diagnostic Systems. 注1：水样如须稀释，建议于稀释后30分钟完成检测步骤，以免造成细菌死亡或增生，影响实验结果。
图一水样稀释步骤表一三连续稀释度（10 mL、1 mL、0.1 mL）五试管重复测试时，阳性结果组合之MPN指数及95%信赖区间表二判读说明。