PCR仪温度校准的必要性及方法
PCR仪校验规程
PCR仪校验规程
PCR仪校验规程
1.目的：
确保本仪器的功能和运行正常，检测数据正确，特制定本规程。
2.技术指标
加热范围：可调式热盖，控制温度范围从30℃~110℃。
温度精度：0.1℃
热均一性：15秒内温度均一性0.3℃。
升温、降温速度：最快升温速度4℃/秒，最快冷却速度3.0℃/秒。
电压：100～240V
频率：50～60Hz/相
功率：250W
存储量：程序最多可有1000个，每个最多99步，总步骤可达1500步。
3.自校步骤
3.1打开电源开关，电源指示灯亮，仪器自校。
3.2进入控制面板，利用各种操作键编制程序。
3.3放入加好样品的Eppendorf管，关好热盖，启动程序。
3.4待程序运行结束后，取出Eppendorf管，将产物进行电泳，并与标准Marker 进行比较，观察其是否与预期设计的片段大小相符。
4.结果判定
将自校结果与上述各项技术指标进行比对，如二者相符，则仪器检定合格，可以正常使用；否则应及时与厂家联系维修。
5.校验周期
一年。
6.参考文件
JJF 1071国家计量校准规范编写规则
JJF 1001 通用计量术语及定义
GBT/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定7.记录表格
《测试设备校验记录表》。
基因扩增仪(PCR仪)温度校准
link appraisement陕西中检计量测试技术有限公司图1 内部结构示意图CHINA SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION May.2021·中国科技信息2021年第10期10万～30万◎室或样品池中孔温度进行测量、在装有反映缓冲液的PCR管中安置温度传感器用于对反应缓冲液温度进行测量，是PCR仪现有的两种主要校准方法。
前者能将加热室或样品池中各点温度、均匀度直接获取，然而却无法将PCR管内反应体系温度反映；后者能获取可将PCR反应中各阶段温度更精确、真实反映的温度参数，然而PCR管质量却会对其构成巨大影响。
综合来看，采用后者展开测量，相对而言更加合理、科学。
PCR仪温度校准项目稳定的温度循环，是PCR得以成功实现的基础条件之一。
温度准确性、升降速度及温场均匀性和最大超调温度等温度控制的动、稳态特性，会对PCR扩增结果的准确性构成严重影响，温度准确性作为PCR仪关键性能指标之一的温度准确性，如果处于较低水平会引起非特异性扩增的情况，更有甚者会导致扩增结果出错，构成假阴性和假阳性。
现有PCR仪性能主要指标中，有关准确度方面的指标多以±0.5℃为主，个别PCR仪性能较好，能实现±0.3℃的温度准确度。
所以，有必要测试 PCR仪控温准确度。
在计算校准实验平均温度时，可采用公式：n ttnii∑==1，式中ti代表各个测量点实际温度值；i代表检测中使用的温度探头序号；n代表检测中使用的温度探头数量。
温场均匀性因PCR仪加热器难以均匀加热的缘故，PCR仪模块上各孔间会有适量温差存在，进而影响试验结果。
PCR仪边中间区域温度通常高于边缘点，因此PCR仪性能指标之一的均匀性也很重要，普遍规定在±0.5℃，个别性能较好的 PCR仪能实现±0.3℃的温度均匀度。
校准试验中，挑选16个孔板中的特殊反应位置用于温度测量，能将孔板温度均匀性获取。
pcr仪校准标准
pcr仪校准标准
一、目的
本标准规定了PCR仪的校准方法、校准项目和校准周期，以确保PCR仪的准确性和可靠性。
二、适用范围
本标准适用于各类PCR仪的校准，包括实时荧光定量PCR仪、普通PCR仪等。
三、校准方法
1.实时荧光定量PCR仪校准方法
（1）选定标准品：选择已知拷贝数的标准品，用于校准PCR仪的荧光定量检测系统。
（2）设置仪器参数：按照仪器说明书设定PCR仪的参数，包括退火温度、延伸时间、循环数等。
（3）运行PCR反应：将标准品DNA加入到PCR反应液中，按照设定的参数进行PCR反应。
（4）数据分析：记录PCR仪生成的荧光信号数据，使用标准曲线法计算标准品的拷贝数。
将计算结果与已知拷贝数进行比较，评估仪器的准确性。
2.普通PCR仪校准方法
（1）温度校准：使用温度计测量PCR仪的加热块温度，观察是否与设定温度一致。
可以参考仪器说明书中的温度校准表进行校准。
（2）灵敏度校准：使用已知浓度的模板DNA进行PCR反应，观
察是否能够正确检测到目标基因。
可以参考仪器说明书中的灵敏度校准表进行校准。
四、校准项目
1.实时荧光定量PCR仪校准项目：荧光信号稳定性、荧光信号准确性、拷贝数计算准确性等。
2.普通PCR仪校准项目：加热块温度准确性、灵敏度检测准确性等。
五、校准周期
1.实时荧光定量PCR仪校准周期：建议每季度进行一次校准。
2.普通PCR仪校准周期：建议每年进行一次校准。
PCR仪温度校准的研究
Science &Technology Vision科技视界0引言PCR 技术是一项在短时间内体外大量扩增特定的DNA 片段的分子生物学技术[1],PCR 仪的工作原理在于为DNA 实验制造不同的温度环境,使DNA 变性、退火、引物链延伸,其实质为一台精密温度控制仪。
其温度的准确性和稳定性、波动性直接影响DNA 反应3个阶段过程中基因片段的扩增质量。
但是目前国内PCR 仪器的校准规程里并未对温度校准装置的响应速度及温度测量位置进行详细阐述,为此本文针对PCR 仪试样环境温度的测量装置及测温位置进行探讨。
1PCR 仪简介1.1PCR 仪简介目前市面上PCR 仪的主流方向为半导体式PCR,其内部结构示意图如图1所示:在快速导热金属质地的基座上设有多个试管孔,并由下方的半导体片进行加热制冷控温。
图1半导体式PCR 仪内部结构示意图1.2PCR 仪校准用温度传感器PCR 仪使用的基座按孔数分有48孔、60孔、96孔,按孔的大小也分为0.2ml、0.5ml 等。
根据PCR 仪的特殊结构,若采用一般铂电阻的形状及大小无法与基座完全接触,且粗大的铂电阻数据线使得在校准过程中带闭盖结构的PCR 仪顶盖无法闭合,加强了空气对流,破坏了基座温度场分布,影响校准结果。
目前市面上主流的国外PCR 温度检测装置其测量传感器使用固定测点间距及探头大小的检测系统,其普适性低,不适用于检测对象具有多样性的计量检测机构。
此外,以DRIFTCON 的PCR 实时检测系统为例,其温度探头(如图2所示)虽能和基座试管孔完美贴合,但尺寸较大直接影响其热容值,导致热响应速度减慢,不能满足快速检测的需求,在校准PCR 仪升降温速率时偏差较大。
(1)(2)图2BIOplastics 的温度传感器图2温度测量2.1标准器装置1)温度采集利用本院自主研发的Vtest-1101温湿度试验设备自动检定系统的18CH 温度数据采集器(如图3所示),对温度数据进行自动快速采集。
pcr仪测温方法
pcr仪测温方法
PCR测温服务
PCR是分子生物学领域的关键技术。
不管是在基础研究还是临床诊断领域，
PCR 的应用越来越广泛。
一个稳定的温度循环是成功实现PCR所必须的，
在PCR反应过程中
对温度控制的要求很高，
良好的温度控制
是PCR仪质量好坏的关键。
为什么要对PCR仪进行测温
1、PCR仪的温度条件和状态对于PCR试剂盒的研发和应用来说，是必不可少的条件之一
2、根据测温的结果可以避免某些试剂盒对某些特定品牌型号仪器的依赖，拓宽试剂盒的应用范围
3、在合格的仪器上做实验可以极大的节约人力物力
4、对于拥有老旧仪器和高强度使用的实验室来说，节省效果尤为明显
5、良好的实验室管理中包含了对仪器的定期质控
6、定期对PCR仪进行温度测定可以完善实验室的质量管理体系
PCR仪测温服务对象：
大专院校
科研院所
国家各级疾控中心（CDC）
国家各级检验检疫部门
企业用户
内六角的PCR仪温度检测服务
内六角科技提供的PCR仪温度检测服务，采用国际主流的15通道实时动态温度记录的温度检测系统，结合自主研发的温度分析软件，创新的在传统的分析温度准确性、均匀性等基础上，对温度过冲的过程进行了详细的分析，并尝试推出了PCR仪温控状态的分类标准和对每台检测过的PCR仪进行温度和时间值修正指导的服务。
内六角的PCR仪温度主要检测项目：
●升降温速率
●准确性
●当匀性
●过冲情况
●个性化检测要求
内六角的PCR仪测温服务特色15通道实时动态温度记录。
基因扩增仪(PCR仪)测温系统校准规范
JJF ××××─201×基因扩增仪（PCR仪）测温系统校准规范1 范围本规范适用于48孔或96孔孔板结构的测量范围为（0～120）℃的多通道基因扩增仪（PCR仪）测温系统或者单通道基因扩增仪（PCR仪）测温仪的的校准，其他孔板结构和温度范围的基因扩增仪（PCR仪）测温系统的温度校准可以参考本规范。
2引用文件本规范引用下列文件：JJF 1071-2000 《国家计量校准规范编写规则》JJF 1007-2007 《温度计量名词术语及定义》JJF 1527-2015 《聚合酶链反应分析仪校准规范》YY/T 1173-2010《聚合酶链反应分析仪》ITS-90 1990年国际温标凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。
3术语3.1 基因扩增仪（PCR仪），即聚合酶链反应分析仪polymerase chain reaction analyzer基于PCR（聚合酶链反应）技术原理，模拟DNA或RNA的复制过程，在模板、引物、校验和没等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备。
[YY/T 1173-2010 3.2]3.2 基因扩增仪（PCR仪）测温系统temperature measuring system for Polymerasechain reaction analyzer用于基因扩增仪（PCR仪）的专用温度校准装置。
3.3 温度校准专用等温块与配件isothermal block and accessory for temperaturecalibration与标准恒温槽配套使用并提供基因扩增仪测（PCR仪）温系统温度校准的洁净温场的辅助装置。
3.4 温度校准专用等温块测试孔testing hole for temperature calibration模拟基因扩增仪控温块内的结构，提供基因扩增仪（PCR仪）测温系统探头布放插孔的专用等温块。
pcr校准规程
1、温度校准
温度控制是PCR仪的核心功能之一，必须确保加热和冷却均匀、准确。
通常使用温度计或红外线测温仪来检查PCR仪内部不同位置的温度是否稳定，并与设置温度进行比较，以确保其精度和准确性。
2、时间校准
时间控制是PCR过程中的另一个重要因素。
在PCR过程中，各个步骤的时间应该严格控制，以确保反应的准确性。
通过使用标准计时器或电子计时器，在不同时间段内测试PCR仪的时间精度和准确性。
3、光强度校准
PCR仪的光强度检测系统需要被校准以确保准确读取荧光信号。
为此，校准PCR仪前需要检查光源和检测器是否正常工作。
然后，使用标准荧光素材，如SYBR Green等，对PCR仪进行校准，以确保光强度检测系统的精度和准确性。
4、热平衡校准
热平衡是指PCR仪内部所有区域的温度达到稳定状态。
为了保证PCR反应的可靠性和准确性，必须确保PCR仪的各个区域在温度上达到平衡。
通常使用热敏电阻或热电偶来检查PCR仪不同位置的温度是否均匀，并进行调整以确保热平衡。
5、压力校准
PCR反应管需要在PCR仪中得到牢固的支撑，以保持其位置不变，并避免在高速旋转时移位。
因此，压力校准也是PCR仪校准过程中非常重要的一步。
通过检查PCR反应管架的压力和精度，确保PCR反应管可以正确地放置并安全运行。
PCR仪确认方案
PCR仪确认方案PCR仪是一种用于扩增DNA片段的仪器，是分子生物学实验室中常用的设备之一、为了确保PCR仪的准确性和可靠性，需要进行PCR仪的确认方案。
下面是一个详细的PCR仪确认方案，包括仪器准备、性能测试和验证步骤。
一、仪器准备1.确定确认PCR仪的固定条件，例如温度范围、时间设置等。
2.准备PCR仪所需的耗材，包括PCR试管、PCR反应物、引物等。
3.清洁PCR仪的工作台面和内部，确保无灰尘和杂质。
二、性能测试1.温度精确度测试a.使用温度计分别测量PCR仪的加热块和冷却块的温度，记录温度值。
b.以设置的温度为目标值，在PCR反应槽中设置温度计，进行温度稳定性测试。
c.比较目标温度和实际温度之间的差异，计算温度偏差。
2.温度一致性测试a.在PCR反应槽中放置数个PCR试管，每个试管中加入相同的反应物。
b.设置PCR仪的温度循环程序，进行温度一致性测试。
c.检查各个PCR试管中的反应物扩增结果，评估PCR仪温度循环的一致性。
3.温度均匀性测试a.在PCR反应槽中设置多个温度计，测量不同位置的温度。
b.运行PCR仪的温度循环程序，观察和记录各个位置的温度。
c.比较各个位置的温度差异，计算温度均匀性。
4.反应时间测试a.在PCR反应槽中放置PCR试管，设置不同的扩增时间。
b.完成PCR反应后，分析PCR试管中的扩增结果，评估PCR仪的反应时间准确性。
三、验证1.重复性验证a.准备相同的PCR反应物和程序，分别在不同的PCR仪上进行PCR扩增。
b.比较各个PCR仪之间的扩增结果，评估其重复性。
2.敏感性验证a.准备不同浓度的DNA样品，分别加入PCR反应槽进行PCR扩增。
b.比较不同浓度DNA样品的扩增结果，评估PCR仪的敏感性和线性范围。
3.特异性验证a.准备包含目标基因和非目标基因的PCR反应槽，进行PCR扩增。
b.检查PCR试管中的扩增产物，确认PCR仪的特异性。
四、记录和分析结果1.记录每个测试项目的结果，包括温度精确度、温度一致性、温度均匀性、反应时间等。
PCR实验室仪器设备的校准制度
PCR实验室仪器设备的校准制度1. 目的：保证PCR检测仪器的有效运转及其准确性。
2. 范围：基因扩增仪、高速离心机、医用冰箱、加样器、温度湿度计。
3. 职责：实验室负责该仪器的工作人员应定时校准仪器或联系厂家校准仪器。
4. 程序：4.1. 保证PCR实验室检验仪器、设备在投入使用前，必须经过校准。
4.2. 依据每台检验仪器、设备的校准检定计划，按期送检定部门或仪器生产厂家，对检验仪器、设备进行校准，保证每一参数达到国家基准。
4.3. 校准检定报告存档：每台仪器设备校准报告由科主任统一归档。
4.4. 实时监测扩增仪由厂商每年校准一次。
4.5. 加样器校准按《加样器校准操作程序》进行，每一年一次。
4.6. 以经过质量计量监督局校准过的温度湿度计对其它温度计进行校准，每一年一次。
4.7. 标识：对实验室所有检定后的仪器、设备、贴有不同颜色的标签，明确标识其工作状态。
贴：绿色标签为正常使用标识，黄色为待检标识，红色为停用标识。
4.8. 仪器、设备修理后，应当重新校准，检定合格后，方可使用。
检定不合格，依修理或报废程序进行。
4.9. 实验室拥有的质控物、砝码等重要的标准物质要记录，记录内容包括：产品名称：生产单位；型号；批号；接受日期；启用日期；目前存放地点；接收状态；生产单位说明书等。
标准物质不能用于其它目的，除非能够证明测量参考标准的性质不会失效。
4.10. 仪器应有专人负责使用，使用人在仪器开机后，应填写仪器使用记录。
5. 引用的记录表5.1.仪器校准记录表。
pcr温度校准标准
pcr温度校准标准1. 简介PCR（聚合酶链式反应）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它通过扩增DNA片段来检测和定量目标DNA序列。
PCR反应的准确性和可重复性是保证实验结果可靠性的关键因素之一。
因此，PCR温度校准标准的制定和实施对于确保PCR实验数据的准确性至关重要。
2. PCR温度校准标准的背景2.1 PCR反应中温度参数的重要性在PCR反应中，不同温度阶段（变性、退火、延伸）对于扩增目标序列起着至关重要的作用。
不同目标序列需要不同的退火温度，而延伸阶段则需要适当控制延伸时间。
因此，正确控制PCR反应中各个阶段的温度参数对于扩增特定目标序列非常关键。
2.2 PCR仪器中温度控制系统现代PCR仪器通常配备了高精确度、高稳定性和快速响应速度的热电偶或光学传感器来监测和调节反应体系中各个阶段所需的精确温度。
然而，由于PCR反应过程中温度的变化，仪器中的温度控制系统可能存在一定的误差。
因此，制定PCR温度校准标准以确保反应体系中真实的温度是非常必要的。
3. PCR温度校准标准的制定3.1 标准样品选择PCR反应体系中常用的标准样品是由特定序列构建而成的DNA片段。
这些片段具有已知序列和长度，并且已经在许多实验室和研究领域进行了广泛应用。
选择合适的标准样品对于确保PCR反应体系中真实温度测量结果非常重要。
3.2 标准样品测量在制定PCR温度校准标准时，必须对所选标准样品进行精确测量。
这可以通过使用高精密仪器和合适的测量方法来实现。
例如，可以使用高分辨率热电偶或光学传感器来监测和记录PCR反应体系中不同阶段所需的精确温度。
3.3 数据分析与处理通过对多次重复实验数据进行统计分析和处理，可以得到更加可靠和可重复性结果。
这些数据可以用于建立PCR温度校准曲线和计算温度误差范围。
根据这些数据，可以制定PCR温度校准标准，以确保实验数据的准确性和可重复性。
4. PCR温度校准标准的实施4.1 标定PCR仪器一旦制定了PCR温度校准标准，就可以使用标定样品来验证和调整PCR 仪器的温度控制系统。
pcr仪的使用方法和注意事项
pcr仪的使用方法和注意事项
技术服务说明书
一、概述
PCR仪是一种高效灵敏的DNA扩增技术，是现代分子生物学的重要组成部分。
其特点是快，灵敏，可靠，并且能够在微量样本中获得大量DNA。
PCR仪是一种可以进行非编码RNA表达水平定量实验的常用仪器，可提供温度控制、计时和编程，以确保每次反应的准确性和精确性。
二、使用方法
1、首先，用户在PCR仪上安装一个放大振荡器，并将PCR反应液和反应封袋放在其上。
2、然后，启动PCR仪，并输入仪器中的相应参数，如温度、时间、复制次数等。
参数各种参数要参照试剂盒中的说明，并以实验需要为准。
3、接着，根据实验要求，将反应液添加到反应封袋中，完成PCR 试剂添加。
4、最后，控制PCR仪的反应参数，稳定的温度、时间、复制量，以及控制PCR仪的加热、稳定时间，以完成PCR实验。
三、注意事项
1、使用PCR仪之前，用户要搞清楚所使用试剂的厂家，以确保试剂的质量。
2、使用PCR仪进行实验时，用户要确保设置的参数符合实验要
求，以 make sure 反应结果精准可靠。
3、当使用PCR仪时，要特别注意清洁，避免污染样本，以保证实验数据的可靠性。
4、使用PCR仪时，要定期检查PCR仪内的元件，如放大板，电位器等，使仪器保持良好的工作状态，可以有效的保证实验的效果。
5、当使用PCR仪时，用户要注意安全，应避免曝晒、触碰内部的高温以及电源线，以免造成损伤。
荧光定量pcr仪校准标准法规
荧光定量pcr仪校准标准法规荧光定量PCR（polymerase chain reaction）是一种常用的基因分析技术，可以快速、敏感地定量化目标基因的表达水平。
为了保证荧光定量PCR的准确性和可重复性，需要进行标准化和校准。
下面是一份关于荧光定量PCR仪校准标准法规的详细解释。
一、背景介绍荧光定量PCR仪是一种高精度、高灵敏的仪器，广泛应用于医学、生物科学研究和临床诊断中。
为了确保PCR仪的准确性和可靠性，需要进行定量标准校准，以确保仪器在不同实验条件下的可重复性和一致性。
二、仪器校准标准法规的制定1. 校准对象与要求：校准对象是PCR仪中的荧光检测系统，包括光源、光学系统、光传输系统和荧光信号采集系统。
校准要求包括：(1) 准确性：即PCR仪在不同条件下对同一样品的测量结果应相同或非常接近；(2) 灵敏度：即PCR仪能够测量到极低浓度的目标DNA或RNA；(3) 线性范围：即PCR仪在不同浓度范围内对目标DNA或RNA的测量值应呈线性关系。
2. 校准方法：校准方法应包括标准样品的制备、测量条件的设定、实验的重复性验证等步骤。
(1) 标准样品的制备：根据实际需要，制备一系列已知浓度的目标DNA或RNA样品。
这些标准样品应来自于可靠的来源，同时要进行交叉验证以确保其准确性和可靠性。
(2) 测量条件的设定：根据PCR仪的规格和使用说明，设置合适的温度、时间和荧光信号采集参数等测量条件。
同时，根据实际需要，也可以设置不同的测量模式，如单点测量或多点测量等。
(3) 实验的重复性验证：使用已知浓度的标准样品进行一系列重复实验，通过统计分析方法评估PCR仪的重复性和准确性。
3. 校准结果的评估与控制：根据实验结果，使用统计学方法对PCR仪的准确性和线性范围进行评估和控制。
评估指标包括测量值的偏差、标准偏差和相关系数等。
如果测量值与已知浓度值存在偏差，则需要调整PCR仪的测量参数。
通过不断地校准和调整，使PCR仪的测量结果更加准确和可靠。
pcr温度校准标准
PCR温度校准标准
PCR温度校准标准是指在PCR实验中，用于校准温度的标准参考
物质或方法。
目前常用的PCR温度校准标准包括以下几种：
1. 高精度温度探头：使用高精度的温度探头，如铂电阻温度传
感器（PT100）或热电偶（Thermocouple），将探头插入PCR反应管中，通过测量温度，并与实验室中的已知温度进行比较，从而校准PCR仪
的温度。
2. 具有已知熔解温度的DNA片段：使用具有已知熔解温度的DNA 片段作为模板，在PCR过程中进行熔解曲线分析，通过比较实验结果
与已知结果，确定PCR仪的温度准确性。
3. 二色荧光染料：使用二色荧光染料，如SYBR Green，将其添
加到PCR反应体系中，利用其独特的荧光特性，在PCR过程中进行熔
解曲线分析，通过比较实验结果与已知结果，确定PCR仪的温度准确性。
4. 校准PCR仪自带的温度传感器：有些PCR仪自带温度校准功能，可以通过内置的温度传感器进行校准，该传感器通常经过严格的
标定，提供准确的温度测量。
需要注意的是，不同的PCR仪可能需要不同的温度校准标准，具
体的校准方法和标准应根据PCR仪的型号和厂家提供的说明进行选择。
普通PCR仪温度测量规程
使用Fluke 52Ⅱ温度表测PCR 仪温度规程1．目的PCR 仪的温度准确性直接影响PCR 扩增，为了保证客户端的实验顺畅，避免因PCR 仪的问题影响到产品的使用，需要定期对PCR 仪进行校验测量，特制定本规程。
2．基本原理1.1PCR 仪升降温原理：PCR 仪能够升温和降温，靠的是制冷片（图1），在PCR仪基座上平均放置了6块（图2）。
当电流从正极流向负极时，一面制冷同时另一面加热；反过来，当电流从负极流向正极时，原来制冷的那面就加热，原来加热的那面就制冷。
图1.制冷片构造图2.制冷片摆放位置1.2温度表测温原理：两种不同成份的导体（称为热电偶丝材或热电极）两端接合成回路，当两个接合点的温度不同时，在回路中就会产生电动势，这种现象称为热电效应，而这种电动势称为热电势。
热电偶就是利用这种原理进行温度测量的，其中，直接用作测量介质温度的一端叫做工作端（也称为测量端），另一端叫做冷端（也称为补偿端）；冷端与显示仪表或配套仪表连接，显示仪表会指出热电偶所产生的热电势。
3．应用范围普通PCR仪，如黑马9600，博日TC－96等4．使用工具Fluke 52Ⅱ温度表，0.2ml离心管，矿物油5．测试方法5.1温度传感器安装及放置为能得到更接近反应管中液体的温度（矿物油），将传感器探头插入到试管底部，既可以保证感温探头有足够的插入深度，以减少导热损失，又保证与缓冲液充分热接触。
具体操作方法如下：首先取0.2mL PCR管，用锥子在管盖下方管壁处钻一个小孔。
然后将传感器穿入孔中，进一步将传感器弯曲至PCR管底部，注入50μl矿物油，为了防止传感器晃动，建议将传感器另一端在管子外面缠绕一圈，如能保证线路不晃动，也可不进行缠绕（图3）。
图3.温度传感器安装方法把安装好温度传感器的反应试管放入PCR仪基座，选择模拟管的测温方式进行温度测试，另外，测试过程要在四个角竖四个空管，让热盖平衡（图4）。
图4.温度传感器放置方法5.2温度信号采集点选择因PCR仪基座中心区域温度均匀性较好，边缘插孔温度略低于中心区域，并且孔间具有很好的对称性的规律，在温度信号采集时，只需选择具有代表性的若干个温度点加以检测即可。
pcr仪的使用方法和注意事项
pcr仪的使用方法和注意事项PCR仪是一种广泛应用于分子生物学实验室的仪器，其主要用于DNA的扩增和复制。
PCR技术的发展对于生物学研究和医学诊断有着重要的意义。
在使用PCR仪时，必须遵守一定的使用方法和注意事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。
一、PCR仪的基本原理PCR仪是基于聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）原理而设计制造的。
聚合酶链式反应是一种体外体系中DNA复制技术，能够在短时间内扩增特定DNA片段。
其基本原理是通过不断重复三个步骤：变性、退火和延伸，使目标DNA片段得以扩增。
二、PCR仪的使用方法1. 准备实验材料：包括目标DNA样本、引物、聚合酶、缓冲液等。
2. 设置反应体系：根据实验需求，在试管中加入适量目标DNA样本、引物和其他试剂，并保持反应体系中各组分浓度适当。
3. 设置PCR程序：根据目标DNA片段长度和引物特性等因素，在PCR 仪上设置相应程序。
主要包括变性温度、退火温度、延伸温度和延伸时间等参数。
4. 开始PCR反应：将试管放入PCR仪中，启动反应程序，使PCR仪按照预设的温度和时间变化进行反应。
5. 结果分析：根据实验目的，选择适当的方法对PCR产物进行分析和检测，如凝胶电泳、测序等。
三、PCR仪的注意事项1. 严格控制实验环境：PCR反应对环境要求较高，要保持实验室干净整洁，并严格控制空气中的污染物。
避免使用含有DNA污染的试剂和器皿。
2. 避免交叉污染：在每次操作前，使用漂白剂或紫外线照射等方法对操作台面、试管架等进行消毒。
每次使用新工具或器皿前都要进行彻底清洗，并避免交叉使用。
3. 严格控制反应体系中各组分浓度：各组分浓度过高或过低都会影响PCR反应的效果。
在设置反应体系时要根据实验需求选择适当浓度，并保持稳定性。
4. 避免样本污染：在提取DNA样本过程中，要避免外源DNA的污染，使用无菌技术操作，并在操作过程中避免接触皮肤和呼吸道。
PCR仪温度的准确性几种模式的比较-ThermoFisherScientific
应用说明 4PCR 仪模式或梯度模式下，加热模块的不同部位设置为不同的温度。
我们比较了目前市售的几款PCR 仪，并将其与制造商公布的参数进行比较。
材料与方法本研究中测试的仪器如表1所示。
采用相同的设备和方法，具体如下文所述。
PCR仪温度的准确性：几种模式的比较表1. 本研究中测试的仪器。
简介PCR 仪温度的准确性可能是决定PCR 反应成败的关键因素。
在退火温度优化过程中，温度准确性尤为重要，该过程需要PCR 仪加热模块具有准确性和一致性。
本研究采用精确的温度确认设备进行测量，比较了PCR 仪加热模块的准确性。
在恒温模式下测量温度准确性，整个加热模块均为相同的温度；在VeriFlex™图1. 采用多传感器模块测量加热模块准确性。
* 仪器界面显示。
†使用VeriFlex 96孔温度确认试剂盒测量。
‡在结果部分，报告整个温度范围内观察到的delta最大值。
表2. 温度范围测量的样本数据。
取上述24个数据点的平均值，用仪器设置点数值减去平均值，确定加热模块温度的准确性。
在仪器维持温度180秒后测量准确性。
重复上述步骤3次，测量下列各温度设置点：45、55、72、85和95°C 。
然后将准确性数据与制造商网站上公布的参数进行比较。
利用VeriFlex 加热模块或梯度加热模块测量温度准确性利用VeriFlex 加热模块或梯度加热模块技术改变温度，测试各仪器的准确性。
ProFlex 96孔PCR 系统和SimpliAmp™ PCR 仪均配备独立温控VeriFlex 加热模块。
其他的PCR 仪均仅使用一个加热模块。
使用常用的60°C 退火温度作为中心点，然后在PCR 仪容许的最大温度范围内测试各加热模块。
例如，最大温度范围为20°C 的PCR 仪的测试范围如表2所示。
孔A3、A7和A11的位置5温度测试点加热盖温度测试点带状电缆恒温模式下测量加热模块的准确性使用VeriFlex 96孔温度确认试剂盒(货号：4377669)及3种温度传感器测量加热模块的准确性。
热裂解气相色谱质谱联用仪校准
热裂解气相色谱质谱联用仪（Py-GC/MS）是一种用于分析复杂有机物样品的先进技术。
在进行样品分析前，必须对仪器进行校准，以确保测试结果的准确性和可靠性。
下面将从仪器校准的目的、方法和步骤等方面介绍热裂解气相色谱质谱联用仪的校准过程。
一、校准的目的1. 确保准确性和可靠性：校准过程旨在检验和调整仪器的性能，以确保分析结果的准确性和可靠性。
2. 确保数据的可比性：校准可以使不同时间和不同操作人员得到的数据具有可比性，为结果的解释和比较提供重要依据。
3. 保证仪器性能：经过长时间的使用，仪器的性能可能会发生变化，校准可帮助及时发现问题并进行调整，以保证仪器的正常工作状态。
二、校准的方法和步骤1. 校准标准品的准备：选择适当的标准品，并按照仪器操作手册中的要求进行稀释或制备溶液。
2. 仪器的预校准：在正式校准前，首先对仪器进行预校准，检查仪器各部分的状态是否正常，并进行必要的清洁和维护。
3. 质谱部分的校准：利用质谱扫描标准物质进行质谱部分的校准，校准步骤包括：a. 设置质谱扫描模式，检查质谱仪性能。
b. 加入标准物质，进行质谱扫描，并记录质谱图谱。
c. 根据标准物质的特征峰，调整质谱仪参数，使得质谱图谱与标准相符。
4. 色谱部分的校准：利用色谱标准物质进行色谱部分的校准，校准步骤包括：a. 设置色谱柱和色谱条件，进行基础色谱分离。
b. 加入色谱标准物质，进行色谱分离，并记录色谱图谱。
c. 根据标准物质的保留时间，调整色谱仪参数，使得色谱图谱与标准相符。
5. 全部参数的检查和调整：校准完成后，对仪器的所有参数进行全面检查，确认所有参数调整到最佳状态，并记录校准过程中的各项参数。
6. 校准结果的确认：校准完成后，应当进行校准结果的确认，包括比对校准前后的数据，检查仪器性能是否满足实验要求。
7. 校准记录的保存：校准完成后，应当及时整理和归档校准记录，包括校准标准品的准备记录、校准操作步骤记录、校准结果确认记录等。
《基因扩增仪(PCR仪)测温系统校准规范》编制说明【模板】
《基因扩增仪（PCR仪）测温系统校准规范》编制说明《基因扩增仪（PCR仪）测温系统校准规范》起草小组2017年02月目录一、任务来源二、制定目的和意义三、基因扩增仪（PCR仪）测温系统生产和使用情况四、规范起草的技术依据五、制定规范的主要内容六、总结《基因扩增仪（PCR仪）测温系统校准规范》编制说明一、任务来源根据国家质量监督检验检疫总局国质检量函[2014]79号文件《2016年国家计量技术法规文件制定/修订计划》，2016年5月，全国温度计量技术委员会向上海市计量测试技术研究院等单位下达制定《基因扩增仪（PCR仪）测温系统校准规范》任务，完成期限2017年5月。
二、制定目的和意义基因扩增仪也称聚合酶链式反应仪（以下简称PCR仪），是一种使DNA聚合酶在指定的温度场条件下发生基因复制的仪器。
随着生物技术不断发展，PCR 仪的校准需求也随之呈现几何级数增长。
图1 基因扩增仪（PCR仪）测温系统基因扩增仪测温系统（如图1）是一种外观新型，结构特殊的高精度温度计量器具，主要用作基因扩增仪温度性能校准的标准器，它作为JJF1527-2015《聚合酶链式反应分析仪校准规范》规定的温度计量标准器，国内外技术机构已经广泛使用其开展基因扩增仪的温度校准，目前国内基因扩增仪（PCR仪）测温系统主要用户集中在各大计量技术机构，PCR仪生产厂商，各类生物实验室，医学检验所。
作为PCR仪的测温标准器，这些用户对基因扩增仪测温系统的温度量值溯源需求是显而易见的，而基因扩增仪（PCR仪）测温系统本身的量值溯源问题却始终未解决，国内外尚无针对该类测温系统的校准方法。
基因扩增仪测温系统校准方法的研究与制订配合了JJF1527-2015《聚合酶链式反应仪校准规范》和YY/T1173-2010 《聚合酶链反应分析仪》等技术法规的颁布实施，更好的规范了国内基因扩增仪的使用，保障基因扩增仪温度参数评价的正确性。
可以满足国内PCR仪的生产商和用户的质量保障需求；填补了国内此测温领域的技术空白；作为生物安全、医疗安全等领域计量溯源技术研究的重要一环也是《计量发展规划（2013-2020年）》的计量科技基础研究重点项目。
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浅谈PCR仪温度校准的必要性及方法
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浅谈PCR仪温度校准的必要性及方法
朱晨彬，朱毅晨，姚丽芳，张丽萍，陈宇，朱学平
（上海市计量测试技术研究院）
摘要：本文分析了PCR仪使用的现状及其进行温度校准的必要性。
提出了PCR仪温度校准的方法和校准项目（温度准确性，温场均匀性，升降温速率，最大超调温度）以及数据处理方法，并分析了每一校准项目的重要性。
关键词：PCR仪，温度校准，温度准确性，温场均匀性，升降温速率，最大超调温度
一、引言
PCR是聚合酶链反应(polymerase chain reaction)的简称，是在短时间内体外大量扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。
自动完成聚合酶链反应，提供DNA扩增的温度条件而设计的仪器称为PCR仪。
PCR仪主要用于DNA片段的放大，可将DNA分子或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍，在这过程中主要是3个特征温度循环：
1．高温变性：把样品加热至90～95℃让DNA模板变性变成单链。
2．低温退火：让样品的温度迅速下降至50～65℃,引物就可以结合到模板上去。
3．适温延伸：让样品的温度上升至70～75℃,DNA聚合酶就可以从引物开始用底物复制出新链。
因此，在PCR反应过程中对温度控制的要求很高，良好的温度控制是PCR仪质量好坏的关键。
二、PCR基因扩增仪校准的现状
PCR仪的控温精度、升降温速率以及温场的均匀性等直接影响DNA片段扩增的结果。
PCR仪经使用后，其温度传感器的计量特性会发生变化，作为计量设备一般须经定期校准后方能继续使用。
几乎进行聚合酶链反应试验的实验室（如基因判别、亲子鉴定、DNA个体识别）都会使用多台扩增仪以满足实验需求。
而且，实验室内的基因扩增仪都是常开常用，使用频率高，很难保证其性能指标符合实验要求。
各实验室对PCR仪的质量控制还停留在自检自校和依赖于厂商的售后支持。
我院于2006年编写了基因扩增仪（PCR仪）的校准规范JCJ/E111025.1/0-2006，早已开展PCR仪的温度校准项目。
使用标准装置：
装置名称（PCR仪）校准仪
特点加热槽温度动态实时检
测
适用工况任何工况
测温通道数16
温度测量范围（0-110）℃
系统分辨率0.01℃
测温准确度±0.10℃
采样频率2Hz
由于需要PCR仪升降温速率较快, 故要求温度传感器的热惯性小(滞后要小)，反应灵敏。
因此，校准过程使用热敏电阻作为测温传感器。
标准测试程序为：
序号温度点持续时间
步骤1 30°C1:00 分钟
步骤2 95°C3:00 分钟
步骤3 30°C 2:00 分钟
步骤4 90°C 3:00 分钟
步骤5 50°C 3:00 分钟
步骤6 70°C 3:00 分钟
步骤7 60°C 3:00 分钟
步骤8 30°C 1:00 分钟
通过专用软件进行数据处理及分析，并绘制温度循环测试曲线。
见图一
图一pcr温度循环测试曲线
三、PCR仪温度校准的项目及必要性
一个稳定的温度循环是成功实现PCR 所必需的。
其中温度控制的动、稳态特性是影响PCR 扩增结果正确与否的最重要因素之一, 这包括温度准确性、升降温速度、温场均匀性、最大超调温度。
（一）、温度准确性
温度准确性是PCR 仪最重要的性能指标，如温度准确性低可直接造成非特异性扩增，甚至是错误的扩增结果，造成假阳性和假阴性。
市场上各家厂商考核基因扩增仪（PCR 仪）性能的主要指标，一般厂家的企业指标为±0.5℃，一些性能较好的产品可以实现的温度准确度为±0.3℃。
故需对PCR 仪控温准确度进行测试。
校准实验平均温度的计算公式为：
1
i
i t
n
=∑
I —参加检测的温度探头序号；n —参加检测的温度探头的数量 （二）、温场均匀性
由于PCR 仪加热器加热不均匀，导致PCR 仪模块上各孔存在一定温差。
造成试验结果偏差。
一般PCR 仪边缘点的温度低于中间区域，所以均匀性为PCR 仪重要的性能指标。
一般厂家的企业指标规定均匀性为±0.5℃，一些性能较好的产品可以实现的温度均匀度为±0.3℃。
校准实验时，通过选取孔板中16个特殊反应位置（如图2所示）来测量温度，并得出孔板的温度均匀性。
均匀性为各个探头在同一时刻最大温度与最小温度的差值。
均匀度计算公式为：t max -t min （t max =最大温度；t min =最小温度）
图二 96孔板探头布点示意图 （三）、升降温速率
PCR扩增产物数量的多少决定了PCR的效率。
为了在短时间内获得尽可能多的产物，需要仪器在升降温段具有按照预设升降温速率快速升温和降温的能力（最大升温速率达15~20℃）。
一个完整的PCR过程，是由若干个升温→恒温→降温循环构成的。
因为“变性”，“退火”和“延伸”3个阶段是必须要保证的。
因此，只有使升降温的过程尽可能地迅速，才能缩短每个PCR循环以及整个PCR 过程所需时间。
一般厂家的企业指标规定升温速率为±3℃/sec。
仪器校准实验时，升温速率为温度从40℃到90℃的时间；降温速率为温度从70℃到35℃的时间。
详见图三
图三PCR降温速率计算示意图
（四）、最大超调温度
当温度从一定点温度调节到另一定点温度,就会产生温度的超调。
超调温度过大同样会对试验产生影响，所以校准实验时，需要计算最大超调温度和平均超调温度。
见图四
图四温度曲线超调温度部分
四、结束语
聚合酶链反应（PCR）技术由于其极高的检测灵敏度和特异性已经越来越多地应用于临床检验、司法鉴定等工作中。
有多种原因会造成PCR扩增的错误结果，排除实验过程中人为因素造成的误差，PCR仪温度控制系统工作性能的优劣是造成检验结果出现偏差甚至错误的至关重要因素。
通过对PCR仪的定期校准可以极大的避免PCR过程中假阳性或假阴性结果的产生，提高PCR试验的准确性和稳定性。
参考文献
[1] 王宇松,佟慧艳,张文超.影响PCR仪温度控制精度的因素分析[J]. 生命科学仪器, 2007, (02) .
[2] 陈居德,杨明. PCR扩增基因检测中的温度控制[J]. 仪器仪表用户, 2004, (01) .
[3] 张文超,刘晓光,吴勤勤. 基因扩增分析(PCR)仪温控系统的研究与应用[J]. 华东理工大学学报, 2004, (02) .
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[5] 薛生虎,李东升,叶子弘,俞晓平,方荣瑞. 基于多传感器融合技术的PCR仪温度校准系统[J]. 仪
器仪表学报,2011,(06)
Introduction to the necessity and method of temperature calibration for
PCR instrument
Zhu Chenbin，Zhu Yichen，Yao Lifang，ZhangLiping，Chen Yu，Zhu Xueping Abstrat:The situation of using PCR intrument and the nessity of its temperature calibration is introducted. The mathod of PCR instrument’s temperature calibration is given by this article. The temperature calibration items for PCR instruments that contain the temperature accuracy, temperature uniformity ,velocity of temperature change,max overshoot temperature and mathods of data analysis are also introducted. So is the temperature analysis of each calibration items
Key words: PCR instrument；temperature calibration；temperature accuracy；temperature uniformity；velocity of temperature change；max overshoot temperature。