分子生物学实验室存在问题
分子生物学实验室安全管理制度
分子生物学实验室安全管理制度在分子生物学领域，实验室安全管理制度是保障实验室安全的重要基础。
实验室安全管理的目标是防止实验室事故的发生，确保实验人员的生命安全和健康，保护实验室设备和实验材料的完整性，确保实验结果的可靠性。
为了达到这些目标，实验室需要建立一套科学严密的安全管理制度。
首先，实验室需要明确安全责任。
实验室负责人应明确各级实验室人员的安全责任，确保实验室人员明白自己在实验室安全工作中的具体职责和义务。
安全责任可以分为个人责任和集体责任两个层面，每个实验室成员都需要自觉履行个人责任，注意自身安全，不得私自操作未经许可的实验设备或使用危险物质。
集体责任则要求实验室成员相互监督，共同营造一个安全的工作环境。
其次，实验室需要建立完善的安全教育培训制度。
实验室工作人员在加入实验室前，必须接受系统的安全培训，包括熟悉实验室安全规章制度、熟练掌握实验操作技巧和安全操作要点等。
安全教育培训应定期进行，以更新实验室成员的安全意识和知识水平。
培训内容可以涵盖实验室事故案例分析、紧急处理措施、常见危险物质的性质及应对方法等，以提高实验室成员的安全防护能力。
第三，实验室需要建立严格的实验操作规程。
实验操作规程是实验室中最重要、最基础的安全管理规定，其目的是规范实验操作流程，降低意外事故风险。
操作规程应包括实验设备使用要求、安全防护措施、危险物质的储存和处理方式等。
实验操作规程应当明确，易于理解和执行，并定期进行更新和完善。
此外，在实验操作规程中还应制定实验室事故的报告和处理程序，以提高事故应急处置能力。
第四，实验室需要建立科学的安全检查和监测制度。
为保证实验室的安全与稳定运行，需要定期进行安全检查和监测。
安全检查可以包括实验设备的运行状况检查、实验室环境卫生检查、实验材料的储存情况检查等。
安全监测可以通过安全设备的使用和维护情况、危险物质的储存和使用记录等方式进行。
通过安全检查和监测，可以及时发现和解决存在的安全隐患，确保实验室的安全运行。
分子生物学实验中常见的问题与对策-9
分⼦⽣物学实验中常见的问题与对策-9⼀、质粒提取常见问题分析与策略1.⽤试剂盒未提出质粒或质粒得率低有哪些原因？1）细菌⽼化请凃布平板培养后，重新挑选新菌落进⾏液体培养。
2）细菌培养物⽣长过度或不新鲜不要于37℃培养超过16⼩时，分离质粒前长时间存放培养物是不利的。
3）质粒拷贝数低由于使⽤低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低，可更换具有相同功能的⾼拷贝数载体。
4）菌体中⽆质粒有些菌体本⾝不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。
例如柯斯质粒在⼤肠杆菌中长期保存不稳定，因此不要频繁转接，每次接种时应该接种单菌落。
另外检查筛选⽤抗⽣素使⽤浓度是否正确。
5）菌体过量，碱裂解不充分取样时菌液过多，导致菌体裂解不充分，可减少菌体⽤量或增加溶液悬浮液、裂解液、中和液的⽤量。
对低拷贝数质粒，提取时可加⼤菌体⽤量并加倍增加溶液悬浮液、裂解液、中和液的⽤量（应保持1：1：1.4⽐例）。
6）溶液使⽤不当溶液裂解液、中和液在温度较低时容易出现盐析，如出现，应将其放⼊37℃⽔浴⾄完全溶解、澄清，⽅可使⽤。
7）质粒未全部溶解（尤其质粒较⼤时）洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。
8）⼄醇残留洗涤液Ⅱ洗涤后应离⼼并静置数分钟尽量去除残留⼄醇后，再加⼊洗脱液洗脱回收。
9）洗脱液加⼊位置不正确洗脱液应加⼊吸附柱中膜的中央以确保洗脱液完全覆盖吸附膜的表⾯达到最⼤洗脱效率。
10）洗脱效率：洗脱效率与洗脱液PH值、洗脱液⽤量、洗脱次数、加⼊洗脱液后的静置时间和是否预热等因素有关。
PH7.0－8.5之间，洗脱液⽤量不得⼩于50µl，重复洗脱2-3次，增加室温静置时间及65℃⽔浴预热可以有效提⾼得率30%。
2.试剂盒提取质粒纯度不⾼，如何解决？1）有蛋⽩质污染应在加⼊去蛋⽩液后，以⾜够⾼的转速离⼼，使沉淀紧密，并⼩⼼地吸取上清液，避免吸⼊沉淀。
另外，不要使⽤过多菌体。
经悬浮液、裂解液、中和液处理，离⼼后溶液应为澄清的，如果还混有微⼩蛋⽩悬浮物可再次离⼼去除后再进⾏下⼀步骤。
分子生物学检测实验室技术要求与质量控制
案例分析：乙型 肝炎病毒核酸检
测
遗传性疾病：由基因突变或染色体异常引起的疾病
诊断方法：分子生物学检测技术，如基因测序、基因芯片等
应用案例：遗传性疾病的诊断，如唐氏综合征、地中海贫血等
质量控制：确保检测结果的准确性和可靠性，如样本采集、处理、检测等环节的质量控 制
个体化医疗：根据患者的基因、环境和生活方式等因素制定个性化的治疗方案 精准医学：通过分子生物学检测技术，精确诊断疾病，制定个性化的治疗方案 案例分析：分子生物学检测技术在癌症、遗传病等疾病诊断中的应用 技术要求：分子生物学检测实验室的技术要求，包括设备、试剂、人员等
PART SIX
实验室生物安全是实 验室工作的重要组成 部分，需要严格遵守 相关法律法规和标准。
实验室生物安全包括 生物安全柜、生物安 全实验室、生物安全 防护设备等设施设备 的使用和管理。
实验室生物安全还包 括实验室人员的培训 和考核，确保实验室 人员具备必要的生物 安全知识和技能。
实验室生物安全还需 要建立完善的生物安 全管理制度和应急预 案，确保实验室生物 安全的有效实施。
应用：研究基 因表达调控、 疾病诊断、药 物研发等领域
质量控制：包括 样本采集、RNA 提取、构建、 测序和数据分析 等环节的质量控
制
蛋白质组学：研究蛋白质在细 胞、组织或生物体中的表达、 修饰、相互作用和功能
蛋白质组学检测技术：包括质 谱分析、蛋白质芯片、蛋白质 相互作用分析等
质谱分析：通过测量蛋白质的 质量和电荷，确定蛋白质的种 类和数量
实验动物福利：确保实验动物的健 康和福利，遵循3R原则（替代、减 少、优化）
实验动物使用：实验动物必须经过 适当的训练和适应，确保实验结果 的准确性
分子生物学实验教改中存在的问题及对策研究
分子生物学实验教改中存在的问题及对策研究引言：分子生物学实验是生物科学教育中非常重要的一环，是培养学生科学研究和实践能力的重要途径。
然而，在实验教学过程中存在不少问题，如何解决这些问题，提高实验教学效果是当今教育界一个迫切需要解决的问题。
因此，本文将围绕分子生物学实验教学中存在的问题及解决对策展开研究分析。
一、实验设备和仪器不足实验室设备和仪器的获取是分子生物学实验教学中的一个基本问题。
一些普通高校、中小学开设的生物学相关专业实验室设备不足，影响了教学质量。
解决这一问题的方法是，其一是向国家申请更多经费投入到实验教学当中，购置更为先进的仪器设备。
其二是引进企业、行业和社会资源，与其合作开设论坛、实习机会等。
二、名师不足教师水平因素也是影响分子生物学实验教学成败的一个重要因素，由于学科名师不足，导致理论课与实验教学相不相衔接，自然不同样在实验课上获得很好的教育效益。
作为此问题的解决方案是，学校应注重对教师教育的培训提高，改变传统的教育方式，引导学生自主学习，为学生创造创新性学习环境，与此同时还可以通过开展教师教学建设项目、举行教学竞赛等方式吸引并培养优秀专家和教师。
三、课程内容缺少实际性分子生物学实验教学应以实验为主，但课程内容可以涵盖更多有实践性的内容，同时配以丰富的讲解、演示和操作步骤等教学方法。
学生应重视每一个实验环节，开展学生实践实验学习，能更加丰富整个教育体系，这也是更好发展的基础，应以实验为主，但课程内容可以涵盖更多有实践性的内容,从而增强学生的实践表现能力。
四、考试评价方式过于简单教育评价是教育过程中不可或缺的一环，而分子生物学实验教学中，考试评价常常滞后于教育学术发展和教学实践的现实前沿，教育评价也没有得到足够重视和改进。
提高考试评价方式，注重能力的培养，有助于学生更好地掌握实践过程和实验方法。
同时，运用多种评价方式，如成绩考核、实验报告、实验记录拓宽测评的层面，得到更为准确的评价结果。
生物技术实验教学中的问题与应对措施
生物技术实验教学中的问题与应对措施生物技术实验教学是生物学专业学生必不可少的一门重要课程，通过实验教学，学生能够更好地了解生物技术的基本原理、操作技能和应用方法，提高实验操作能力和科学素养。
生物技术实验教学中也存在着一些问题，如实验设备不足、学生动手能力差、安全意识薄弱等。
本文将从生物技术实验教学中存在的问题以及应对措施两个方面进行探讨。
一、生物技术实验教学中存在的问题1. 实验设备不足：生物技术实验涉及到许多专业设备，如PCR仪、电泳仪、离心机等，而一些院校或实验室由于各种原因，设备条件相对较差，导致实验教学效果不佳。
2. 学生动手能力差：生物技术实验具有一定的难度，需要学生具备一定的动手能力和实验技能，然而一些学生在动手能力方面存在不足，导致实验效果不佳。
3. 安全意识薄弱：生物技术实验涉及到一些化学试剂和生物制品，如果学生的安全意识不强，存在一定的安全隐患，容易导致实验事故的发生。
1. 加强实验设备的建设和更新：学校或实验室应该加强对生物技术实验设备的建设和更新，同时充分利用社会资源，引进先进的实验设备，提高实验教学的质量。
2. 加强实验技能的培训：学校应该加强对学生实验技能的培训，注重培养学生的动手能力，提高他们在生物技术实验中的操作水平，增强实验教学的实效性。
3. 加强安全教育和管理：学校应该加强对学生的安全教育和安全管理，引导学生树立安全意识，积极参与安全管理工作，规范实验操作行为，减少实验事故的发生。
生物技术实验教学中存在的问题是客观存在的，解决这些问题既需要学校和实验室的积极配合，也需要学生自身的努力。
只有通过共同努力，才能够提高生物技术实验教学的质量，为培养高素质的生物学专业人才奠定坚实的基础。
分子生物学实验室安全问题探讨
（ Ｇ Ｂ １ ９ ４ ８ ９～
更 是 备 受 重 视 。高 校 分 子 生 物 学 实 验室 作 为 实 践 教 学 的 ２ ０ ０ ８ ），该 标 准 对 实 验 室 生 物 安 全 设 施 、设 备 等 硬 件 和
基 地 ，对 于 提 高本 科 生 、研 究 生 的综 合 素 质 ，培 养 高 素 安全 管 理 体 系 、组 织 、文 件 等 软件 管 理做 出通 用 性 强 制
易燃 易 爆 、有 毒有 害 物 品 和高 温 、高 压 、高 真 空 、高 转 险 性 高 ，而 且对 环 境 的危 害 和 影 响也 极 大 。 如 溴 化 乙锭 Ｅ Ｂ ） 是 强诱 变 剂 ，具 有 高 致 癌 性 ，实 验 结 束 后 应 对 含 速 等设 备 ） 、实 验 项 目和 内 容 更 复 杂 、实 验 过 程 的 未 知 （
Ｅ Ｂ ） 、丙 分 子 生 物 学 是 一 门 非 常 强 调 实 验 技 术 和 技 能 的 学 性 、强 毒 性 、腐 蚀性 和 致 癌 性 ，如 溴 化 乙 锭 （ Ｎ 一 亚 甲 双 丙 烯 酰 胺 、 四 甲 基 乙 二 胺 科 ，学 生都 要 进行 大 量 的实 验 操 作 ，实 验 过 程 中 涉 及 的 烯 酰 胺 、 Ｎ
高中生物实验室存在的问题整改报告
高中生物实验室存在的问题整改报告高中生物实验室存在的问题整改报告一、问题概述在高中生物实验室中，存在着一些常见的问题，这些问题既包括安全隐患，又包括实验环境的整体质量。
通过对实验室的全面评估，我们发现了以下一些问题：1. 实验器材老化：部分实验器材老化严重，存在安全隐患。
2. 实验室环境脏乱差：实验室内卫生较差，桌面和地面有杂物和污渍。
3. 安全意识薄弱：部分学生对实验室安全意识不强，容易发生事故。
4. 实验室管理混乱：实验室标识不清晰，管理不规范。
二、整改措施为了解决上述问题，我们提出了以下整改措施：1. 更新实验器材：对老化严重的实验器材进行更新，确保实验设备的安全性能。
2. 实施定期清洁：制定实验室卫生清洁的详细标准，并进行定期清洁，确保实验环境的整洁。
3. 加强安全教育：加强学生的安全意识教育，进行定期的安全知识培训和模拟演练。
4. 规范管理制度：制定实验室管理制度，明确实验室规章制度和使用流程，加强实验室管理。
三、实施效果经过一段时间的整改和落实，我们已经取得了明显的成效：1. 实验器材得到了更新，实验设备的安全性能得到了极大提高。
2. 实验室环境得到了明显改善，整体清洁度得到提升。
3. 学生的安全意识明显增强，安全事故大幅减少。
4. 实验室管理体系得到了规范，管理混乱的现象得到了有效遏制。
四、个人观点作为生物实验室负责人，我深刻认识到了实验室问题的严重性以及整改措施的重要性。
通过这次整改，我对实验室管理和安全意识有了更深入的理解，也明白了规范管理对于实验室的重要性。
我将继续努力，不断改进实验室管理，确保实验室环境的安全和稳定。
总结回顾通过本次对高中生物实验室存在的问题进行的全面评估和整改，我们成功解决了实验器材老化、实验室环境脏乱差、安全意识薄弱以及实验室管理混乱等问题。
整改措施的实施效果明显，实验室的安全和整体质量得到了极大提升。
在未来的工作中，我将继续关注实验室管理和安全意识教育工作，不断完善实验室管理制度，为学生提供更安全、更稳定的实验环境。
本科临床分子生物学检验实验课的教学改进
本科临床分子生物学检验实验课的教学改进随着科学技术的不断发展，生物医学领域的临床分子生物学检验技术得到了广泛应用，尤其是在疾病诊断、预防和治疗方面起着至关重要的作用。
而本科临床分子生物学检验实验课作为培养医学生实验操作技能和理论知识的重要环节，其教学改进显得尤为重要。
本文将围绕本科临床分子生物学检验实验课的教学现状进行分析，针对存在的问题提出一些教学改进的建议。
一、教学现状分析1. 实验设备和条件不足：目前很多高校的本科临床分子生物学检验实验室的设备和条件相对落后，无法满足学生的实验需求。
实验所需要的PCR仪、电泳仪、超低温冰箱等设备的品质和数量都不够理想，导致学生在实验操作中遇到困难。
2. 实验内容与实际医学应用脱节：目前本科临床分子生物学检验实验课程中的实验内容大多是根据教材和实验指导书中的例题设计的，而与实际医学诊断、预防和治疗的需求有一定的脱节，学生缺乏对临床实验的认识和了解。
3. 实验教学方法单一：当前很多高校的本科临床分子生物学检验实验教学方法主要是讲授理论知识和实验操作技能，而缺乏与学生互动交流和实际问题解决能力培养。
二、教学改进建议1. 提升实验室设备和条件：学校和实验室管理部门应该加大对本科临床分子生物学检验实验室的设备更新和维护力度，确保实验室设备的品质和数量能够满足教学需求。
可以通过引进合作、捐赠等方式，扩大实验室设备资源。
2. 优化实验内容设计：针对实验内容与实际医学应用的脱节问题，可以邀请医学专家或实验室技术人员参与实验内容的设计，结合临床诊断的实际情况进行优化，并引入一些新的实验项目，使学生在做实验的更贴近临床实际应用。
3. 多元化教学方法：除了传统的讲授理论知识和实验操作技能外，可以结合学生的实际情况，引入案例教学、实验设计和实验报告撰写等教学方法，通过小组讨论和学生答疑等方式，提高学生实验操作技能和解决问题的能力。
4. 强化实践环节：实验课程中可以设置实践环节，例如请学生到医学实验室参观，或者到临床诊断实验室进行实习，以便学生更加深入地理解临床分子生物学检验技术在实际医学中的应用，提高他们的实际操作能力。
分子生物学实验室环境安全建设的问题和建议-分子生物学论文-生物学论文
分子生物学实验室环境安全建设的问题和建议-分子生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——摘要：健全的实验室安全环境是保证实验得以正常进行的前提条件,分子生物学实验对环境的要求相对较高,因此建立健全分子生物学实验室安全环境建设尤为重要。
以岭南师范学院分子生物学实验室为例,针对分子生物学实验室存在的污染问题进行分析并阐明产生这些污染的主要危害和原因,提出了应从健全实验室规章制度、加强安全教育和合理安排实验室的布局三个方面来改善分子生物学实验室的安全环境。
关键词：分子生物学; 实验室; 安全环境;Abstract： A sound laboratory safety environment is a prerequisite to ensure that experiments can be carried out normally. Molecular biology experiments have relatively high requirements on the environment. Therefore, it is particularly important to establish a sound laboratory environment for molecular biology. Taking the molecularbiology laboratory of Lingnan normal university as an example, the pollution problems existing in molecular biology laboratories were analyzed and the main hazards and causes of the pollution were expounded.It was suggested that the safety environment of molecular biology laboratories should be improved from three aspects: perfecting laboratory rules and regulations, strengthening safety education and reasonably arranging laboratory layout.Keyword：molecular biology; laboratory; safety environment;分子生物学是研究分子层次的生命过程的学科。
分子实验常见问题
分子生物学实验常见问题分析及对策一、各种常见PCR1.PCR反应扩不出条带，出现假阴性，可能原因：（1）模版：模板中含有杂蛋白质，模板中含有Taq酶抑制剂，且含量低；Buffer 对样品不合适；引物设计不当或者发生降解；模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。
模板核酸变性不彻底。
在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。
（2）酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。
需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。
（3）引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。
有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：选定一个好的引物合成单位。
引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。
如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。
引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。
引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。
（4）Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。
或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。
（5）物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。
分子生物学实验的常见问题与解决方案
一、Southern杂交问题1：电泳后发现凝胶中DNA扩散，导致结果难以确定，如何解决这一问题？解决方案：（1）在操作上：电泳时隔孔上样，电泳后要对凝胶及时处理使凝胶干燥；（2）琼脂糖的质量应该较好，尤其是不应含有内切酶，否则有时将使低拷贝数基因的杂交结果难以解释。
问题2：传统方法中转膜不完全的问题如何克服？解决方案：经典的向上转移法会使凝胶短时间内变薄,此时即使延长转移时间至24小时以上,也不能使大分子DNA良好地转移出去,因此,转膜不完全。
向下转膜法由于不需在吸水纸上增加重量,凝胶基本不变形；加之吸水纸的吸力与水受到的重力方向一致,故可以良好地完成DNA的转移,它不需要特殊的仪器,转移速度较快,转移效率高。
利用地高辛标记探针进行Southern 杂交时，对于大于15kb的DNA片断，转膜之前用盐酸进行脱嘌呤可以促进转膜效率, 但脱嘌呤过度可导致分子量相对较小的DNA 被打断成过小的片段而难以和尼龙膜结合。
如果实验转膜过程中同时含有大于15kb的DNA(通常为基因组)和小片段DNA(通常是基因组酶切产物)，那么在转移的过程中倾斜容器，仅使凝胶上半部分浸泡于盐酸，这样既可以提高大片断DNA 的转移效率，又不会打碎小片段DNA。
另外，等采用琼指糖凝胶直接杂交的方法，来解决这一难题：以转基因鼠的检测为例，实验步骤如下：1.转基因鼠的建立：以鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5’调控区指导人G-CSF基因为构件，建立转基因小鼠。
转基因小鼠的检测采用剪取鼠尾DNA做Southern进行鉴定。
2.琼脂糖凝胶直接杂交l)用BanHI(150U)对由假孕鼠产生的仔鼠剪尾提取基因组DNA10μg酶切过液，取少量电泳检查酶切完全后，上样电泳8小时，(2)将电泳槽板连同凝胶置50℃放置3小时，用镊子轻轻揭起凝胶，放于变性液(0.5MNaOH，0.5MNaCl)20分钟，转置中和液(0.5MTrisHCl，0.15MNaCl)20分钟，将胶放于玻璃板上沥干液体，室温放置30分钟。
生物技术实验教学中的问题与应对措施
生物技术实验教学中的问题与应对措施生物技术实验在教学中起着非常重要的作用，它可以让学生学以致用，深入了解生物技术的原理和实践操作。
生物技术实验教学中也存在一些问题，如实验设备不足、实验安全隐患、学生动手能力不够等。
针对这些问题，教师们需要采取一些应对措施，以保障生物技术实验教学的顺利进行。
一、实验设备不足的问题生物技术实验通常需要一些特殊的设备和器材，比如PCR仪、电泳仪、离心机等。
由于实验设备的价格昂贵，并且使用寿命有限，学校可能无法负担购置足够的实验设备，导致实验教学受到限制。
这就需要教师采取一些措施来解决这个问题。
应对措施：1. 合理规划实验内容。
教师可以根据学校实验设备的情况，合理规划实验内容，选择适合学生进行的实验项目，避免过多依赖特殊设备。
2. 制定实验轮换计划。
对于实验设备紧缺的学校，可以制定实验轮换计划，确保每个班级都有机会使用到实验设备，最大限度地发挥设备的作用。
3. 积极争取经费支持。
教师可以积极向学校领导提出实验设备不足的问题，并争取经费支持，用于购置新的实验设备，以解决实验设备不足的困境。
二、实验安全隐患的问题生物技术实验涉及到一些生物制剂和化学试剂，如果不注意安全防护，很容易引发安全事故，给师生造成伤害。
教师在进行生物技术实验教学时，必须高度重视实验的安全问题，采取严格的安全措施，确保师生的人身安全。
应对措施：1. 加强安全教育。
教师在进行生物技术实验教学前，应向学生进行详细的安全教育，告知实验中可能存在的安全隐患及应对措施，让学生充分认识到安全的重要性，增强安全意识。
2. 配备安全防护装备。
教师应根据实验内容和要求，配备相应的安全防护装备，如实验服、手套、护目镜等，确保师生进行实验时的人身安全。
3. 定期检查实验场地和设备。
及时发现和排除实验场地和设备中存在的安全隐患，确保实验的安全进行。
三、学生动手能力不够的问题生物技术实验需要学生进行许多操作，包括样品制备、试剂配制、仪器操作等，而一些学生的动手能力可能不够，会影响实验的进行和实验结果的准确性。
我院分子生物学技术课程教学问题分析与对策
我院分子生物学技术课程教学问题分析与对策基金项目：郑州师范学院校级课题项目（项目批准号：***-*****）。
分子生物学技术是我国综合、师范、医药、农林类院校生物专业必修的一门基础课，也是生命科学的带头前沿学科，课程地位十分重要。
我校是一所师范类的本科院校，在生物技术与应用专业开设了分子生物学技术课程。
本课程内容主要包括分子生物学技术的基础理论、基本技术以及当前分子生物学技术研究的前沿领域。
了解或掌握分子生物学技术的基础理论、基本技术及其研究方法对高级人才的培养具有重要的现实意义。
然而，分子生物学技术的理论知识抽象、有深度、内容多，而且教学时间短（54学时），教学效果往往不尽人意。
如何利用有限的教学时间取得良好的教学效果，是教师们最关心的问题。
作为一名分子生物学技术课程的老师，就我院学生的情况在分子生物学技术课程教学方面存在的问题及教学的思路及对策谈几点看法。
一、分子生物学技术课程特点及存在的问题（一）分子生物学课程特点分子生物学是在生物化学的基础上发展、向生命科学各个领域拓展而形成的，是研究核酸、蛋白质等生物大分子的结构、功能及其相互间作用规律的一门实践性很强的学科。
随着这门学科的飞速发展，使人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动地适应自然界转向主动地改造和重组自然界。
另外，近年来的诺贝尔医学和生理学奖绝大多数都颁给了分子生物学相关的研究领域，这表明了分子生物学在整个生命科学中的重要地位。
（二）分子生物学技术教学存在的问题1.过分依赖现代化教学手段分子生物学技术内容庞杂、抽象，较难理解，并且涉及大量的实验技术和操作，在有限的时间内让学生理解和掌握大量的知识和技术是很难的，导致教学效果很不理想。
随着多媒体技术进入课堂，教学效果有明显提升。
该技术可将抽象的、理论的东西形象化，将空间的、难以想象的内容具体化，还可以在课件中展示自然界的直观现象、模拟实验过程和再现研究过程，提高了学生学习的兴趣。
分子实验常见问题及对策
分子生物学实验常见问题分析及对策一、各种常见PCR1.PCR反应扩不出条带，出现假阴性，可能原因：（1）模版：模板中含有杂蛋白质，模板中含有Taq酶抑制剂，且含量低；Buffer对样品不合适；引物设计不当或者发生降解；模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。
模板核酸变性不彻底。
在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。
（2）酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。
需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。
（3）引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。
有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：选定一个好的引物合成单位。
引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。
如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。
引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。
引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。
（4）Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。
或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。
（5）物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。
分子实验操作误区
至于那种情况好，要看我们进一步实验的目的了，进 行分子克隆的操作，构建载体。这随便那种情况都可以， 不会影响后续实验。进行细胞转染和测序，必须要超螺旋， 所以它们的质量好坏顺序是： 3）、2）、1）
三 实验操作的经验
• 质粒的提取常见问题与对策
质粒大小如何在电泳中的鉴定？
• 酶切将质粒线性化以后，才可以用marker判断大小。 如果有三种构像，可以用中间那条带与marker比较 判断大小。 • 商品化的质粒估计应该大部分是超螺旋构像。 • 酶切后线性化条带电泳时所处的位置就指示质粒的 大小。
三 实验操作的经验
• 质粒的提取常见问题与对策
抽提质粒DNA时，用酚、氯仿、异戊醇有什么作用？
• 酚与氯仿是非极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白 质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去而变性。经过离心，变性 蛋白质的密度比水的密度为大，沉淀在水相下面与水相中的DNA 分开。 • 酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。酚的变性作用大， 但酚与水相有一定程度的互溶，大约10％～15％的水溶解在酚相 中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚 效果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。所以在抽提过程 中，混合使用酚与氯仿效果最好。为了混合均匀，必须剧烈振荡 容器，易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇 能降低分子表面张力，能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用 氯仿与异戊酵为24：1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25： 24:1，同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性 蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。 • 经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的， 可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。
二 实验室存在的实验误区
医学分子实验室污染原因分析及应对措施
医学分子实验室污染原因分析及应对措施摘要：探讨医学分子生物实验室污染的原因分析和应对医学分子生物实验室污染的防控和消除措施。
方法：医学分子生物实验室污染发生后，针对实验室进行环境监测，查找污染源，针对污染源进行清除，并对实验室操作人员定期培训和考核。
结论：针对医学分子生物实验室污染进行原因分析，并采取相应措施清除污染。
平时注重预防医学分子实验室污染。
关键词：医学分子生物实验室；PCR;污染；原因分析；应对措施Cause analysis and Countermeasures of pollution in medical molecular laboratoryAbstract:To explore the causes of pollution in medical molecular biology laboratory and the prevention, control and elimination measures of pollution in medical molecular biology laboratory.Keywords:Medical Molecular Biology Laboratory; PCR; Pollution; Cause analysis; Countermeasures医学分子生物技术近些年来发展迅速，为检验医学领域发展较迅速的一门学科，特别是以聚合酶链反应（PCR)为主要检测方法发展和应用较为成熟。
聚合酶联反应（PCR）是美国化学家Kary Mullis于1983年发明的[1]。
它用于对靶核苷酸进行体外扩增，数倍的增加，有着非常高的灵敏度和较高的特异性，从20世纪90年代中后期在国内医学实验室开始被应用开，已经在临床医学检验方面发挥着越来越大的作用。
但是由于其敏感性极高，微量的污染将造成实验失败，尤其实验过程中涉及阳性质粒或行RT-PCR操作时更易污染[2].截止目前在医院检验科中开设分子实验室的数量越来越多，甚至基层实验室也都开始进行医学分子实验室的建设，数量越来越多的分子实验室，同时面临的实验室污染现象也有所增加，一旦实验室污染出现，可能会造成假阳性结果，导致结果不可信，正常的工作程序就会被迫打断。
分子生物学实验常见问题分析及对策-20
分子生物学实验常见问题分析及对策-20质粒的提取常见问题与对策Q1: 提质粒没有明显的沉淀，能说明是没有提出来吗？跑完电泳还是没有条带能证明质粒没提出来吗？A: 提质粒的时候没有明显的沉淀，也有可能是由于你加的乙醇量少或异丙醇量不足或质量有问题。
或者质粒太少了难以用肉眼看出。
跑完电泳还是没有条带也有可能是跑胶时配置胶出问题，或染色剂不够，或者你加的质粒量少。
要具体情况再分析Q2:质粒条带很暗而且通常只有一条带是什么问题？A:没有用试剂盒提取的话可能考虑技术问题。
如果常做质粒的提取，且用的是试剂盒，还出现这种情况，就要从质粒本身着手考虑了：首先做个PCR鉴定一下，确保有质粒的情况下，很可能质粒是低拷贝的，如此就要用大量的细菌来提取质粒。
一般的用可以用水煮法提(1ml菌液离心,沉淀加50μl DEPC 水,100度水煮3-4分钟,离心取上清夜,含有大量的质粒)用1-2μl作为模板跑PCR效果很好。
Q3: 用分光光度计测得的质粒浓度很高，但是跑出来的电泳却看不到条带，这是什么原因？A: 三种可能：1）可能EB有问题，应同时检查同一块胶上其它样品是否有条带。
2）计算OD260/280比例，有可能为蛋白污染所致。
3）稀释后上样的浓度过低。
Q4: 提质粒电泳显示应该几条带？哪种情况较好？A: 质粒在电泳时会出现三种情况的图谱：1）三条带，按照电泳泳动速度（快到慢）排列为：超螺旋、缺口闭环、开环。
经常会出现。
2）两条带，超螺旋/闭环/开环任意两种。
3）一条带，超螺旋。
至于那种情况好，要看我们进一步实验的目的了。
1）进行分子克隆的操作，构建载体。
这随便那种情况都可以，不会影响你的后续实验。
所以在这种情况下，没必要评比谁好谁不好。
2）进行细胞转染。
因为转染必须要超螺旋，所以它们的质量好坏顺序是： 3）、2）、1）。
Q5: 如何降低质粒变性超螺旋的含量？A: 理论上，用碱裂解法抽提质粒，变性超螺旋的出现是不可避免的。
分子生物学实验常见问题分析及对策
分子生物学实验常见问题分析及对策-141、Southern杂交技术成败主要取决于哪两个因素？答：Southern杂交技术的成败主要取决于两个因素：首先，用于探针的DNA纯度要高，否则影响特异性。
其次是探针DNA的放射性比强度要高，因为增加放射性强，可提高检测水平。
2、Southern杂交技术中的DNA的消化和电泳有哪些注意点？答：①选择的限制性内切酶应提供某种信息，通常消化前DNA中间长度至少应该三倍于消化产生的DNA 中间长度；②高分子的DNA容易造成消化不均匀，所以要用大体系酶切；而若酶切体系太大，消化后不方便上样，则可以对DNA进行浓缩，用乙醇沉淀DNA；③电泳电泳前，除乙醇，并且70℃水浴，这样也可以破坏限制性片段黏性末端之间的碱基配对；④消化后的DNA可以在4℃保存，但是电泳加样前需加热至56℃2~3分钟，破坏黏性末端碱基对；⑤酶切后，电泳上样前最好通过荧光测量法测DNA消化产物的浓度；⑥电泳前要保证DNA分散均匀，并且若是大分子量的DNA，要用大口径吸头吸取；⑦过夜电泳，低电压慢迁移率；⑧电泳后将凝胶用溴化乙锭染色，读胶，用透明荧光尺读取迁移距离；⑨电泳后的凝胶可以再4℃保存，但是不可超过一天。
3、Southern杂交技术中的膜转移有哪些注意点？答：①凝胶、膜、吸水纸大小要适中，差不多大，不能太大，防止造成短路。
并且各层之间不能有气泡；②凝胶、膜都要做好标记，不能搞混；③转膜前要对凝胶中DNA片段进行变性、洗涤等工作，若目的DNA片段大于15kb，则变形前还要进行短暂脱嘌呤处理，使DNA产生缺口，提高转移效率；④不带电膜需用中性缓冲液，同时凝胶经变性后需用中性缓冲液洗涤；若是带点膜需用碱性缓冲液，则凝胶可直接进行转移，不需要变性。
4、Southern杂交技术中杂交部分的主要因素有哪些，分别有什么关系？答：杂交步骤中主要因素有膜上的DNA量、探针量以及结合效率等；杂交的灵敏度可达到0.1pg，杂交信号强度与探针特异性活性呈正比，与探针长度呈反比。
分子实验 常见问题及分析
采用吸附材料吸附的方式分离DNA时，应提 供相应的缓冲体系
采用有机（酚/氯仿）抽提时应充分混匀，但 动作要轻柔 离心分离两相时，应保证一定的转速和时间
针对不同材料的特点，在提取过程中辅以相 应的去杂质的方法
核酸分离、纯化
蛋白质的去除：
酚/氯仿抽提 使用变性剂变性（SDS、异硫氰酸胍等） 高盐洗涤 蛋白酶处理
细胞器DNA－差速离心法
线粒体和叶绿体是生物体内半自主性细胞器，自身可编码蛋 白，它们的比重和大小一定，因而在同一离心场内的沉降速度 也一定，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各 种组分分级分离出来。
差速离心法原理
是利用物质比重的不同分离混合物的一种方法。 将待分离物质置于均匀介质（蔗糖）中，以一定的转速进 行离心，比重大的物质优先沉降，比重小的却处于上层， 从而得以分离。
6.
尽量取新鲜材料，低温保存材料避 免反复冻融 液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻 前加入裂解缓冲液 在提取内源核酸酶含量丰富的材料 的DNA时，可增加裂解液中螯合剂 的含量 细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔 所有试剂用无菌水配制，耗材经高 温灭菌 将DNA分装保存于缓冲液中，避免 反复冻融
DNA提取常见问题
核酸分离、纯化
多酚的去除：
在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β -巯基乙醇、 抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等 加入易与酚类结合的试剂：如PVP、PEG(聚乙二醇)，它 们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合
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样品破碎过程：动物源性的怎么破碎，植物的怎么破碎，破碎到什么程度，需要什么步骤和仪器，破碎过程中有什么注意事项
需要进一步购买的仪器：nanodrop，凝胶成像仪，ABI7500荧光定量PCR仪，电泳仪，电泳槽，.........（还有什么仪器需要补充）
负压，紫外，可安装排风
样品处理是实验基础和关键，样品混匀，研磨充分，样品之间放止交叉污染，器具一定处理干净
核酸提取室
全自动核酸提取仪，桌（带柜），超净工作台（垂直风），恒温混匀器，水浴锅，高速离心机，移液枪-（至少1000,200,100，10），NanoDroP，冰箱（各种DNA），
负压，紫外，安装排风
负压，紫外，可安装排风
可以将遗传分析仪在此
PCR产物分析室
毛细管电泳仪，凝胶成像系统（UVP），凝胶电泳仪器，电泳槽，倒胶，移液器（100,10），
负压，紫外，应安装排风
主要污染来源，单独实验服等。
分室（区）
设备仪器
压差（设置缓冲间）
注意事项
试剂储存和准备室（各种试剂的分装与配制）
超净工作台/UVP，带柜桌，移液器全套，冰箱（除模板之外的引物探针等）
设缓冲间/正压
此处试剂绝对不可以污染，移液器不能混用
样品处理室
实验桌（带柜），电子天平，液氮罐，研样器，组织冷冻研样器+配套适配器，冰箱，（研钵，剪刀，镊子，小药匙，酒精灯，托盘，均质袋），
提取手动自动结合，提取过程注意放止交叉污染，个人认为：如果有羊肉牛肉猪肉样品，又都检测猪牛羊的话，提取过程最好同一类肉一批；浓度质量测定重要数据
加样室
移液器至少10,超净工作台/UVP台/生物安全柜（垂直风），小离心机，
负压，可安装排风
模板单独在此添加，必须有工作台
PCR扩增室
梯度PCR仪，荧光定量PCR仪（必需ABI7500）遗传分析仪，小转子