产几丁质酶的筛选及活力测定

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一株产几丁质酶菌株的筛选鉴定与产酶条件优化

一株产几丁质酶菌株的筛选鉴定与产酶条件优化苗飞;孟阳;王悦;袁春营;崔青曼【摘要】几丁质酶在降解几丁质和生物防治上具有重要作用.采用平板筛选法从对虾养殖池塘底泥中筛选几丁质酶产生菌株,以培养时间、培养温度和胶体几丁质含量为自变量,响应面法优化该菌株的产酶条件,建立二次回归方程.试验结果表明,通过菌株的菌落形态、亚显微形态特征和16S rDNA序列同源性分析,确定该菌株为蜂房芽孢杆菌.3个因素对菌株产酶的影响依次为培养时间>培养温度>胶体几丁质含量.菌株的最佳产酶的条件为:培养基中胶体几丁质含量1.62%,培养温度40 ℃,培养时间72 h,在此条件下,菌株产生的几丁质酶活力为13.07 U/mL.该研究为筛选菌株的进一步利用提供科学依据.%Chitinase plays an important role in the degradation of chitin and biological control.A chitinase-producing strain was screened from prawn-farming pond sediment using plate screening method.The cul-ture temperature,culture time and the content of colloidal chitin as independent variables,the enzyme pro-duction condition of the strain was optimized using a response surface method,and quadratic regression e-quation was established.The results showed that the strain was determined as Paenibacillus alvei through colonymorphology,submicroscopic morphology and 16S rDNA sequence homology analysis.The influ-ence of three factors on the enzyme production of the strain was expressed as culture time>culture temper-ature>content of colloidal chitin.The maximal enzyme production was observed under conditions of col-loidal chitin content of 1.62% in culture medium,the temperature of 40 ℃,and the culturing time of 72 h,withchitinase activity of 13.07 U/mL.The findings provided scientific basis for further utilization of the screened strain.【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2018(037)002【总页数】6页(P221-226)【关键词】几丁质酶;蜂房芽孢杆菌;产酶条件;优化【作者】苗飞;孟阳;王悦;袁春营;崔青曼【作者单位】天津科技大学海洋与环境学院,天津市海洋资源与化学重点试验室,天津300457;天津科技大学海洋与环境学院,天津市海洋资源与化学重点试验室,天津300457;天津科技大学海洋与环境学院,天津市海洋资源与化学重点试验室,天津300457;天津科技大学海洋与环境学院,天津市海洋资源与化学重点试验室,天津300457;天津科技大学海洋与环境学院,天津市海洋资源与化学重点试验室,天津300457【正文语种】中文【中图分类】S917.1几丁质广泛存在于真菌、细菌、高等植物及甲壳动物等的外壳中，据估计自然界每年生物合成的几丁质约为1×1011t，是自然界中第二丰富的多聚糖[1-3]。

病原芽胞杆菌几丁质酶产生菌的筛选与活性鉴定

胶体几丁质的制备：将１丁质粉末投２．８Ｌ０几ｇ，ｏｍ浓盐酸中，搅拌２溶解后再加入ｌ预冷的９％乙１ｈＬ５
作者简介：蔡亚君（９０，女，博士，讲师，研究方向：应用微生物遗传改良１８一）
基金项目：武汉纺织大学校基金项目（０８２２０Ｚ４）．
第２４卷第３期
２１年０月０１６
武
汉
纺
织
大
学
学
报
Ｖｂ．４Ｎｏ－１２３Ｊｕｎ．２０１１
Ｊ０ＵＲＮＡＬＯＦＷＵＨＡＮＴＥＸＴＩＥＵＮＩＥＲＳＩＹＬＶＴ
病原芽胞杆菌几丁质酶产生菌的筛选与活性鉴定
几丁质（ｈｔｃｉｎ）为聚Ｂ一，４乙酰葡萄糖胺，是一种广泛存在于自然界的直链状高分子生物多聚体。ｉ１一
自然界每年生成的几丁质数以百亿吨计，是储量仅次于纤维素的天然聚合物。几丁质是许多真菌细胞壁的主要成分，也大量存在于昆虫或节肢动物的甲壳及昆虫的中肠中。几丁质酶（ｈｉａｅｃｉｎｓ）可催化水解几丁ｔ质的ｐ一，１４糖苷键生成Ｎ乙酰一一一Ｄ氨基葡萄糖（Ａ，广泛存在于微生物、植物、昆虫和脊椎动物中，ＮＧ）在环境保护和农业等方面有着广泛的应用前景。至今，芽胞杆菌属中已有环状芽胞杆菌（ａｉｕｃｅｌｎ）Ｂｃｌｓｉｕｓ，ｌｒａ蜡状芽胞杆菌（ｇｃｓｒｕ，简称Ｂ）云金芽胞杆菌（ｔｕｉｉｓｓｅ，苏ｈｒｇｅｉ，简称研）等相继发现产几丁质酶ｎｎ

几丁质酶高产菌的筛选及其产酶条件的优化研究_邓红梅

称取 10 g 几丁质粉末, 加入 40 mL 丙酮, 充分研磨至糊状。在低温下边研磨边慢慢加入浓盐酸 400 mL, 几分钟后, 用玻璃棉过滤, 在剧烈搅拌下将滤液缓缓加入到剧烈搅拌的 50% 乙醇( 至少是滤液的 5 BV 以上) 中, 使胶体几丁质沉淀析出, 离心收集胶体几丁质, 用蒸馏水冲洗几次, 置透析袋过夜, 避光保存在冰箱中。 1. 4 菌种筛选方法
基金项目: 茂名市重点科学计划资助项目( 201173) 收稿日期: 2009- 12- 28 作者简介: 邓红梅( 1965- ) , 女, 广东茂名人, 副教授, 从事生物技术方面的教学与研究。E- mail: dhm005@ 126. co m。
邓红梅等: 几丁质酶高产菌的筛选及其产酶条件的优化研究/ 2010 年第 5 期
of enzyme by strain X
由图 3 可知, 菌株 X 在 30~ 35 e 温度范围内产酶活性较高, 且较稳定。最适产酶温度在 30 e , 酶活达 1. 02 U # mL - 1, 在 40 e 时菌株产酶活性最低。表明菌株 X 较适宜在低温环境中产酶, 过高的温度会抑制其产酶活性。 2. 4 初始 pH 值对菌株 X 产酶的影响
1 实验
1. 1 土样及试剂 5 份土样采自茂名沿海地区。几丁质粉, 上海市生物制品有限公司; 其它试剂均
为国产分析纯。 1. 2 培养基
平板分离培养基( g # L- 1 ) : 胶体几丁质 5, K2 HPO4 0. 7, KH2 PO4 0. 3, MgSO4 # 7H2 O 0. 5, FeSO4 # 7H2 O
图 1 菌株 X 的菌落形态和透明圈( a) 、显微镜下的形态( b) 、芽孢在显微镜下的形态( c) Fig. 1 Colony shape and clear zones of strain X( a) , strain X observed by microscope( b) , spore of strain X observed by microscope( c)

几丁质酶的活性测定

几丁质酶活性的测定⑴几丁质酶几丁质是绝大多数真菌细胞壁的主要成份，而在植物中却不存在。

但高等植物普遍存在着几丁质酶，并可通过几丁质酶催化几丁质的水解，使植物具有抵御真菌侵染的能力（Shibuya and Minami, 2001）。

在正常情况下，高等植物的几丁质酶表达水平很低，而当植物体遭受到病原真菌、细菌和病毒侵染，机械创伤或乙烯处理时，其表达活性显著增强。

特别是在β-1,3-葡聚糖酶的协同作用下，可明显抑制真菌的生长（Sela-Buurlage et al., 1993）。

几丁质酶是植物体中与防御有关的一种次生水解酶，是植物广谱防御机制的一个成分（V an Loon and Van Strien, 1999），它能催化真菌细胞壁的重要成分——几丁质的水解，从而抑制真菌的生长增殖，提高植物的抗真菌能力。

而植物体中尚未发现几丁质酶作用的底物，所以，几丁质酶在植物体中诱导与积累，对于增强植物的抗病能力有重要作用。

几丁质酶主要水解几丁质多聚体β-1,4键，产生N-乙酰葡聚糖胺寡聚体，水解可以是外切作用也可以是内切作用。

⑵试剂的配制①胶状几丁质的制备称取粉末状几丁质（甲壳素，sigma）5.0 g，缓慢加入200 mL （≤4℃）预冷的浓HCl中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，待几丁质粉末均匀分散后，在水浴中轻度搅拌并缓慢加热至37 ℃混合物的粘度迅速增加，几分钟后粘度开始下降，混合物逐渐变得清亮。

当几丁质基本上溶解完毕时，用玻璃棉过滤，将滤液倒入2000 mL预冷（≤4℃）的蒸馏水中，搅拌，几分钟后几丁质沉淀，溶液变得混浊，30分钟后停止搅拌，将悬液置于冰箱(≤4℃)沉淀过夜。

倒掉上清，剩余部分用双层中性滤纸抽滤，沉淀用蒸馏水洗涤数次，待pH达到5以上时，加数滴1 N NaOH使溶液呈中性。

将上述中性沉淀物加到200 mL的蒸馏水中，剧烈搅拌重新悬浮，即为胶体几丁质溶液。

取该溶液5 mL, 105℃烘箱干燥至衡重，测定溶液几丁质的含量（胶体几丁质溶液的几丁质含量为: mg/mL），并将胶体几丁质溶液浓度稀释为1%。

高产几丁质酶菌株的筛选与CK1-3菌株几丁质酶的纯化与鉴定的开题报告

高产几丁质酶菌株的筛选与CK1-3菌株几丁质酶的纯化与鉴定的开题报告摘要：几丁质酶是一种特殊的酶，在海洋生态系统中具有重要的生物学功能，因此对于高效的几丁质酶菌株的筛选和几丁质酶的纯化与鉴定具有重要意义。

本文将实验室中先前筛选出的CK1-3菌株进行体外培养，通过测定其几丁质酶的活性进行筛选，同时优化产酶条件，最终得到高产几丁质酶的菌株。

接下来对于CK1-3菌株进行几丁质酶的纯化与鉴定，使用超滤、离子交换层析和凝胶过滤三个步骤纯化CK1-3菌株的几丁质酶，测定其纯化比和比活力，同时采用SDS-PAGE和质谱分析进行鉴定。

关键词：几丁质酶；菌株筛选；纯化；鉴定；CK1-31. 研究背景随着人们对生物化学及海洋生态系统的研究深入，几丁质酶作为一种具有右旋螺旋结构的酶，逐渐成为研究重点。

它是一种特殊的酶，在海洋生态系统中，它可以释放出被几丁质包裹的有机物，为微生物提供能量和营养素。

同时，几丁质酶也被广泛应用于食品工业、纺织业等领域。

因此，对于高效的几丁质酶菌株的筛选和几丁质酶的纯化与鉴定具有重要意义。

2. 研究目的本研究旨在筛选高产几丁质酶的菌株，同时对CK1-3菌株的几丁质酶进行纯化与鉴定。

3. 研究方法3.1 菌株的培养先前从海波中分离出的CK1-3菌株通过体外培养的方式进行増菌。

用含有几丁质的培养基进行培养，其成分为（每升）：几丁质4.0 g、柠檬酸0.5 g、胰蛋白酶1.0 g、NaCl 1.0 g、K2HPO4 0.5 g、MgSO4 0.25 g、FeSO4 0.002 g和微量元素液体1 mL。

3.2 几丁质酶的筛选对体外培养的CK1-3菌株进行几丁质酶的筛选，分别在不同的温度（20℃、25℃、30℃、35℃、40℃）、pH值（5.0、6.0、7.0、8.0、9.0）和培养时间（12、24、36、48、72 h）下测定几丁质酶的活性，最终确定其最佳产酶条件。

3.3 几丁质酶的纯化利用超滤、离子交换层析和凝胶过滤三个步骤对CK1-3菌株的几丁质酶进行纯化，测定纯化比和比活力。

产几丁质酶菌株的筛选及酶解产物鉴定

产几丁质酶菌株的筛选及酶解产物鉴定谭海刚;李静;赵祥颖【摘要】几丁质酶是一种专一性降解几丁质的水解酶.在工业上,几丁质酶可用于制备功能性甲壳低聚糖.结合平板透明圈法和摇瓶发酵测酶活力的方法,从土壤中筛选到一株产几丁质酶的菌株L012,酶活力为0.75 IU/mL;采用离子色谱法对菌株L012产几丁质酶的酶解产物进行分析,初步确定产物中有氨基葡萄糖、乙酰氨基葡萄糖以及聚合度小于10的寡糖.【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2013(021)002【总页数】3页(P65-67)【关键词】几丁质;几丁质酶;几丁寡糖【作者】谭海刚;李静;赵祥颖【作者单位】山东省食品发酵工程重点实验室,山东济南 250013【正文语种】中文【中图分类】TS201.3几丁质酶专一性降解几丁质，水解得到的几丁寡糖、几丁二糖或N－乙酰葡萄糖胺在食品及药物方面有广泛的用途。

几丁质酶(chitinase，EC3.4.1.14)的酶源相当丰富，自从 Benecke［1］首次报道分离到几丁质酶产生菌以来，发现微生物中细菌、放线菌、真菌、酵母及某些病毒都能够产生几丁质酶。

不同来源的微生物的酶系有所不同，酶学性质差异较大。

一般微生物产几丁质酶的酶系含有外切几丁质酶、内切几丁质酶和几丁质二糖酶等。

本文采用平板透明圈法和摇瓶发酵相结合的方法从土壤等样品中筛选到一株产几丁质酶的菌株，并用离子色谱法对该菌株酶解产物进行了分析、鉴定。

1 材料与方法1.1 土样采自山东沿海等地区的土样。

1.2 主要试剂胶体几丁质(Colloidal chitin):按 Sun Chul Kang［2］的方法制备，细粉几丁质:济南海得贝公司，DNS试剂:参照文献［3］，磷酸缓冲液:参照文献［4］，其他试剂均为分析纯。

1.3 培养基1.3.1 富集培养基细粉几丁质 2.5 g/l，MgSO4·7H2O 0.5 g/l，K2HPO40.7 g/l，KH2PO40.3 g/l，FeSO4·7H2O 0.01 g/l，pH 7.0～7.2，121 ℃灭菌 20 min。

产几丁质酶侧孢短芽孢杆菌的筛选及其酶学性质研究

产几丁质酶侧孢短芽孢杆菌的筛选及其酶学性质研究刘蒲临;程德勇;缪礼鸿【摘要】筛选并鉴定高产几丁质酶的芽孢杆菌菌株，旨在研究其酶学特性为高效利用几丁质酶资源奠定基础。

分离纯化产几丁质酶芽孢杆菌，将目的菌株的几丁质酶基因异源表达并纯化后研究其酶学参数。

考虑到菌株的生物安全性，选择侧孢短芽孢杆菌CDY64为进一步研究对象，将其几丁质酶基因表达于大肠杆菌BL21中。

酶学研究表明，纯化后的几丁质酶最适反应温度为60℃，在pH6.0-8.0范围内均表现出良好的活性；使用胶体几丁质作为底物时Km与kcat值分别为5.85μmol/L和29.27S-1。

结果表明，侧孢短芽孢杆菌CDY64所产几丁质酶在高温下具有良好的催化能力，在体外对多种植物病原真菌表现出了良好的拮抗作用。

%This study aims to screen and identify Bacillus strain producing high yield of chitinase and to study its enzymatic properties for laying groundwork in the efficient utilization of chitinase resources. Firstly,the Bacillus producing chitinase was isolated and purified,and then chitinase gene in the target strain was heterologously expressed,and enzymatic parameters of the purified chitinase were assayed at optimal conditions. Considering the bio-safety of the strain,Brevibacillus laterosporus CDY64 was selected as study object,and its chitinase(Chi72A) was expressed in Escherichia coli BL21(DE3). Enzymatic studies revealed that the purifiedChi72A by Ni-NTA affinity presented solid activity at pH range 6.0-8.0,and the optimal temperature of its activity was 60℃;and the Km and kcat ofChi72A were 5.85 μmol/L and 29.27 S-1,respectively while using colloidal chitin as substrate. In conclusion,Chi72A from CDY64 had high catalyticability at high temperature and exhibited high antifungal activity against many phytopathogenic fungi in vitro.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2016(032)006【总页数】7页(P174-180)【关键词】几丁质酶;侧孢短芽孢杆菌;酶学性质【作者】刘蒲临;程德勇;缪礼鸿【作者单位】武汉轻工大学生物与制药工程学院，武汉 430023;武汉轻工大学生物与制药工程学院，武汉 430023;武汉轻工大学生物与制药工程学院，武汉430023【正文语种】中文几丁质酶可以催化几丁质的水解，广泛存在于高等动植物、微生物以及某些病毒体内［1］。

一株产几丁质酶菌株的筛选及其产酶条件的研究_李静

第37卷第3期　2007年6月工业微生物Industrial M icrobiology　Vol .37No .3　Jun .2007山东省科技攻关计划项目(NO .031010115)。

作者简介:李静(1982～),女,硕士研究生。

一株产几丁质酶菌株的筛选及其产酶条件的研究＊李　静1,　刘建军2,3,　赵祥颖2(1.青岛农业大学食品科学与工程学院,青岛266109;2.山东省食品发酵工程重点实验室,济南250013;3.山东轻工业学院食品与生物工程学院,济南250100)摘　要采用平板透明圈法从土壤中分离筛选到一株产几丁质酶放线菌株L 12,用250mL 摇瓶发酵初筛和复筛,酶活力为0.63U m L 。

通过产酶条件实验,初步确定了该菌株较适产酶培养基和摇瓶发酵条件。

条件优化后,30℃、250m L 摇瓶发酵48h ,几丁质酶活力达到1.06U mL 。

关键词:几丁质;　几丁质酶;　筛选;　酶活力几丁质(Chitin )又称甲壳素、甲壳质,是以β-1,4-N -乙酰氨基葡萄糖为基本单位的直链多聚物,其含量在天然聚合物中仅次于纤维素居第二位[1,2]。

几丁质在医药、化工、食品、化妆品、印染、造纸、农业、环保等方面具有广泛的用途。

几丁质酶(ChitinaseEC3.3.1.14)[3]是一种专一性降解几丁质的酶类,可将几丁质完全水解为几丁单糖或几丁寡糖,直接被人体吸收利用,从而使几丁质用途更加广泛。

本研究从采集的40份土样中,以几丁质为唯一碳、氮源,采用平板透明圈法初筛,共挑取428株产生明显透明圈的菌株。

然后经摇瓶初筛、复筛,最终获得一株产几丁质酶活力较高的菌株放线菌L 12,并对其产酶条件进行了初步研究,本文报道了产酶菌株放线菌L 12的筛选过程和产酶条件研究的结果。

1　材料与方法1.1　土样采自山东沿海等地区的40份土样。

1.2　试剂胶体几丁质:按Sun Chul Kang [5]的方法制备;细粉几丁质购于济南海得贝公司。

快速、准确鉴别产几丁质酶菌株的新方法

快速、准确鉴别产几丁质酶菌株的新方法胡晓;张敏;刘彭强;邓秋蕾;舒凯【摘要】使用几丁质平板法筛选具有几丁质酶活性的细菌时,由于几丁质平板本身趋于透明,而降解环也为透明色,不易观察到明显的抑菌圈,故在筛选几丁质降解菌时,其观察结果受人为因素影响较大.本文首次使用刚果红染色的方法,对几丁质平板进行染色,降解环为浅红色,而未降解部分为深红色;结果表明,降解环的直径大小随着接种时间的延长而逐步增大,且降解环的大小可反映酶活大小.因此,此法可以直观、清晰、准确地对具有几丁质酶活性的菌株进行筛选,在相关菌株的筛选中具有较大的潜在应用价值.【期刊名称】《植物保护》【年(卷),期】2010(036)004【总页数】4页(P163-166)【关键词】几丁质分解菌;刚果红;鉴别培养基【作者】胡晓;张敏;刘彭强;邓秋蕾;舒凯【作者单位】四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014;四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014;四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014;四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014;四川农业大学农学院植物病理系,雅安625014【正文语种】中文【中图分类】Q93-31使用几丁质平板法筛选具有几丁质酶活性的微生物时，因几丁质平板本身为乳白趋于透明色，而降解环也为透明色，不易观察到明显的抑菌圈，故不易筛选出几丁质降解菌，而且其准确性往往受到研究人员的影响，不同观察者可能得出不同的结论。

1977年，Hankin和Anagnostakis首次发现，生长在含有纤维素刚果红的琼脂培养基上的纤维素降解菌的菌落周围可产生降解环［1］。

刚果红是一种染料，它可以与多糖物质形成红色复合物，但并不和降解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。

根据此原理，当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红－纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。

产几丁质酶菌株的筛选与鉴定及几丁质酶酶学性质研究的开题报告

产几丁质酶菌株的筛选与鉴定及几丁质酶酶学性质研究的开题报告标题：产几丁质酶菌株的筛选与鉴定及几丁质酶酶学性质研究一、论文简介：随着人们对生态环境的关注度不断提高，利用微生物降解环境污染物已经成为了一种重要的手段。

几丁质是海洋生物、昆虫等生物体中普遍存在的一种寡聚糖，具有材料的天然，广泛应用于生物材料、食品工业等领域。

几丁质酶是一种能够降解几丁质的酶，是利用几丁质资源的关键。

本文旨在从环境中筛选出一株具有高效几丁质酶产生能力的菌株，并对该酶的酶学性质进行初步研究，为几丁质酶产业化研究提供理论参考。

二、研究目的：1. 通过环境筛选、鉴定和比较，寻找一株优异的几丁质酶产生菌株。

2. 分离、纯化并表征出所筛选的几丁质酶的分子量、催化效能、热稳定性等酶学特性。

三、研究内容与方法：1. 采用实验室分离、培养等方法，从野外样品中筛选出几个具有几丁质酶生产能力的菌株，通过形态学、生理学和生化检测等手段进行鉴定和比较。

2. 对所筛选出菌株的几丁质酶进行分离、纯化、组分鉴定和物化特性等分析，包括所得几丁质酶的分子量、催化效能、pH和温度对催化活性的影响等酶学特性。

3. 对所筛选出菌株产生的几丁质酶进行产酶条件的优化和工艺参数的调整，最终以高活力和低成本的方式实现几丁质酶的产业化生产。

四、研究意义：本文的研究旨在寻求一种高效、环保、经济的几丁质资源化利用方式。

一方面，研究结果能够为工业化生产几丁质酶提供强有力的理论依据；另一方面，研究结果有望为几丁质生物降解技术的推广和应用提供新的途径，有助于缓解环境污染问题。

五、研究展望：几丁质酶作为一种生物酶，其产生机制、分离纯化和活性调整等问题仍然存在许多亟待解决的问题。

今后的研究可以进一步探讨几丁质酶的基因结构和修饰方式，寻求提高几丁质酶催化效率和抗污染能力等优化措施。

同时，也可以借助生化技术和生物工程技术，开创出更多有益的降解技术和应用领域。

产几丁质酶真菌菌株的筛选及产酶抑菌活性的检测

产几丁质酶真菌菌株的筛选及产酶抑菌活性的检测张宇;贺丹;周鑫;田庄;郭亮;王丽【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(036)001【摘要】目的:分离真菌菌株,筛选出几丁质酶高产菌株,检测其粗酶液对临床常见假丝酵母的抑菌作用,为抗真菌药物的开发提供研究基础.方法:利用刚果红几丁质平板法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法筛选出几丁质酶高产菌株,并用纸片法检测粗酶液的抑菌作用.结果:从环境中分离的47株真菌菌株中得到产几丁质酶菌株6株,其中高产菌2株(烟曲霉JLC 50134和木霉JLC 31235);JLC 50134粗酶液对白假丝酵母、热带假丝酵母的抑制作用强于JLC 31235,抑菌圈直径分别为4～5 cm和约2 cm;JLC 31235粗酶液对克柔假丝酵母、光滑假丝酵母的抑制作用强于JLC 50134,抑菌圈直径分别为约2 cm和1 cm.结论:烟曲霉JLC 50134和木霉JLC31235是几丁质酶高产菌株,两种粗酶液对临床常见假丝酵母有抑制作用.【总页数】4页(P67-70)【作者】张宇;贺丹;周鑫;田庄;郭亮;王丽【作者单位】吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021;吉林大学基础医学院病原生物学教研室,吉林长春,130021【正文语种】中文【中图分类】R379【相关文献】1.一株产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究 [J], 郑爱芳;魏和平;许远;芮辰飞;王枫;宋伟佳2.土壤产几丁质酶菌株的筛选鉴定及产酶条件 [J], 张荣奎;贺淹才;刘爱花;魏巍;李红然3.一株产几丁质酶菌株的筛选鉴定与产酶条件优化 [J], 苗飞;孟阳;王悦;袁春营;崔青曼4.产低温几丁质酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化 [J], 陈立功;吴家葳;张庆芳;迟乃玉;王晓辉5.产几丁质酶菌株GXUN-20的筛选、鉴定及其产酶条件优化 [J], 张奇;王一兵;申乃坤;姜明国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

几丁质酶高产菌的筛选及其产酶条件的优化研究

适产酶条件是：０Ｃ、Ｈ值７０蛋白胨１３￣ｐ．、Ｏｇ・Ｌ、～细粉几丁质１０ｇ・Ｌ。－。优化条件下的几丁质酶活力达１２・．５Ｕ
ｍＬ＿。。
关键词：丁质；丁质酶；芽孢杆菌属几几短中图分类号：１．Ｑ８４１文献标识码：Ａ文章编号：６２４５２１）５０６～Ｏ１７ —５２（０００－０２４
入到剧烈搅拌的５％乙醇（Ｏ至少是滤液的５Ｂ以上）Ｖ
存、繁殖的特殊的微生物群体，能通过分泌几丁质酶它
降解几丁质为几丁寡糖、丁二糖直至几丁单糖，接几直被人体吸收利用，而使几丁质用途更加广泛。茂名从
化，拟为 “ 渔业垃圾 ” 、等甲壳动物的外壳的再生虾蟹
利用提供理论基础。
１实验
１１ ± 样及试剂．
取产透明圈直径与菌落直径比最大的菌株纯化培养并保存待用。
按照常规细菌学方法Ｌ鉴定到属。３］１５产酶条件实验方法．
是一个海滨城市，、虾蟹资源非常丰富，、壳等废弃虾蟹
中，使胶体几丁质沉淀析出，离心收集胶体几丁质，用蒸
馏水冲洗几次，透析袋过夜，置避光保存在冰箱中。
１４菌种筛选方法．
物一直影响着茂名地区的生态环境。作者在此筛选了
一
株几丁质酶活力高的菌株并对其产酶条件进行优

产几丁质降解酶菌株的筛选及其产酶条件

１３４摇瓶筛选培养基（／）．．ｇＬ细扮几丁质ｌ，０蛋白胨５酵母膏５ｌ如０７，，＜１．，
ＫＨ２Ｏ４．，ＭｇＯ４Ｈ２．，ＦＳ ‘ Ｈ２Ｐ０３Ｓ７Ｏ０５ｅＯ４７Ｏ０．ｌ０，
ＺＳ０．１ｐｎＯ４ＯＨ７．０
或寡糖，使几丁质的用途更加广泛。
１３２平板分离培养基（／）．．ｇＬ胶体几丁质２５Ｏ０７．，ＫＨＰ．，ＫＨＰ．，Ｏ０３
ＭｇＯ７Ｏ．，ｅＯ ‘ Ｈ，００，Ｓ４Ｈ，０５ＦＳ７Ｏ．１琼脂１，Ｈ７０５ｐ．
ｏｔｌｕｔｒｄｕａｄｆｒｎａｉｎｃｎｉｏｓｗｅｅｉｖｓｉａｅ．ｄｒｈｐｉｌｏｄｔｎ，２ｔａｎｒｄｃｄｐｉｌｅｍｅｉｍｎｍｅｔｔｏｄｔｎｒｎｅｔｔｄＵｎｅｅｏｔｍａｃｕｅｏｉｇｔｍａｃｎｉｏｓＬｌｓｒｉｓｐｏｕｅｉｅｚｍｅａｉｈａ．６ｍＬ．ｎｙｓｈｇｓ１Ｕ／０
细粉几丁质２５．，ＭｇＯＨ，０５。ＯＳ４７Ｏ。，ＫＨＰ
０７．，ＫＨ２Ｏ０３ＦＳ４７Ｏ．１（）Ｏ３Ｐ４．，ｅＯ ‘Ｈ２００，ＮＨ４Ｓ４，２
ｐ７０～７２Ｈ．．
和的条件下将大分子的几丁质或壳聚糖降解成单糖
摘
要采用平板透明圈法从土壤中分离筛选到一株产几丁质降解酶菌株Ｌ酶活力为０６Ｕｍ。通过产酶条．３／Ｌ酶活力

由真菌产生的大分子昆虫几丁质酶抑制剂的筛选和活性鉴定

由真菌产生的大分子昆虫几丁质酶抑制剂的筛选和活性鉴定吴　霞　编译几丁质酶是昆虫蜕皮过程中的一个关键酶,人们一直努力尝试将几丁质酶抑制剂开发成为具有生物合理性的昆虫生长调节剂。

先前曾有文献报道阿洛氨菌素(allosamidin)或其他一些低活性化合物为几丁质酶抑制剂,但都未进入商业化使用阶段。

因此,科研人员在积极寻求开发新颖的昆虫几丁质酶抑制剂。

在前期研究中,日本Okayama大学的T eruhiko Nitoda等人研制出一种对斜纹夜蛾(Spodoptera litu2 ra)几丁质酶抑制活性的测试方法,可应用于昆虫几丁质酶抑制剂的快速、灵敏筛选。

使用该测试方法,他们对一系列真菌培养物进行了筛选。

试验菌株生长于静止培养基中,以充分利用它们产生不同次级代谢产物的能力。

本文主要报道了对776个真菌菌株的静止培养物的筛选结果,以及有5个活性菌株产生的昆虫几丁质酶抑制剂的鉴定。

1　材料和方法111　概要阿洛氨菌素由日本东京大学的S.Sakuda博士提供。

取自S.litura蛹的几丁质酶溶液,其制备方法按照文献指导进行。

胶体几丁质亦按文献方法通过几丁质粉(日本Osaka Wako纯化学工业株式会社生产)制备得到。

几丁质酶来源于灰色链霉菌(Streptomyces griseus),糖苷酶来源于角蝾螺(Turbo cornutus),链霉蛋白酶P分别从Sigma、日本东京Seikagaku和K aken化学公司购买。

其他所用化学品均可从市场采购。

112　真菌菌株的分离真菌菌株从土样或植株叶片开始分离。

每份土样被分成3份,各自通过下列3种处理方式加以选择性分离:(1)去除细菌(在40℃下加热24h),(2)诱导孢子萌发(在50%乙醇中浸泡15min),(3)去除孢子(滗析水悬浮液)。

经过处理后的土样制成无菌蒸馏水悬浮液,然后在下述4种不同的琼脂培养基的平板上涂皿,并于20℃下进行培养。

将植株叶片上切割成1cm左右见方,用90%乙醇进行表面灭菌处理70sec,随后用1%次氯酸钠处理5min,在无菌蒸留水中漂洗。

产几丁质酶酵母菌的筛选与鉴定

产几丁质酶酵母菌的筛选与鉴定惠丰立;冯金荣;杨柯金;文祯中【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2007(035)008【摘要】从番茄果实表面筛选到1株产几丁质酶酵母菌株CY-6,该菌株产生的几丁质酶对番茄镰刀菌果腐病菌(Fusarium oxysporum)有较强的抗菌活性并具有较广的抗菌谱.形态及生理生化特征测定结果表明:菌株CY-6与伊萨酵母属(Issatchenkia)中的陆生伊萨酵母(I.terricola)种的特征基本一致;测定了该菌株的26S rDNAD1/D2区域序列并根据26S rDNA构建了系统发育树;在系统发育树中,菌株CY-6与陆生伊萨酵母形成一个类群,序列同源性高达99.6%.因此,将菌株CY-6鉴定为陆生伊萨酵母.【总页数】3页(P66-67,70)【作者】惠丰立;冯金荣;杨柯金;文祯中【作者单位】南阳师范学院,南阳,473061;南阳师范学院,南阳,473061;南阳师范学院,南阳,473061;南阳师范学院,南阳,473061【正文语种】中文【中图分类】S476【相关文献】1.土壤产几丁质酶菌株的筛选鉴定及产酶条件 [J], 张荣奎;贺淹才;刘爱花;魏巍;李红然2.一株产几丁质酶菌株的筛选鉴定与产酶条件优化 [J], 苗飞;孟阳;王悦;袁春营;崔青曼3.产低温几丁质酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化 [J], 陈立功;吴家葳;张庆芳;迟乃玉;王晓辉4.产几丁质酶海洋细菌 Dyadobacter sp. CZW019的筛选、鉴定及酶学性质研究[J], 丁志雯;刘耀东;黄志发;程钰;杨光;侯晓月;刘姝;房耀维5.产几丁质酶菌株GXUN-20的筛选、鉴定及其产酶条件优化 [J], 张奇;王一兵;申乃坤;姜明国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

病原芽胞杆菌几丁质酶产生菌的筛选与活性鉴定

病原芽胞杆菌几丁质酶产生菌的筛选与活性鉴定蔡亚君;桂震;李锋;杨小俊【摘要】通过特异引物PCR方法和水解圈活性法对62株苏云金芽胞杆菌菌株、26株蜡状芽胞杆菌菌株及18株球形芽胞杆菌菌株进行了几丁质酶产生菌的筛选.所测苏云金芽胞杆菌中除4株野生型菌株外均为阳性结果,蜡状芽胞杆菌仅1株为阴性结果,球形芽胞杆菌全为阴性结果,且水解圈法观察结果与PCR检测结果一致.在此基础上,通过DNS比色法对几丁质酶产生菌株的几丁质酶比活力也进行了测定.对这些具有致病性的病原芽胞杆菌几丁质酶的研究对于研究其致病机理及对其进行遗传改良具有重要的理论和实际应用价值.【期刊名称】《武汉纺织大学学报》【年(卷),期】2011(024)003【总页数】4页(P58-61)【关键词】几丁质酶;苏云金芽胞杆菌;蜡状芽胞杆菌;球形芽胞杆菌;比活力;致病【作者】蔡亚君;桂震;李锋;杨小俊【作者单位】武汉纺织大学环境工程学院,湖北武汉430073;武汉纺织大学环境工程学院,湖北武汉430073;武汉纺织大学环境工程学院,湖北武汉430073;武汉纺织大学环境工程学院,湖北武汉430073【正文语种】中文【中图分类】Q89几丁质（chitin）为聚β-1，4-乙酰葡萄糖胺，是一种广泛存在于自然界的直链状高分子生物多聚体。

自然界每年生成的几丁质数以百亿吨计，是储量仅次于纤维素的天然聚合物。

几丁质是许多真菌细胞壁的主要成分，也大量存在于昆虫或节肢动物的甲壳及昆虫的中肠中。

几丁质酶（chitinase）可催化水解几丁质的β-1,4糖苷键生成N-乙酰-D-氨基葡萄糖（NAG），广泛存在于微生物、植物、昆虫和脊椎动物中，在环境保护和农业等方面有着广泛的应用前景。

至今，芽胞杆菌属中已有环状芽胞杆菌（Bacillus circulans），蜡状芽胞杆菌（B. circus，简称Bc），苏云金芽胞杆菌（B. thuringiensis，简称Bt）等相继发现产几丁质酶的菌株。

产几丁质酶的筛选及活力测定

产几丁质酶的筛选及活力测定一、实验材料1.菌种：白僵菌，或其他菌种及土壤采样等 (菌种接种于PDA斜面上，28℃，80％RH培养14 d后分别置于4℃和20℃备用。

)2.试剂：DNS试剂 :（称取3，5-二硝基水杨酸3．15 g，加水500 mL。

，搅拌5 s，水浴至45。

然后逐步加入100 mL 0．2g/mL的氢氧化钠溶液，同时不断搅拌。

直到溶液清澈透明(注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃)。

再逐步加入四水酒石酸钾钠91．0 g 苯酚2．5 g和无水亚硫酸钠2．5 g。

继续45"C水浴加热，同时补加水300 mL，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解。

停止加热，冷却至室温后，用水定容至1000 mL。

用烧结玻璃过滤器过滤，取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。

室温下存放7 d后可以使用。

)几丁质酶基础培养基(g／L)：葡萄糖5．09，蛋白胨5．09，KH2P04、KCI、MgS04·7H20各0．59，FeS04·2H20 0．1 g，pH 7．0。

几丁质酶诱导培养基(g／L)：蛋白胨5．09，KH2P04、KCI、MgS04·7H20各0．59，ZnS04·7H202 0．01 g，胶体几丁质10 ml，pH 7．0。

（胶体几丁质固体培养基。

g K2HPO4，gKH2PO4， g MgSO4·H2O， g FeSO4·7H2O， gZnSO4·7H2O 500 ml 1%胶体几丁质，500 ml 蒸馏水，15 g 琼脂，，121℃灭菌15 min，冷却至50℃左右倒平板）马铃薯培养基(PDA)；去皮的马铃薯200 g切块，沸水煮30 min，纱布过滤，20 g蔗糖，209琼脂，加热至全部溶解，定容至1 L。

二、筛选·1.初筛采用平板透明圈法。

用0．1 mL孢子悬液(1×107／mL)滴于几丁质平板的中央(每个样品重复3次)，28℃培养7d，其菌落周围有透明圈出现。

产几丁质酶芽孢杆菌的筛选鉴定和酶活力测定_顾真荣

上海农业学报2001,17(3):92～96　Acta Agriculturae Shanghai 文章编号:1000-3924(2001)03-92-05产几丁质酶芽孢杆菌的筛选鉴定和酶活力测定顾真荣　马承铸(上海市农业科学院植物保护研究所,上海201106)韩长安(上海市农业技术推广服务中心,上海201103) 摘　要　从103份采自中国各地的土样中分离得到了312株芽孢杆菌,用平板透圈法筛选到3株产几丁质酶菌株G 1、G 2和G3。

经鉴定,G1为短芽孢杆菌(Bacillus brevis );G2为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis );G3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )。

它们在几丁质平板上的透明圈直径以G1>G 3>G2为序,在以Schales '法测定壳聚糖酶活力时,其摇瓶发酵上清液的酶活力以G 3>G1>G2为序。

本文首次报道短芽孢杆菌产生几丁质酶和壳聚糖酶。

关键词　芽孢杆菌;几丁质酶;筛选;鉴定;测定中图分类号:Q 55;Q 939.124 文献标识码:A 几丁质又称甲壳素,是广泛分布于自然界的生物多聚物,每年都有上百亿吨的生物量产生,数量仅次于纤维素。

几丁质和几丁质酶的利用一直是生命科学中的重大课题,在环境保护、医学、化学和农业等方面具有重大的潜在应用价值[1,2]。

几丁质酶广泛存在于植物、动物和微生物中。

细菌的几丁质酶由于潜在的商业用途倍受人们关注,粘质沙雷氏菌(Serratia marc enscens )是人们长期来研究的热点[3]。

对环境和卫生方面安全的芽孢杆菌亦有较多的研究。

已报道能产几丁质酶的芽孢杆菌有环状芽孢杆菌(B .circulans )[4,5]、蜡状芽孢杆菌(B .cereus )[4]、地衣芽孢杆菌(B .licheniformis )[4]和枯草芽孢杆菌(B .subtilis )[4,6]。

几丁质酶高产菌的筛选及其产酶条件的优化研究

几丁质酶高产菌的筛选及其产酶条件的优化研究
邓红梅;毕方铖;叶炬斌;叶炼佳
【期刊名称】《化学与生物工程》
【年(卷),期】2010(27)5
【摘要】利用平板分离法,从土壤中分离出一株能产几丁质酶的细菌,经初步鉴定为短芽孢杆菌属(Brevibacillus shida.Agri).研究了菌种在不同温度、pH值、氮源、碳源下的产酶情况并进行了产酶条件优化.结果表明,此细菌的最适产酶条件是:30℃、pH值7.0、蛋白胨10 g·L-1、细粉几丁质10 g·L-1.优化条件下的几丁质酶活力达1.25 U·mL-1.
【总页数】4页(P62-65)
【作者】邓红梅;毕方铖;叶炬斌;叶炼佳
【作者单位】茂名学院化学与生命科学学院,广东,茂名,525000;茂名学院化学与生
命科学学院,广东,茂名,525000;茂名学院化学与生命科学学院,广东,茂名,525000;茂名学院化学与生命科学学院,广东,茂名,525000
【正文语种】中文
【中图分类】Q814.1
【相关文献】
1.哈茨木霉高产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究 [J], 王红梅;蒋立科;陶芳;魏
练平;岳永德
2.高产纤维素酶真菌的筛选及产酶条件优化研究 [J], 朱振;单淑芳;朱薇薇;吴海亮
3.一株几丁质酶产生菌的筛选及产酶条件优化 [J], 郝之奎;杨美玲;张自英;吴翰桂;廖祥儒
4.抗稻瘟病几丁质酶产生菌的筛选及产酶条件的研究 [J], 唐勇军;卢向阳;邹俊;田云
5.低温几丁质酶生产菌的筛选鉴定与产酶条件研究 [J], 王晓辉;张庆芳;迟乃玉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。