免疫学检测技术
免疫学实验方法
免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分，它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织，以及它们之间的相互作用。
这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面，对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。
下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。
一、ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。
该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合，再加入酶标记的二抗来进行标记，最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。
二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器，它利用激光照射细胞，通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布，对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。
三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法，通过电泳将待测蛋白分离，再将其转移到膜上，最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。
四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法，通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理，再使用特异性的抗体来标记待测蛋白，并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。
五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法，通过将待测抗体与蛋白结合，再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来，最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。
以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法，它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用，不仅在科研领域有重要应用，同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。
希望以上内容能够对您有所帮助。
医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
双抗体夹心法、间接法ELISA
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间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
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免疫荧光法
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2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
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II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
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3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
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（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
常用免疫学检验检测技术
要点一
总结词
要点二
详细描述
蛋白质分析的常用技术
免疫印迹技术是一种用于分离、检测和识别蛋白质的常用 技术。该技术通过将蛋白质混合物在凝胶上进行电泳分离 ，然后将其转移到膜上，再与特异性抗体结合，最后通过 显色反应检测目标蛋白质。免疫印迹技术具有高灵敏度、 高特异性和可同时检测多个蛋白质的特点，广泛应用于生 物学、医学和生物工程领域。
注意事项
由于放射性同位素具有放射性，操作过程中需要注意安全防护，避免对操作人员和环境造成污染。同 时，由于放射免疫分析需要使用放射性同位素标记的抗原，因此成本较高。
优缺点分析
优点
放射免疫分析具有较高的灵敏度和特异性， 可以用于痕量物质的定量检测；操作简便， 易于自动化；测量结果准确可靠。
缺点
由于使用放射性同位素，操作过程中存在安 全风险；成本较高，需要特殊仪器和实验室 条件；对于某些样品，可能存在交叉反应或 非特异性干扰。
化学发光免疫分析（CLIA）
总结词
快速、高灵敏度的定量检测技术
详细描述
化学发光免疫分析是一种基于化学发光反应 的免疫分析技术，通过测量化学发光反应过 程中释放的光子数量来检测抗原或抗体的浓 度。该技术具有快速、高灵敏度和低背景干 扰的优点，广泛应用于传染病、肿瘤标志物
和激素等生物分子检测领域。
免疫印迹技术（Western Blot）
05
其他常用免疫学检验检测技术
时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）
总结词
高灵敏度、高特异性的定量检测技术
详细描述
时间分辨荧光免疫分析是一种基于荧光能量共振转移的免疫分析技术，通过测量荧光标 记物的发射光谱来检测抗原或抗体的浓度。该技术具有高灵敏度、高特异性和低背景干
免疫学检测技术及应用
划痕法
细胞因子的检测技术
一、 生物学检测技术 二、 免疫学检测技术 三、分子生物学检测技术
依赖细胞株测定法 ELISA法
分子杂交、PCR 等检测mRNA
细胞因子检测的特点
• 样品含量低 •样品具有时效性 •生物效应特异性差
Figure 14-12
细胞因子的功能
Cell activation
／immunogold staining)
（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗
丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光 抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体 结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检 抗原的存在。
免疫荧光技术包括：
直接法
间接法
间接补体增强法
ELISA法： 直接法 间接法 双抗体夹心法(双位点法) 竞争法
ELISA
(三) 同位素标记技术(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay,
RIA) 是一种用放射性同位素分析抗原抗体反应 相结合方法。 优点：灵敏度高, 可检测0.001pg／mL
Direct and indirect immunofluorescence staining of membrane antigen (mAg).
（二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用 相结合的一种方法。
主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）
•3H-胸腺嘧啶核苷参入法（3H-TdR）: 间接观察DNA 合成含量。灵敏度高，具有放射性。 •四甲基偶氮唑盐法（MTT）: MTT商品名为噻唑蓝。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将外源性 MTT还原成蓝紫色结晶-甲瓒（formazan）, DMSO使 其溶解，酶标分析仪检测。简便，灵敏度高，稳定性 差。
免疫学检测技术(课堂PPT)
.
36
一、凝聚反应(Agglutination)
二、沉淀反应
1、溶液中的沉淀反应
2、凝胶扩散沉淀
3、免疫电泳Biblioteka 血清免疫电泳火箭电泳
对流免疫电泳
三、补体参与的反应
四、免疫标记的抗原抗体技术
酶联免疫吸附（ELISA）
.
37
一、凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合 反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整 的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在 一定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称 为凝集原，抗体称为凝集素。
. Equivalence – Lattice formatio6 n
抗原或抗体检测原理
.
7
• 免疫学（Immunology）：
是研究抗原性物质、免疫系统、免疫应 答的规律及免疫应答的调节的一门科学。
• 免疫的定义（Immunity）：免疫是机体识 别自我与非自我的过程。排除异己，维护 自身稳定的生理反应。
体细胞会因物理、化学和病毒等生物因素的影响，使
细胞发生癌变，形成肿瘤等，机体可识别、清除这些
细胞，这是免疫系统的第三个功能。当这一功能低下
或失调时，会导致肿瘤或癌. 症。
9
抗原 （Antigen）
抗原概念 凡能刺激机体产生特异性抗体和致敏淋巴细胞，
并能与相应抗体或致敏淋巴细胞在体内或体外发生 反应的物质。
亲缘关系越远，差异越大，抗原性越强。
自身抗原：自身组织发生异常变异、免疫功能紊乱、眼球晶体 蛋白、精子蛋白、甲状腺蛋白
2. 大分子胶体：一般在10 kD以上 。
3. 具有复杂的立体结构或空间构象.
如明胶分子量虽然为100 kD，但结构简单，免疫原性差。
免疫学检测技术基本原理
荧光免疫检测技术(FI)的基本原理
荧光免疫检测技术与FIA类似，但是不需要标记酶和底物，而是直接标记荧光染料，通过检测荧光信号 随时间变化的曲线来判断样品中免疫分子的存在和浓度。
无需酶标记
荧光免疫检测不需要使用 酶标记荧光素酶，避免了 潜在的酶和底物污染。
高通量检测
荧光免疫检测可以在低浓 度下完成快速检测，适用 于高通量和大规模的样品，可以 标记多种不同的免疫分子， 提高检测的多元性和特异 性。
放射免疫检测技术(RIA)的基本原理
放射免疫检测技术利用放射性标记的免疫分子来检测样品中目标免疫分子的存在和浓度。
1
放射性标记
将免疫分子与放射性元素标记如131I、125I等结合。
2
孵育和分离
将标记的免疫分子与待测样品反应孵育，通过分离获得实验的反应产物。
免疫学检测技术基本原理
免疫学检测技术是一种检测生物体内免疫分子的方法，应用广泛于临床诊断、 生命科学、农业、环境监测和食品安全等领域。
免疫学检测技术的定义和概述
免疫分子的来源
免疫分子包括抗体、补体和细 胞因子等，都是免疫系统特异 性抗原识别和应对的产物。
检测方法的基本原理
通过与特定抗原或抗体结合来 检测样品中目标免疫分子的存 在和浓度。
免疫学检测技术的应用
广泛应用于疾病诊断、药物开 发、生物学研究和疫苗制备等 领域，成为现代生物技术发展 的重要手段。
免疫学检测技术的常见方法
直接法
直接使用标记的抗体或抗原检测样品中的免 疫分子。
间接法
利用未标记的抗体与样品中的免疫分子结合， 再使用标记的二抗或蛋白A/G结合物检测。
竞争法
利用抗原或抗体与样品中的免疫分子竞争结 合，测定中目标免疫分子的含量。
医学免疫学第22章--免疫学检测技术
一、T细胞功能的检测
➢T细胞增殖试验 ➢T细胞分泌功能测定 ➢T细胞介导的细胞毒试验 ➢体内试验
（一）T淋巴细胞增殖试验
1. 原理：
•淋巴细胞
•刺激物
•DNA合成
•分化
•母细胞
•细胞变大 •细胞浆扩大 •空泡 •核仁明显 •核染色质疏松
• 凝集反应常用于溶血性疾病的诊断：
•+
•病人的RBC •体内anti-Rh
•+
•由于抗体多属于IgG，分子 量较小，抗体与红细胞间的 结合力不能克服细胞间的排 斥力，不出现凝集
•体外加 入抗人
IgG
•出现凝集现象， 叫直接库姆试验
•+
•正常人O型血 的Rh+的RBC
•患者血清内 的游离anti-Rh
第二节 检测抗原或抗体的体外试验
• 凝集反应 • 沉淀反应（中和反应） • 免疫标记技术：用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应 • 蛋白质芯片技术
一、凝集反应 (Agglutination)
• 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结 合、凝集的现象。
• 1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗 体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集 现象。又分为玻片法（定性试验）和试管 法（半定量试验）。
负电的疏水胶溶液，因静电作用而呈稳定的胶体状态。 3. 该技术可应用于免疫组化(光镜下检查)和免疫层析快速诊断。
• ⑥免疫印迹法-Western blotting
免疫印迹法（Immunoblotting）
• 将凝胶电泳与固相免疫测定结合，先把电泳分区 的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免 疫等技术测定。
临床分析中的免疫学检测技术
临床分析中的免疫学检测技术免疫学检测技术在临床分析中起着至关重要的作用。
它通过检测和分析免疫系统相关的指标，为医生提供了诊断和疾病监测的有力工具。
本文将介绍几种常见的免疫学检测技术，并探讨它们在临床分析中的应用。
一、酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)酶联免疫吸附试验是一种常见的免疫学检测技术。
它基于抗原-抗体的特异性反应，通过酶标记的抗体与待测物质结合，再通过底物的酶反应转变为可定量测量的光学信号。
在临床中，ELISA广泛应用于病原体检测、肿瘤标志物监测、自身免疫疾病诊断等领域。
例如，ELISA可以用于检测HIV抗体、乙肝病毒表面抗原等感染性疾病的诊断。
此外，它还可以用于监测肿瘤标志物如癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原(PSA)等以及自身免疫疾病的相关指标。
二、流式细胞术(Flow Cytometry)流式细胞术是一种高精度和高通量的免疫学检测技术。
它通过将细胞悬液经过单个细胞形成的窄流柱后，利用激光光源和多种激光解译系统对细胞进行多参数的定量分析。
在临床中，流式细胞术被广泛用于免疫表型分析、细胞凋亡检测以及免疫荧光染色分析等。
例如，流式细胞术可以用于检测白血病和淋巴瘤中的异常细胞、测定淋巴细胞亚群、检测细胞表面标记物等。
三、蛋白质微阵列技术(Protein Microarray)蛋白质微阵列技术是一种高通量的免疫学检测技术。
它通过将多种特异性抗体或抗原固定在基质上，与待测样品进行反应后，利用检测系统测量样品中多种免疫反应产物的定量和定性信息。
在临床中，蛋白质微阵列技术可以用于潜在致病因子的筛查、疾病标记物的发现以及蛋白质相互作用的研究。
例如，它可以用于检测某些癌症中的肿瘤抗原、检测病毒感染中产生的抗体以及筛选特定药物的作用靶点。
四、实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR)实时荧光定量PCR是一种敏感且高效的免疫学检测技术。
第十四章免疫学检测技术
将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗 原或抗体，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子
）激发下发射光子，通过自动发光分析仪测定光
子产量，可反映待检样品中抗体或抗原含量。 该法灵敏度高，常用于检测血清超微量活性 物质（甲状腺素等激素）。
５．免疫印迹法(immunoblotting)
该法又称Western印迹法，其结合凝胶电
免疫电泳原理图解
火箭电泳 （Rocket Electrophoresis)
火箭电泳也称单向电泳扩散免疫沉淀试验， 是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法。抗原 在含有定量抗体的琼脂中泳动，两者比例适宜时， 在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围 内，沉淀峰的高度与抗原含量成正比。此法的特点 是需时较短，故可用于快速沉淀标本中抗原的含量。
1．直接凝集（direct agglutination) ：
细菌或红细胞与相应抗体直接反应，可出现 细菌或红细胞凝集现象。
2．间接凝集（indirect or passive agglutination) ： 检测针对可溶性Ag的Ab 3．间接凝集抑制试验 (direct agglutination inhibition test) 4. 协同凝集试验（co-agglutination test）
用于检测特异性抗体。用已知抗原包被固相，加入
待检血清标本，再加酶标记的二抗，加底物观察显 色反应。
2）免疫细胞或免疫组化技术
应用酶标记的抗体与组织或细胞抗原发生反 应，结合形态学观察，对组织或细胞表面抗原 进行定性、定量、定位。
ICC
IHC
3．放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA)
5种成分，3个系统
反应分两步进行
第一步:反应系统与补体的作用
免疫学检测法汇总
免疫学检测法汇总免疫学检测法是现代医学中常用的一种检测方法，通过检测人体免疫系统产生的抗原-抗体反应来确定疾病的存在与否，以及疾病的类型和程度。
免疫学检测法广泛应用于临床诊断、流行病学调查、药物监测和研究等领域。
以下将对常用的免疫学检测法进行汇总。
1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA是一种常用的免疫学检测方法，利用酶标技术来检测抗原或抗体的存在。
ELISA分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接荧光ELISA等多种类型，适用于检测各种疾病，如感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等。
2.免疫磁珠技术：免疫磁珠技术是通过抗体与磁性颗粒结合，然后利用磁力分离的原理实现对抗原或抗体的检测。
该技术具有高灵敏度和高特异性的特点，常用于病原微生物的检测、蛋白质的分离等。
此外，免疫磁珠也可用于药物检测、生物分子的富集等。
3. 蛋白质印迹（Western blot）：蛋白质印迹是一种用于检测蛋白质的存在和表达水平的方法。
首先将蛋白质分离并转移到膜上，然后利用抗体与目标蛋白质结合，最后通过荧光标记或酶标记的二抗进行信号的检测。
该方法常用于疾病的诊断和研究，如肿瘤标记物的检测和鉴定。
4.免疫组织化学（IHC）：免疫组织化学是一种通过对组织切片中特定抗原的免疫反应进行染色来检测该抗原的存在和分布的方法。
该技术应用广泛，在病理学诊断中常用于确定肿瘤的类型和分级、鉴别不同组织类型等。
5.流式细胞术：流式细胞术是一种通过检测细胞表面或内部抗原的免疫反应来对细胞进行分类和分析的方法。
流式细胞术结合免疫标记物和激光技术可以实现对单个细胞的快速高通量检测，常用于免疫细胞亚群的检测、免疫细胞活性的评估等。
6.荧光免疫检测：荧光免疫检测利用荧光标记的抗体或荧光探针与靶分子结合来检测目标物的存在和表达水平。
该技术具有高灵敏度、高分辨率和多重检测的优势，常用于疾病的诊断和治疗监测。
除了上述常用的免疫学检测法外，还有ELISPOT（酶联免疫斑点法）、免疫电镜（Immuno-EM）等特殊的检测方法，用于对特殊细胞亚群或抗原的检测。
常用的临床免疫学检测技术【可编辑全文】
可编辑修改精选全文完整版常用的临床免疫学检测技术第一讲免疫浊度技术一、免疫浊度法基本原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
二、免疫比浊法的特点：1、自动化免疫分析稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高（CV<5%)，干扰因素少，结果判断更加客观、准确，也便于进行室内及室间质量控制。
2、自动化免疫分析快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。
3、自动化免疫分析能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
4、自动化免疫分析可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。
三、免疫浊度法分类（一）透射光免疫浊度法透射光免疫浊度法是个极简便的方法，测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减，读数以吸收光单位（A）或OD表示，这种A值反映了入射光和透射光的比率。
（二）散射比浊法散射比浊法应用越来越多，且有替代其他免疫定量法的趋势。
散射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的，当复合物较小时（<3*10）呈全透射，透射与散射相当。
当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射，在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量。
1、终点散射比浊法2、速率散射比浊法速率法的灵敏度与特异性都优于终点法，前者的灵敏度比后者高出3个数量级之多，但终点法稳定性好。
所谓速率，是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量（不是积累数），当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表抗原的量。
速率散射比浊法有三大特点：1、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试；2、比较准确，因其测定形成速率，抗原多，速率快；3、节省试剂。
免疫学检测技术
Ab
Ab
双向免疫扩散
Ag1 Ag2
Ag3
Ag4
Ab
鉴定多种抗原是完全相同、 部分相同或完全不同
沉淀反应—免疫电泳
存在于不同区域 旳抗原与抗体结 合，在百分比合 适处形成沉淀弧。 沉淀弧旳数量、 位置和形状与原 则品相对比，可 分析样品旳成份 及其性质。
第二节 免疫组织化学检测技术
抗原＋抗体（特异性）＋酶标识抗体，经过酶与 底物作用生成有色反应物，定位组织或细胞内抗 原旳一门技术。 免疫组织化学：用带标识物旳抗体或抗原在组织细 胞原位经过抗原抗体反应或组织化学反应，对相 应抗或抗体进行定性、定量、定位测定旳技术。
d) 微粒捕获酶免疫分析技术
将已知特异性抗体致敏旳
免疫微粒与生物素、亲和
b）
素、酶相结合，最终酶作
用于荧光底物发光，经过
检测荧光强度判断未知抗
原旳含量。
e) 免疫组化技术
定位、定性、定量检测
②免疫荧光技术
海马细胞
微管蛋白
绿色(胞体、树突)
轴突终末蛋白
红色(突触)
培养旳成纤维细胞
微管呈绿色
核呈蓝色
+Y
体外加入 抗人IgG
Y
Y
Y
Y
出现凝集现象， 叫间接库姆试验
2.沉淀反应
毒素、组织浸液及血清中旳蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见旳沉 淀物，称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，也可在半固体琼脂凝胶中进行。
单向免疫扩散 Ab in gel
用于拟定 抗原浓度
Ag
Ag
Ag
Ag
免疫比浊
过量Ab Ab
免疫学检测技术就是利用抗原和抗体高 度特异性结合旳原理和措施，检测分 析各样品中旳目旳物质，以监控物品 质量、检测机体免疫机能和诊疗某些 疾病旳体外检测措施。
免疫学检测技术的基本原理及其应用
免疫学检测技术的基本原理及其应用免疫学检测技术是一种通过测定机体中的抗体或抗原来进行诊断、监测或研究的检测方法。
其基本原理是利用人体免疫系统的特性，通过抗原与抗体的特异性结合来检测和定量分析抗原或抗体的存在与水平。
下面将详细介绍免疫学检测技术的基本原理及其主要应用。
一、免疫学检测技术的基本原理1.直接免疫检测方法：直接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体标记物直接反应，利用标记物发出的信号来检测目标物质。
常用的标记物有放射性同位素、荧光物质、酶和金等。
2.间接免疫检测方法：间接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体反应后，再经过第二抗体与标记物结合的方式来检测目标物质。
这种方法主要应用于寻找含有多重抗原决定簇的抗原。
二、免疫学检测技术的主要应用1.临床应用：免疫学检测技术在临床上应用广泛，例如用于检测病毒、细菌、寄生虫等病原体的感染，常见的如乙肝、艾滋病、流感等病毒的检测。
此外，免疫学检测技术还可用于检测肿瘤标志物、自身免疫性疾病、免疫功能检测等。
2.生物制药与生物工程：免疫学检测技术在生物制药与生物工程中有着重要应用。
例如，通过免疫学检测技术来检测和定量分析生物制药产品中的杂质和残留物，确保产品质量和安全性。
另外，免疫学检测技术还可用于基因工程草甘膦抗性作物的筛选和鉴定。
3.食品安全监测：免疫学检测技术在食品安全监测中起到重要作用。
通过免疫学检测技术可以检测食品中的有害物质或者过敏原，如重金属、农药、酒精、过敏原等，确保食品的质量和安全。
4.动物疫病监测：免疫学检测技术在兽医领域有着广泛应用。
例如，可以通过免疫学检测技术来检测动物体内的病原体感染，如猪瘟、狂犬病、禽流感等，及时采取措施进行防治。
5.环境监测：免疫学检测技术还可用于环境污染物的监测。
例如，通过检测水体、大气中的有害物质，判断环境中的污染程度和对人体的危害。
总结起来，免疫学检测技术基于抗原与抗体的特异性结合反应，可以应用于临床诊断、药物开发、食品安全监测、动物疫病监测和环境监测等多个领域。
免疫学检测技术及应用概述
免疫学检测技术及应用概述免疫学检测技术的原理是利用机体产生的特异性抗体与抗原之间的特异性结合反应。
当机体感染病原体或注射外源性抗原后，免疫系统将识别并生成相应的抗体。
免疫学检测技术通过将已知的抗原与待测物进行结合，利用特异性抗体识别和测定待测物的存在与含量。
常见的免疫学检测技术包括免疫荧光、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫分析法（RIA）、免疫电泳、免疫印迹等。
其中，免疫荧光是一种通过将荧光标记的抗体与待检测物结合后，利用荧光显微镜观察来检测抗原或抗体的存在。
ELISA是一种通过将待检测物与酶标记的抗体结合，再利用底物与酶反应来产生颜色变化，通过光密度计读取颜色变化程度来测定待检测物的含量。
RIA则是通过将放射性同位素标记的抗体与待检测物结合，再通过放射性测定来确定待测物的含量。
免疫学检测技术在临床诊断中被广泛应用。
例如，通过检测病毒或细菌感染所产生的特异性抗体，可以确定患者是否感染此病原体。
免疫学检测还广泛用于肿瘤标志物的检测，根据肿瘤细胞产生的特异性抗原来判断肿瘤的存在与发展程度。
此外，免疫学检测还可用于血型鉴定、妊娠检测、自身免疫性疾病等多个方面的诊断。
免疫学检测技术在生物学研究中也发挥着重要作用。
例如，在分子生物学研究中，通过检测特定的抗体可以确定蛋白质的表达和定位，从而理解其功能。
免疫学检测还可以用于研究免疫系统的功能和异常情况，为疾病的治疗和预防提供参考。
在药物研发中，免疫学检测技术可以用于药物的安全性和有效性评估。
例如，通过检测特定抗体的产生，可以评估疫苗的免疫效果。
免疫学检测技术还可以用于药物代谢和药物动力学研究，为药物的合理应用提供依据。
总之，免疫学检测技术是一项重要的分析和检测技术，广泛应用于临床诊断、生物学研究和药物研发等领域。
随着技术的不断发展，免疫学检测技术将继续发挥其在疾病诊断、药物研发和生物学研究中的重要作用。
免疫学实验技术
免疫学实验技术
免疫学实验技术是一种用于研究和分析免疫系统的实验方法。
它涉及到各种技术和手段，用于检测、分析和研究免疫细胞、免疫分子以及免疫反应。
其中一些常见的免疫学实验技术包括：
1. 流式细胞术：这是一种用于对单个细胞进行高速分析和分选的技术。
它可以用于检测细胞表面标志物、细胞内蛋白质、细胞功能等。
2. 免疫组织化学：该技术用于检测组织样本中的特定抗原或蛋白质。
通过使用特异性抗体与组织中的目标抗原结合，然后通过显色或荧光染料进行可视化。
3. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：这是一种常用的检测体液中特定抗体或抗原的技术。
ELISA 利用抗体与抗原的特异性结合，并通过酶催化的显色反应来定量检测目标分子。
4. Western blotting：该技术用于检测蛋白质样本中的特定抗原。
它通过电泳分离蛋白质，然后将其转移到膜上，再使用特异性抗体进行检测。
5. 免疫沉淀：这是一种用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术。
通过使用特异性抗体捕获目标蛋白质，然后通过沉淀和分析来确定与其相互作用的其他蛋白质。
6. 细胞培养和功能分析：免疫学实验常涉及细胞培养，如淋巴细胞的激活、增殖和功能测定，以研究免疫细胞的行为和应答。
这些技术在免疫学研究、疾病诊断、药物开发等领域都有广泛的应用。
随着技术的不断发展，新的免疫学实验技术也在不断涌现，为深入了解免疫系统的功能和机制提供了更多的手段和工具。
检验科免疫学检测技术解析
检验科免疫学检测技术解析免疫学是生物医学领域中重要的研究方向之一，它研究免疫系统的结构、功能以及与疾病之间的关系。
而免疫学检测技术就是通过检测人体免疫系统产生的抗体或抗原来诊断疾病、评估免疫状态、监测治疗效果等。
在临床诊断中，免疫学检测技术广泛应用于疾病的早期诊断、治疗监测和预后评估等方面，具有迅速、准确、灵敏等优势。
1. 免疫学检测技术的分类免疫学检测技术可以根据检测的目标分为两大类：体外诊断和体内诊断。
体外诊断主要是通过分析体液中的免疫标志物，如血清、尿液、唾液等来进行疾病的诊断。
而体内诊断则是通过组织标本中的免疫标志物来进行诊断，如组织切片、细胞标本等。
2. 免疫学检测技术的原理免疫学检测技术的原理主要包括免疫试剂、抗原-抗体相互作用和信号检测。
免疫试剂是指用于检测的试剂，包括抗原、抗体、底物等。
抗原-抗体相互作用是指在免疫学检测中，抗原与抗体发生特异性结合反应，形成免疫复合物。
信号检测是指利用特定的方法来检测免疫复合物的存在与数量，如荧光素酶标记法、放射免疫法等。
3. 免疫学检测技术的应用免疫学检测技术在临床诊断中有广泛的应用。
其中，最常见的应用之一是疾病的早期诊断。
例如，通过检测HIV抗体可以诊断艾滋病，通过检测乙肝病毒表面抗原可以诊断乙肝等。
此外，免疫学检测技术还可以用于评估免疫状态。
免疫系统的功能状态对于人体的健康至关重要，通过检测免疫相关指标可以判断免疫系统的活性和免疫功能的强弱。
同时，免疫学检测技术还可以用于监测治疗效果。
在治疗某些疾病过程中，通过监测特定的免疫指标可以了解治疗效果和病情变化情况。
4. 免疫学检测技术的优势和局限免疫学检测技术具有许多优势，首先它具有高度的特异性，可以特异性地识别和定量分析抗原或抗体。
其次，免疫学检测技术具有高灵敏度，可以检测到非常低浓度的物质。
此外，免疫学检测技术还具有快速、简单、可靠等特点。
然而，免疫学检测技术也存在一些局限性，例如对操作人员技术要求较高，检测结果可能受到其他因素的干扰等。
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2. 细胞毒活性测定法 许多细胞因子 (TNF) 针对转化的细 胞及病毒感染的细胞具有溶细胞或抑制 细胞生长的活性。
3.抗病毒活性测定法 常用于检测抗病毒活性的细胞株有 WISH,Hep2/c,L929,A549 和 MDBK 等 。 其 中 WISH和Hep2/c细胞株用以检测人干扰素 ,L929 细胞株用于检测小鼠干扰素 ,Ratec 细胞株用于 检测大鼠干扰素 , 而 MDBK 细胞株则可用于检 测多种族的IFN-α和IFN-γ。 常用于攻击细胞的病毒有滤泡性口炎病毒 (VSV) 、鼠脑心肌炎病毒 (EMCV) 以及 Sindbis virus等病毒。 检测抗病毒活性的方法:测定细胞因子抑 制病毒的致细胞病变效应(CPE)、抑制病毒蚀 斑形成或抑制病毒的产量等。
(一)细胞因子基因组DNA或mRNA的检测 1. Northern杂交分析
2. 斑点杂交法 3. 原位杂交法 4. PCR扩增产物杂交分析 是将细胞因子的 mRNA 经过逆转录为 cDNA ，用特异性细胞因 子引物进行PCR扩增，通过Southern blot后， 再用标记探针检测特异细胞因子 DNA 的水平。 5．Southern印迹杂交 6. 斑点及狭缝印迹杂交: 将DNA变性后直接 点样于硝酸纤维膜上再进行杂交 7. 细胞因子mRNA表达的测定还可采用 RT-PCR、原位杂交与原位PCR,RNA半寿期 的检测,进行中的转录分析等。
(4) 巨噬细胞细胞毒测定 : 通常取小鼠腹腔巨
噬细胞，以 - 干扰素为激活剂使其活化，作 为效应细胞。用 125I-UdR 标记的 DBA/2 小鼠 肥大细胞瘤P815作为靶细胞。 (3)巨噬细胞吞噬功能测定：中药斑蝥酒精浸 液敷贴法诱发无菌性皮炎，从皮肤水泡渗出 液中收集巨噬细胞，在体外进行鸡红细胞吞 噬试验，计算吞噬率和吞噬指数，作为判断 巨噬细胞吞噬功能的指标。
1. 促进细胞增殖和增殖抑制法 * 多种 IL 、表皮生长因子、转化生长因子 α 、 神经生长因子、血小板衍生生长因子、成纤维 细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子 *各种CSF作用于造血系统的不同细胞,可 促进其增殖及在半固体琼脂凝胶系统中克隆培 养骨髓细胞的集落形成,故可采用集落形成试验 研究CSF的水平 *常用的检测细胞增殖的方法有3H-TdR掺 入法、比色法、染色法和直接计数法等。其中 测定细胞代谢酶反应细胞增殖数的比色法包括 MTT、XTT、MTS和NAG等方法。
根据细胞因子对特定的生物学活性 , 应用 相应的指示系统 ,同时与标准品对比测定 ,从而 得知样品中细胞因子的活性水平 , 一般以活性 单位(U/ml)表示。 靶细胞可直接从组织中分离 , 如骨髓细胞的 集落形成试验和胸腺细胞(脾细胞)的增殖试验, 或用体外培养的依赖细胞因子才能生长的细胞 因子依赖株及对细胞因子杀伤敏感的细胞作为 靶细胞。
三、免疫细胞的检测
对机体参与免疫应答的细胞进行鉴定,计数 及功能测定 (一)细胞计数 1. 荧光抗体染色 2. 免疫酶染色技术: *ABC法 *APAAP法 3. 免疫金银染色法(IGSS) 4．免疫细胞化学法 5．四聚体法 6．TCR链测定
(二)免疫细胞功能的测定 1. T细胞功能测定：肿瘤，病毒感染，免疫
(二)BCR及TCR克隆性基因重排分析 1．Southern印迹杂交法：仅适用于科研，
而不适用于临床诊断。 2. PCR扩增技术:正常多克隆淋巴细胞群 DNA的扩增产物含有不同长度的片段，电泳 检查呈现弥漫涂片状结构或多条带。而单克 隆性基因重排经 PCR扩增后，产生明显相同 长度的片段，电泳呈现单一紧密折带状结构 *应用 PCR 扩增技术进行基因诊断具有 特异、敏感 (1/104~1/105 克隆性细胞 ) 、快速 (24h可完成)等优点。 *用于恶性淋巴瘤和白血病等的临床诊断 以及白血病治疗后微小残留病灶的检测。
五、粘附分子的检测
某些粘附分子除表达于细胞膜表面外， 还以可溶性形式存在于体液中。粘附分 子的检测方法目前大多采用免疫学技术 检查其在细胞膜上的分布和测定某些样 品中的含量。
六、免疫相关基因分析
* 包括各种类型的杂交技术，如转印杂交、斑
点杂交、原位杂交等以及PCR技术等。 杂交技术主要工具是核酸探针，它是指一段用 放射性核素或其他标记物 ( 生物素、荧光素、 地高辛等 ) 标记，并与目的基因互补的 DNA 片 段或单链 DNA、 RNA。分为 cDNA 探针、寡核 苷酸探针、基因组DNA探针及RNA探针等。 * 核酸探针技术的操作主要包括：①质粒 DNA 的提取；②靶 DNA 片段的分离；③靶 DNA 片 段的标记；④待测样品mRNA的提取；⑤标记 cDNA 探针与待测样品进行疫标记技术
(一)免疫荧光技术
(二)放射免疫分析法
4.趋化活性测定法 多种细胞因子具有趋化活性，分别能诱 导中性粒细胞、单核/巨噬细胞和淋巴细胞定 向迁移 趋化因子诱导细胞移动的方式包括趋化 性和化学增活现象。 趋化性 (chemotaxis) 是指诱导细胞向趋化 因子化学浓度高的方向作定向移动 ,可采用琼 脂糖和微孔小室趋化试验测定细胞因子的趋 化活性； 化学增活现象(chemokinesis)是指增强 细胞的随机运动,可采用琼脂糖小滴化学动力 学试验检测。
(4)化学发光法
(5)流式细胞术：应用FCM检测NK细胞活性是
根据PI染料排斥法。PI渗入死亡细胞内与DNA 和RNA结合，在488nm波长激发下产生绿色荧 光。此法既可以测定单个细胞毒活性，也可以 用于总细胞毒活性试验。 *还可利用荧光染料法,细胞光扫描法，双标记 细胞毒法测定细胞毒性细胞的杀伤效应。
(五)细胞内细胞因子的检测
采用 FCM 免疫荧光技术可从单细胞水 平检测不同细胞亚群中的细胞因子 ,用两 种标记的荧光抗体可在一种细胞内同时 测定两种不同的细胞因子。
细胞因子受体检测的基本技术
细胞因子的广泛生物学活性是通过与 各自相应的受体结合而发挥的。因此细 胞因子受体的检测与细胞因子检测一样， 已成为基础理论和临床免疫学研究的一 个重要内容。
(三)HLA基因分型技术
1 ． 序 列 特 异 性 寡 核 苷 酸 探 针 PCR(PCRSSOP) 或 PCR-ASO:PCR-SSOP是目前应用最多 的一种简单、快速而又精确的HLA-Ⅱ类抗原分 型方法，能鉴定所有已知序列的 HLA-DR、DQ、 DP等位基因，精确地分析DNA的多态性。 2．限制性片段长度多态性 (PCR-RFLP)技术： 此项技术特别适用于个别标本和小样本的检测。 3 ．单链构象多态性 PCR （ PCR-SSCP ）：藉 此可鉴别编码HLA-Ⅱ类抗原基因的多态性。 应用 PCR-SSCP 可以直接比较供、受体之间 HLA-Ⅱ类基因是否完全一致，且可精确到 12 个碱基之差，具有相对简捷而精确的特点。在 异基因骨髓移植的配型中已初步应用于临床。
免疫学检测与免疫学技术
一、抗原抗体的检测技术 二、免疫细胞的检测 三、细胞因子的检测 四、免疫相关基因分析 五、免疫标记技术 六、免疫PCR(IM-PCR)技术 七、杂交瘤技术与T细胞克隆技术 八、新型抗体的制备技术 九、抗原的制备技术
一、概述 免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列 测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因 子的实验手段及分子生物学技术在免疫学研究 中的应用。 免疫学技术的应用极为广泛,疾病的诊断、 疗效评价及理论研究等。 二、抗原抗体的检测技术 * 根据反应的基本原理与表现主要分为凝集 反应、沉淀反应和补体参与的各种反应 *根据抗原抗体反应设计的试验还有标记抗 原(或抗体)检测相应物质的标记技术。
四、细胞因子的检测
（一）免疫学检测法
免疫学检测的基本原理是将细胞因子作 为抗原进行定量检测。如免疫斑点法、 ELISA 法、 RIA 法和免疫印迹法等均已用于 细胞因子的检测。某些细胞因子含量甚微的 样品(如脑脊液)可用免疫聚合酶链反应 (immuno-PCR)进行检测。
（二）生物学测定法
缺陷，自身免疫病等 (1)细胞增殖(转化)试验：可分为非特异性丝 裂原和特异性抗原两类。 *丝裂原主要有PHA、Con A和PWM； * 抗原刺激物有破伤风类毒素、 PPD 和白色 念珠菌等； *同种MHC及抗CD3单抗等 *肿瘤细胞-自体淋巴细胞混合培养 (2)T细胞介导的细胞毒试验：CTL (3)分泌功能检测 (4)T细胞功能的体内检测法 *接触性超敏反应*移植物抗宿主反应
4．吞噬细胞功能测定 (1) 中性粒细胞趋化功能测定：一般采用滤膜渗 透法(Boyden小室法)或琼脂糖平板法。 (2)中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定 1)显微镜检法 2)NBT 试验：此项试验是测定中性粒细胞吞噬、 杀菌功能的一种简易方法。 3) 化学发光测定法：中性粒细胞在吞噬过程中 出现呼吸爆发 ,产生活性氧代谢产物。此类活性 氧化基团与细胞内杀菌作用密切相关，同时又 能激发细胞内某些物质产生化学发光。
(三)分子生物学测定法
RNA印迹法、核酸酶保护分析、原 位杂交、PCR和Real Time PCR等。亦可 通过检测细胞内细胞因子的基因组成或 mRNA量，推算出细胞因子的合成量。
(四)单个细胞产生细胞因子测定法
常用的方法有反向溶血空斑试验 (RHPA)和反向ELISA斑点试验 (1) 反向溶血空斑试验 (RHPA):RHPA 是一种体外检测抗体分泌细胞的试验 , 亦 可用于检测细胞因子。 (2) 酶联免疫斑点试验 (ELISPOT): 所 用的包被抗体与酶标抗体应分别针对细 胞因子的不同抗原决定簇
4 ．序列特异性引物 PCR 技术 (PCR-SSP) ：该
法操作简单、快速、实验结果容易判断，杂合 子也很易检出。不足之处在于，为检出所有的 等位基因必须用多个引物进行扩增。 5．指纹图谱 (PCR-fingerprinting)技术|：进 行 HLA- 基因分型鉴定时，将供、受体的 DNA 扩增产物混合，电泳后得出一指纹图，再与二 者各自的PCR指纹图谱进行比较，从中选择出 指纹图一致的供、受体进行移植。 *PCR 指纹图谱在选择非亲缘关系的供、受体 进行骨髓和器官移植配型时，可以节省大量时 间。 6. SNP(单个核苷酸多态性)分析 (四)补体基因分析 (五)抗体基因分析 (六)细胞膜分子基因分析