耳聋基因检测 - 2

卫生部
2010年12月颁布《新生儿 听力筛查技术规范（2010 版）》修订版，旨在全国范 围内全面系统的开展新生儿 听力筛查。
随着新生儿听力筛查工作的广泛开展和临床经验的积累，逐 渐发现在新生儿听力筛查中存在局限或缺陷，使得在普遍的 新生儿听力筛查中联合耳聋基因筛查成为可能。
3
耳聋筛查的意义
新生儿筛查方案
3
耳聋筛查的意义
天津新生儿联合筛查数据
物理听力 筛查
通过
未通过
耳聋基因筛查
通过
52834例 (90.47%)
2248例 (3.85%)
未通过
3056例 (5.24%)
259例 (0.44%)
结论： 天津58397例新生儿筛查的结果表明，仅通过新生儿物 理听力筛查，新生儿迟发性耳聋的漏检率高达5.24%。
数据来源：韩明昱 等,中华耳科学杂志,2011
3
耳聋筛查的意义
耳聋基因筛查是降低耳聋出生缺陷的 最有效的手段
新生儿筛查耳聋基因，耳聋早发现早诊断早干预 产前筛查耳聋基因，有效评估生育聋儿风险 高危人群筛查耳聋基因，显著降低后代耳聋风险
4
耳聋基因诊断的方法
熔解曲线法
芯片法
ARMS-PCR法
SLC26A4
• 先天或后天中度以上感音神经性耳聋，临 床主要表现为大前庭水管综合征 • 指导并明确患儿的日常行为及注意事项
12S rRNA
• 氨基糖苷类药物引起的感音神经性耳聋 • 避免使用耳毒性药物，并对其母系成员具 有预防作用
3
耳聋筛查的意义
耳聋基因检测的意义
• 节省财政开支 • 提高出生缺陷 防治水平 • 推进计生、卫 生服务水平
PCR导流杂交法
12SrRNA：1494C>T、1555A>G；
检测位点少 （9个）
4
耳聋基因诊断的方法
公司 中生北控
市场上的耳聋产品
产品名称
检测位点
四项耳聋基因 检测试剂盒
GJB2:235delC； SLC26A4：IVS7-2A>G； 12S rRNA：1494C>T、1555A>G；
检测方法
遗传性耳聋基因检测
目录
1
耳聋概况
2
常见的致聋基因及位点
3
耳聋筛查的意义
4
耳聋基因诊断的方法
1
耳聋概况
2780 万
根据第二次全国残疾人抽样调查报告，我国听力语言 残疾者多达2780万，居各类残疾之首。
80万
在听力语言残疾人群中，0～6岁听力障碍儿童有80万， 每年新增迟发性、药物性耳聋患儿3~5万。
耳聋 筛查
家庭
• 开展耳聋基因 的流行病学调查 • 提高迟发性和 药物性耳聋个体 的诊断效率，减 少医院漏检率
• 婚育指导，实现优生优育 • 早发现、早诊断、早干预，避免 “因聋致哑”
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耳聋筛查的意义
耳聋基因检测的应用
孕前筛查
产前筛查
新生儿筛查
听障诊治
3
耳聋筛查的意义
新生儿听力筛查政策
卫生部
2009年2月发布《新生儿疾 病筛查管理办法》（卫生部 令第64号），明确新生儿听 力筛查为全国新生儿三大疾 病筛查之一。
12SrRNA：1494C>T、1555A>G；
微阵列 芯片法
微阵列 芯片法
优缺点
检测位点少 （9个） 专用仪器 价格高 耗时长
检测位点 （15个） 专用仪器
价格高 耗时长
凯普
GJB2:35delG、176-191del16、235delC、299-
耳聋易感基因检测 试剂盒
300delAT； GJB3：538C>T； SLC26A4：IVS7-2A>G、2168A>G；
常见的致聋基因及位点
GJB2
GJB3
常见致聋 基因
SLC26A4
12rRNA
2
常见的致聋基因及位点
遗传性耳聋特点
遗传性耳聋突变位点具有明显的种族差异
中国人群大部分遗传性耳聋由4个基因的突变所引起： GJB2基因：先天性非综合性耳聋； GJB3基因：后天高频感音神经性耳聋； SLC26A4基因：先天或迟发性耳聋，大前庭水管综合征； 12S rRNA基因：氨基糖苷类药物性耳聋。
操作简单，实时监控， 核酸提取、PCR 据扩增曲线判读，通量
低
4
耳聋基因诊断的方法
测序技术
4
耳聋基因诊断的方法
PCR-RFLP分型技术
4
耳聋基因诊断的方法
TaqMan探针分型技术
4
耳聋基因诊断的方法
Multiplex SNaPshot分型技术
4
耳聋基因诊断的方法
电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）分型技术
GJB2、SLC26A4和mtDNA 12S rRNA突变在非综合征 耳聋人群中所占比例分别约为21%、14.5%和4.4%；
GJB2与SLC26A4相关耳聋主要表现为常染色体隐性遗 传非综合征性耳聋，mtDNA 12S rRNA突变携带者表现为对 氨基糖甙类药物敏感，遵循母系遗传方式。
2
12SrRNA：1494C>T、1555A>G；
博奥
GJB2:35delG、176-191del16、235 delC、
十五项遗传性耳聋
299-300delAT； GJB3：538C>T；
相关基因检测试剂 SLC26A4：IVS7-2A>G、1174A>T、1226 G>A、
盒
1229C>T、1975G>C、2027T>A、2168A>G 、 IVS15+5G>A；
遗传性耳聋基因检测
SLC26A4：IVS7-2A>G、1174A>T、 1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027
荧光PCR熔
试剂盒
T>A、2168A>G 、IVS15+5G>A、
解曲线法
2162C>T、749T>C、754T>C；
12S rRNA：1494C>T、1555A>G；
检测位点多 （20个） 仪器要求较高
4
耳聋基因诊断的方法
HRM技术
4
耳聋基因诊断的方法
等位基因特异PCR技术
4
公司
耳聋基因诊断的方法
市场上的耳聋产品
产品名称
检测位点
检测方法
GJB2:35delG、176-191del16、235delC、299-
九项遗传性耳聋相 关基因检测试剂盒
300delAT； GJB3：538C>T； SLC26A4：IVS7-2A>G、2168A>G；
常染色体隐性遗传
遵循常染色体隐性遗传模式，多表现 为散发
SLC26A4基因突变与大前庭水管综合 征和Pendred 综合征有密切关系
临床表现：多在学龄前发病，呈进行 性或波动性听力下降，多为重度以上感 音神经性聋
2
常见的致聋基因及位点
12S rRNA基因特点
12S rRNA突变位点位于高度保守的小核糖体亚基氨酰— tRNA结合区域，是氨基糖苷类抗生素重要的识别区域。氨基糖 苷类抗生素攻击12S rRNA突变携带者的耳蜗细胞中的线粒体， 从而对这些细胞形成组织特异性的损伤，最终导致耳聋的发生。
荧光探针法 飞行时间质谱法
测序法
耳聋基因检测常用方法比较
方法
主要设备
检测时间 所需步骤
特点
DNA测序法
PCR仪，测序仪 ＞10H
核酸提取、PCR，金标准，操作繁琐，需
电泳、纯化、测 要专门培训，结果判读
序
复杂
限制性内切酶法 PCR仪，电泳仪 约4H ARMS-PCR法
基因芯片法
P扫C描R仪仪，杂交仪，约5H
ARMSPCR法
优缺点
检测位点少 （4个）
先天性耳聋基因 检测 试剂盒
GJB2:512insAACG、176-191del16bp 、235delC、299-300delAT；
济南英盛
药物性耳聋基因 检测 试剂盒
耳聋基因GJB2 235delC检测试剂盒
12S rRNA：1494C>T、1555A>G； GJB2:235delC；
遵循常染色体隐性遗传模式
在不同人群均具有显著的高发病率
临床表现：绝大多数为先天性重度、
极重度耳聋
2
常见的致聋基因及位点
GJB3基因特点
GJB3基因是我国本土克隆的第一个遗传疾病基因
临床症状主要与GJB3突变基因的外显度有关，表现为正 常听力、轻度耳聋、中度耳聋、重度耳聋及极重度耳聋等
数据来源：韩冰,中国人民解放军医学院,2013
3
耳聋筛查的意义
（例数） 1600 1400 1200
天津新生儿耳聋基因筛查
未通过数据
8.89% 91.11%
6.59% 93.41%
听力未通过率 听力通过率
1000
800
Leabharlann Baidu
600
4.02% 95.98%
5.50%
400
94.50%
200
0
结论： GJB2
熔解曲线法
荧光PCR仪 约4H
飞行时间质谱法 PCR仪，质谱仪 ＞10H
荧光PCR法
荧光PCR仪 约3H
核酶酸切提、取电、泳PCR、检操易出作污率复染低杂，，特需异要性跑差电，泳，
核酸提取、PCR， 杂交、洗涤、扫 通量高，较复杂， 描
根据峰图判断结果，非 核酸提取、PCR 特异性扩增易产生假阳
性 核酸提取、PCR、操作复杂繁琐，对使用 纯化、打质谱 者要求较高
常染色体显性遗传
遵循常染色体显性遗传模式
后天高频耳聋的常见突变基因
缺乏系统的流行病学统计数据
2
常见的致聋基因及位点
SLC26A4基因特点
SLC26A4基因又称PDS基因，编码的Pendrin蛋白主要由 疏水性氨基酸组成，参与碘/氯离子的转运。Pendrin蛋白发生 异常即可影响细胞内外阴离子的转运，从而影响声音传递而导 致听力损失。
MtDNA 12S rRNA携带者 6例（0.2%）
86例孕妇配偶进行耳聋基因检测
夫妇同为GJB2携带者3对 夫妇同为SLC26A4携带者3对
后代耳聋风险25%
包括胎儿在内的所有母系 成员均为携带者，须终生 绝对禁止使用氨基糖苷类 抗生素，可有效避免耳聋
的发生
4对夫妇进行产前诊断 1例胎儿确诊为遗传性耳聋，家庭选择引产
非综合征型耳聋（70%）
综合征型耳聋（30%）
常染色体隐性（80%） 常染色体显性（15%） X连锁遗传（1%~3%） 线粒体遗传 （＜1%）
Alport 综合征 Pendred综合征 Waardenburg综合征 BOR综合征 Usher综合征
细菌感染 病毒感染 耳毒性药物 声损伤 ……
4
国内现状
2
常见的致聋基因及位点
GJB2基因特点
GJB2基因编码缝隙连接蛋白Cx-26，负责细胞间信号介导 和离子传递，突变的GJB2基因可能导致连接蛋白异常，进而影 响细胞间隙的连接功能，引起内耳钾离子回收障碍而致耳聋， Cx-26 对维护耳蜗的正常功能非常重要。
常染色体隐性遗传
第一个发现的非综合征性耳聋基因
荧光PCR法
PDS基因突变 检测 试剂盒
SLC26A4：IVS7-2A>G、1174A>T、、 1229C>T、2168A>G ；
检测位点 （10个）
通量低
厦门致善
GJB2:35delG、167delT、176-
191del16、235delC、299-300delAT
； GJB3：538C>T、547G>A；
线粒体母系遗传
线粒体突变遵循母系遗传模式
临床表现为药物性耳聋
对正常听力携带者进行正确用药 指导可以预防耳聋
3
耳聋筛查的意义
遗传性耳聋的防治
GJB2
• 纯合突变或复合杂合突变表现为先天性重 度或极重度双侧对称性感音神经性聋 • 预示良好的人工耳蜗植入的治疗效果
GJB3
• 临床表现与GJB3突变基因的外显度有关， 为正常听力到极重度耳聋等不同症状 • 后天需佩戴高频助听器进行听力补偿
2003年起，首次全国性大规模聋病分子流行病学调查研究
按统一的调查方式收集了10880例耳聋患者DNA样本，覆盖了28个 省市地区20余个民族，对其进行常见耳聋遗传病因的流行病学调查。
1
耳聋概况
全国性聋病分子流行病调查结果
GJB2、SLC26A4和mtDNA 12S rRNA突变是导致中国 大部分非综合征性遗传性耳聋的三个最常见的致病基因；
GJB3 SLC24A6 12S rRNA （基因）
天津58397例新生儿筛查的结果表明，仅通过物理听力
筛查，不同基因型的漏检率均超过90%以上。
数据来源：韩冰,中国人民解放军医学院,2013
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耳聋筛查的意义
北京耳聋出生缺陷防控效果
3000例孕妇基因筛查 （耳聋基因突变携带者160例，5.3%）
GJB2携带者105例（3.5%） SLC26A4携带者49例（1.6%）
4
耳聋基因诊断的方法
公司 华大医学
市场上的耳聋产品
产品名称
检测位点
检测方法
耳聋基因检测
GJB2:35delG、167delT、176191del16、235delC、299-
3.5万 6%
我国每年新增3.5万先天性聋儿，其中90%的聋儿 出生于听力正常、没有耳聋家族史的家庭。
我国正常人群中耳聋基因的携带率高达6%，大部分 非综合症性耳聋由GJB2、GJB3、SLC26A4、12S rRNA等基因的突变引起。
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耳聋概况
耳聋致病因素
耳聋
遗传因素 (约60%)
环境因素（约40%）