金黄色葡萄球菌检测方法ppt课件

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第一法金 黄色葡萄 球菌定性
检验
国家标准检验方法GB4789.10-94
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操作步骤： 1、样品的处理 2、增菌和分离培养 3、鉴定：染色镜检、血浆凝固酶试验 4、肠毒素的测定 5、结果报告
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1、样品的处理 称取25g样品至盛有225mL7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪 胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min 均质 1min～2min，或放入盛有225mL7.5 %氯化钠肉汤或10%氯化钠 胰酪胨 大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。 若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5 %氯化钠肉汤 或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当 数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
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2、增菌和分离培养 3）金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊 带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树 胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊 带及透明圈。
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BP平板主要成分及作用：P223 氯化锂、甘氨酸 抑制非制病性葡萄球的生长 丙酮酸钠: 促进葡萄球菌生长 亚碲酸钾: 抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为碲盐
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血平板上金黄色葡萄球菌 菌落形态
金黄色葡萄球球菌的单 个菌落在血平板上呈金 黄色，有时也为白色， 大而突出、圆形、不透 明、表面光滑，周围有 溶血圈。
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3、鉴定 1）染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡 萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为 0.5μm～1μm。
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来自百度文库
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2）血浆凝固酶试验：
有无致病性的重 要指标
挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落1 个或以上，
分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养
18 h～24 h。
取新鲜配置兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培
养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置36
℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6 h，
葡萄球菌属 金黄色葡萄球菌的检测方法
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葡萄球菌属（Staphylococcus）
引起毒素型食物中毒 分为：金黄色葡萄球菌
表皮葡萄球菌 腐生性葡萄球菌
对于加工过的食品或食品加工 设备而言，此菌或其肠毒素的 存在通常作为卫生条件差的一 种指标。
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金黄色葡萄球菌的扫描 电镜照片
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2.2 葡萄球菌属（Staphylococcus）
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阳性
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4、葡萄球菌肠毒素的检验 可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌 菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌 肠毒素。 5、结果与报告 1）结果判定：符合2（3）、3，可判定为金黄色葡萄球菌。 2）结果报告：在25 g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄 球菌。
生物学特性 1、形态与染色特性
G+，无芽孢、无鞭毛、无荚膜、不运动 2、培养特性： ① ② ③ ④ ⑤ 3、生化特性：MR阳性，V－P弱阳性，靛基质阴性…… 4、抵抗力
具有较强的抵抗力，80 ℃ 30min 5、抗原结构
蛋白抗原——表面抗原，无特异性。 多糖抗原——半抗原，有型特异性
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食品中金黄色葡萄球菌的检验
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2、增菌和分离培养 1）将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色 葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 2）将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血 平板。血平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。Baird-Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。
如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固
体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
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有无致病性的重 要指标
2）血浆凝固酶试验： 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培 养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进 行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养18 h～48 h，重复试验。
2.2.2 生物学特性 6、毒素和酶
肠毒素形成条件： 存放温度：在37℃内，温度越高，产毒时间越短； 存放地点：通风不良氧分压低易形成肠毒素； 食物种类：含蛋白质丰富，水分多，同时含
一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
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金黄色葡萄球菌的检验 GB 4789.10-2010
第一法 金黄色葡萄球菌的定性检测 第二法 金黄色葡萄球菌 Baird-Parker 平板计数 第三法 金黄色葡萄球菌MPN 计数
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2、培养特性：
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长 良好，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛需氧或兼性厌氧，最 适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～15%NaCl肉 汤中生长。
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金黄色葡萄球菌 在甘露醇盐平板上的菌落
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2.2 葡萄球菌属（Staphylococcus）
一、金黄色葡萄球菌的生物学特性 1、形态与染色：(staphylococcus aureus)
G+，无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显微镜下 排列成葡萄串状。
萄球菌的显微照片 色葡萄球菌的染色照片 色葡萄球菌的扫描电镜照片
附：
金黄色葡 金黄
金黄
金黄色葡萄球菌的透射电镜照片
呈黑色 卵黄: 含蛋白质、卵磷、脂肪
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金黄色葡萄球菌 在BP平板上的菌落形态 圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm，颜色呈灰色到黑玉色， 边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色），周围 为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄 油树胶的粘稠感
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2、增菌和分离培养 3）长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所 产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形 成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白 色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革 兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。