细菌菌落总数检测常见误差原因分析

细菌总数监测常见误差分析

细菌菌落总数就是水源地与地面废水样品检测必做得一项指标。菌落总数检测同其她检验一样,也存在检测误差。平板计数法就是细菌总数常用方法之一, 因此,该值准确与否直接关系水质好坏。微生物平板计数得通常方法为每个样品用3个稀释度,每个稀释度常做3个重复。但如何对平板菌落进行正确计数、３个稀释度以哪一个稀释度进行计数及微生物检测允许误差等问题,在饲料标准中并未有所规定,而这些问题与统计值得准确性密切相关。我们就实际检测芽孢杆菌工作中遇到一些菌落计数得问题,与大家进行探讨。

1材料与方法

１.１试验材料

1。1。1样品:随机抽取微生态饲料添加剂合生素样品3份。

1。１.２培养基:营养琼脂。

1.１.3仪器设备:磁力搅拌器,无菌培养皿,培养箱,振荡器。

1.2 试验方法

1。2。1样品得振荡时间对菌数检测得影响

选择1个样品,称取１0 ｇ,放人无菌锥形瓶内,加入90 mＬ无离子水,磁力搅拌分别为l0、2０、３0、４0与6０ rａiｎ、用1 ｍL移液枪从中吸取1 mL样品悬浊液加入到盛有９mＬ去离子水得试管中,用振荡器使样品充分均匀,以此类推,制成10一～1Ｏ一’不同稀释度得样品溶液。平板涂布法检测菌含量:用移液枪从样品稀释液中各吸取20０L,每个样品稀释液3个重复;将平板倒置于3５—37 ｃC培养箱中培养24 h。

1.2。2 检测方法对菌数检测得影响

各个样品称取l0 g,放入无菌锥形瓶内,加入9０ mL无离子水,磁力搅拌分别为40 raiｎ。并稀释成1０～～l0 不同稀释度得样品溶液。倾注平板法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取１ mＬ,每个样品稀释液3个重复,待培养基表面干燥后,将平板倒置于３５ 37～(2培养箱中培养24 h、平板涂布法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取２０0 L涂布平板,每个样品稀释液３个重复;将平板倒置于

35~37℃培养箱中培养2４ｈ、2结果

2.1样品得振荡时间对菌数检测结果得影响

采用细菌平板计数得方法,不同振荡时间对合生素中芽孢杆菌检出量得结果见表1。从表l中可见:不同振荡时间获得得细菌菌落数量有较大差别。总体而言,在一定时间内,随着振荡时间得延长检出有效菌含量增加,说明细菌从载体上解析需要一定得时间;当振荡时间为4０rain后产品中得菌含量基本稳定。采用适当振荡时间才能更精确得显示产品中有效菌得含量。表1 震荡时间对有效菌含量结果得影响’［"／_。CFU/g 震荡时间对有效菌落含量结果得影响

3分析与讨论

3.1样品处理对结果得影响

取样时对样品取样口与取样工具要消毒,防止样品交叉污染。

３、２样品得均质处理对结果得影响

固体样品要用均质器或玻璃珠等充分均质,也可在稀释液中添加相应溶解液ｆ如吐温80与液体石蜡等1得稀释液,以保证样品得充分均质。测定芽孢杆菌活菌数时,不同振荡时间获得得细菌菌落数量有较大差别,因为细菌从载体上解析并均匀分散到溶液中需要一定得时间,待测样品应在振荡器上充分振荡,使得芽孢杆菌可以充分与均匀地分散到待测溶液中,避免因为菌体未完全释放而引起结果中细菌含量偏低得现象。

3、３试验过程中操作方法得影响

加样l mL时,用1 ｍL得吸管并且每做一个稀释度都要换１支吸管,否则稀释度间菌落计数误差会超过10%,说明存在操作误差、用吸管向平皿里加样,平皿开口要小,吸管要直立且加样结束后,让吸头接触皿底干燥处,保证加样得体积不少、若采取倾注平板法时,平皿加样后要及时倾注琼脂,其间隔一般不超过２0 min f最好在１0 ｍin内)、以琼脂不烫手(约45℃)为宜,否则会杀灭细菌,太热也会使冷凝水过多,影响细菌得生长。加入琼脂要及时摇匀,先向一个方向旋转,然后向另一方向旋转。这样会减少菌落得集聚与连片现象。另外,用力不要过大,使琼脂不溅到ⅡIL壁与肌盖上,保证计数结果得准确。当琼脂凝。当琼脂凝固后,要及时移人培养箱倒置培养、若采用涂布平板法进行检测,放置适当时间后,则立即将平皿翻转后放置培养箱中进行培养,以避免菌落蔓延生长,难以计数。为保证结果准确,除作琼脂得空白对照外,还要对菌落计数得全程做一对照、

3.4 菌落计数误差

菌落计数在完成培养后应立即进行,以防菌落继续生长蔓延从而影响测定结果。培养基中加入TｒC ｆ氯化一苯四氮唑)可使细菌菌落显红色,这样可

与同样品颗粒与凝集物(白色)相区分,以提高菌落计数得准确性。有学者认为:１００ mL培养基中加入2～3 mL得TＴC可使菌落着色且不抑制细菌得生长。菌落计数时要2个人分别用菌落计数器计数菌落总数,取2个人得平均数报告菌落总数、一般来说,每平板含20～200个菌落得稀释度得菌含量与实际结果最接近,超过200个／平皿或小于２O个/平皿得计数结果则可能与实际存在较大差别。因此,应尽量选择20～200个/平皿得稀释度进行芽孢杆菌得计数,保证菌落计数得有效性。报告结果要遵守国标中菌落计数得方法进行。

４小结

菌落数检测得误差可能来自于多个方面。试验研究表明:除了检测环境与培养基之外,误差主要来自于样品与检验得操作过程,包括检验得准备环节。一般认为,微生物样晶不能复检、但当菌落总数在标准得临界或菌落出现明显得异常时,有时重新检测还就是必要得、这里所提到得重新检测就是对同一批次未开封且保存得时间与温度都比较合适得样品。这样,可以通过重新检测校正误差。