维生素药物的分析

网上辅导7（第13-15章）

第十三章维生素药物的分析

第一节维生素A的分析

一、结构与性质

维生素A的结构为具有共轭多烯侧链的环己烯，故具有许多立体异构体。

1．溶解性维生素A不溶于水，易溶于有机溶剂。

2．不稳定性维生素A结构中含有共轭多烯醇侧链，所以性质活泼，不稳定。易被氧化剂氧化，易被紫外光裂解。

3．紫外吸收特性维生素A结构中有多个共轭不饱和键，在紫外光区有强吸收，可用于鉴别和含量测定。

4．与三氯化锑呈色维生素A在氯仿溶液中与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。

二、鉴别试验维生素A的鉴别可用三氯化锑反应、紫外分光光度法和薄层色谱法等。

三、含量测定

（一）紫外分光光度法（重点、难点）

1．三点校正法的建立：维生素A在325~328nm的波长范围内具有最大吸收，可用于含量测定。但维生素A原料中常混有其他杂质，干扰维生素A的测定。

为消除非维生素A物质引起的无关吸收所引入的测定误差，以求得维生素A的真实含量，建立了三点校正法。即在规定条件下用校正公式计算吸收度A max（校正）后，再进行计算。可消除无关吸收，测得维生素A的真实含量。

2．测定原理本法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算吸收度A校正值后，再计算含量，故本法称为“三点校正法”。其原理主要基于以下两点：

（1）杂质的无关吸收在310~340nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸收度下降。

（2）物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和，因而吸收曲线也是二者吸收的叠加。

3．波长选择三点波长的选择原则为一点选择在维生素A的最大吸收波长处（即λ1）；其它两点选择在λ1的两侧各选一点（λ2和λ3）。

（1）第一法（等波长差法）：使λ3－λl＝λl－λ2。中国药典规定，测定维生素A醋酸酯时，λl＝328nm，λ2=316nm，λ3＝340nm，Δλ=12nm。

（2）第二法（等吸收比法）：使2λA ＝3λA ＝6/71

λA 。中国药典规定，测定维生素A 醇时，λl ＝325nm ，λ2＝310nm ，λ3＝334nm 。

4．测定方法：维生素A 测定法有“第一法”和“第二法”两种方法（中国药典2000年版）。

（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A 醋酸酯）

（2）第二法（皂化法，适用于维生素A 醇）

第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A 醋酸酯）

（1）测定方法：供试品适量→精密称定→环己烷溶解→定量稀释制成每1ml 中含9~15单位的溶液→照分光光度法→测定其吸收峰的波长→分别在300、316、328、340和360nm 波长处测定吸收度（如不在326~329nm 之间，则改用第二法测定）→计算各波长处的吸收

度与波长328nm 处吸收度的比值和波长328nm 处的%1cm 1E 值。

（2）含量计算：

每1g 供试品中含有的维生素A 的单位= %1cm 1E （328nm ）×1900

（3）校正步骤： ① 如果吸收峰波长在326~329nm 之间，且所测得各波长比值不超过表13-2中规定的±0.02，则用A 328（实测）计算。

② 如果吸收峰波长在326~329nm 之间，但所测得的各波长吸收度比值超过表13-2中规定值的±0.02，应按下式求出校正后的吸收度，并计算校正吸收度与实测吸收度的差值对实测吸收度的百分率（简称差值百分率）。

A 328（校正）=3.52（2A 328-A 316-A 340）

③ 如差值百分率在-3.0 %~ +3.0 %之间，则不用校正吸收度，仍以实测吸收度计算含量。 ④ 如差值百分率在-15%~ -3 %之间，则以校正吸收度计算含量。

⑤ 如差值百分率＜-15%或＞+3 %，则供试品须按第二法测定。

（4）生物效价和换算因数：

1g 维生素A 醋酸酯相当的单位数是：

100

328%1cm 1⨯⨯=L C A E %

A A A 100328328328⨯-=（实测）（实测）

（校正）差值百分率

∵ 维生素A 醋酸酯的吸收系数为1530

∴ 换算因数

应用示例：中国药典收载的维生素A 胶丸、维生素AD 胶丸和维生素AD 滴剂等均采用本法测定含量。

维生素AD 胶丸的测定：精密称取维生素AD 胶丸装量差异项下的内容物重0.1287g （每丸内容物的平均装量0.07985g ，标示量每丸含维生素A 10 000单位），置10ml 烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml 量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml ，置另一50ml 量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测得最大吸收波长为328nm ，并分别于300、316、328、340和360nm 的波长处测得吸收度如下，求胶丸中维生素A 占标示量的百分含量？

波长（nm ）

300 316 328 340 360 测得吸收度（A ）

0.374 0.592 0.663 0.553 0.228 解：

（1）计算各波长处的吸收度与328nm 波长处的吸收度比值，并与规定比值比较。 波长（nm ）

300 316 328 340 360 吸收度比值

（A i /A 328）

0.564

0.893 1.000 0.834 0.344 规定比值

0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 比值之差 +0.009 -0.014 0 +0.023 +0.045 其中，比值A 360/A 328与规定比值之差为+0.045，超过规定的（±0.02）限度，故需计算校正吸收度。

（2）计算校正吸收度，并与实测值比较

A 328（校正）＝3.52（2A 328－A 316－A 340）

＝3.52（2×0.663－0.592－0.553）＝0.637

92.3100663.0663.0637.0100(328)实测

(328)校正(328-=⨯-=⨯-实测）A A A

IU

IU g g 2907000/344.01000000=μμ190015302907000)/纯品效价（维生素%

1烷)

，328(cm 1==E g IU A nm 己环