实验五逆境对植物组织的伤害

实验五逆境对植物组织的伤害

—电导率法检测植物细胞质膜透性和愈创木酚法测定过氧化物酶活性

一、实验目的：1.了解研究植物抗逆生理的实验方法，学会使用DDS-11A型电导率仪，掌握绝对电导率和相对电导率的概念；2.熟悉植物组织过氧化物酶活性的测定方法，学会分光光度计的“动力学”测量程序

二、实验原理：（P78和P97）

三、实验材料：绿豆幼苗

四、实验步骤：

1.材料处理：10株幼苗为一组分别置于45℃（纯水最好预热至该温度）和室温中（在上课之前请先处理好材料，以课堂小组为单位）。

2.电导率的测定：2h后小心取出幼苗，冷却至室温后测定浸出液和纯水的电导率。（不必测材料煮沸后的电导率）

3.过氧化物酶（POD）活性测定P97

3.1POD的提取：材料1g，加入KH2PO4冰浴研磨成匀浆，低温4000rpm离心15min,收集上清液，定容至25mL,低温保存

3.2POD的测定：先在分光光度计的“动力学”或“时间扫描”程序上设置好参数取比色杯2个，1个将对照液放入参比杯按照程序调零，另一个比色杯拉出加入20μL酶液，再加入1mL KH2PO4 ，最后加入3mL反应混合液，立即测量。

❖723G型分光光度计“动力学”测定

❖【3

按“

按“

按“ENT”后，出现：

测量出图谱后，按“ESC”返回到界面:

按“3”进入活性测量功能，出现如下界面：

按“SET”进行具体设置，按“ENT”可得出相应值。

按“4”进入图谱处理功能，出现如下界面：

其中按“1”可见原始图谱，按“2”可进行峰谷检测，按“3”通过横纵坐标的缩

放可达到图谱缩放功能，方便观察图谱。按“4”具有具体的实验查询功能。

思考题

1.电导率的测定主要有哪些影响因素?

2.相对电导率和绝对电导率的概念?

3.请说出电导率和电导度的概念区别。

4.温度和CO2会影响电导度的测定结果吗？在操作中应注意什么？

5.影响酶提取、纯化和活性测定的因素有哪些？

6.测定时酶活性的测定应当定在什么时间范围内？测定植物组织过氧化物酶活性的意义与用途。

7.请分析比较两种处理下绿豆幼苗的膜透性及过氧化物酶活性。