实验二_暗视野显微镜
暗视野显微镜实验原理
暗视野显微镜实验原理暗视野显微镜是一种常用于生物学和医学领域的显微镜，其原理是利用特殊的光学技术，使样品在显微镜下呈现出明暗对比度，从而增强细胞和组织的观察效果。
下面将详细介绍暗视野显微镜实验的原理和操作步骤。
一、原理1. 暗视野显微镜的光路设计与普通显微镜有所不同。
在普通显微镜中，光线通过样品后被物镜聚焦到目镜，而在暗视野显微镜中，光线经过样品后，穿过一个特殊的光阑，使得未被样品散射的直射光被完全屏蔽，只有散射光通过光阑进入目镜。
2. 光阑是暗视野显微镜中的关键部分，它由一个圆形光阑和一个同心圆环组成。
圆形光阑用于屏蔽直射光，而同心圆环则用于引导散射光进入目镜。
通过调节光阑的大小和位置，可以调整样品的明暗对比度。
3. 在样品中，光线会被细胞和组织中的不同结构和成分所散射。
这些散射光通过光阑进入目镜后，会与直射光相干叠加，形成明暗对比度。
由于散射光的相位和振幅与直射光不同，因此在目镜中观察到的样品会呈现出明暗不一的图像。
二、操作步骤1. 准备样品：将待观察的生物样品制备成薄片或薄片切片。
在制备过程中，需要注意避免样品过厚或过薄，以免影响观察效果。
2. 装载样品：将样品放置在载玻片上，并加入适量的显微镜目标液，以保持样品湿润，并提高观察的清晰度。
3. 调整光源：打开显微镜的光源，根据需要调节亮度。
对于暗视野显微镜，需要将光源调暗，以减少直射光的干扰。
4. 调整光阑：通过旋转光阑的大小和位置，调整样品的明暗对比度。
一般来说，光阑的直径应略大于样品的直径，以确保散射光能够完全进入目镜。
5. 调焦观察：通过调节显微镜的焦距，使样品处于清晰的焦平面上。
可以通过调节物镜和目镜的焦距来实现。
6. 观察记录：通过目镜观察样品，并记录所见到的结构和细胞。
可以使用目镜上的刻度盘来测量样品的大小。
三、应用领域暗视野显微镜广泛应用于生物学和医学领域，特别是在细胞学、组织学和病理学研究中起着重要作用。
通过暗视野显微镜，研究人员可以观察到细胞内部的结构、细胞器的分布以及细胞和组织的形态和结构变化。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导编者梁亦龙张继承生物信息学院2004年9月前言细胞是一切生物(包括人类)最基本的结构和功能单位。
生命科学中的各个学科领域，甚至非生命科学的许多学科领域中的学者们，越来越多地投入到对细胞生命现象的研究。
细胞是生命的载体，不理解细胞就不理解生命。
在现代生命科学教学中，不设置细胞生物学课，所培养出来的学生就称不上是完全的生命科学家。
在细胞生物学放学中，实验课不可或缺。
实验课的基本任务是，让学生学习细胞生物学基本技术，使他们具有一定的实验操作技能，并培养他们树立独立设计实验的思考观念和进行科研的基本素质。
我们借鉴兄弟院校的经验编写了这本《细胞生物学实验指导》•，供我院开设的各专业选用。
由于我们主客观条件所限，而且编写时间仓促，肯定会有不少缺点和错误，请提出批评意见，帮助我们不断改进教学。
编者梁亦龙2004年9月目录实验是规则与操作要求 (1)实验一细胞形态及大小的观测 (2)实验二相差和暗视野显微镜的原理、使用及标本观察 (5)实验三荧光显微镜原理及应用 (9)实验四电镜参观 (12)实验五植物细胞骨架的显示及光镜观察 (14)实验六人淋巴细胞染色体标本制作 (15)实验七人淋巴细胞姐妹染色体区分染色 (17)实验八碱性磷酸酶的显示 (19)实验九叶绿体的制备及其对染料的还原 (22)实验十人体细胞核型图的制作 (24)实验十一线粒体的分离及活性测定 (27)实验十二联会复合体的染色与观察 (32)实验十三细胞融合 (33)实验十四死、活细胞鉴别 (39)实验十五细胞固定染色法 (41)实验十六早熟染色体凝集（PCC） (43)实验十七细胞同步化 (46)实验十八动物染色体分带技术 (48)实验十九线粒体的显示 (50)实验二十植物愈伤组织培养以及再分化 (52)实验二十一肿瘤细胞培养实验步骤 (57)实验二十二细胞器的分离 (62)实验二十三石蜡切片的制作 (66)实验室规则与操作要求为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希望实验者能严格遵守。
暗视场和相差显微镜
暗视场显微镜
（一 ）实验原理 暗视野显微镜是以丁达尔效应为基础，通过特殊的聚光器，使照 射样品的直射光不能进入物镜，只有被照样品表面反射或衍射的 散射光进入物镜，因而在黑暗的视野中形成物体明亮的像。
图1 暗视野聚光器工作原理
结构特点
丁达尔效应：光通 过浑浊媒质时 ,浑 浊媒质所呈现的光 的强烈散射现象,通 常称为丁达尔效应
暗视场显微镜及相差 显微镜的使用
BRAND
PLANING
1
实验目的
2
掌握暗视场显微镜及相差显微镜的原理、构造及使用方
法。
实验内容
01
暗视场显微镜 1. 实验原理 2. 使用方法
2 结构特点 4 注意事项
02
相差显微镜 1. 实验原理 2. 使用方法
2 结构特点
03 观察动植物细胞的胞质运动和胞质环流
薄则亮环小。 如果染色必须浅，而且是淡染。
思考题
B
简述相差显微镜的使用方法及注意事项
A 试述相差显微镜的成像原理及结构特点
相位: 是指在某一时间上，光 的波动所能达到的位置 .
光程: 是指媒质的折射率和媒 质厚度的乘积。
干涉: 直射光和衍射光相遇会 发生迭加现象造成振幅的变化， 或明或暗。
相差: 是指相同波长的光线经 过折射率不同的介质，其相位 发生变化而产生的位差，相差 一般不为肉眼所分辨，而相位 的变化是由光程的差别造成的。
中分出来。 2. 用相差物镜(内含相板)代替普通物镜 相板结构 共轭面:环状，通过直射光 补偿面:非环状，通过衍射光 相板作用:将直射光和衍射光分别加以相位调整 及强度削弱 . 相板类型:明相差或负相差 ,暗相差或 正相差 . 3. 用中心望远镜合轴调中 4. 光源和滤色镜：强光低热和绿色滤色镜
暗视野显微镜实验原理
暗视野显微镜实验原理引言：暗视野显微镜是一种常用的显微镜技术，它能够观察无法被普通显微镜观察到的样品。
本文将详细介绍暗视野显微镜的实验原理和工作原理，并探讨其在科学研究和生物医学领域的应用。
一、暗视野显微镜的实验原理暗视野显微镜利用了相位差干涉原理，通过对样品和背景之间的相位差进行测量，实现对样品的观察。
相位差是光束通过不同介质或不同部分时产生的光程差的一种度量。
在普通显微镜中，样品的透明度差异会导致光束的相位差，从而形成对比度低的图像。
而暗视野显微镜通过引入一个相位补偿器，使得样品和背景之间的相位差变化为强度差，从而增强了对比度，使得样品的细节更加清晰可见。
二、暗视野显微镜的工作原理暗视野显微镜由三个主要部分组成：光源、补偿器和检测器。
光源发出一束平行光，并通过凸透镜使光束汇聚到样品上。
样品会对光束进行散射和吸收，产生相位差。
接下来，光束通过一个补偿器，该补偿器会引入一个反位的相位差，以抵消样品中的相位差。
经过补偿器后，光束进入检测器，检测器会将相位差转化为强度差。
最后，通过图像处理和显示装置，观察者可以看到一幅明亮且对比度较高的图像。
三、暗视野显微镜的应用1. 细胞观察：暗视野显微镜在生物医学领域中被广泛应用于细胞观察。
由于暗视野显微镜可以增强对比度，使得细胞的形态和结构更加清晰可见。
这对于细胞学研究和疾病诊断具有重要意义。
2. 纳米颗粒研究：暗视野显微镜还可以用于纳米颗粒的观察和研究。
由于纳米颗粒非常小，普通显微镜很难观察到其细节。
而暗视野显微镜可以通过增强对比度，使得纳米颗粒的形态和分布更加清晰可见。
3. 材料科学研究：暗视野显微镜在材料科学研究中也具有广泛的应用。
通过观察材料的表面形貌和内部结构，可以研究材料的性质和性能。
暗视野显微镜可以帮助科学家更好地理解材料的微观结构，从而指导材料的设计和制备。
结论：暗视野显微镜利用相位差干涉原理，通过引入相位补偿器来增强对比度，实现对样品的观察。
详解显微镜的八种观察方式
详解显微镜的八种观察方式:microimage中国显微图像网(2011-08-02 17:25:45)方式一明视野观察(Bright field,BF)明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。
方式二暗视野观察(Dark field)暗视野实际是暗场照明。
它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。
因此，视场为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的像。
暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。
若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。
暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。
它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图像。
暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02-0.004μm。
8方式三相差镜检法(Phase contrast,PH)在光学显微镜的发展过程中，相差镜检法的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。
我们知道，人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度)。
对于无色透明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效的利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。
这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。
相差图片相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。
光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ(波长)，如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减小，提高反差。
暗视野显微镜
BF降低聚光镜DF镜像DF效果：只观察到标本的表形，运动状态→原虫、细菌鞭毛、伪足、管型、结晶等。
理论分辨率：优于0.004micron光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法3光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法9相长干涉：0相位，振幅M+M ＝2M相消干涉：相位相反，光程差1/2λ；合成波极振幅小。
光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法10光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法11光的干涉环状光阑–造成光程不同，偏斜/衍射。
产生直射光及衍射光。
相(位)板：共轭面(半透明环)→通过直射光，补偿面(中间) →通过衍射光。
光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法13明反差－负相差+相板，共轭面涂相位膜推迟直射光1/4波长，使其与衍射光接近同一相位，同时加大对直射光的吸收，物像明亮，背景暗光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法16光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法17暗反差－正相差（－相板）共轭面仅涂吸收膜－振幅小，补偿面涂相位膜推迟衍射光1/4，使两者差1/2相位，合成波振幅形成相消干涉，背景亮，物体暗光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法23光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法24偏振现象□自然光经反射、折射、双折射后及吸收后，可成为只在一个方向振动的光波，为偏光现象或称“偏振光”。
光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法正常光，1.658＞树胶折射率异常光，1.53~1.54光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法27光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法如不是双折射体物质表现为各向同性，无论怎样旋转标本也不会出现物像，因起偏镜发出的直线偏振光的振动方向不发生改变，仍与检偏镜振动方向相垂直。
成像检偏镜双折射体起偏镜自然光光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法29光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法31作轴向偏斜调节，产生平行劈裂＜被检目标CON前焦面Obj后焦面棱镜I棱镜II相差观察法33横向偏移90°光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法34光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法36光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法37光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法38DIC像差与相差的光路光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法40４种光镜法镜像：BF,DF,PH,DIC光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法41光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法相差、DIC相差、HOFFMAN相差镜像之比较光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法43斜射光照明光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法。
普通和几种特殊光学显微镜的结构及使用-2022年学习资料
结构特点：普通光学显微镜加上一些附件-荧光光源-超高压汞灯-激发滤片-阻断滤片
按光路分两种：-1.透射式荧光显微镜-2.落射式荧光显微镜
银球-第：二凌光片-截玻片与盖或片-汞奶-第一滤光片-平面度射镜-心y-函25透射式荧光显徽镜图解-B-图 -6落射式荧光显微镜图解-A.-载物台；B.标本：C,物镜：D,双色束分离器；凡.激-发漤片F.阻断滤片； .目镜；H,汞灯
三注意事项-1.-拿显微镜时，要一手紧握镜臂，一手托住镜座，不要单手提-拿，以防目镜或其他零件滑落。-2. 显微镜不可放置在实验台边缘，以免碰翻落地。-3.-不要随意取下部件，以免灰尘落入内部。-4.-保持显微镜的 洁。光学和照明部分的镜面只能用擦镜纸轻-轻擦拭，切勿用手指、手帕和绸布等擦摸。机械部分可用布-擦拭。-5. 显微镜使用完毕后，转动粗调上升镜筒或下降载物台，取下-标本，转动转换器使物镜离开通光孔，下降镜筒或上升载物 台，使接近物镜，垂直反光镜，下降集光器，关闭虹彩光阑
3.油镜的使用方法-1在高倍镜下找到所要观察的标本，移至视野中心。-2把集光器上升到最高位置，光阑开到最大 -3移开高倍镜，在要观察的部位的盖玻片上滴加一滴香柏油作为-介质。-4稍稍上升镜简或下降载物台，使油镜对准 光孔，慢慢转动粗-调螺旋，使油镜与油滴接触，再小心地使它贴近盖玻片表面。-5用眼观察目镜，微微上升或下降载 台，直到出现清晰的物像。-6油镜使用完毕，先用拭镜纸蘸少许二甲苯将镜头上的大部分油-去掉，再用干拭镜纸擦拭 擦拭时要顺镜头的直径方向，不要-沿镜头的圆周擦。
3.光学部分-目镜常备有2一3个目镜，上面刻有5x、10x、15x等-符号以示其放大倍数，可选择使用，一般 用的-目镜倍数为10x。-物镜-显微镜分辨性能高低的关键部件》-主要性能指标一一放大倍数和镜口率（如-10 0.25,40/0.65和100/1.25，镜筒长度和所要求的-盖玻片厚度（如160/0.17）-表1-1 标准费镜的生质-镜1率〔.4.-工作距离mm-1D×-6.5-20X-0.60-2.0-40×-100×.20
暗视野显微镜检查法的原理
暗视野显微镜检查法的原理
暗视野显微镜是一种显微镜检查方法，可以观察无色或透明细胞和组织。
其原理基于相位差显微镜的原理。
在普通的透视显微镜中，光线通过物镜镜头和载物中的细胞或组织，然后进入目镜观察。
由于无色细胞或组织对光的吸收和散射较弱，使得它们在背景光线中很难被观察到。
暗视野显微镜采用了相位差显微镜的技术，通过在光路中插入一个透明光柱形容器，在光的传播路径中引入了一个光程差。
当光通过细胞或组织时，细胞或组织的不同部分会对光的相位和振幅产生不同程度的影响，从而产生相位差。
在目镜观察时，通过调整相位差环的位置和大小，使得细胞或组织的不同部分之间的相位差被抵消，仅留下由于样品的不均匀性产生的相位差。
这使得无色细胞或组织与背景光线产生对比，从而使它们更容易被观察到。
暗视野显微镜可以提供高对比度的图像，使得观察者可以更清晰地看到无色或透明细胞和组织的细节。
这种显微镜适用于多种生物学和医学应用，如观察活体细胞、细胞培养、组织切片等。
梅毒的实验室检查
梅毒血清反应的假阴性
• 1． 一期梅毒硬下疳：一般硬下疳 出现2-3周，机体才出现反应素，故 早期血清反应常呈阴性。
• 2． 感染梅毒立即治疗或晚期梅毒： 由于血清反应素低，出现阴性。
• 3． 二期梅毒假阴性；不到1%的二 期梅毒患者其未稀释的血清VDRL试 验呈阴性或弱阳性反应，而在高度 稀释后反而为阳性，即前带现象 （Prozone phenomenon），这是血 清中抗心磷脂抗体过多，抑制阳性 反应的结果。 • 4． 技术操作或抗原敏感性低出现 血清试验阴性。
• TP-ELISA利用酶的放大系统，提高 了检测灵敏度，甚至可以比TPPA能 更早地检测出梅毒螺旋体特异性抗 体。在梅毒螺旋体特异性抗体和非 特异性抗体中，特异性IgM抗体最早 出现，感染梅毒螺旋体后，机体启 动体液免疫即可产生；抗心磷脂抗 体是当组织被破坏释放心磷脂后才 产生。
• 梅毒螺旋体特异性IgG抗体出现时间 较晚，可终身存在，因此，TPELISA或TPPA阳性无法判断是初次感 染还是既往感染。抗心磷脂抗体可 在梅毒治愈后消失，用TRUST能判断 是新近感染还是既往感染。
• 感染梅毒后，心磷脂抗体出现晚于 特异性螺旋体抗体，晚期梅毒时此 类抗体又部分转阴。有报道，三期 梅毒病人非梅毒螺旋体抗原试验仅 有71%仍为阳性，而梅毒螺旋体抗体 检测几乎均为阳性。 • 因此，非梅毒螺旋体抗原试验不适 于诊断一、三期梅毒，潜伏期梅毒 也不敏感，而且有急慢性的生物学 假阳性和假阴性反应。
• 血清学试验用作先天性梅毒的辅助诊 断，其首要问题是将无症状感染婴儿 从非感染婴儿区别开来，这些婴儿的 母亲梅毒血清试验阳性，困难在于不 能将母亲体液免疫反应同婴儿的抗体 反应相区别，因为母亲的IgG可传递 给胎儿。另外由于IgG终身存在，所 以很难评价治疗结果。血清学诊断常 常又存在着假阳性。
暗视野光学显微镜
暗视野光学显微镜第一篇：暗视野光学显微镜暗视野光学显微镜一、操作步骤（1）．将显微镜上的视野调节旋钮旋至暗视野处（2）．将光源亮度调至最大，使在低倍镜下所见的光环亮度最大。
（3）先在低倍镜下找聚光镜的光亮点或环形圈，并扭动暗视野聚光镜的调节杆，使亮点或环形圈移至视野正中。
（4）．在聚光镜镜面上滴加香柏油一滴,然后稍下降。
将标本置载物台上,旋上聚光器使油与载玻片接触(不能有气泡产生)。
（5）．先用低倍物镜及7×目镜进行配光对准物体。
调节聚光器的高度,首先在载玻片上出现一个中间有一黑点的光圈,最后为一光亮的光点,光点愈小愈好,由此点将聚光器上下移动时均使光点增大。
（6）．换上所需目镜和高倍镜,缓慢上升物镜进行调焦,至视野中心出现发光的样品。
（7）．在盖玻片上滴一滴香柏油,将油镜镜头浸在油中后调节物镜焦距处，再缓缓上下移动聚光镜高低，使物体发出最大亮度为止。
二、注意事项（1）．进行暗视野观察时,聚光镜与载玻片之间滴加的香柏油要充满,否则照明光线于聚光镜上面进行全面反射,达不到被检物体,从而不能得到暗视野照明。
（2）．在进行暗视野观察标本前,一定要进行聚光镜的中心调节和调焦,使焦点与被检物体一致。
（3）．由于暗视野聚光镜的数值孔径都较大(NA=1．2—1．4),焦点较浅,因此,过厚被检物体无法调在聚光镜焦点处,一般载玻片厚度为1．0mm左右,盖玻片厚度宜在0．16mm以下,同时载玻片、盖玻片应很清洁,无油脂及划痕,否则都会严重地扰乱最终的像。
三、基本原理生活的细菌在明视野显微镜下观察是透明的,不易看清。
暗视野显微镜的原理与来自缝隙的一束强光通过暗室时,可清楚地看到其中细微灰尘的现象是一样的,即给样品照明的光不直接穿过物镜,而是由样品上反射或折射的光进入物镜,那么,在漆黑的视野中,由于反差增大了,使样品能够看得更清楚。
因用暗视野法可以在黑暗的视野中看到光亮的菌体,故在观察生活细菌及细菌运动时常采用此法。
暗视野显微镜观察草履虫实验报告
文章标题：探寻微观世界：暗视野显微镜观察草履虫实验报告在我们日常生活中，很难想象到微观世界的奇妙与复杂。
然而，通过科学技术的进步，我们有幸能够利用暗视野显微镜来窥探微生物的世界。
本文将基于暗视野显微镜观察草履虫的实验报告，探索微生物世界的奥秘，以及暗视野显微镜在科学研究中的重要意义。
一、实验材料与方法在进行暗视野显微镜观察草履虫的实验中，我们准备了一台暗视野显微镜、草履虫标本、蒸馏水、载玻片等实验工具。
我们将草履虫标本放在载玻片上，加入少量蒸馏水后覆盖另一片玻片。
将载玻片放在暗视野显微镜的工作台上进行观察。
二、观察过程和结果通过暗视野显微镜观察草履虫的过程中，我们发现草履虫在显微镜下呈现出清晰的轮廓和细节。
我们可以清晰地看到草履虫的体形、纤毛、细胞器等结构，这些结构在肉眼下是无法观察到的。
通过调节暗视野显微镜的焦距和光源，我们还可以更清晰地观察到草履虫在水中的游动状态，以及其与其他微生物的互动。
三、实验总结与个人观点通过本次实验，我们不仅深入了解了暗视野显微镜的观察原理和操作技巧，也对草履虫这一微生物的生态和行为有了更全面的认识。
我们深刻体会到，暗视野显微镜在微观世界的探索中具有不可替代的作用，它为科学研究提供了重要的工具和支持。
我们也认识到微生物世界的多样性和微生物在生态系统中的重要性。
在我看来，微生物作为地球生命的基本单位，其丰富的形态和功能对我们的生存环境和人类健康有着重要影响。
暗视野显微镜的发明和应用，让我们能够更深入地认识微生物世界，从而更好地保护生态环境、预防疾病等。
我认为微生物学及暗视野显微镜研究在当今科学研究中具有重要的意义。
总结起来，暗视野显微镜观察草履虫的实验为我们打开了微观世界的大门，让我们领略到微生物世界的丰富多样性和微观生命的奇妙之处。
希望未来我们能够继续通过科学技术的进步，更深入地探索微观世界，为人类的生存、健康和环境保护做出更大的贡献。
参考资料：1. 陈恩泽、刘正春、顾剑飞编著. 暗视野显微镜观察技术手册. 北京：化学工业出版社. 20072. 鲁斌等编著. 微生物学实验教程. 北京：高等教育出版社. 2015.暗视野显微镜观察草履虫的实验报告，让人对微观世界有了更深入的了解。
浅析暗视野显微镜的故障问题及对应的解决方法 显微镜解决方案
浅析暗视野显微镜的故障问题及对应的解决方法显微镜解决方案暗视野显微镜也叫超显微镜，常用来察看未染色的透亮样品。
暗视野显微镜问题及解决方法1、问题：有充分的照明，使标本可见，或标本是可见的，但很微弱。
解决方案：灯电压可以被设置得太低，或灯泡可能没有充分的强度照射试样。
将电压上升到大约12伏（12伏，100瓦钨卤素灯泡）或更换光源，假如可能的话，与更大的强度。
假如不解决这个问题，检查台下冷凝器，以确保它正确的位置用适当大小的视场光阑。
此外，还要检查颜色和/或中性密度滤光片，偏光板，相位差板，或任何其他组件，可能会降低光照强度的光路，假如这个问题发生的高数值孔径反射式冷凝器，检查做出确定冷凝器ding级镜头正确涂油的显微镜载片上的底部。
假如浸没接触已被打破，重新申请了冷凝器的油和机架，直到顶端透镜完全浸在油中和底部的滑动接触。
2、问题：视场的中心降低光照强度，有一个暗点，但在外围的对象都亮起，显示正常。
解决方案：台下聚光器位置不正确或光站的目标是错误的大小。
当心机架冷凝器向上和向下，同时在视场中察看试样。
检查做出确定的冷凝器孔径和视场光阑设置打开位置。
假如这并不影响照明，更改视场光阑尺寸使其稍大或稍小，然后重新检查照明。
偶然显现此问题时使用过厚（大于标准一毫米）显微镜载玻片。
使用千分尺或一组表卡尺来确定厚度滑动和滑动/盖玻片组合。
假如滑动太厚，要么更改到正确的厚度的滑动或检查冷凝器，以确定它是否可以调整，以补偿不同厚度的幻灯片。
3、问题：灯往往有一个很短的寿命，灯泡内部有涂层的黑色蒸发的钨烧结。
解决方案：长时间在过高的电压，这确定会影响其寿命的灯泡已使用。
更换灯泡削减灯电压经过察看和/或试样的显微摄影。
4、问题：图像有明场暗区的中心的带或不带外周。
解决方案：这个问题是典型的台下冷凝器时，被错误地集中或场站太小。
恢复明场，并重新建立科勒照明的条件下，再重复暗场的过程中，确保冷凝器集中。
假如这没有帮忙，加添视场光阑的大小，直到建立适当的暗场条件，当使用目标具有太高的数值孔径为暗场聚光，也可能显现这个问题。
暗视场显微镜的原理及注意事项 显微镜操作规程
暗视场显微镜的原理及注意事项显微镜操作规程暗视场显微镜：使用特别的暗视场聚光镜使照明光线偏移而不进入物镜，只有样品的散射光进入物镜。
注意事项1、制作暗视场光挡时，若光挡直径过小或光挡的中心位置不正，则不能全部挡掉直射光，视野不暗，样品与背景的明暗反差不明显；若光挡直径过大，聚焦到样品上的光线不足，使暗视野显微镜察看到的样品亮度不佳，影响察看效果。
2、使用暗视野显微镜时，照明光源的照明强度要高，否则样品的反射光强度不够，影响察看效果。
3、若视场中样品与背景明暗反差不强时，可以上下调整聚光器的位置，使视场内的反差提高。
4、要求使用的载玻片和盖玻片必需无划痕且无灰尘，物镜前透镜也必需清洁无尘。
载玻片与盖玻片的厚度应符合标准。
载玻片太厚，聚光器的焦点将落在载玻片内，达不到被检物体的平面上；使用油镜头时，由于物镜的工作距离很短，甚至无法调焦，从而看不到或看不清被检物体。
5、载玻片的厚度要适合，照明光束经暗视野显微镜聚光器后，产生空心照明光锥，即中心为暗区。
而反射光的焦点在聚光器上透镜表面之上，很短的距离。
因此，载玻片的适合厚度为0.8～1.2mm。
6、物镜的数值孔径必需小于聚光器的数值孔径，否则会因物镜的孔径角大于暗视野显微镜聚光器所形成的照明光束中心暗区的角度，致使部分照明光线射入物镜，破坏或降低了暗视场的照明。
7、暗视野显微镜镜检时室内要暗，假如没有这样的条件，应尽可能使用遮光装置，以阻拦目镜四周的光线射入。
8、在进行油镜镜检时，由于油内的杂质和气泡的漫反射，会阻拦暗视野显微镜镜检效果，所以要求尽可能地除掉油内的杂质和气泡。
工作原理暗视场显微镜在构造上应用丁达尔现象（Tyndall phenomenon:当聚光光束射入溶胶时，从光束的侧面可以看到一条发亮的光柱，在光的传播过程中，光线照射到粒子时，如粒子直径略小于入射光波长，则发生光的散射，每个微粒就成为一个发光点，从侧面可以看到一条光柱。
），装配了一类特别聚光器暗视场聚光器，使入射光束，从聚光器斜向照明被检样品。
实验二_暗视野显微镜
线会在其处发生漫射而影响暗视野的照明。 (4)照明光源的照明强度要高。若照明强度不够，
样品的反射光强度不够，会响观察。
主要用来观察活细胞中微粒的运动观察单细胞硅藻放线菌细菌的线状结构如鞭毛和纤材料和试剂普通光学显微镜相差显微镜多功能显微镜黑卡纸圆规剪刀直尺草履虫载玻片盖玻片擦镜纸吸水纸棉花等实验内容与方法暗视野挡板的制作1选择要观察的物镜
暗视野显微镜
实验目的： 1.了解暗视野显镜的构造原理和使用方法。 2.学习制造暗视野挡板
材料和试剂
普通光学显微镜、相差显微镜、多功能 显微镜、黑卡纸、圆规、剪刀、直尺、 草履虫、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸 水纸、棉花等
实验内容与方法
暗视野挡板的制作 (1)应倍数的物
镜相对应,对标本准焦。 (3)从显微镜上卸下聚光器，用圆规量出孔径光阑开
实验原理
暗视野显微镜在构造上应用了光学上的丁达尔现 象。和普通光学显微镜相比，它在聚光镜中央有挡 光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本 反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑 的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小 至4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50 倍，但是只能看到物体的存在和运动，不能辨清其 结构。主要用来观察活细胞中微粒的运动，观察单 细胞、硅藻、放线菌、细菌的线状结构如鞭毛和纤 维等。
孔的直径，以上测直径在相纸上绘一圆。 (4)再测量聚光器下方滤片支架的直径。以上测直径
在相纸上作另一同心圆。 (5)在两圆之间绘出三条连接的支架，用剪刀剪下两
圆，放入滤片支架中。 (6)将聚光器安装回显微镜，即得该物镜的暗视野挡
暗视野显微镜检查法
暗视野显微镜检查法暗视野显微镜又叫暗场显微镜，是一种通过观察样品受侧向光照射时所产生的散射光来分辨样品细节的特殊显微镜。
1、暗视野显微镜的原理和结构特点暗视野显微镜和一般的明视野显微镜区别在于二者的聚光器不同，暗视野显微镜装有一个中央遮暗的聚光器，使光线不能通过聚光器，而只能从聚光器四周边及未遮暗的部位斜射到载玻片的标本上。
因光线是斜射的，不能进入物镜，故观察的视野是暗的，而聚光器斜射到菌体上的光线，因光散射作用而使菌体发出亮光，反射到物镜内，这样在显微镜中可见到暗视野中明亮的物像。
暗视野显微镜主要用于检查未染色标本的形态和运动能力。
2、操作方法①使用研究用暗视野显微镜，或将普通光学显微镜上的聚光器取下，换上暗场聚光器。
②不论是使用干燥物镜还是油浸物镜，镜检时都应在聚光器的上透镜上加一大滴香柏油。
③将制作好的细菌悬滴标本片置于载物台上，上升聚光器至顶部使油与载玻片接触。
④放大光源。
⑤进行聚光器光轴调节及调焦。
用10*物镜找到被检物像，关小聚光器虹彩光圈至可在视野中看到视场光阑的轮廓，再上下缓慢调整聚光器，这样会使视场光阑的像变得清晰，如视场光阑不在场中央，利用聚光器外侧的两个调节钮进行调整，当亮光点调到场中央后，再将其开大，即可进行观察。
3、注意事项①暗视野观察所用物镜的数值孔径宜在1.00—1.25左右，太高反而效果不佳，最好是使用带视场光阑的物镜，转动物镜中部的调节环，可随意改变数值孔径的大小。
②要求使用的载玻片和盖玻片必须无划痕且无灰尘，物镜前透镜也必须清洁无尘。
载玻片与盖玻片的厚度应符合标准。
载玻片太厚，聚光器的焦点将落在载玻片内，达不到被检物体的平面上;使用油镜头时，由于物镜的工作距离很短，甚至无法调焦，从而看不到或看不清被检物体。
③镜检时室内要暗，如果没有这样的条件，应尽可能使用遮光装置，以阻止目镜周围的光线射入。
④在进行油镜镜检时，由于油内的杂质和气泡的漫反射，会妨碍视场的镜检效果，所以要求尽可能地除掉油内的杂质和气泡。
二、暗视野显微镜
以丁达尔效应为基础，常用于微生物，胶体化学，观察 单细胞有机体，硅藻，放线虫类，细菌等具有线性结 构的物体：鞭毛、纤维。浮游生物，悬浮细胞，精子， 梅毒螺旋体等，不适合观察染色的标本 只能看到物体的存在和应用，看不到内部的细微结构
（二）结构： 结构特点: 使用中央遮光板或暗视野聚光器（常用 的是抛物面聚光器），使光源的中央光束 被阻挡。不能由下而上地通过标本进入物 镜。从而使光线改变途径，倾斜地照射在 观察的标本上，标本遇光发生反射或散射， 散射的光线投入物镜内，因而整个视野是 黑暗的。
（三）操作： 1、样品制备：蒸馏水一小滴→ 载玻片 →牙 签取口腔上皮细胞→混匀→盖上盖玻片 → 吸 去多余水→ 封片 2、装暗视野聚光器，若用油浸系时，需在载 玻片与聚光器之间滴油 3、标本置于载物台上 ，用10倍物镜聚焦 升高聚光器直至出现一个清晰的光点，将其调 中 4、换用高倍时，需注意其数值孔径应低于聚 光器的数值孔径（N.A.）
（四）注意事项： 1、物镜NA<聚光器NA 2、要调中 3、 载玻片1mm标准，盖玻片0.17mm标准且 干净无痕 4、标本不能太厚、太密，不适于染色标本
实验报告： 1、为什么物镜NA应小于聚光器NA？ 2、为什么要把聚光器调到视野中只有一个 清晰光点，并且要把它调到中央？ 3、正确的操作步骤是什么？你在实际操作 过程中遇到了哪些具体问题？如何解决的？ 试剂和器材： 蒸馏水 暗视野显微镜 载玻片 牙签 滤纸条 指甲油
（一）原理 丁达尔效应-----光通过浑浊的媒质（如烟雾、 悬浮液、乳状液）时，从入射光的垂直方 向可以观察到胶体里出现的一条光亮的通 路，是浑浊媒质所呈现出的光的强烈散射 现象。 三个特点： 1、斜射照明，使背景为暗色，物体发亮 2、观察到的光为非直射光，是散射光 3、非物体本身，而是它的衍射图像，因此 它的应用受到限制
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线会在其处发生漫射而影响暗视野的照明。 (4)照明光源的照明强度要高。若照明强度不够，
样品的反射光强度不够，会响观察。
暗视野显微镜
实验目的： 1.了解暗视野显镜的构造原理和使用方法。 2.学习制造暗视野挡板
实验原理
暗视野显微镜在构造上应用了光学上的丁达尔现 象。和普通光学显微镜相比，它在聚光镜中央有挡 光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本 反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑 的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小 至4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50 倍，但是只能看到物体的存在和运动，不能辨清其 结构。主要用来观察活细胞中微粒的运动，观察单 细胞、硅藻、放线菌、细菌的线状结构如鞭毛和纤 维等。
孔的直径，以上测直径在相纸上绘一圆。 (4)再测量聚光器下方滤片支架的直径。以上测直径
在相纸上作另一同心圆。 (5)在两圆之间绘出三条连接的支架，用剪刀剪下两
圆，放入滤片支架中。 (6)将聚光器安装回显微镜，即得该物镜的暗视野挡
板。
实验内容与方法
使用注意事项 (1)聚光器与物镜的数值孔径应合理匹配，物镜
材料和试剂
普通光学显微镜、相差显微镜、多功能 显微镜、黑卡纸、圆规、剪刀、直尺、 草履虫、载玻片、盖玻片、擦镜纸、 (1)选择要观察的物镜。 (2)转动聚光器孔径光阑调节环，使与相应倍数的物
镜相对应,对标本准焦。 (3)从显微镜上卸下聚光器，用圆规量出孔径光阑开