植物的器官培养
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失发育成苗的能力。引起原因一是生长素浓
度过高，引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织
的形成。• 二是光照太弱或温度太高。
（2）培养问题处理：
III 生长正常型是接种后茎尖基部稍增大并形成
少量愈伤组织，• 茎尖颜色逐渐变绿，并逐渐
伸长，叶原基发育成可见的小叶，进而形成
小苗。
（3）培养条件：
培养时每天光照可长一些，最长达16h/d，照度
一、离体根培养
2．无性系的建立和培养、应用 1)将种子进行表面消毒，在无菌条件下用湿布培养萌发，至根伸长1.0cm以上。 2)从根尖一端切取长1.2cm的尖端，接种于培养基中。3)培养物生长甚快，• 几天后发育 出侧根。待侧根生长约一周后，即切取侧根的根尖进行接种培养，如此反复，得到 离体根的无性系。 4)这种根可用来进行根系生理生化和代谢方面的实验研究。如营养选择吸收、根尖伸长 生长、生长素对伸长的影响等
1500-3000Lx，温度25±2℃。并且根据不同植物种 类，• 或者随培养过程的不同，给予适当的昼夜温 差等处理。 注意：防培养基干燥，由于茎尖培养时间较长，通 过定期转移、严加封口等。• 一般茎尖培养在４０ 天左右可直接长成新梢。
（4）继代培养
用茎段切割法。•
继代培养可用MS0培养基。或用生长物质较
5.移栽驯化
⑴ 指标：发现新梢基部生有较浓密的不定根，生长健壮而发达， 长度在1cm以内。 ⑵ 移栽：可先进行几天炼苗程，• 取出→洗培养基→栽入驯化器 皿—基质蛭石：珍珠岩：草炭土为1:1:0.5。 ⑶ 栽后管理：1)初期保持湿度。• 基质浇透水，床面浇湿，• 搭小拱 棚等，并且初期要常喷雾处理。 • 2)后期逐渐减少湿度。拱棚两端打开通风，减少喷水次数。• 以 后揭去拱棚，并控制水分。 ⑷ 温度管理上要掌握适宜的生根温度，最适宜的温度是16～20℃， 春季地温较低时，可用电热线来加温。 光照：初期弱光照，加盖遮阳网或报纸等，后期可直接利用自 然光照。
第六章
植物的器官培养
【学习目的要求】
1．一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择。 2．掌握茎尖培养的种类和操作步骤。 3．掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调 整。 4．掌握离体叶片的培养步骤。 5．一般掌握胚胎培养的类型与各自的注意事项。 6.掌握如何防止培养过程中外植体的褐化和玻璃化。 7.掌握植物器官组织培养常见问题的原因及对策
2．消毒
将采到的茎尖切成0.5～1.0cm长，并将大叶除去，休眠芽预先
剥除鳞片。• 将茎尖置于流水冲洗干净，再在95%的酒精中处理30秒， 然后在稀释20倍的次氯酸钠中浸5～８分钟，最后用无菌水冲洗数次， 沥干后准备接种。 3．• 接种 为了减少污染，在接种前再剥掉一些幼叶，使茎尖为0.5cm大小 左右。• 用作快速繁殖。 注意：一要防褐化。接种时，不用锈刀，动作敏捷，• 随切随接，用 1～5%VC液浸泡处理。二要防干燥
移栽前的工作
（1）培养瓶生壮苗 加入生长控制剂，如多效唑， B9， CCC，其 作用是使苗粗壮，叶绿素增加。
（2）炼苗
将瓶盖打开，打破无菌环境，湿度逐渐下降，光照逐 渐加强，使之形成新的功能强的根和叶片。一般炼苗时 间为10—30D。
生长正常等三种类型。
I 生长太慢：接种后茎尖不增大，只是茎尖逐渐
变绿，出现绿色小点，细胞逐渐老化而进入休
眠状态，• 或者逐渐变褐死亡。引起原因的是生
长素浓度太低，或是温度过低或过高。
（2）培养问题处理：
II 生长太快型：是接种后茎尖迅速增大，在茎
尖基部产生愈伤组织，• 并迅速增殖，而茎尖
不伸长，久之茎尖也形成愈伤组织，从而丧
1.微茎尖：指带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。 2.普通茎尖：指取几mm到几十mm长的顶芽尖及侧芽尖。这里主要介 绍后者 ㈢ 特点：技术简单，• 操作方便，易成活和分化，成苗时间短。
㈣ 步骤如下：
1．取材：挑选洁净、无污染，生长不久的茎，从植物的茎、藤或匍匐枝 上切取2cm以上的顶梢。• 木本植物可事先对茎尖喷几次灭菌药剂。• 用 于普通茎尖培养。
营养吸收、生长和代谢的变化。
㈡ 应用：研究根系生理和代谢变化；也可由根细胞再生成植株，不 仅证明根细胞的全能性，也产生了无性繁殖系，用于生产实践 。
一、离体根培养
㈢ 培养方法： 1．培养基 用无机离子浓度低的White培养 基，也可用MS、B5等，但浓度为2/3或1/2。 White培养基配方为：硝酸钾80，硫酸镁720， 硫酸锰7，硫酸铜0.03，碘化钾0.75， Vpp0.5,VB6 0.1,VB1 0.1,甘氨酸3(mg/L)
低的MS培养基。
也可边增殖边生根培养
（5）诱导生根
I） 用1/2 MS培养基， • 并只加入生长素类调节物质， 如NAA 、IBA等。注意浓度 II）也可将切下的新梢基部浸入50或100ppm的IBA溶液 处理4～8小时，然后转移到无激素的生根培养基中。 III）注意较高浓度的生长素对生根有抑制作用。
5)培养条件为暗光、25～27℃。
3．植株再生培养 第一步诱导形成愈伤组织。• 第二步在再分化培养基上诱导芽的分化、
再分化成小植株。
二、 茎尖培养
㈠ 概念：是切取茎尖部分或茎尖分生组织部分，进行培养的过程。
这是组织培养中用得较多的外植体。因为茎尖分生区是三个分 区的主要部分。
㈡ 茎尖培养可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
4．培养
（1）培养基：• 采用MS培养基或略加修改，或补加其它物
质。也可用其它培养基如White,Heller等。 培养基中生长素是必须的，如2,4-D，IAA,• NAA等，但 是浓度不能太高，一般用0.1mg/L左右，若高易产生畸 形芽或形成愈伤组织。
（2）培养问题处理：
茎尖在培养过程中会出现生长太慢、• 生长太快和
【主要内容】
第一节 营养器官培养 一、离体根培养 二、茎尖培养 三、茎段培养 四、离体叶培养 第二节 生殖器官培养 一、花器官和种子培养 二、胚胎培 三、胚珠培养 第三节 植物器官组织培养常见问题及对策
第wk.baidu.com节
一、离体根培养
营养器官培养
㈠ 离体根培养特点：因为根系生长快，• 代谢强，变异小，加上无菌， 不受微生物干扰，可根据研究需要，• 改变培养的成分来研究其
度过高，引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织
的形成。• 二是光照太弱或温度太高。
（2）培养问题处理：
III 生长正常型是接种后茎尖基部稍增大并形成
少量愈伤组织，• 茎尖颜色逐渐变绿，并逐渐
伸长，叶原基发育成可见的小叶，进而形成
小苗。
（3）培养条件：
培养时每天光照可长一些，最长达16h/d，照度
一、离体根培养
2．无性系的建立和培养、应用 1)将种子进行表面消毒，在无菌条件下用湿布培养萌发，至根伸长1.0cm以上。 2)从根尖一端切取长1.2cm的尖端，接种于培养基中。3)培养物生长甚快，• 几天后发育 出侧根。待侧根生长约一周后，即切取侧根的根尖进行接种培养，如此反复，得到 离体根的无性系。 4)这种根可用来进行根系生理生化和代谢方面的实验研究。如营养选择吸收、根尖伸长 生长、生长素对伸长的影响等
1500-3000Lx，温度25±2℃。并且根据不同植物种 类，• 或者随培养过程的不同，给予适当的昼夜温 差等处理。 注意：防培养基干燥，由于茎尖培养时间较长，通 过定期转移、严加封口等。• 一般茎尖培养在４０ 天左右可直接长成新梢。
（4）继代培养
用茎段切割法。•
继代培养可用MS0培养基。或用生长物质较
5.移栽驯化
⑴ 指标：发现新梢基部生有较浓密的不定根，生长健壮而发达， 长度在1cm以内。 ⑵ 移栽：可先进行几天炼苗程，• 取出→洗培养基→栽入驯化器 皿—基质蛭石：珍珠岩：草炭土为1:1:0.5。 ⑶ 栽后管理：1)初期保持湿度。• 基质浇透水，床面浇湿，• 搭小拱 棚等，并且初期要常喷雾处理。 • 2)后期逐渐减少湿度。拱棚两端打开通风，减少喷水次数。• 以 后揭去拱棚，并控制水分。 ⑷ 温度管理上要掌握适宜的生根温度，最适宜的温度是16～20℃， 春季地温较低时，可用电热线来加温。 光照：初期弱光照，加盖遮阳网或报纸等，后期可直接利用自 然光照。
第六章
植物的器官培养
【学习目的要求】
1．一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择。 2．掌握茎尖培养的种类和操作步骤。 3．掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调 整。 4．掌握离体叶片的培养步骤。 5．一般掌握胚胎培养的类型与各自的注意事项。 6.掌握如何防止培养过程中外植体的褐化和玻璃化。 7.掌握植物器官组织培养常见问题的原因及对策
2．消毒
将采到的茎尖切成0.5～1.0cm长，并将大叶除去，休眠芽预先
剥除鳞片。• 将茎尖置于流水冲洗干净，再在95%的酒精中处理30秒， 然后在稀释20倍的次氯酸钠中浸5～８分钟，最后用无菌水冲洗数次， 沥干后准备接种。 3．• 接种 为了减少污染，在接种前再剥掉一些幼叶，使茎尖为0.5cm大小 左右。• 用作快速繁殖。 注意：一要防褐化。接种时，不用锈刀，动作敏捷，• 随切随接，用 1～5%VC液浸泡处理。二要防干燥
移栽前的工作
（1）培养瓶生壮苗 加入生长控制剂，如多效唑， B9， CCC，其 作用是使苗粗壮，叶绿素增加。
（2）炼苗
将瓶盖打开，打破无菌环境，湿度逐渐下降，光照逐 渐加强，使之形成新的功能强的根和叶片。一般炼苗时 间为10—30D。
生长正常等三种类型。
I 生长太慢：接种后茎尖不增大，只是茎尖逐渐
变绿，出现绿色小点，细胞逐渐老化而进入休
眠状态，• 或者逐渐变褐死亡。引起原因的是生
长素浓度太低，或是温度过低或过高。
（2）培养问题处理：
II 生长太快型：是接种后茎尖迅速增大，在茎
尖基部产生愈伤组织，• 并迅速增殖，而茎尖
不伸长，久之茎尖也形成愈伤组织，从而丧
1.微茎尖：指带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。 2.普通茎尖：指取几mm到几十mm长的顶芽尖及侧芽尖。这里主要介 绍后者 ㈢ 特点：技术简单，• 操作方便，易成活和分化，成苗时间短。
㈣ 步骤如下：
1．取材：挑选洁净、无污染，生长不久的茎，从植物的茎、藤或匍匐枝 上切取2cm以上的顶梢。• 木本植物可事先对茎尖喷几次灭菌药剂。• 用 于普通茎尖培养。
营养吸收、生长和代谢的变化。
㈡ 应用：研究根系生理和代谢变化；也可由根细胞再生成植株，不 仅证明根细胞的全能性，也产生了无性繁殖系，用于生产实践 。
一、离体根培养
㈢ 培养方法： 1．培养基 用无机离子浓度低的White培养 基，也可用MS、B5等，但浓度为2/3或1/2。 White培养基配方为：硝酸钾80，硫酸镁720， 硫酸锰7，硫酸铜0.03，碘化钾0.75， Vpp0.5,VB6 0.1,VB1 0.1,甘氨酸3(mg/L)
低的MS培养基。
也可边增殖边生根培养
（5）诱导生根
I） 用1/2 MS培养基， • 并只加入生长素类调节物质， 如NAA 、IBA等。注意浓度 II）也可将切下的新梢基部浸入50或100ppm的IBA溶液 处理4～8小时，然后转移到无激素的生根培养基中。 III）注意较高浓度的生长素对生根有抑制作用。
5)培养条件为暗光、25～27℃。
3．植株再生培养 第一步诱导形成愈伤组织。• 第二步在再分化培养基上诱导芽的分化、
再分化成小植株。
二、 茎尖培养
㈠ 概念：是切取茎尖部分或茎尖分生组织部分，进行培养的过程。
这是组织培养中用得较多的外植体。因为茎尖分生区是三个分 区的主要部分。
㈡ 茎尖培养可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
4．培养
（1）培养基：• 采用MS培养基或略加修改，或补加其它物
质。也可用其它培养基如White,Heller等。 培养基中生长素是必须的，如2,4-D，IAA,• NAA等，但 是浓度不能太高，一般用0.1mg/L左右，若高易产生畸 形芽或形成愈伤组织。
（2）培养问题处理：
茎尖在培养过程中会出现生长太慢、• 生长太快和
【主要内容】
第一节 营养器官培养 一、离体根培养 二、茎尖培养 三、茎段培养 四、离体叶培养 第二节 生殖器官培养 一、花器官和种子培养 二、胚胎培 三、胚珠培养 第三节 植物器官组织培养常见问题及对策
第wk.baidu.com节
一、离体根培养
营养器官培养
㈠ 离体根培养特点：因为根系生长快，• 代谢强，变异小，加上无菌， 不受微生物干扰，可根据研究需要，• 改变培养的成分来研究其