淀粉、总糖、还原糖的测定方法

淀粉、总糖、还原糖的测定方法

淀粉的测定方法---蒽酮法

一( 原理

用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。二( 仪器设备

三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计

三( 试剂

盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮

四、试剂的配制和标准曲线的绘制

1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。

2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液

(100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至

500ml

4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml

5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中

6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424

保存2,3周。

五实验步骤

1. 分离出水溶性糖

0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸

提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入

8ml80%乙醇。重复三次

2. 水解

残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。

3. 测定

取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色

六结果的计算与表述

C=AN*0.9/W

C—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(g)

A—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数

蒽酮比色法测总糖:

实验步骤:

1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。

2、总糖的测定:取提取液1毫升于试管中(空白中用1毫升蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色。

蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+2402424的蒸馏水)，棕色瓶冰箱保存2~3周。

3、标准曲线的绘制:取干洁试管6支，依次加入葡萄糖标准液(100μg/ml)0、0.2、0.

4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，绘出标准曲线。

4、计算:C=AN/W

C—样品总糖含量(μg/g)

W—样品重量(g)

A—标准曲线查得的糖量(μg)

N—样品提取液占样品反应液的倍数

总糖、还原糖、淀粉测定所需试剂

无水葡萄糖(AR级) 蒽酮乙醇浓盐酸氢氧化钠

3，5—二硝基水杨酸(DNS) 酒石酸钠结晶酚亚硫酸钠

滤纸，PH试纸，小标签纸

3，5—二硝基水杨酸(DNS)比色法测还原糖仪器与用具:

25ml刻度试管;离心管;100ml玻璃烧杯;100ml三角瓶;刻度吸管1ml、2ml、

10ml;沸水浴;离心机;电子天平;分光光度计。

试剂:

1. 1mg/ml葡萄糖标准液:准确称取100mg分析纯葡萄糖(预先在80?烘至恒

重)，在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。 2. 3,5,二硝基水杨酸(DNS): 6.3g 3,5,二硝基水杨酸和262ml

2mol/lNaOH，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶

备用。

实验步骤:

1(可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%乙醇，于80?水浴浸提30min，冷却后于4000转离心5min收集上清液，残渣再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。

2(还原糖的测定:取提取液1ml于试管中(空白中用1ml蒸馏水代替)，加入DNS 试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml，摇匀，然后在540nm波长处比色。

3(标准曲线的绘制:取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液

(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入DNS试剂1.5ml，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温，再用蒸馏水定容至25ml刻度处，摇匀，然后在540nm波长处比色。

4(计算:还原糖(,)=〔(C×V/a)/(W×1000)〕×100

C—标准曲线方程求得的还原糖含量mg数;

V,提取液的体积(ml);

W—样品重量(g);