病原微生物生理学检验优秀课件

(2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。 (3)方法：将待检菌接种于上述培养基中，
培养2~4d，于培养基内加入甲基红试剂， 立即观察结果。 (4)结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱 阳性；黄色为阴性。
(5)应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产 气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。 此外肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、 枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性， 而肠杆菌属则为阴性。
(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞，染色体特 征类似肿瘤细胞。常用的有人宫颈癌细胞 (Hela)、人喉上皮癌细胞(Hep-2)。
三、真菌的分离培养
1.大培养 2.小培养
(1) 玻片法 (2) 钢圈法 (3) 方块法
第二节 毒素的检测
一、细菌内毒素的测定
主要用于诊断病人是否发生革兰阴性细 菌感染。另外，还可用于检测注射用液和 生物制品有无内毒素污染
4. 枸橼酸盐试验(Simmons法）
原理: 枸橼酸盐利用试验是检 测细菌能否利用枸橼酸盐作 为碳的唯一来源的特征，培 养基含有枸橼酸钠和磷酸二 氢胺
结果：培养基由绿色变为深蓝 色为阳性
用途：用于肠杆菌科内各种细 菌的鉴别
5.丙二酸盐试验
• 某些细菌以丙二酸盐 为唯一碳源，生成碳 酸钠
• 使培养基变碱性 • 阳性结果 蓝色 • 溴麝香草酚蓝
(三)细菌的培养方法
1.需氧培养法 2.二氧化碳培养法
1) 二氧化碳培养箱 2) 烛缸法 3) 化学法 3.厌氧培养法
二 病毒分离培养
1．动物接种 动物对病毒的敏感性是不同的，
选择合适动物十分重要。小鼠、乳鼠、 家兔、豚鼠、猴等常用于分离病毒。
2．鸡胚接种 鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹
病毒、痘类病毒的较为理想的材料 3. 组织培养
本试验对内毒素具有高度特异性，灵 敏度高，可检查出0.005～ 0.0005μg/ml内 毒素。且操作简便，速度快，在2h内即 可得出结论。
二、外毒素的测定
1．体内毒力试验 细菌外毒素对机体的毒性作用，可被
相应抗毒素中和，若先给动物注射抗毒素， 然后再注射外毒素，则动物不产生中毒症 状。
2．体外毒力试验
1．细菌内毒素的致热作用
常以家兔作为实验动物，家兔正 常体温38.5℃～40℃。抽取被检物注 入家兔耳静脉，记录体温变化情况， 分析实验结果
2．鲎试验
鲎血液的有核变形细胞内含凝 固酶 原及凝固蛋白原，当内毒素与鲎变形细 胞冻融后的溶解物(鲎试剂)接触时，可激 活凝固酶原，使可溶性的凝固蛋白原变 成凝胶状态的凝固蛋白，利用此种反应 来检测内毒素。
(4)结果：在数分钟内出现红色为阳性；如 无红色出现且于35 ℃ 4h后仍如故者即为 阴性。
(5)应用：常与甲基红试验一起使用，因为 前者阳性的细菌，后者通常为阴性。
3．甲基红试验
(1)原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮 酸，进一步分解，产生甲酸等，使pH 降至4.5以下，加入甲基红试剂则呈红 色为阳性。若分解葡萄糖产酸量少，则 pH 6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄 色，为阴性。
外毒素抗原性强，可刺激机体产生相 应的抗体。在体外以细菌外毒素的特异性 免疫血清为抗体与被检细菌外毒素(抗原) 进行抗原抗体反应，来检测外毒素，从而 鉴定细菌是否产生该种毒素。如白喉棒状 杆菌的Elek平板毒力测定
３．ELISA法
如葡萄球菌肠毒素、肠产毒型大肠埃 希菌LT及ST等的测定
第三节 生化反应
6. 氰化钾抑制试验
• 原理：检测细菌能否被一定浓度的氰化 钾抑制而不能生长
病原微生物生理学 检验
第一节 分离培养
一、细菌的分离培养
（一）培 养 基
由人工方法配制而成的，专供微生物生 长繁殖使用的混合营养物制品。
1.培养基种类
① 基础培养基 ② 营养培养基 ③ 鉴别培养基 ④ 选择培养基 ⑤ 特殊培养基
包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。 ① 碱性琼脂 ② 血液增菌培养基 ③ 营养肉汤
是指将人或动物离体的活组织或 分散的活细胞放在实验室的试管或培 养瓶中,模拟体内的生理条件使之生长
2. 组织细胞培养
根据细胞的来源、特性和传代次数分为：
(1)原代细胞培养：将细胞悬液加入营养液 培养，形成的单层细胞，称之为原代细胞。
(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体特性。寿 命一般为40～50代，如人胚肺细胞。广泛用 于病毒分离和疫苗制备。
不同细菌具有各自独特的酶系统， 因而对底物的分解能力各异，其代谢的 产物也不相同。这些代谢产物又各具有 不同的生物化学特性，为此，可利用生 物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定 细菌
1．糖(醇、苷)类发酵试验
(1)原理：由于细菌含有发酵不同糖类的酶， 故分解糖的能力不同，终末产物亦不一 致。有的能分解，有的仅能分解1~2种， 还有的不能分解。有的产酸产气，有的 仅产酸，故可利用鉴别细菌
(2)培养基：在培养基中加入0.5％-1％的糖 类(单糖、双糖或多糖)、醇类(甘露醇、 肌醇等)、苷类(水杨苷、菊糖等)。可为 液体、半固体、固体或微量生化管几种 类型
(3)方法：将细菌接种到糖发酵培养基中， 培养数小时至2w后，观察结果
(4)结果：能分解糖产酸时，呈酸性反应， 若产气可出现气泡或培养基内有裂隙等 现象;若不分解，除有细菌生长外，无任 何变化
(5)应用：是鉴定细菌最主要的试验，特别 对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要
2．V-P试验
(1)原理：某些细菌分解葡萄糖产生 丙酮酸，脱羧产生乙酰甲基甲醇， 在碱性环境中被氧氧化为二乙酰， 进而与胍基起作用生成红色化合物， 则为V-P试验阳性。
(2)培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。
(3)方法：将待检菌接种于上述培养基中， 于35 ℃培养48h后加入甲液(6％n·萘酚酒 精溶液)和乙液(40％KOH溶液)，振摇。
分离培养基的选择
依据卫生部临床检验中心推荐，应备有 如下分离培养基：
1．血平板 2．巧克力血平板 3．中国蓝平板或伊红美蓝平板 4．麦康凯平板 5．SS琼脂
2.培养基的组成成分
营养物质 凝固物质 抑制剂பைடு நூலகம்指示剂
(二)细菌的接种方法
1.平板划线分离法
1) 连续划线分离法 2) 分区划线分离法
2.斜面接种法 3.液体接种法 4.穿刺接种法 5.倾注平板法 6.涂布接种法