高效液相色谱法对黄精多糖分子量及组成的测定

、 改善老龄大鼠 老 化 相 关 酶 的 活 性 及 对 老 龄
［!］
大鼠明显的促智作 用
， 这说明黄精多糖是中蒙药
成分中有效的活性成分之一。它的生物活性和化学
收稿日期： !""& )"$ )"’
作者简介： 张晓红， 女， 硕士， 讲师， 现在内蒙古大学化学化工学院工作， *+# ： （ "&$* ） )!)!&%’ ， ,)-./# ： 01"#!’ + !* 23’ 2&-’ 通讯联系人： 博・格日勒图， 男， 博士， 教授， 博士生导师， *+# ： （ "&$* ） &’’!#** ’ 基金项目： 国家自然科学基金资助项目 （ (&’ !"")&""* ） ， 国家科技部医药技术创新基金资助项目 （ (&’ ’) )’"* )") ))’ ） ’
图 ! " 凝胶高效液相色谱法测定 "#" 的相对分子质量 $%&! !" ’()*+%,( -.)(/0)*1 -*22 3(+(1-%4*+%.4 .5 "#" 67 8"9: ;%+< * =": /.)0-4 $ L *$* ；& L 7&0F(25L
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#" 结果与讨论
# ! !" "#" 的纯度和相对分子质量的测定结果 ! ! 采用高效液相 色 谱 法， 利用凝胶色谱柱测定多 糖的相对分子质量。测定结果表明黄精干燥根的提 取物为均匀 单 一 的 对 称 峰， 表 明 *$* 为 均 一 产 品。 *$* 的数均相 对 分 子 质 量 （ !2 ） 为 ) ")% ， 相对分子 质量 （ !6） 为) &!) ， K 均相对分子质量 （ !B ） 为 ) !’) ， 分散系数为 $* "&’ ； *$* 的峰 形较 窄 （ 见图 $ ） ， 表明 *$* 相对分子质量的分布范围较小。
!" 材料与方法
! ! !" 材料与仪器 ! ! 内蒙古产黄精 （ 呼和 浩 特 医 药 公 司 ） ； 标准多糖 为 */00/012 *3#"" ， *3!"" ， *3&"" ， *3$"" ， *3’" ， *3$" ， *3’ （ 美国 $%&’() 公 司 ） ； 单 糖 标 样 为 葡 萄 糖、 半乳 糖、 甘露糖、 果糖 （ 分 析 纯， 北京化学试剂公司） ， 提 取所用的 试 剂 均 为 分 析 纯。 415(67 公 司 高 效 液 相 色谱仪、 &!$" 示 差 检 测 器、 ’$’ 型 高 压 进 样 泵； $%&3 ’() 8*+ 凝 胶 色 谱 柱、 $%&’() $*"#$" 糖 色 谱 柱； "#3$(" 紫外分光检 测 仪 （ 日本岛津公司） ； *93&!"" 型元素分析仪 （ *(6:;2 90<(6 +&<=12> ） ； ?@- ’"" -AB 核磁共振仪 （ 德国 C6/:(6 公司） 。 ! ! #" 方法 ! ! # ! !" *$* 的提取与纯化 ! ! 将黄精的干燥根磨成粉末， 于 )" D 下干燥后用 乙醚脱去脂肪， 再用无水乙醇加热回流除去醇溶物， 最 后加入蒸馏水于 #" D 下回流 & % 。提取 & 次。合 并 & 次提取液， 离心， 过滤， 依次用无水甲醇沉淀， 丙 酮、 乙醚洗涤； 重复操作 % 次。沉淀物用水溶解后 浓 缩， 于冷冻真空干燥机上冻干， 得浅黄色粗黄精多糖 （ E*$* ） 。将以 上 得 到 的 E*$* 充 分 溶 解， 用胰蛋白 酶法与 $(F1G 法 结 合 脱 去 E*$* 中 的 蛋 白 质， 然后 于% ("" 6 H <;2 速 率 下 离 心 $’ <;2 ， 除 去 凝 胶 状 物， 重复操作多次。上清 液透析 % ’ ， 用 活 性 炭脱 色， 离 心， 过滤。浓缩后， 经甲醇沉淀， 丙酮洗涤， 水溶解后 浓缩， 再冷冻干燥， 得纯白色粉末， 即为 *$* 。 ! ! # ! #" *$* 的纯度和相对分子质量的测定 ! ! 用 A*I+ 法测定 *$* 的相 对分 子 质 量， 色谱柱 为 $%&’() 8*+ 凝胶柱， 流动相为 "* "& <&0 H I 的磷 酸盐缓冲溶液 （ =A (* + ） ， 流速 $ <I H <;2 ， 柱温为 %’ D， 进 样 量 &" ! I ， 示 差 折 光 检 测 器 检 测， 检测池温 度为 %’ D 。 用 标 准 多 糖 */00/012 *3#"" ， *3!"" ， *3 &"" ， *3$"" ， *3’" ， *3$" ， *3’ 做校正曲线， 基线稳定后 进样测定。 ! ! # ! $" *$* 单糖组成的测定 ! ! 准 确 称 取 *$* ， 置 于 螺 口 试 管 中， 加 入 "* ’ <&0 H I 的 A & $J ! 溶 液， 充 入 ,& ， 拧 好 试 管 盖， 于 +" D 下水解 # % ， 用 C1+J % 中和至 =A 值为 ) ， 离心， 过 滤， 将过滤液浓 缩 后 冷 冻 干 燥。 用 同 样 的 方 法 对 单 糖 （ 葡萄糖、 半乳糖、 甘露糖、 果糖） 标样进行处理。 ! ! 用水配制单糖标样及 *$* 全水 解 物 水 溶 液， 使 其质量浓度均为 $" G H I 。
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组成与 其 相 对 分 子 质 量 有 密 切 的 关 系［ % ］。 分 离 和 纯化多糖的方法 很 多［ & ］。 本 文 采 用 热 水 提 取， 反复 用甲醇、 丙 酮 沉 淀 析 出 的 方 法［ # ］ 得 到 粗 黄 精 多 糖 （ J:5: ） ， 并用胰蛋白酶法与 5+6.7 法结合 脱 去 其 中 的蛋白质得到纯黄精多糖 （ :5: ） 。采用高效液 相色 对 :5: 的纯度、 相对分子质量、 相对 分 谱法 （ @:N; ） 子质量分布及完全酸水解后的单糖组成进行了测定 分析。高效液 相 色 谱 法 对 :5: 的 纯 度 测 定 结 果 与
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高效液相色谱法对黄精多糖相对分子质量及组成的测定
张晓红， 4 博・格日勒图， 4 昭日格图， 4 娜日苏
（ 内蒙古大学高分子化学及蒙药研究所，内蒙古 呼和浩特 "*""!* ） 摘要： 从内蒙古野生黄精根茎中提取出粗黄精多糖， 并用胰蛋白酶法和 5+6.7 法 结 合 脱 去 其 中 的 蛋 白 质， 采用高效 相对分子质量和相对分子质 量 的 分 布 进 行 了 测 定， 结果表明所得 液相色谱法， 利用 51&8+0 9:; 色谱柱对其纯度、 产物为均一成分， 测得的数均相对分子质量 （ !3 ） 为 $ "$% ， 相对分子质量 （ !< ） 为 $ !&$ ， 分散系数为 *, "!# 。以水为 结果表明， 黄精多糖是由单一的果糖组成的。 流动相， 利用 51&8+0 5:"-*" 糖色谱柱对黄精多糖的组成进行分析， 关键词： 高效液相色谱法； 相对分子质量； 组成； 黄精多糖 中图分类号： =)#-. . . 文献标识码： >4 4 4 文章编号： *""" )-$*% （ !""# ） "& )"%’& )"%
! 第!期
张晓红等： 高效液相色谱法对黄精多糖相对分子质量及组成的测定
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紫外 （ "# ） 分 析 和 元 素 分 析 的 测 定 结 果 一 致； 利用 $%&’() $*"#$" 糖色谱柱对黄精多糖组成 的 分 析结 （ ,-. ） 的测定结果也一致。 果与 + 核磁共振
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! ! 用 A*I+ 法 测 定 *$* 的 单 糖 组 成， 色谱柱为 $%&’() $*"#$" 糖柱， 流动 相 为 三 次 蒸 馏 水， 流速 $ <I H <;2 ， 柱温 #" D ， 进 样 量 为 &" ! I ， 示差折光检 测器 检 测。 待 高 效 液 相 色 谱 仪 基 线 稳 定 后 进 样 测试。
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