医学课件新城疫病毒的鸡胚培养和病毒滴度检测
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病毒的鸡胚培养
实验九 新城疫病毒的鸡胚培养 与病毒滴度检测
扬州大学兽医学院 成大荣
2009年5月4日星期一来自一、目的要求1. 掌握鸡胚接种的常规方法； 2. 学习NDV的分离培养及其鉴定方法。
二、背景知识介绍
1. 病毒的鸡胚培养
① 鸡胚是正在发育的活体：
• 组织分化程度低； • 细胞代谢旺盛； • 适于许多病毒的生长增殖， 尤其是禽类病毒。
④ 血凝性：可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。 ⑤ 病毒分离培养：9~11日龄鸡胚尿囊腔接种。
三、实验材料
1. 2. 3. 4. 5. 常规接种工具：注射器、打孔器、酒精灯等； 待接种的新城疫病毒材料； 9~11日龄鸡胚（1个/人）； 灭菌生理盐水； 其他： • 镊子、照蛋器； • 酒精棉球、碘酊棉球； • 固体石蜡； • 灭菌瓶子、灭菌吸管 等。
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种 ：
2. 新城疫病毒
① 副粘病毒科/副粘病毒亚科/禽腮腺炎病毒属。 ② 新城疫的病原体。 ③ 形态： • • • • • 病毒子多呈球形； 单股负股RNA； 核衣壳螺旋形对称； 有囊膜； 囊膜表面有纤突。
7. 病毒的收获与鸡胚的观察
① 收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血; ② 取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面； ③ 用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜； ④ 以眼科镊镊住绒毛尿囊膜，用吸管吸取 尿囊液，置无菌容器中保存备用。 一般能尿囊液6-10mL。 ⑤ 取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病 理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。
4. 注入病毒材料
• 用1mL注射器抽取接种物； • 针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内； • 注入待接种的新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。
扬州大学兽医学院 成大荣
2009年5月4日星期一来自一、目的要求1. 掌握鸡胚接种的常规方法； 2. 学习NDV的分离培养及其鉴定方法。
二、背景知识介绍
1. 病毒的鸡胚培养
① 鸡胚是正在发育的活体：
• 组织分化程度低； • 细胞代谢旺盛； • 适于许多病毒的生长增殖， 尤其是禽类病毒。
④ 血凝性：可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。 ⑤ 病毒分离培养：9~11日龄鸡胚尿囊腔接种。
三、实验材料
1. 2. 3. 4. 5. 常规接种工具：注射器、打孔器、酒精灯等； 待接种的新城疫病毒材料； 9~11日龄鸡胚（1个/人）； 灭菌生理盐水； 其他： • 镊子、照蛋器； • 酒精棉球、碘酊棉球； • 固体石蜡； • 灭菌瓶子、灭菌吸管 等。
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种 ：
2. 新城疫病毒
① 副粘病毒科/副粘病毒亚科/禽腮腺炎病毒属。 ② 新城疫的病原体。 ③ 形态： • • • • • 病毒子多呈球形； 单股负股RNA； 核衣壳螺旋形对称； 有囊膜； 囊膜表面有纤突。
7. 病毒的收获与鸡胚的观察
① 收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血; ② 取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面； ③ 用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜； ④ 以眼科镊镊住绒毛尿囊膜，用吸管吸取 尿囊液，置无菌容器中保存备用。 一般能尿囊液6-10mL。 ⑤ 取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病 理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。
4. 注入病毒材料
• 用1mL注射器抽取接种物； • 针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内； • 注入待接种的新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。
鸡新城疫的诊断ppt课件
5
（二）ND的实验室诊断
1．病毒的分离培养 2．病毒的鉴定
6
1．病毒的分离培养
（1）病料采集与处理 分离病毒的材料应来自早期病例 病鸡扑杀后应用无菌操作采取脾、脑、肺、肝、肾等
器官组织混合 将病料制成1∶5～1∶10的乳剂，每毫升加入青霉素
10000单位、链霉素10mg，以抑制可能污染的细菌 置冰箱中作用2～4h，然后离心沉淀，取其上清液作
废弃不用，于24h后死亡的鸡胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上 （气室向上）。 然后用无菌操作吸取尿囊液，并做无菌检查，尿囊液浑浊应废弃。 留下无菌的尿囊液置低温冰箱保存，供作进一步鉴定。 在这同时可将鸡胚倾入一平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒 致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出 血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。
15
血凝抑制试验（HI）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
待检血清
50 50 50 …… 50 50 弃
4单位病毒
50
50
50 …… 50
50
50
振荡1min，置于室温20min，或置37℃温箱中5~10min。
1%红细胞
50
50
50 …… 50
8
2．病毒的鉴定
（1）微量血凝试验（HA） （2）微量血凝抑制试验（HI）
9
（1）微量血凝试验（HA）
一方面判断分离病毒是否具有血凝性，另一方面确定HI试验中所用抗 原的HA滴度。
①用微量移液器向反应板每个孔分别加生理盐水50μl，共加12孔。 ②换一吸头吸取50μl待检病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器
（二）ND的实验室诊断
1．病毒的分离培养 2．病毒的鉴定
6
1．病毒的分离培养
（1）病料采集与处理 分离病毒的材料应来自早期病例 病鸡扑杀后应用无菌操作采取脾、脑、肺、肝、肾等
器官组织混合 将病料制成1∶5～1∶10的乳剂，每毫升加入青霉素
10000单位、链霉素10mg，以抑制可能污染的细菌 置冰箱中作用2～4h，然后离心沉淀，取其上清液作
废弃不用，于24h后死亡的鸡胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上 （气室向上）。 然后用无菌操作吸取尿囊液，并做无菌检查，尿囊液浑浊应废弃。 留下无菌的尿囊液置低温冰箱保存，供作进一步鉴定。 在这同时可将鸡胚倾入一平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒 致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出 血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。
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血凝抑制试验（HI）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
待检血清
50 50 50 …… 50 50 弃
4单位病毒
50
50
50 …… 50
50
50
振荡1min，置于室温20min，或置37℃温箱中5~10min。
1%红细胞
50
50
50 …… 50
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2．病毒的鉴定
（1）微量血凝试验（HA） （2）微量血凝抑制试验（HI）
9
（1）微量血凝试验（HA）
一方面判断分离病毒是否具有血凝性，另一方面确定HI试验中所用抗 原的HA滴度。
①用微量移液器向反应板每个孔分别加生理盐水50μl，共加12孔。 ②换一吸头吸取50μl待检病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器
鸡新城疫(课堂PPT)
（2）呼吸系统症状 不同程度的 呼吸困难，即患鸡张口伸颈，呼吸 困难，有喘鸣声，咳嗽，口含粘液， 有摇头和吞咽动作。
（3）生殖系统症状 产蛋鸡产蛋 率下降，产软壳蛋、沙皮蛋，颜色 变淡。
病程10～20d。
19
病理变化
主要病理变化是全身粘膜和浆膜出 血，淋巴系统肿胀、出血和坏死， 尤其以消化道和呼吸道病变明显。
生防疫制度，地面、用具应定期消毒， 防止一切带毒动物（特别是鸟类）和污 染物品进入鸡群，进出的人员和车辆应 该消毒，饲料来源要安全，不从疫区引 进种蛋和鸡苗等。
41
2.做好预防接种，增强特异免疫力 （1）疫苗
1）灭活疫苗 常用油苗，不散病毒。 2）活疫苗 包括： 弱毒疫苗 包括Ⅱ（B1株）、Ⅲ（F 株）、Ⅳ（Lasota株）系苗，一般没有 致病力、偶尔有轻微呼吸道或其他反应， 可用于雏鸡，但Ⅳ系苗毒力较强，一般 不用于4周龄以下的鸡。 中等毒力苗 Ⅰ系苗，一般肌肉注射， 作加强免疫，但不用于8周龄以下鸡。
病程2~5d。
口腔流出酸臭黏液
12
拉稀黄绿便
13
神经症状
14
扭颈，呈观星状
15
扭颈，转圈
16
产软皮蛋，蛋壳变白
17
3.亚急性或慢性型（或非典型新城疫） 多发生在流行后期，主要表现在三个方面：
（1）神经系统症状 病初症状似急性， 后渐减轻，且出现神经症状，如翅膀下垂， 腿麻痹，破行或站立不稳，向后倒退，头颈 向后或向一侧扭转，常伏地旋转，反复发作。 不发作时貌似健康，受惊扰或抢食时又突然 发作，头颈屈仰，全身抽搐旋转，数分钟后 又恢复正常，最后瘫痪死亡。极少数耐过鸡 留下神经症状的后遗症。
诊断
1.现场诊断 根据流行病学、临床症 状、病理变化等综合诊断。
新城疫课件(共56张PPT)《禽病防治》
了排出口内液体，病鸡常有甩头动作。
典型性新城疫症状
2.急性型 ✼ 下痢，排出黄白色或黄绿色恶臭稀粪，有时混有
少量血液。
典型性新城疫症状
2.急性型 ✼ 随着情发展，病鸡极度虚弱，体温降
至常温以下，虚脱而死。 ✼ 病程３－５天，雏鸡１－２天。雏鸡
的病程一般比成鸡短，而且症状不明 显，死亡率高。
典型性新城疫症状
防制措施
一、平时的卫生防疫措施 2、建立科学的适合于本场实际情况的免疫程序
✼ 母源抗体水平 ✼ 疫苗种类及毒力 ✼ 最佳剂量和接种途径 ✼ 鸡的品种和日龄
弱毒疫苗
许可 疫苗
油佐剂疫苗
缓发型 ：新城疫Ⅱ系、Ⅳ系 中发型 ：新城疫Ⅰ系
缓发型毒株特点
✼ 毒力较低 ✼ 可用于各种年龄鸡的预防接种 ✼ 免疫力较弱，免疫期也只有1-2个月 ✼ 可用于未经免疫的鸡群做首次基础免疫
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
红细胞凝集 (HA)
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
红细胞凝集 (HA)
这种血凝特性能被抗血清中的抗体特异性抑制 (HI), 可用HA和HI来诊断疾病和免疫监测。
非典型性新城疫症状
在一些接种过新城疫疫苗的鸡群内，由于多种原 因造成了一部分鸡免疫力不足，不能完全抵抗强病毒的 自然感染，发病后症状、病变较轻，死亡率也低，称之 为非典型新城疫。
典型性新城疫症状
2.急性型 ✼ 下痢，排出黄白色或黄绿色恶臭稀粪，有时混有
少量血液。
典型性新城疫症状
2.急性型 ✼ 随着情发展，病鸡极度虚弱，体温降
至常温以下，虚脱而死。 ✼ 病程３－５天，雏鸡１－２天。雏鸡
的病程一般比成鸡短，而且症状不明 显，死亡率高。
典型性新城疫症状
防制措施
一、平时的卫生防疫措施 2、建立科学的适合于本场实际情况的免疫程序
✼ 母源抗体水平 ✼ 疫苗种类及毒力 ✼ 最佳剂量和接种途径 ✼ 鸡的品种和日龄
弱毒疫苗
许可 疫苗
油佐剂疫苗
缓发型 ：新城疫Ⅱ系、Ⅳ系 中发型 ：新城疫Ⅰ系
缓发型毒株特点
✼ 毒力较低 ✼ 可用于各种年龄鸡的预防接种 ✼ 免疫力较弱，免疫期也只有1-2个月 ✼ 可用于未经免疫的鸡群做首次基础免疫
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
红细胞凝集 (HA)
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
红细胞凝集 (HA)
这种血凝特性能被抗血清中的抗体特异性抑制 (HI), 可用HA和HI来诊断疾病和免疫监测。
非典型性新城疫症状
在一些接种过新城疫疫苗的鸡群内，由于多种原 因造成了一部分鸡免疫力不足，不能完全抵抗强病毒的 自然感染，发病后症状、病变较轻，死亡率也低，称之 为非典型新城疫。
鸡新城疫ppt课件
32嗉囔内充满酸臭黏液倒提病鸡可从口腔中流出33呼吸困难张口呼吸咳嗽发出呼噜声35有时可见神经麻痹瘫痪37未受刺激时较为正常一旦受到惊吓便出现头颈扭曲38平衡失调倒地挣扎41产蛋鸡发病时产蛋量大度下降软壳蛋42腺胃乳头出血是本病的特征性病变44肠道淋巴集结出血坏死45盲肠扁桃体出血溃疡及坏死荧光定量pcr鉴定ndv强弱毒株8株ndv强毒检测结果nd临床病例的快速诊断检测结果图
鸡新城疫Ⅱ系活疫苗
毒力弱,通常只用于雏鸡首免,安全性好, 但产生免疫力较慢较弱。用法为滴眼/滴鼻, 不耐饮水。
鸡新城疫活疫苗 (Lasota株)
是新城疫Ⅳ系活疫苗，为国内外广泛应 用的优良低毒力苗,其毒力与免疫性能高于 Ⅱ系苗,安全性良好。7日龄以上酌健康雏鸡、 青年鸡、产蛋鸡均可使用。用法可滴眼、 滴鼻、饮水或肌注,雏鸡首免应滴眼/滴鼻。
是用热带新城疫病毒自然弱毒株克隆 的一种低毒力苗,可用于各日龄鸡。安全性 好,较耐热,耐饮水:用法可滴眼、滴鼻、饮水 或肌注,角于雏鸡首免应滴眼/滴鼻。
鸡新城疫疫苗VH株
是以色列用新城疫病毒自然弱毒株制成 的一种低毒力苗,毒力温和而稳定,主要遘于 雏鸡首免。通常应用的是该苗与传支、肾 传支联苗,即VH+H120+28/86,用法应滴眼/ 滴鼻,砉稀释为每只鸡1滴时应滴眼。
鸡新城疫
鸡 新 城 疫爆发的控制 本病无特效疗法，鸡群一旦发病，应 立即用La系、克隆30或V4点眼或饮水，两 月龄以上鸡群也可用Ⅰ系紧急接种。 同时配合使用抗菌素和多种维生素， 以预防细菌继发染，促进机体恢复。
鸡新城疫
我国鸡新城疫难以控制的原因
1、鸡场生物安全措施不力 鸡群过 分密集、半开放式饲养、不同年龄 鸡群同场饲养等。 2、母源抗体的影响 母源抗体可抑 制相应的弱毒株在幼雏体内复制， 从而影响弱毒疫苗的免疫。
鸡新城疫Ⅱ系活疫苗
毒力弱,通常只用于雏鸡首免,安全性好, 但产生免疫力较慢较弱。用法为滴眼/滴鼻, 不耐饮水。
鸡新城疫活疫苗 (Lasota株)
是新城疫Ⅳ系活疫苗，为国内外广泛应 用的优良低毒力苗,其毒力与免疫性能高于 Ⅱ系苗,安全性良好。7日龄以上酌健康雏鸡、 青年鸡、产蛋鸡均可使用。用法可滴眼、 滴鼻、饮水或肌注,雏鸡首免应滴眼/滴鼻。
是用热带新城疫病毒自然弱毒株克隆 的一种低毒力苗,可用于各日龄鸡。安全性 好,较耐热,耐饮水:用法可滴眼、滴鼻、饮水 或肌注,角于雏鸡首免应滴眼/滴鼻。
鸡新城疫疫苗VH株
是以色列用新城疫病毒自然弱毒株制成 的一种低毒力苗,毒力温和而稳定,主要遘于 雏鸡首免。通常应用的是该苗与传支、肾 传支联苗,即VH+H120+28/86,用法应滴眼/ 滴鼻,砉稀释为每只鸡1滴时应滴眼。
鸡新城疫
鸡 新 城 疫爆发的控制 本病无特效疗法，鸡群一旦发病，应 立即用La系、克隆30或V4点眼或饮水，两 月龄以上鸡群也可用Ⅰ系紧急接种。 同时配合使用抗菌素和多种维生素， 以预防细菌继发染，促进机体恢复。
鸡新城疫
我国鸡新城疫难以控制的原因
1、鸡场生物安全措施不力 鸡群过 分密集、半开放式饲养、不同年龄 鸡群同场饲养等。 2、母源抗体的影响 母源抗体可抑 制相应的弱毒株在幼雏体内复制， 从而影响弱毒疫苗的免疫。
鸡新城疫PPT
冷冻干燥有以下优点：
1.冷冻干燥在低温下进行，因此对于许多热敏性的物质特别适用， 如蛋白质、微生物之类不会发生变性或失去生物活力，因此在 医药上得到广泛地应用。 2.在低温下干燥时，物质中的一些挥发性成分损失很小，适合一 些化学产品、药品和食品干燥。 3.在冷冻干燥过程中，微生物的生长和酶的作用无法进行，因此 能保持原来的性状。 4.由于在冻结的状态下进行干燥，因此体积几乎不变，保持了原 来的结构，不会发生浓缩现象。 5.干燥后的物质疏松多孔，呈海绵状，加水后溶解迅速而完全， 几乎立即恢复原来的性状。 6.由于干燥在真空下进行，氧气极少，因此一些易氧化的物质得 到了保护。 7干燥能排除95%-99%以上的水份，使干燥后产品能长期保存而不 致变质。 8.冷冻干燥目前在医药工业，食品工业，科研和其他部门得到广 泛的应用。
鸡新城疫低毒力 活疫苗(lasota)生 产岗位操作规则
贺永佳
鸡新城疫低毒力活疫苗(lasota)生产岗位 操作规则
一、目的：确保鸡新城疫低毒力活疫苗 （lasota）的质量。 二、适用范围：适用于鸡新城疫低毒力或疫 苗（lasota）生产的全过程。 三、责任者：生产运行部各岗位
正文
一、鸡胚孵化。 二、生产用毒种制备。 三、半成品的制作。 四、疫苗的制备。 五、疫苗的分装。 六、疫苗的冻干。 七、轧盖、贴签。
疫苗配制
（二）：操作规则 1、 取出半成品和冻干稳定剂 将融化了的半成品及经无菌检验合格的冻干稳定剂 取出，放到100级工作台上。 2、 配苗 将检验合格的半成品混合于同一灭菌容器中，按比 例加入检验合格的冻干稳定剂，进行无菌检验，同 时加适量抗维生素充分摇匀后，供分装用。
疫苗配制
（三）：清场和记录
实验一 鸡新城疫疫苗(一)课件
活胚可看到清晰的血管和鸡胚的暗影，比 较大一些的可以看见胚动，随后每日观察一次， 将胚动呆滞或没有运动的、血管昏暗模糊者，即 可能是已死或将死的鸡胚，要随时加以淘汰。生 长良好的蛋胚一直孵育到接种前，具体胚龄视所 拟培养的病毒种类和接种途径而定。
2.接种材料的制备 ：
将青霉素和链霉素分别注入注射用生理盐水 瓶中，使两种抗生素在生理盐水中的含量均达 到1000-2000 IU(μg)/ml。将注射用生理盐水 3-4ml注入一瓶新城疫Ⅳ系弱毒疫苗中，稀释。
（2）根据接种部位，病毒种类或需要，收获相 应的鸡胚材料如尿囊液、羊水、绒毛尿囊膜、 胎儿、卵黄囊等，有时需要收获全胚（除去卵 黄和蛋白），如新城疫病毒、马脑炎病毒等。
尿囊液：气室打开后，用无菌眼科镊子慢慢撕去卵壳 膜，然后夹住绒毛尿囊膜轻轻提起，用巴氏吸管刺破 绒毛尿膜直接吸取尿囊液。为防止羊膜堵住吸管口， 可用镊子轻轻压下羊膜及胎儿，然后再吸。每个鸡胚 一般可收8mL左右尿囊液。
3.照蛋定位 ：
接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚和 弱胚。对所有健康胚应先用红铅笔画出气室位 置，再于胚胎侧画出接种位点（进针点），接 种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚头 约1cm左右。
4.病料接种：
若用鸡胚分离、培养病毒，则应选9～12日龄之间 的发育鸡胚。许多病毒，特别是大多数禽病毒都能在 鸡胚或鸭胚中生长繁殖。接种时应先在照蛋器下检查 鸡胚是否健康、活泼，并划出气室和接种部位。然后 严格消毒接种部位和气室（先用碘酊消毒，再用70% 酒精消毒），用打孔器打孔后，每胚接种处理好的接 种材料0.2mL。接种后要用石蜡将孔口封死，放37℃ 环境中继续孵育96h。不同病毒其接种部位、方法和 培养时间不尽一样。
（3）卵黄囊接种
新城疫课件(共16张PPT)《动物疫病防治》
9
非典型新城疫:免疫鸡群中发生非典型ND，其 发病率和病死率较低，仅表现呼吸道或消化道 症状，有时在产蛋鸡群仅表现产蛋下降，这种 现象称为ND免疫失败。
10
四、病理变化
全身黏膜和浆膜出血，淋巴 系统肿胀、出血和坏死，尤其 以消化道和呼吸道最为明显。 嗉囊充满酸臭味的稀薄液体和 气体。食道与腺胃交界处、腺 胃乳头、腺胃与肌胃交界处、 肌胃角质膜下有出血，或溃疡 和坏死，这是新城疫的特征性 病理变化。
2
二、病的发生
• （一）病原
• 1.形态：NDV为副粘病毒科， 副粘病毒属Paramyxovirus， • 新城疫病毒只有一个血清型
病毒粒子蝌蚪状，呈球形，核 ，与其他禽副黏病毒有交叉
酸为单链RNA螺旋对称，核 衣壳外包有囊膜（脂蛋白），
反应。
囊膜外有纤突（有血凝毒和
酶）。
3
新城疫病毒对高温、日光及消毒剂抵抗力不强。一般在 100℃经 1min，55℃经45 min死亡。在30℃可存活30d 。病毒在直射阳光下30min死亡。在冷冻尸体内可存活6 个月以上。常用的消毒药如2％氢氧化钠、5％漂白粉等， 20min即可将其杀死。
• 免疫鸡群发生新城疫时，其病 理变化不典型，仅见黏膜卡他 性炎症，喉头和气管黏膜充血， 腺胃乳头出血少见，但多剖检 数只，可见有的病鸡腺胃乳头 有少数出血点，直肠黏膜和盲 肠扁桃体多见出血。
12
五、诊 断
• 1．病毒分离和鉴定：应在潜伏期或临诊病例的早期采样，（从感 染后3～5天禽的呼吸道分泌物或肺组织），全身症状严重的病例， 从脾、血液、扁桃体采样，还可从泻殖腔或脑组织采样。种蛋须来 自健康母鸡，无NDV抗体（否则，缓发型毒株不能致死鸡胚，速发 型毒株虽能致死鸡胚，但胚液HA凝集价很低或阴性）强、中毒株常 使鸡胚36～96小时死亡，胚液凝集价较高，弱毒株不能使鸡胚死亡， 但胚液能凝集RBC。可疑病料如不使鸡胚死亡，应用尿囊液和鸡胚 组织制作悬液，盲传鸡胚3代，另还可用细胞培养物（CEF、CEK） 来进行。
二、新城疫ppt课件
为排除这些粘液，日夜摇头作吞咽状； 嗉囊积液，倒提时从口角流出酸臭液体； 病鸡排黄白色或黄绿色的蛋清样的稀粪，有时混有血液； 神经症状：翅、腿麻痹，头颈歪斜或后仰，呈观星状；
7
3、慢性型 常由急性型转来，出现严重的神经症状。如头颈下垂搁到地上或头颈歪斜仰视。
8
鸡在接种NDV强毒后，出现神经症状，头颈后仰或头颈歪曲
连用3-5天。板青颗粒50克，分2次饮水，连用3-5天。雏鸡减半。 （3）银翘散300克，供100只成鸡使用，雏鸡减半，拌料。用于非典型新城疫初期，连用
3-5天。
30
5
（三）临床症状 潜伏期一般为3-5天，最长可达2周以上。根据临床表现和病程长短，可分为三型：
1、最急性型 突然发病，常常无特征性症状而迅速死亡。多见于发病初期和雏鸡。4℃，精神沉郁，羽毛松乱，垂头缩颈，鸡冠和肉髯发绀； 病鸡呼吸困难，张口呼吸，咳嗽，发出“咯咯”的怪叫声，鸡口角流出多量的粘液，
22
接种NDV后的死亡鸡，腺胃粘膜部分出血，乳头基部粘膜郁血
23
接种NDV强毒后死亡鸡，显示腺胃粘膜几种不同形式的出血，以及 肠道浆膜面出血
24
鸡新城疫：盲肠小点出血，盲肠扁桃体出血坏死
25
鸡新城疫：腺胃乳头出血、溃疡，肠道枣核状出血、坏死
26
鸡新城疫：肠道枣核状出血坏死
27
（五）诊断
1、流行病学、临床症状和特征性病变 2、实验室诊断 （1）病毒分离鉴定 ①鸡胚接种：取肺、脑、脾等组织，接种9-11日龄鸡胚，取死胚尿囊液作HA试验 ②特异性：用HI抑制试验鉴定 （2）血清学诊断
9
鸡在接种NDV强毒后，出现神经症状，3只正在发作的病鸡表现头颈后仰朝天， 其他3只处于发病的间隙期
10
7
3、慢性型 常由急性型转来，出现严重的神经症状。如头颈下垂搁到地上或头颈歪斜仰视。
8
鸡在接种NDV强毒后，出现神经症状，头颈后仰或头颈歪曲
连用3-5天。板青颗粒50克，分2次饮水，连用3-5天。雏鸡减半。 （3）银翘散300克，供100只成鸡使用，雏鸡减半，拌料。用于非典型新城疫初期，连用
3-5天。
30
5
（三）临床症状 潜伏期一般为3-5天，最长可达2周以上。根据临床表现和病程长短，可分为三型：
1、最急性型 突然发病，常常无特征性症状而迅速死亡。多见于发病初期和雏鸡。4℃，精神沉郁，羽毛松乱，垂头缩颈，鸡冠和肉髯发绀； 病鸡呼吸困难，张口呼吸，咳嗽，发出“咯咯”的怪叫声，鸡口角流出多量的粘液，
22
接种NDV后的死亡鸡，腺胃粘膜部分出血，乳头基部粘膜郁血
23
接种NDV强毒后死亡鸡，显示腺胃粘膜几种不同形式的出血，以及 肠道浆膜面出血
24
鸡新城疫：盲肠小点出血，盲肠扁桃体出血坏死
25
鸡新城疫：腺胃乳头出血、溃疡，肠道枣核状出血、坏死
26
鸡新城疫：肠道枣核状出血坏死
27
（五）诊断
1、流行病学、临床症状和特征性病变 2、实验室诊断 （1）病毒分离鉴定 ①鸡胚接种：取肺、脑、脾等组织，接种9-11日龄鸡胚，取死胚尿囊液作HA试验 ②特异性：用HI抑制试验鉴定 （2）血清学诊断
9
鸡在接种NDV强毒后，出现神经症状，3只正在发作的病鸡表现头颈后仰朝天， 其他3只处于发病的间隙期
10
新城疫病毒的鸡胚培养与病毒滴度检测课件
• 尿囊腔接种： • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种： • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种： • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
实验九 新城疫病毒的鸡胚培养 与病毒滴度检测
一、目的要求
1. 掌握鸡胚接种的常规方法；背景知识介绍
1. 病毒的鸡胚培养
① 鸡胚是正在发育的活体：
• 组织分化程度低； • 细胞代谢旺盛； • 适于许多病毒的生长增殖，
尤其是禽类病毒。
④ 鸡胚接种的方法：
5. 封孔
• 用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔。
6. 孵育与观察
• 气室朝上于37℃温箱中孵育； • 以后每天检卵1~2次。 • 弃去24h内的死亡鸡胚：
– 机械损伤、细菌或霉菌污染等引起。
7. 病毒的收获与鸡胚的观察
① 收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血; ② 取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面； ③ 用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜；
四、实验内容
以尿囊腔接种为例，介绍新城疫病毒的接种方法： 1. 照胚：
取9~12日龄发育良好的鸡胚，观察气室及胚胎位置， 标出气室底边，在无大血管处标出尿囊腔注射部位。
4. 注入病毒材料
• 用1mL注射器抽取接种物； • 针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内； • 注入待接种的新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种： • 静脉接种
2. 新城疫病毒
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种： • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种： • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
实验九 新城疫病毒的鸡胚培养 与病毒滴度检测
一、目的要求
1. 掌握鸡胚接种的常规方法；背景知识介绍
1. 病毒的鸡胚培养
① 鸡胚是正在发育的活体：
• 组织分化程度低； • 细胞代谢旺盛； • 适于许多病毒的生长增殖，
尤其是禽类病毒。
④ 鸡胚接种的方法：
5. 封孔
• 用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔。
6. 孵育与观察
• 气室朝上于37℃温箱中孵育； • 以后每天检卵1~2次。 • 弃去24h内的死亡鸡胚：
– 机械损伤、细菌或霉菌污染等引起。
7. 病毒的收获与鸡胚的观察
① 收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血; ② 取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面； ③ 用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜；
四、实验内容
以尿囊腔接种为例，介绍新城疫病毒的接种方法： 1. 照胚：
取9~12日龄发育良好的鸡胚，观察气室及胚胎位置， 标出气室底边，在无大血管处标出尿囊腔注射部位。
4. 注入病毒材料
• 用1mL注射器抽取接种物； • 针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内； • 注入待接种的新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种： • 静脉接种
2. 新城疫病毒
实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测
实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测篇一:实验五十动物病毒的鸡胚培养实验五十一动物病毒的鸡胚培养三、器材1(病毒痘苗病毒(Vaccinia virus)，鸡新城疫病毒(Necastle distase virus)。
2.仪器或其他用具孵卵器，检卵灯，齿钻，磨壳器，钢针，蛋座木架，注射器，2.5,碘酒，70,乙醇，镊子，剪刀，封蜡(固体石蜡加1,4凡士林，溶化)，灭菌培养板，灭菌盖玻片等。
3.白壳受精卵 (自产出后不超过10d，以5d以内的卵为最好)。
四、操作步骤1(准备蛋胚孵育前的鸡卵先用清水以布洗净，再用干布擦干，放入孵卵器内进行孵育(37?，相对湿度是45%~60%)，孵育3d后，鸡卵每日翻动1~2次。
孵至第4d，用检卵灯观察鸡胚发育情况，未受精卵，只见模糊的卵黄黑影，不见鸡胚的形迹，这种鸡卵应淘汰。
活胚可看到清晰的血管和鸡胚的暗影，比较大一些的可以看见胚动，随后每日观察一次，将胚动呆滞的或没有运动的、血管昏暗模糊者，即可能是已死或将死的鸡胚，要随时加以淘汰。
生长良好的蛋胚一直孵育到接种前，具体胚龄视所拟培养的病毒种类和接种途径而定。
鸡卵孵化期间，箱内应保持新鲜空气流通，特别是孵化5~6d后，鸡胚发育加快，氧气需要量加大，空气供应不足，会导致鸡胚大量死亡。
2.接种(1)绒毛尿囊膜接种?将孵育10~12d的蛋胚放到检卵灯上，用铅笔勾出其实与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育的好的地方。
?用碘酒消毒气室顶端与绒毛尿囊膜记号处，并用磨壳器或齿钻在记号处的卵壳上磨开一三角形或正方形(每边约5~6mm)的小窗，不可弄破下面的壳膜。
在气室顶端钻一小孔。
?用小镊子轻轻揭去所开小窗处的卵壳，露出壳下的壳膜，在壳膜上滴一滴生理盐水，用针尖小心地划破壳膜，但注意切勿伤及紧贴在下面的绒毛尿囊膜，以利两膜分离。
?用针刺破其实小孔处的壳膜，再用橡皮乳头吸出气室内的空气，是绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室(图?—4)。
新城疫精品课件
区分三种毒型的致病指数见下表
缓发型 中发型 速发型
MDT
>96 44～70 40～70
ICPI 0.0～0.4 0.4～1.9
>1.6
编辑版ppt
IVPI
0.0 0.0～0.5 0.5～2.8
6
3. 新城疫病毒的培养
NDV能在鸡胚中生长繁殖，以尿囊腔接种于9～10日 龄鸡胚，强毒株在30～60小时死亡，弱毒株3～6天死亡。 死亡的鸡胚，以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头
角质层下也常见有出血点。
由小肠到盲肠和直肠黏膜有大小不等的出血点，肠黏
膜上有纤维素性坏死性病变，有的形成假膜，假膜脱落后
即成溃疡。盲肠扁桃体常见肿大、出血和坏死。
气管出血或坏死，周围组织水肿。肺有时可见瘀血或
水肿。心冠脂肪有细小如针尖大的出血点。脾、肝、肾无
特殊的病变。
非典型新城疫，仅见黏膜卡他性炎症，喉头和气管黏
膜充血，腺胃乳头出血少见，有的病鸡腺胃乳头有少数出
血点，直肠黏膜和盲肠扁桃编体辑版多ppt 见出血。
22
鸡新城疫：病鸡皮下和腹腔脂肪出血
编辑版ppt
23
鸡新城疫：病鸡气管粘膜和气管环出血
编辑版ppt
24
鸡新城疫：病鸡腺胃粘膜出血
编辑版ppt
25
鸡新城疫：病鸡腺胃粘膜乳头及乳头间出血
编辑版ppt
检测，对发病初期和发病末期分别采血测定抗体，如发病末期血清 抗体滴度较发病初期的抗体滴度高4倍或2个滴度，可确诊。此外， HI 试验可用于免疫抗体监测。
3. 鉴别诊断
本病应注意与禽流感、禽霍乱、传染性支气管炎、传染性喉气
编辑版ppt
37
七、防制 1.平时的防疫措施
缓发型 中发型 速发型
MDT
>96 44～70 40～70
ICPI 0.0～0.4 0.4～1.9
>1.6
编辑版ppt
IVPI
0.0 0.0～0.5 0.5～2.8
6
3. 新城疫病毒的培养
NDV能在鸡胚中生长繁殖，以尿囊腔接种于9～10日 龄鸡胚，强毒株在30～60小时死亡，弱毒株3～6天死亡。 死亡的鸡胚，以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头
角质层下也常见有出血点。
由小肠到盲肠和直肠黏膜有大小不等的出血点，肠黏
膜上有纤维素性坏死性病变，有的形成假膜，假膜脱落后
即成溃疡。盲肠扁桃体常见肿大、出血和坏死。
气管出血或坏死，周围组织水肿。肺有时可见瘀血或
水肿。心冠脂肪有细小如针尖大的出血点。脾、肝、肾无
特殊的病变。
非典型新城疫，仅见黏膜卡他性炎症，喉头和气管黏
膜充血，腺胃乳头出血少见，有的病鸡腺胃乳头有少数出
血点，直肠黏膜和盲肠扁桃编体辑版多ppt 见出血。
22
鸡新城疫：病鸡皮下和腹腔脂肪出血
编辑版ppt
23
鸡新城疫：病鸡气管粘膜和气管环出血
编辑版ppt
24
鸡新城疫：病鸡腺胃粘膜出血
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25
鸡新城疫：病鸡腺胃粘膜乳头及乳头间出血
编辑版ppt
检测，对发病初期和发病末期分别采血测定抗体，如发病末期血清 抗体滴度较发病初期的抗体滴度高4倍或2个滴度，可确诊。此外， HI 试验可用于免疫抗体监测。
3. 鉴别诊断
本病应注意与禽流感、禽霍乱、传染性支气管炎、传染性喉气
编辑版ppt
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七、防制 1.平时的防疫措施
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2. 新城疫病毒
① 副粘病毒科/副粘病毒亚科/禽腮腺炎病毒属。 ② 新城疫的病原体。 ③ 形态：
• 病毒子多呈球形； • 单股负股RNA； • 核衣壳螺旋形对称； • 有囊膜； • 囊膜表面有纤突。
④ 血凝性：可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。 ⑤ 病毒分离培养：9~11日龄鸡胚尿囊腔接种。
三、实验材料
4. 注入病毒材料
• 用1mL注射器抽取接种物； • 针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内； • 注入待接种的新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。
5. 封孔
• 用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔。
6. 孵育与观察
• 气室朝上于37℃温箱中孵育； • 以后每天检卵1~2次。 • 弃去24h内的死亡鸡胚：
取9~12日龄发育良好的鸡胚，观察气室及胚胎位置， 标出气室底边，在• 气室向上放置鸡胚于卵架上； • 先后用碘酊和酒精棉球消毒蛋壳所标记的位置。
距气室底边0.5cm
3. 打孔
• 在所标记注射部位用剪刀尖端打孔； • 注意用力要稳，恰好使蛋壳打通而不伤及壳膜。
一、目的要求
1. 掌握鸡胚接种的常规方法； 2. 学习NDV的分离培养及其鉴定方法。
二、背景知识介绍
1. 病毒的鸡胚培养
① 鸡胚是正在发育的活体：
• 组织分化程度低； • 细胞代谢旺盛； • 适于许多病毒的生长增殖，
尤其是禽类病毒。
② 鸡胚培养的优点： • 来源充足；
• 价格低廉； • 操作简单，无需特殊设备； • 易感病毒谱较广； • 对接种的病毒不产生抗体。
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种： • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种： • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种 ：
1. 常规接种工具：注射器、打孔器、酒精灯等； 2. 待接种的新城疫病毒材料； 3. 9~11日龄鸡胚（1个/人）； 4. 灭菌生理盐水； 5. 其他：
• 镊子、照蛋器； • 酒精棉球、碘酊棉球； • 固体石蜡； • 灭菌瓶子、灭菌吸管 等。
四、实验内容
以尿囊腔接种为例，介绍新城疫病毒的接种方法： 1. 照胚：
⑤ 取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病 理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。
8. 新城疫病毒滴度的检测 血凝试验（HA）
• 凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数,称为该病毒的 血凝滴度。
六、思考题
1. 鸡胚接种过程中，应该注意的问题？ 2. 接种病毒后，24h内鸡胚死亡原因？ 3. 如何判断新城疫病毒的血凝滴度？ 4. 临床上还有哪些病毒具有血凝性？
– 机械损伤、细菌或霉菌污染等引起。
7. 病毒的收获与鸡胚的观察
① 收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血; ② 取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面； ③ 用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜；
④ 以眼科镊镊住绒毛尿囊膜，用吸管吸取 尿囊液，置无菌容器中保存备用。 1.一般能尿囊液6-10mL。
③ 鸡胚培养的缺点： • 非SPF鸡胚，可能含有某些家禽
病毒的母源抗体，甚至还可能带 有鸡白痢沙门氏菌、支原体、鸡 白血病病毒、鸡贫血病毒等。
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种： • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种： • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种