不同产地荷叶总生物碱的含量测定
广西不同产地对叶百部总生物碱的含量测定
１ ． １ 仪器
２ ］ 杨敏． 仙草提取物 的体 外抗 氧化实验 入 国际中草药市场的基本保证。 而 ［
研究 ［ Ｊ ］ ．中 华 预 防 医 学 杂 志 ， 凉粉草作 为中草药 和制作凉粉冻 ２ ０ ０ ６， ４ ０ （ ３ ） ： ２ ０ ３ — ２ ０ ４ ． 的原料在我 国乃至东南 亚地区 已 ［ ３ ］刘 富来 ， 冯翠 兰 ． 仙草对 禽大肠 杆菌 有悠久的历史 ， 已成为我 国一些地
药典中 ， 百部项下仅有性状 、 鉴别 、 表６ 的 结 果 ，广 西 灵 山 凉 粉 草 ２ ０ ０ ４ ， ２ ４ （ １ ２ ） ： １ ６ ７ ２ — １ ６ ７ ５ ． 浸 出物等项 目， 尚不能有效控制百 （ ２ ０ １ ２ ０ ３ ）中除了ｃ ｒ 夕 其余元素含 ［ ８ ］ 李 文龙 ， 荆淼， 陈军辉 ， 等． 微 波消解 部药材和相关制剂的质量 。 生物碱 Ｉ Ｃ Ｐ — ＭＳ 测 定４ Ｏ 种 中药材 中的 ５ 种 有 量均高于其他产地 ，其 中Ｃ ｕ ， Ａ ｓ ， 是百部脂溶性部位 的主要成分 ， 同 毒 元素 ［ Ｊ ］ ．分 析 试 验室 ， ２ ０ ０ ８ ， ２ ７ Ｃ ｄ ， Ｐ ｂ 都在 限度范围内。而广西灵 时也是百部提取物 的主要 活性成 （ ２ ） ： ６ － ８ ． 山凉粉 革（ ２ Ｏ ｌ ｌ Ｏ ３ ） 中Ｃ ｒ 的含量 明 其具有 良好的杀虫 、 抗菌 、 镇 咳 ［ ９ ］ 何佩雯 ， 杜钢 ， 赵海誉 ， 等． 微波消解 一 分， 显偏 高 。 原子 吸 收光谱 法测 定 ９ 种 中药材 中 祛痰等作用【 ５ ］ 。经查 阅文献 ， 尚未 ３ － ３ 基体效 应会对待测元素产生 重 金 属 含量 ［ Ｊ ］ ． 药 物分 析 杂 志 ， 见有关广西产对 叶百部 生物碱含 抑制作用 ， 故本实验采用内标法对 ２ ０ １ ０ ， ３ ０ （ ９ ） ： １ ７ ０ ７ — １ ７ １ ２ ． 量 的报 道 。因此 ， 本研 究 以广 西不 基体效应进 行补偿 ，选 用Ｇ ｅ 、 Ｉ ｎ 、 ［ １ ０ ］ 钱春燕 ， 宋薇 ， 杨彦 丽 ， 等． 微波消解一 同产地对 叶百部药材为对象 ， 参照 Ｂ ｉ 、 ｓ ｃ 四种元素作为内标 ，浓度为 原子吸收光谱法 分析 中药材 中Ｐ ｂ ， 文献 ［ ６ ］ 方法 ， 以对叶百 部碱 为对 １ ０ ｎ ｇ ／ ｍ ｌ ，根据信号响应值与内标 ｃ ｄ ， Ａ ｓ ， № 的含 量 ［ Ｊ ］ ． 现代 科 学 仪 照品 ， 采用酸性染料 比色法测定其 器， ２ ０ ０ ４ （ ４ ） ： ３ ８ — ４ ０ ． 响应值 的比值计算数值 ， 从而提高 现报道如下 。 ［ １ １ ］ 王 志嘉 ， 尤海丹 ， 吴 志刚 ， 等． 微 波消 总生物碱含量 ， 测定结果 的准确性。
荷叶中生物碱提取设计方案
含量：不同地区荷叶中的荷叶碱含量不一，在0.275%-1.37%左右,一般含量在0.683%。
理化性质：荷叶生物碱碱性较弱，不能直接溶于水，但能与酸作用生成盐溶于水。
荷叶中生物碱类化合物种类繁多，根据母核结构的不同可将其分为三类：(1)阿朴啡类：包括荷叶碱(Nuciferine，N-去甲荷叶碱(N．nomuciferine)，O-去甲荷叶碱(O．nornuciferine)，莲碱(Roemerine)，番荔枝碱(Anonaine)，鹅掌楸碱(Lirioderine)，N-去甲基亚美罂粟碱(N．norarmepavine)。
(2)单苄基异喹啉类：包括亚美罂粟碱(Armepavine)、衡州乌药碱(Coclaurine)、N-甲基异衡州乌药碱(N—Methylisococlaurine)、N一甲基衡州乌药碱(N-methycolaurine)、O一去甲基衡州乌药碱(O-Norcoclaurine)。
(3)去氢阿朴啡类：去氢荷叶碱(Dehydronuciferine)，去氢莲碱(Dehydroroemerine)荷叶中主要的5种生物碱结构提取方法：（1）酸水提取法：a）称取荷叶粉10g，加入200mL pH2.5盐酸溶液，在80℃水浴恒温提取2.5h，过滤，滤渣再用100mL盐酸溶液提取1.5h，过滤，合并两次滤液，用旋转蒸发仪真空浓缩至50mL，过滤，滤液调pH值至2～3，用氯仿60mL分三次萃取，弃去氯仿层，以除去脂类和树脂。
取上层液体，加入2％NaOH调节pH至7左右，静置片刻，待肉眼可见沉淀，过滤，除去鞣质。
滤液再加2％NaOH调节pH至10.5，再用氯仿90 mL分3次萃取，合并氯仿液，在旋转蒸发仪中蒸发干燥后，用少量pH2.5 HCl溶液在超声波清洗机上洗脱生物碱，转移至100毫升容量瓶，定容，摇匀得荷叶总生物碱提取液，备用。
b) 称取荷叶粉末1g放入圆底烧瓶中，加入35ml蒸馏水，用0.5%盐酸调节pH2~3，圆底烧瓶上接40cm冷凝管，85℃冷凝回流提取2h，提取结束后，提取液用滤纸过滤，用30ml氯仿分两次萃取酸水液，弃去氯仿层。
荷叶中生物碱类成分的研究进展_肖桂青
化学与生物工程2006,Vol.23N o.5综述专论 Ch emistry &B ioengin eerin g1基金项目:湖南省教育厅优秀青年基金资助项目(05B026),湖南农业大学后备人才创新团队建设基金项目(04T D04)收稿日期:2006-02-28作者简介:肖桂青(1978-),女,湖南株洲人,硕士研究生,研究方向为天然产物开发与利用。
荷叶中生物碱类成分的研究进展肖桂青,卢向阳,田 云,易 克,周晓明(湖南农业大学生化与发酵工程实验室,湖南长沙410128)摘 要:概述了荷叶中主要活性成分)))生物碱的提取与含量测定、主要化学成分及药理活性的研究进展,为荷叶生物碱功能成分的合理开发与利用提供参考。
关键词:荷叶;生物碱;化学成分;药理活性中图分类号:T Q 283 R 28411 文献标识码:A 文章编号:1672-5425(2006)05-0001-02荷叶(N elum bo nucif er a )是睡莲科莲属植物莲N elumbo nucif era Gaertn 的叶,具有清暑利湿、升发清阳、清心去热、止血利水的活性[1]。
据5本草纲目6记载/荷叶服之,令人瘦劣0、/生发元气,稗助脾胃,涩精浊,散淤血,消肿痛,发痘疮0。
现代临床研究表明:荷叶具有降脂减肥、抗氧化与抗衰老、抑制脂肪肝、抑菌、抗病毒、抗炎、抗敏等作用[2]。
荷叶中含有多种生物碱和黄酮类化合物[3],其中具有强烈抗有丝分裂作用的碱性成分)))生物碱是荷叶的主要活性成分之一。
作者在此概述国内外关于荷叶中生物碱的提取分析、主要化学成分及其药理活性的研究进展。
1 荷叶中生物碱的提取与含量测定111 荷叶中生物碱的提取因荷叶生物碱碱性较弱,不能直接溶解于水,但能与酸作用生成盐溶于水,故荷叶生物碱可用偏酸性的水溶液提取[4]。
刘密新等[5]用pH 3~4的盐酸水溶液浸泡荷叶10h 后用氯仿萃取两次,以除去脂肪烃及树脂类杂质,然后在pH 5~7的条件下过滤除去鞣质及鞣酸盐类杂质,再将溶液调成强碱性(pH >12),用氯仿反复萃取,使生物碱转移到氯仿中,然后将氯仿脱水干燥,蒸去氯仿,即得到荷叶生物碱。
荷叶中生物碱类成分的研究进展
荷 叶 （ ｌｍｂ Ｕ・ ｅｎ） 睡 莲科 莲 属 植 物 莲 Ｎｅｕ ｏ１ （ｆ ｒ 是 １ ｉ Ｎｅｕ ｏ １（ ｆｒ ａ ｒ ｌｍｂ Ｕ・ ｅｎ Ｇ ｅｔ １ ｉ ｎ的叶 ， 有 清 暑 利 湿 、 发 具 升 清阳、 清心 去热 、 止血 利水 的活性 … 。据《 本草 纲 目》 记 载“ 叶服之 ， 人瘦 劣” “ 荷 令 、 生发 元气 ， 稗助 脾 胃 ， 涩精 浊， 散淤 血 ， 肿痛 ， 痘 疮 ” 消 发 。现 代 ｌ 床研 究 表 明 ： 荷 叶具 有 降脂减 肥 、 氧化 与抗衰 老 、 抗 抑制 脂肪 肝 、 菌 、 抑 抗病 毒 、 炎 、 敏等作 用 ］ 抗 抗 。荷 叶中 含有多种 生物 碱
氯仿 反复萃 取 ， 生物 碱转移 到氯仿 中， 使 然后将 氯仿 脱
水 干燥 ， 蒸去 氯仿 ， 即得 到荷 叶生物 碱 。也可用 醇类溶
剂提 取法 ， 采用 酸水 一碱 化 一亲 脂 性溶 剂 萃 取法 反 再 复进行 。赵 骏等 。用 ９ ％的乙醇 提 取 ， 滤 ， 液拌 ５ 过 滤
因荷叶 生物碱 碱性较 弱 ， 能直接 溶解 于水 ， 不 但能 与酸作 用生成 盐溶 于水 ， 故荷 叶 生 物碱 可 用 偏 酸性 的 水 溶液 提 取 。刘 密 新 等［ 用 ｐ ～４的盐 酸水 溶 ］ ＝ ５ Ｈ３ 液 浸泡荷 叶 １ 后 用 氯仿 萃 取 两 次 ， 除去 脂 肪 烃 及 ０ｈ 以 树脂 类杂 质 ， 后在 ｐ ～７的条件 下过 滤除 去鞣 质 然 Ｈ５ 及鞣 酸盐类 杂 质 ， 将溶 液 调 成 强碱 性 （ Ｈ＞ １ ） 用 再 ｐ ２，
HPLC法测定荷叶中荷叶碱含量的不确定度评定
doi:10.16736/41-1434/ts.2020.09.055
HPLC 法测定荷叶中荷叶碱含量的 不确定度评定
Evaluation of Uncertainty for the Determination of Nuciferine in Lotus leaf by HPLC
1 仪器与试剂
Thermo U3000 高效液相色谱仪（美国 Thermo 公 司）；Sartorius BSA 124S 电子分析天平（德国赛多利斯 公司）；Mettler AB135-S/ ME203E 电子分析天平（瑞士 梅特勒公司）；Milliq IQ 7000 纯水仪（美国默克公司）； DK-S14 恒温水浴锅（上海森信实验仪器有限公司）。
摘 要：目的：评定 HPLC 法测定荷叶中荷叶碱含量的测量不确定度，分析影响不确定度的主要因素。方法： 参照《中华人民共和国药典》（2015 版）一部荷叶含量测定方法，建立数学模型，对各因素进行量化分析与评定。 结果：荷叶中荷叶碱含量的扩展不确定度为 0.01%，测量结果表示为 0.23%±0.01%，k=2。结论：测量不确定度 的主要来源为对照品的称量。因此对照品称量过程需严格把控以确保测量结果准确可靠。
◎ 应佳妮 1，王兴飞 2 （1. 浙江中医药大学中医药科学院，浙江 杭州 310014；
2. 浙江科峰有机硅有限公司，浙江 嘉兴 314000） Ying Jiani1, Wang Xingfei2
(1.Academy of Chinese Medical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310014, China; 2.Zhejiang Kefeng Silicone Co.,Ltd., Jiaxing 314000, China)
荷叶炮制前后有效成分中总黄酮和总生物碱的含量比较
荷叶炮制前后有效成分中总黄酮和总生物碱的含量比较来源：第十二届“挑战杯”省赛作品小类：生命科学大类：自然科学类学术论文简介：本项目采用乙醇回流提取生物碱，并用高效液相色谱法测定其含量；采用超声波法提取总黄酮，并用可见-紫外分光光度法测定其含量。
通过测定荷叶炮制前后其主要有效成分—生物碱及总黄酮类成分的含量，探讨这两类成分的变化与荷叶灰降脂减肥功效的相关性。
从化学成分角度来研究荷叶炮制后对降脂减肥成分总黄酮类成分和生物碱类成分的影响，并对这两类成分含量的变化进行比较。
详细介绍：近年的研究表明荷叶具有降低血脂的功效,其主要活性部位在生物碱和黄酮。
本项目采用乙醇回流提取生物碱，并用高效液相色谱法测定其含量；采用超声波法提取总黄酮，并用可见-紫外分光光度法测定其含量。
通过测定荷叶炮制前后其主要有效成分—生物碱及总黄酮类成分的含量，探讨这两类成分的变化与荷叶灰降脂减肥功效的相关性。
从化学成分角度来研究荷叶炮制后对降脂减肥成分总黄酮类成分和生物碱类成分的影响，并对这两类成分含量的变化进行比较。
本研究发现荷叶生品炒制、煅制后其总生物碱及总黄酮含量均明显减少，即荷叶降脂的主要成分——总生物碱、总黄酮炮制后含量均减少，从化学成分角度说明荷叶炮制后的降脂功效明显减弱。
明代戴元礼的《证治要诀》一书中明确记载：“荷叶灰服之，令人瘦劣，故单服可以消阳水浮肿之气，荷叶灰方”。
即荷叶烧存性，研末，有消肿降脂减肥之功。
古书记载提示荷叶灰也具有降脂减肥的功效。
人们在日常生活中也常用无毒的荷叶灰方来减肥。
就从本研究总黄酮和总生物碱的含量看，荷叶灰的降脂减肥功能似乎大大降低，这与古书记载不甚相符，因此有必要进行深入研究，从药效角度探讨荷叶灰是否仍具有降脂减肥作用，同时探讨荷叶灰中是否还有其他降脂减肥成分，为明确荷叶灰的炮制机理奠定理论基础，对古书中“荷叶灰服之，令人瘦劣” 这一理论找到根据。
(收起)撰写目的和基本思路比较荷叶炮制前后其有效成分中总黄酮和总生物碱的含量变化。
荷叶不同萃取部位总黄酮含量测定_康杰
2014年第3期・51・荷叶不同萃取部位总黄酮含量测定康 杰 金丽萍 孙晓雪（黑龙江省中医药科学院・150036）摘 要 目的：荷叶不同萃取部位的总黄酮含量测定。
方法：用正丁醇、乙酸乙酯、乙醚对荷叶水提液萃取，以芦丁为对照品，通过UV对其总黄酮含量进行测定。
结果：该测定方法回归方程为y=0.0382x+3*10-5，R2=0.9999；重现性、精密度和稳定性较好，RSD分别为0.64、0.87%、1.21%。
结论：为荷叶的总黄酮研究提供依据。
关键词 荷叶 总黄酮 含量测定除药物本身毒性对细胞影响，以保证结果的正确和可靠。
3.2 药物对流感病毒B型和AdV3的抑制作用及TI值大小将金石清瘟解毒口服液和利巴韦林药分别作2倍系列稀释后，对100 TCID50流感病毒B型和AdV3进行抑制试验，计算药物对病毒抑制百分率及半数有效量IC50及TI值大小。
结果见表2。
表2药物对流感病毒B型和AdV3的IC50及治疗指数TI药物流感病毒B型AdV3IC50TI IC50TI金石清瘟解毒口服液20.3±4.176740.03±8.5633.5利巴韦林48.6±10.113050.61±11.72304 讨论急性呼吸道感染90%以上是由呼吸道病毒引起，大都为RNA病毒。
流感病毒B型为流感病毒的一个亚型，由于流感病毒易不断发生抗原变异，预防性注射疫苗效果不够理想[4],对流感尚缺乏有效的药物。
而AdV3是双股DNA病毒，最早是在原发性非典型肺炎患者的呼吸道标本接种于HeLa细胞中发现的，亦可造成不同人群中咽、结膜炎性发热性的流行[4]。
本试验所选两种病毒分属RNA和DNA类病毒，测定其抗病毒谱的范围。
本研究并严格按照卫生部药政局《新药临床前研究指导原则》的要求，以微量细胞培养法进行药物抗病毒试验，具有灵敏度高、便于观察、材料用量少、操作简便等优点。
试验中选择了两种病毒和其对应的敏感MDCK和HeLa细胞株，并设立西药利巴韦林为对照组，每组还设药物对照和细胞对照及病毒对照，使观察的结果规范，具有良好可比性，重复实验3次(n=3)结果一致以药物定量反应法反应稳定。
【精品】紫外分光光度法检测荷叶中荷叶生物碱完整版
4.4 加样回收率实验
采用UV法测定收集液中的荷叶生物碱含量的加样回收率较高， 为98.31%，相对标准偏差为2.10%，较小；应此该方法准确度较高
16
5 结论
•
以荷叶碱为标准品，采用UV检测法检测荷叶碱波长
为273nm，确定了经溴甲酚绿染色后荷叶生物碱的波长为
415nm，通过分析，确定了简单易行的紫外分光光度法对
4
2 材料与仪器
• 材料：1.标准品，荷叶碱、含0.85%生物碱的干荷叶、干
荷叶； 2.供试品，氯仿、溴甲酚绿、邻苯二甲酸氢钾；
• 主要仪器与设备：紫外分光光度计、电子天平、数显
恒温水浴锅、粉碎机；
5
3 方法
• 3.1 溶液配制：（1）溴甲酚绿溶液，称取溴甲酚绿
0.10g，加入7.2ml的0.02mol/LNaOH溶液溶解，蒸馏水定 容至250mL；（2）0.02mol/l NaOH，称取0.08gNaOH于 100ml的容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度；（3）邻苯二甲 酸氢钾缓冲液，将邻苯二甲酸氢钾粉末倒入250mL容量瓶 中，用少量蒸馏水冲塑料袋内壁并稀释至刻度；（4） 80%乙醇，称取80ml食品学院提供的无水乙醇再加20ml的 水；（5）0.42mg/ml荷叶标准品溶液，电子天平称取 4.2mg荷叶标准品于10mL容量瓶中，加水至刻度线定溶。
按制备荷叶碱标准曲线的方法，取2mL浓度 为0.02mg/mL的标准品溶液5份，在415nm下测定 吸光度值。
9
3.5 加样回收率实验
•
称取已知生物碱含量0.85%的同批荷叶2.0g，
共5份，分别精密加入荷叶碱标准品溶液浓度为
0.42mg/mL各1mL，分别加入浓度为80%乙醇
80mL，在80℃下的恒温浴冷凝回流提取。趁热过
荷叶中生物碱的提取及组成成分的分析
归 方 程 为 ： Ｃ（μｇ／ ｍＬ）＝ ５９ ． ０１Ａ－ ９ ． ５６５ ， 相 关 系 数
Ｒ ＝０．９９９９（式中 ｃ 为生物碱浓度， ｍｇ／ｍＬ； Ａ 为吸光度）。
（３）荷 叶 总 生 物 碱 含 量 的 测 定 ： 准 确 称 取 一 定 量
的生物碱粗品（ｗ２， 单位为 ｍｇ）， 按上述方法同样处理 后进行测定， 根据回归方程计算出荷叶总生物碱的
综上所述， 提取生物碱的最优工艺条件为 ｐＨ２．０， 乙 醇浓度为 ９０％， 液固比为 ２５∶１， 提 取 时 间
提取物与应用
荷叶中生物碱的提取及 组成成分的分析
单 斌 １，２， 邓泽元 １＊， 熊冬梅 １， 唐丽君 １， 邓胜国 １ （１．南昌大学食品科学与技术国家重点实验室， 南昌大学高等研究院，
南昌 ３３００４７； ２．韶关学院英东生物科学学院， 韶关 ５１２００５）
摘要： 实验是同步提取荷叶黄酮、生物碱、多糖工艺研究中提取生物碱的工艺部分， 在提取荷叶黄
疗 心 脑 血 管 疾 病 等 功 能［２－ ３］； 荷 叶 中 所 含 生 物 碱 多 为 异 喹 啉 类 生 物 碱 ， 主 要 成 分 为 荷 叶 碱 （Ｎｕｎｃｉｆｅｒｉｎｅ）、 亚 美 罂 粟 碱（Ａｒｍｅｐａｖｉｎｅ）、原 荷 叶 碱（Ｐｒｏｎｕｃｉｆｅｒｉｎｅ）、
收稿日期： ２００８－ ０３－ ２９
（１）溴甲酚绿缓冲液的制备： 精确称取溴甲酚绿 １２５ ｍｇ， 用 ０．２ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ １２．５ ｍＬ 溶解， 加入邻苯 二甲酸氢钾 ２．５５ ｍｇ， 加少量水溶解， 转移至 ２５０ ｍＬ 容量瓶中定容， 备用。
（２）荷 叶 碱 标 准 曲 线 的 制 作 ： 精 确 称 取 荷 叶 碱 ４ ｍｇ， 置于 １００ ｍＬ 容量瓶中， 加无水乙醇定容。分别 取 ４０ μｇ／ｍＬ 荷叶碱溶液 ０．０、５．０、１０．０、１５．０、２０．０、
(完整版)荷叶中生物碱提取设计方案
含量：不同地区荷叶中的荷叶碱含量不一，在0.275%-1.37%左右,一般含量在0.683%。
理化性质：荷叶生物碱碱性较弱，不能直接溶于水，但能与酸作用生成盐溶于水。
荷叶中生物碱类化合物种类繁多，根据母核结构的不同可将其分为三类：(1)阿朴啡类：包括荷叶碱(Nuciferine，N-去甲荷叶碱(N．nomuciferine)，O-去甲荷叶碱(O．nornuciferine)，莲碱(Roemerine)，番荔枝碱(Anonaine)，鹅掌楸碱(Lirioderine)，N-去甲基亚美罂粟碱(N．norarmepavine)。
(2)单苄基异喹啉类：包括亚美罂粟碱(Armepavine)、衡州乌药碱(Coclaurine)、N-甲基异衡州乌药碱(N—Methylisococlaurine)、N一甲基衡州乌药碱(N-methycolaurine)、O一去甲基衡州乌药碱(O-Norcoclaurine)。
(3)去氢阿朴啡类：去氢荷叶碱(Dehydronuciferine)，去氢莲碱(Dehydroroemerine)荷叶中主要的5种生物碱结构提取方法：（1）酸水提取法：a）称取荷叶粉10g，加入200mL pH2.5盐酸溶液，在80℃水浴恒温提取2.5h，过滤，滤渣再用100mL盐酸溶液提取1.5h，过滤，合并两次滤液，用旋转蒸发仪真空浓缩至50mL，过滤，滤液调pH值至2～3，用氯仿60mL分三次萃取，弃去氯仿层，以除去脂类和树脂。
取上层液体，加入2％NaOH调节pH至7左右，静置片刻，待肉眼可见沉淀，过滤，除去鞣质。
滤液再加2％NaOH调节pH至10.5，再用氯仿90 mL分3次萃取，合并氯仿液，在旋转蒸发仪中蒸发干燥后，用少量pH2.5 HCl溶液在超声波清洗机上洗脱生物碱，转移至100毫升容量瓶，定容，摇匀得荷叶总生物碱提取液，备用。
b) 称取荷叶粉末1g放入圆底烧瓶中，加入35ml蒸馏水，用0.5%盐酸调节pH2~3，圆底烧瓶上接40cm冷凝管，85℃冷凝回流提取2h，提取结束后，提取液用滤纸过滤，用30ml氯仿分两次萃取酸水液，弃去氯仿层。
紫外分光光度法测定不同产地半夏中总生物碱的含量
结论 定方 法 简单快速 ； 同产 地 半夏 总生物碱 含量 有一 定差异 ， 测 不 但相 差 不 大。
关键 词 ： 半夏； 总生物碱 紫外分光光度法； 盐酸麻黄碱 中 图分 类 号 ： ８ ． 文 献标 识 码 ： Ｒ２ ４ ２ Ａ 文 章 编 号 ：０ ８０ ０ （ ０ ２ ０ — ０ ３ ０ １ ０ — ８ ５ ２ ０ ） ２０ ７ — ２ Ｄｅｅ ｍｉ ａ ｉｎ ｆ ｔ ｅ Ａｌ ａ ｉｓ ｉ Ｐ ｎ ｌ ａ ｔｒ ａ ａ （ ｕ ｂ ） Ｂ ｅｔ ｆ ｏ ｔ ｒ ｎ ｔ ｏ ｈ ｌ ｄ ｎ ｉｅｌ ｅｎ ｔ ｏ ｋ ｏ ｉ Ｔｈ ｎ ． ｒ ｉ． ｒ ｍ
ａｒｅａｓ．
Ｋ ｅ ｒ ｓ： ｎ ｌ ａ ｔ ｒ ａ ａ （ ｕ ｂ ）Ｂ ｅ ． ； Ａｌ ａ ｏｄ； Ｕ Ｖ ｂ ｏ ｐ ｉ ｎ ｓ ｅ ｔｏ ｃｒｈ ｋ ｔｉ ａ ｓ ｒ ｔ ｐ ｃ ｒ ｓ ｏ ｙ； Ｅｐ ｅ ｒ ｅ ｏ ｈ ｄｉ ｎ
（ 一 ０ ９ ８ ． Ｔｈ ｅ ｏ ｅ ｙ ｗａ ｅ ｆｃ （ ０ ．０ ） Ｔｈ ａ ｌｓ ｗｅ ｅ ｔ ｂ ｌ ａ ｉ ｎ ｉ ｏ ｒ ． ｒ ．９ ９ ） ｅ ｒ ｃ ｖ ｒ ｓ ｐ ｒｅ ｔ １ ２ ２ ． ｅ ｓ ｍｐ ｅ ｒ ｓａ ｉ ｚ ｔ ｎ ５ ｈ ｕ ｓ ｉ ｏ
紫 外 分 光 光 度 法测 定 不 同产 地 半夏 中总生 物碱 的含 量
于 超 ，张 明 ，王 字 ，喻
４０６） ０ ０ ６
强
（ 庆 市 中药研 究 院 重
摘要 ： 目的： 测定不同产地半夏中总生物碱的含量， 比较相互差异。 方法 ： 砷半夏药材采 用超声提取 ， 依
据 酸 ． 染 料 比 色 法 的 原 理 ， ４ ６ｎ 波 长 下 进 行 比 色测 定 药 材 中 总 生 物 碱 。 结 果 ： 得 良好 的 线 性 关 Ｉ 生 在 １ ｍ 获 系（ ｒ—ｏ ９ ９８ 和 回 收 率 （０ ． ２ ） Ｒ Ｄ 为 ２ ３ 。 品 在 ５ｈ 内基 本 稳 定 （ Ｓ 为 ０ ３ ３５ ） ． ９ ） １ ２ ０ ， Ｓ ．８ 样 Ｒ Ｄ ． ２ 。
分光光度法测定不同产地荷叶药材总黄酮的含量
分光光度法测定不同产地荷叶药材总黄酮的含量曹娟;王福刚;陈静;王彩燕【摘要】目的比较不同产地荷叶药材总黄酮的含量.方法采用紫外-可见光分光光度法,以芦丁为对照品,NaNO3-Al(NO3)3-NaOH显色,在500 nm处测定总黄酮含量.结果在14.43～72.15 μg.ml-1范围内,吸光度与浓度线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为100.64%(RSD=0.90%),不同产地药材总黄酮含量范围为1.88%～10.99%.结论不同产地荷叶药材中总黄酮含量存在较大差异.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2010(031)005【总页数】3页(P358-360)【关键词】荷叶;总黄酮;分光光度法【作者】曹娟;王福刚;陈静;王彩燕【作者单位】泰山医学院药学院,山东,泰安,271016;泰山医学院药学院,山东,泰安,271016;泰山医学院药学院2006级制药工程专业,山东,泰安,271016;泰山医学院药学院2006级制药工程专业,山东,泰安,271016【正文语种】中文【中图分类】R284.2荷叶Folium Nelumbinis为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶，味苦、性平，归肝、脾、胃经，具有清热解暑，升发清阳，凉血止血之功效[1]。
《本草纲目》记载，“荷叶服之，令人瘦劣”、“生发元气，裨助脾胃”。
现代药理研究表明，荷叶具有降脂减肥、抗氧化及抗衰老、抑制脂肪肝、抑菌等作用。
1991年 11月中华人民共和国卫生部卫签发(1991)第 45号文件中，荷叶被列入第二批“既是食品又是药品”名单，在食用及药用两方面均有较广泛的应用。
荷叶分布广泛，我国南北均产，其主要活性成分为生物碱和黄酮类化合物[2]。
荷叶黄酮对胰脂肪酶有显著抑制作用[3]，能降低血脂中的甘油三酯含量[4]。
为了研究不同产地荷叶总黄酮含量的差异性，本实验测定了22批荷叶药材总黄酮的含量，为荷叶的进一步开发利用提供依据。
高效液相法测荷叶配方颗粒中荷叶碱的含量
高效液相法测荷叶配方颗粒中荷叶碱的含量摘要：建立HPLC测定荷叶配方颗粒中荷叶碱含量的方法。
方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸（27：70.6：1.6：0.8）为流动相；流速：1ml/min；检测波长为270nm；柱温：30℃。
理论板数按荷叶碱峰计应不低于2000。
结果：荷叶碱在0.0408～0.3072g 范围内具有良好的线性关系，r= 0.9999，平均回收率为97.39%，RSD=2.04%（n=6）。
结论：本法简便、准确，灵敏度高，重复性好，可用于荷叶成分的含量测定。
关键词：荷叶高效液相色谱含量中图分类号：R151 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）04-0022-02荷叶为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn的叶。
属于“既是食品又是药品”的物品，其在食用及药用两方面均有较广泛的应用[1]，具清热解暑、升发清阳、凉血止血之功[2-4]。
《本草纲目》载“荷叶服之，令人瘦劣”[5]。
民间有用荷叶治疗肥胖症的记载[6]。
荷叶富含生物碱和黄酮类两大主要活性成分[7-9]。
现代研究显示荷叶碱为荷叶中的主要降脂活性成分。
荷叶配方颗粒是以荷叶饮片为原料，经过提取、分离、浓缩、干燥、制粒、包装等生产工艺，加工制成的一种新型配方用药，本实验采用高效液相色谱技术，对荷叶配方颗粒中的荷叶碱进行了含量测定。
以期为荷叶资源进一步的开发和利用提供帮助。
1 仪器与试剂高效液相色谱仪：Agilent Technologies 1260 Infinity高效液相色谱仪。
荷叶碱化学对照品：购自中国药品生物制品检定所提供，批号：111566-201208，规格：20mg。
其他所用试剂均为色谱纯和分析纯。
2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 对照品溶液制备取荷叶碱对照品10.2mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得荷叶碱对照品的储备液；吸取1ml储备液，置于10ml量瓶中，加甲醇定容，即得（每1ml含荷叶碱20.4g）。
荷叶总生物碱降脂减肥作用的体内外试验
荷叶总生物碱降脂减肥作用的体内外试验1. 本文概述随着全球肥胖问题的日益严重，寻找安全有效的减肥方法已成为生物医学研究的重要课题。
荷叶，作为一种传统中药材，自古以来就被用于治疗肥胖和调节血脂。
近年来，荷叶中的生物碱成分因其显著的降脂减肥效果而受到广泛关注。
本文旨在通过系统的体内外试验，探讨荷叶总生物碱对降脂减肥的作用及其潜在机制。
本文将综述荷叶总生物碱的化学成分、生物活性及其在传统医学中的应用。
接着，通过体外实验，分析荷叶总生物碱对脂肪细胞分化和脂肪积累的影响，并探讨其作用机制。
进一步地，体内实验部分将评估荷叶总生物碱对肥胖模型动物体重、血脂水平、脂肪组织分布等指标的影响，并分析其可能的分子途径。
本文还将探讨荷叶总生物碱的安全性和耐受性，为其作为减肥药物的开发提供科学依据。
最终，通过综合分析体内外试验结果，本文将评估荷叶总生物碱作为潜在减肥治疗剂的可行性和应用前景，为肥胖治疗提供新的思路和方法。
2. 文献综述荷叶总生物碱是从荷叶中提取的一类生物活性物质，主要成分包括荷叶碱、N去甲基荷叶碱、异荷叶碱等。
这些生物碱具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗菌等（Chen et al., 2012）。
近年来，荷叶总生物碱在降脂减肥方面的潜在作用引起了广泛关注。
多项研究探讨了荷叶总生物碱对体重管理和血脂水平的影响。
Zhang等人（2015）发现荷叶总生物碱能够显著降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠的体重和脂肪积累。
荷叶总生物碱还能显著降低血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，同时提高高密度脂蛋白胆固醇水平（Li et al., 2017）。
荷叶总生物碱的降脂减肥作用机制尚未完全明确，但现有研究提出了一些可能的机制。
一方面，荷叶总生物碱可能通过抑制脂肪细胞的分化来减少脂肪积累（Wang et al., 2019）。
另一方面，荷叶总生物碱可能通过调节脂肪代谢相关酶的活性来影响脂肪代谢过程（Jin et al., 2018）。
不同产地荷叶功能性成分的评价
不同产地荷叶功能性成分的评价黄旭东;晁鲁平;项庆琰;蒋益虹【摘要】测定广昌赣莲(江西广昌)、江苏红莲(江苏宝应)、洪湖莲(湖北洪湖)、湘白莲(湖南湘潭)、建莲(福建建宁)这5个产地的荷叶中生物碱、黄酮、甾醇及挥发物的含量.以乙醇水溶液为提取剂超声提取荷叶粉末,通过分光光度法分析,得到荷叶生物碱含量最高的是湘白莲4.08 mg/g;荷叶中黄酮含量最高的是宝应红莲19.99 mg/g.利用有机溶剂提取法得到甾醇粗提物,经过皂化,SPE柱萃取,衍生,氮吹后,GC-MS测定荷叶中甾醇含量.荷叶中甾醇含量最高的是宝应红莲0.25 mg/g,主要的甾醇为β-谷甾醇.利用水蒸气蒸馏法提取荷叶中的挥发油,并利用GC-MS测定挥发油的含量及成分,荷叶挥发油含量最高的是洪湖莲0.75%,荷叶挥发油中植醇、叶绿醇、烯类较多.%This research studied the contents of alkaloids, flavonoids, sterol as well as volatile oil from the lotus leaves of the five famous origins of lotus in China of Guangchang Lotus (Jiangxi Guangchang), Jiangsu Hong Lotus(Jiangsu Baoying), Hong Hu Lotus(Hubei Honghu), XiangLotus(Hu'nan) and Jian Lotus(Jianning, Fujian). With ethanol as extraction solvent , physiologically active substances was extracted from lotus leaves powder by ultrasonic extraction way, and measured with spectrophotometry. The highest content of alkaloids in lotus leaves was Xiang Lotus 4.08 mg/g. The highest content of flavonoids in lotus leaves was BaoYing Hong Lo-tus 19.99 mg/g. Ethanolic extract from lotus leaves was carried on with saponification, solid phase extraction, derivation, and nitrogen blow, and after that the content of sterol in lotus leaves was detected by Gas Chro matography-Mass Spectrometer. The highestcontent of sterol in lotus leaves was Bao Ying Hong Lotus 0.25 mg/g, and the main kind of sterol wasβ-sitosterol. The volatile oil was extracted by steam distillation, and its content was detected by Gas Chromatography-Mass Spectrometer. The highest content of volatile oil in lotus leaves was Hong Hu Lotus 0.75%. The content of phytol and olefin played a major part in volatile oil of lotus leaves.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)012【总页数】6页(P153-158)【关键词】荷叶;生物碱;黄酮;甾醇;挥发油;气相质谱【作者】黄旭东;晁鲁平;项庆琰;蒋益虹【作者单位】浙江大学生物系统工程与食品科学学院,馥莉食品研究院,浙江省农产品加工技术研究重点实验室,浙江省食品加工技术与装备工程中心,浙江杭州310058;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,馥莉食品研究院,浙江省农产品加工技术研究重点实验室,浙江省食品加工技术与装备工程中心,浙江杭州310058;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,馥莉食品研究院,浙江省农产品加工技术研究重点实验室,浙江省食品加工技术与装备工程中心,浙江杭州310058;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,馥莉食品研究院,浙江省农产品加工技术研究重点实验室,浙江省食品加工技术与装备工程中心,浙江杭州310058【正文语种】中文荷，睡莲科莲属，多年水生植物。
HPLC测定荷叶中碱盐的含量
HPLC测定荷叶中碱盐的含量阎娜;王炜华;李俶;刘成梅;王一铭【摘要】以荷叶为原料,建立一种荷叶碱盐含量的测定方法.运用高效液相色谱法测定,色谱柱为Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸盐缓冲溶液(0.05%磷酸-0.2%三乙胺-水)(25:75,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm.结果显示,荷叶碱盐在0.053～0.159 mg/mL(R2=0.999 2)范围内具有良好的线性关系,平均回收率为96.4%,RSD为0.05%.该方法简便、准确,灵敏度高,重复性好,可用于荷叶碱盐成分的含量测定.%To establish an HPIC method for the determination of nuciferine salt on lotus leaf. Methods: Analyses were carried out on Hypersil ODS2(4.6 mm× 250 mm, 5 μm)column with acetonitrile:0.05％ phosphoric acid-0.2％ triethylamine-water (25 : 75,V/V)as the mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the UV detection wavelength was 270 nm. Results indicated, Linearities of nuciferine salt was good in the ranges of 0. 053～0. 159 mg/mL (R2 =0.999 2). The average recovery was 96. 4％, and RSD was 0.05％ (n = 6). The method was simple, accurate, sensitivity and reproducible. The method can be used to the determination of nuciferine salt.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2011(027)003【总页数】3页(P71-72,87)【关键词】荷叶碱盐;含量测定;高效液相色谱【作者】阎娜;王炜华;李俶;刘成梅;王一铭【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌330047;南昌济顺制药有限公司,江西南昌330008【正文语种】中文荷叶为睡莲植物莲（nelumbo nucifera gaertn）盛产于江西、福建、湖南和浙江等省。
HPLC法测定荷叶与莲房中荷叶碱的含量
HPLC法测定荷叶与莲房中荷叶碱的含量杨鹏【摘要】目的建立高效液相色谱法测定荷叶与莲房中荷叶碱含量的方法.方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27∶70.6∶1.6∶0.8)为流动相;流速∶1.0 mL·min-1;柱温:25℃;检测波长:270 nm.结果荷叶碱在3.01 ～48.16 μg·mL-1范围内线性良好(r=0.999 0),平均回收率为96.97％,RSD=0.99％ (n=6).结论该方法准确、简便、灵敏度高、重现性好,可用于荷叶与莲房中荷叶碱含量的测定.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2014(033)004【总页数】2页(P208-209)【关键词】荷叶;莲房;荷叶碱;高效液相色谱法;含量测定【作者】杨鹏【作者单位】福建中医药大学药学院,福建福州350122【正文语种】中文【中图分类】R927.2荷叶是睡莲科植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的叶片，在中国大部分地区均有分布。
传统医学认为，荷叶具有清暑利湿、升发清阳、清心去热、止血利水的作用［1］。
1991年11月中华人民共和国卫生部卫监发（1991）第45号文件中，荷叶被列入第二批“既是食品又是药品”的名单［2］。
据文献记载，荷叶中主要生理活性物质为生物碱和黄酮类物质［3］，其生物碱具有抑制高胆固醇血症和动脉粥样硬化作用，其中荷叶碱被证实为荷叶中具有降脂减肥作用的活性成分［4］，因此越来越受到重视。
为了控制荷叶的质量，往往把荷叶碱作为荷叶的指标性成分，对其进行含量测定。
查找文献［5］可知，主要采用高效液相色谱法测定含量，本文也建立了高效液相色谱法测定荷叶和莲房中荷叶碱含量的方法。
实验结果表明，该法准确度高，重现性好。
1.1 仪器 Agilent 1100液相色谱仪：Agilent E-clipse XDB－C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱；分析天平（Sartorius AGCP225D）；KQ－500B超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；紫外分析仪（UV－1750）。
不同产地荷叶中二氧化硫和荷叶碱含量测定研究
不同产地荷叶中二氧化硫和荷叶碱含量测定研究
罗栩强;刘经相;曾丽婷;杨勉锐;库瑶;吴梅青
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2022(34)3
【摘要】目的测定贵州、湖北、浙江、山东、湖南、福建6个产地荷叶中二氧化硫和荷叶碱的含量,并对其药用品质进行评价。
方法采用酸碱滴定法测定二氧化硫的含量;采用HPLC法测定荷叶碱含量。
结果不同产地荷叶中均未检测到二氧化硫;荷叶中荷叶碱的含量在0.116~0.641%之间,其中湖南产荷叶中荷叶碱的含量高达0.641%。
结论不同产地荷叶中二氧化硫和荷叶碱含量均符合《中国药典》2020版规定的要求。
该研究可为荷叶药材的质量及安全性评价提供参考。
【总页数】4页(P75-78)
【作者】罗栩强;刘经相;曾丽婷;杨勉锐;库瑶;吴梅青
【作者单位】中山市仙逸堂中药饮片有限公司;中山市中药饮片(仙逸堂)工程技术研究中心;湘潭医卫职业技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R927
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叶黄酮及荷叶碱含量影响4.HPLC法测定荷叶中荷叶碱含量的不确定度评定
5.HPLC法测定荷叶中荷叶碱含量的不确定度评定
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荷叶碱检测
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荷叶碱（Nuciferin）是来源于睡莲科植物莲的干燥叶中的一种阿朴啡型生物碱，为荷叶中的主要降脂活性成分，能有效分解降低体细胞脂肪，提高其对胰岛素的感知度，杜绝高脂疾病发生。
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学号:3506014009毕业设计（论文）题目：不同产地荷叶总生物碱的含量测定院（部）系药学院所学专业药学年级、班级完成人姓名指导教师姓名专业技术职称2010年 6 月 12 日论文原创性保证书我保证所提交的论文都是自己独立完成，如有抄袭、剽窃、雷同等现象，愿承担相应后果，接受学校的处理。
专业：药学班级：2006级药学本科二班签名：年月日目的荷叶中生物碱类化合物的生物活性较高，本实验通过对生物碱类成分几种不同提取方法的对比，确定最优提取方法。
用最优提取方法分别测定22种不同产地的荷叶粉末中生物碱类成分含量，为荷叶药材质量控制提供实验依据。
方法本实验用于荷叶中总生物碱类成分的提取方法主要有以下几种：酸水回流提取法、醇提回流提取法以及氨水-氯仿超声提取法。
其中，酸水提取法的工艺条件为：水提取量为荷叶量的35倍，提取温度为85℃，提取时间为2h，提取液PH为2~3；醇提法工艺条件为：醇提取量为荷叶的30倍分两次回流提取，提取温度为85℃，两次的提取时间共3.5h；氨水-氯仿超声提取法采用0.3g荷叶粉末，25ml氯仿和0.5ml氨水在常温下超声提取30min。
含量测定方法采用紫外可见分光光度法，以荷叶碱为对照，溴甲酚绿为显色剂，在415nm 波长下测定吸光度。
结果氨水-氯仿超声提取法提取最为完全。
用氨水-氯仿超声提取法分别对22种不同产地的荷叶粉末进行提取，用紫外分光光度法测得的吸光度各不相同。
结论不同产地的荷叶中生物碱类成分含量不同。
关键词：荷叶；生物碱类成分；提取方法；紫外分光光度法；含量测定Objective: The alkaloid in nelumbo nucifera is highly activated.Through this experiment ,we used several different ways extracting alkaloid,to determine the best extraction.The best extraction will be used to extract the alkaloid from different places,to determine the different content of alkaloid.Methods: There are three methods used to extract the alkaloid from nelumbo nucifera in this experiment:acid-water extraction ,alcohol extraction and ammonia-chloroform supersonic extraction.The progress of acid-water extraction is:water35 times as much as the mass of powder,85℃for 2h,pH2~3.Alcohol extraction:alcohol 30 times as much as the mass of powder,into two return to extract,85℃altogether for 3.5h.Ammonia-chloroform supersonic extraction:0.3g powder,25ml chloroform,0.5ml ammonia,ultrasound for 30 min at normal temperature.UV is used as the method of content determination,alkaloid for comparison,bromo cresol green for colour developing agent,determin the wavelength at 415 nm.Results: Ammonia-chloroform supersonic extraction is believed to be the best method.In this way ,we test all the nelumbo nucifera powder and get different absorbance.Conclusion: The alkaloid content in nelumbo nucifera from different habitats is of great difference.Key words: nelumbo nucifera ;alkaloid;extract;UV;content determination正文 (1)前言 (1)仪器与试剂 (1)实验方法与结果 (2)讨论 (8)结论 (9)参考文献 (10)文献综述 (11)致谢 (14)附录 (15)不同产地荷叶总生物碱的含量测定学生：李双娟指导教师：王福刚（泰山医学院药学院，泰安271016）1前言荷叶作为我国的传统中药在医学应用中历史悠久，据《本草纲目》记载，“荷叶服之，令人瘦劣”、“生发元气，裨助脾胃”等，而且荷叶在我国南北方均有种植，民间广泛用于食物及药物中。
近来人们加大对其活性化学成分和药理方面的研究，进一步明确其化学成分及药效之间的关系[1]。
这些研究成果将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据[2]。
荷叶化学成分复杂，含有生物碱、黄酮、精油、维生素C、鞣质、酒石酸、苹果酸、枸橼酸等，其中生物碱和黄酮类化合物的生物活性较高[3]因而近年来人们加大了对这两种化学成分的研究。
本课题主要展开荷叶中生物碱类成分的提取及含量测定。
因荷叶生物碱碱性较弱，不能直接溶于水，但能与酸作用生成盐溶于水，故荷叶生物碱可用偏酸性的水溶液提取[4]。
也可用醇类溶剂提取，再用氯仿萃取的方法得到[5,6]，还可以用氯仿及氨水在常温下超声提取[7]。
将由上述方法得到的提取液用紫外分光光度法在200~700nm范围内进行扫描，用荷叶碱作为对照，PH5的溴甲酚绿缓冲液显色，找到415nm 左右出峰较好的方法作为本实验的提取方法。
用最适宜的方法分别测定22种不同产地的荷叶中生物碱类成分的含量。
2仪器与试剂2.1仪器FA-1004型电子分析天平（上海精科天平）、S-54型紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）、KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）、FW-135型中药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅（北京市长风仪器）2.2材料和试剂2.2.1 材料荷叶粉末2.2.2 试剂邻苯二甲酸氢钾（天津市四通化工厂，分析纯，020928）、溴甲酚绿（天津市科密欧化学试剂开发中心，020426）、氨水（莱阳经济技术开发区精细化工厂，分析纯，071130）、氯仿（天津市富宇精细化工有限公司，分析纯，071014）、氢氧化钠（天津市凯通化学试剂有限公司，分析纯，090128）、盐酸（淄博化学试剂厂有限公司，分析纯，36%~38%，070402）、95%乙醇2.3溶液配制2.3.1 pH5.0溴甲酚绿溶液称取邻苯二甲酸氢钾5g，加水450mL，用0.2mol/L氢氧化钠调节pH为5.0，加入溴甲酚绿0.12 g，溶解，加适量氯仿预饱和，备用。
2.3.2 对照品溶液[8]称取荷叶碱对照品约4mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀。
精密量取1ml至10ml量瓶，加氯仿至刻度，作为对照品溶液。
3实验方法与结果3.1 酸水提取法3.1.1 荷叶生物碱提取液的制备[9]称取荷叶粉末1g放入圆底烧瓶中，加入35ml蒸馏水，用0.5%盐酸调节pH2~3，圆底烧瓶上接40cm冷凝管，85℃冷凝回流提取2h，提取结束后，提取液用滤纸过滤，用30ml 氯仿分两次萃取酸水液，弃去氯仿层。
酸水中加入0.5%氢氧化钠调节Ph7左右，静置，滤纸滤过，再加0.5%氢氧化钠调节pH9~11，再用60ml氯仿分2次萃取至水中无生物碱为止，合并氯仿液，在旋转蒸发仪中蒸干后，加入25ml氯仿，超声洗脱即得。
3.1.2 荷叶生物碱最大吸收波长的确定[10]取洗脱样1ml，加入5ml氯仿及1ml溴甲酚绿缓冲液于分液漏斗中，摇匀，静置，取4ml氯仿层于刻度试管中，加入无水乙醇1ml，摇匀，用紫外分光光度计在200~700nm波长范围内扫描，其最大吸收峰出现在275nm，如图1。
图1 酸水回流提取法3.1.3 由于此方法出峰不明显，差异太小，易有干扰，故此方法被排除。
3.2 醇提法3.2.1 荷叶生物碱提取液的制备[11]称取荷叶粉末5g，加95%乙醇80ml浸泡30min，85℃回流提取2h，过滤，滤渣用95%乙醇70ml回流提取1.5h，过滤，合并滤液，用旋转蒸发仪浓缩至20ml，即为荷叶生物碱粗提取液。
3.2.2 采用3.1.2中方法确定其最大吸收波长在412nm，A=0.477。
如图2。
图2醇提回流提取法3.3 氯仿及氨水超声提取法3.3.1 荷叶生物碱提取液的制备称取荷叶粉末0.3g置于50ml锥形瓶中，精密加入氨水0.5ml，氯仿25ml，常温下超声提取30min，放冷，滤过，滤渣用少量溶剂洗涤两次，合并溶剂，并定容至50ml量瓶中，备用。
3.3.2 荷叶碱最大吸收波长的确定取上述提取液1ml，蒸干，加入pH5.0溴甲酚绿缓冲液4ml，氯仿6ml，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中，静置2h，分取氯仿层于200~800nm波长范围内扫描，测得吸收光谱在415nm处有最大吸收峰，A=0.483，如图3。
图3氨水超声提取法3.3.3同3.2.2结果比较，显然超声提取法提取比较完全，且峰比较强，故后续实验全部采用超声提取法。
对照品溶液及供试液在显色前后吸收光谱对比,如图4和5。
图4（a）对照品不显色图4(b)对照品显色图5（a）氨水超声提取不显色图5(b)氨水超声提取显色3.4 超声提取法测定总生物碱的方法学考察3.4.1 精密度考察取荷叶粉末0.3g(0.3009g)，按3.3.1方法获得提取液，取1ml提取液，蒸干，加入4mlpH5.0溴甲酚绿缓冲液，6ml氯仿，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中，静置2h，分取氯仿层，在415nm波长处测定其吸光度，结果见表1，RSD%=0.533。
表1 精密度考察编号 A 平均值RSD（%）1 2 3 4 5 6 0.4340.4330.4360.4380.4370.4390.436 0.5333.4.2 线性关系考察精密吸取荷叶碱对照品溶液(浓度为0.0410mg/ml) 0,0.3,0.6,0.9,1.2,1.5和1.8ml，蒸干，分别加入pH5.0溴甲酚绿缓冲液4ml，氯仿6ml，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中静置2h，分取氯仿层于415nm波长处测定吸光度。