5.鸡血细胞融合1

3. 弃上清液(用吸管吸去)，加1mL0.85％Nacl，混匀后1500r／min离心 5min。
4. 重复上述条件，再离心洗涤1次（10min)。 5. 收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入1mLGKN液使红细胞重新悬浮。 6. 取悬液1ml到1个试管中，加入0.5～0.8ml预热的50％PEG混匀，置于 37℃水浴中温浴2-5min； 7. 加入GKN5ml以终止PEG的作用，在37℃水浴中静止平衡5min. 8. 取血细胞悬液1滴滴于载玻片上，再加入0.2%次甲基蓝溶液1滴,用牙签混 均，3min后，盖上盖玻片，高倍镜下观察细胞融合情况。 9. 进行多个视野的测定，统计平均融合率。
依据融合过程采用的助融剂不同，细胞融合可
分3种类型：
病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒（HVJ）
化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（PEG）；
电场诱导的细胞融合；
病 毒 诱 导 的 细 胞 融 合 过 程
利 用 细 胞 融 合 培 育 杂 种 植 物
• PEG溶液作为助融剂介导动物细胞融 合的原理为：PEG可改变各类细胞的 膜结构，使两细胞接触点处脂类分子 发生疏散和重组，引起细胞融合。
l 利用PEG介导的细胞融合，其融合效果 受以下因素影响： ① PEG的分子量与浓度：D=4000、50％ ② PEG的处理时间：2－5分钟 ③ 融合时的温度：37－40度
④ PEG的 pH值：8.0-8.2
三、实验仪器、材料和试剂
1.仪器、用具：注射器、 离心机、水浴锅、EP管 2.材料：成年家鸡 3.试剂：Alsver溶液 0.85％Nacl GKN溶液 50％PEG溶液 0.2％次甲基兰
四、方法与步骤
1. 鸡血红细胞悬液的制备：用注射器吸入 1mL Alsver液后从鸡翼下静脉取 鸡血2mL，注 入刻度离心管内，按照3：1(V／V)加入Alsver液混匀，放 入4℃冰箱保存。 2. 取细胞悬液0.2，移入EP管内，加入0.8mL0.85％Nacl混匀，1500r／min 离心5 min。
五、实验结果的观察与计算
• 细胞融合的观察，可通过观察细胞内核的数目来
进行鉴别。细胞内只有一个核，定为未融合细胞； 有二至多个核，定为融合细胞。 • 细胞的融合率指在显微镜的视野内，已发生融合 的细胞的核的总数与此视野内所有细胞的细胞核 总数之比。
六、作业
1. 画出观察到的融合细胞. 2.计算细胞的融合率： 融合率=融合的细胞核的个数 总的细胞核的个数 3. 你认为PEG介导的细胞融合实验的关键步骤 是什么？说明理由。
实验五
鸡血细胞 的体外融合
一、实验目的
1. 熟悉细胞融合的理论 2. 掌握PEG诱导的细胞融合方法
二、实验原理
• 细胞融合又Βιβλιοθήκη Baidu细胞杂交，
是指真核细胞通过介导
或培养，两个或多个细
胞合并成一个双核或多核细胞的过程。异核
细胞可进入有丝分裂，使来自两个亲本细胞
的基因组合在一起，形成只含一个细胞核的
杂种细胞。