5.鸡血细胞融合1
实验十 PEG法诱导鸡血细胞融合
（7）詹纳绿染液。
四、方法与步骤
（一）鸡血细胞的体外融合
1.鸡血细胞的获得 用肝素溶液润洗注射器，从家鸡的翼根静脉用注射器采血，
注入试管后，速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制 成抗凝全血。 2.鸡血细胞储备液的制备 在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85%NaCl溶液，制 成红细胞储备液，置于4℃冰箱内可供一周内使用。
• 影响原生质体融合的因素。 （1）首先是酶解条件： 渗透压稳定剂 Ca2+ 、Mg2+、蔗糖 可保持原生质体稳定利于再生；随着酶解时间的增加原生 质体的释放量增大；酶解浓度到达一定浓度后，原生质体 的再生率下降；再就是酶解温度。 （2）原生质体的脱壁是否完全会影响融合效果。有的原生质 体会很快再生细胞壁，因此在洗去酶液后，应立即进行融合 处理。 （3）原生质体的悬浮状况也会影响融合，如果两亲本原生质 体密度相差较大，就难以混和均匀，接触机会减少，这时应 用离心方法强迫它们密集
实验 十 PEG法诱导鸡血细胞融合
College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
一、实验目的
了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合 的基本原理。
通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验， 初步掌握细胞融合的基本方法。
二、实验原理
荧光标记的细胞融合
三．实验仪器、材料和试剂
仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心 机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微 镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、 酒精灯等。
材料：成年家鸡。
■ 试剂
（1）0.85%NaCl溶液:
鸡血细胞的体外融合
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
细胞生物学实验
实验原理：
东北师大 生科院
依据融合过程采用的助融剂 的不同，细胞融合可分为： 病毒诱导的细胞融合、化学 因子诱导的细胞融合、电场 作用下诱导的细胞融合。
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
鸡血细胞的体外融合
实验原理：
细胞生物学实验
业
考
细胞生物学实验
实验原理：
东北师大 生科院
体外细胞融合是细胞工程范畴的 概念，细胞融合(cell fusion)又称 体细胞杂交，是指用人工方法使 两个或两个以上的体细胞融合成 异核体细胞，随后，异核体同步 进入有丝分裂，核膜崩溃，来自 两个亲本细胞的基因组合在一起， 形成只含有一个细胞核的杂种细 胞（hybrid cell）。
1.绘出镜下观察到的细胞融合 情况。 2.计算细胞融合率。
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
鸡血细胞的体外融合
细胞生物学实验
思 考：
东北师大 生科院
试分析哪些因素可能影响 本实验的细胞融合率？
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
鸡血细胞的体外融合
业
考
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鸡血细胞的体外融合
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
细胞生物学实验
作 业：
东北师大 生科院
（细胞融合率系指在显微镜的视野内， 已发生融合的细胞其细胞核总数与该视 野内所有细胞(包；括已融合的细胞)的 细胞核总数之比，称为融合率，通常以 百分比表示，而且要进行多个视野测定, 再加以平均统计，更为准确。 ）
鸡血细胞融合实验报告
鸡血细胞融合实验报告鸡血细胞融合实验报告引言细胞融合是一种重要的实验技术，通过将两种或多种细胞融合在一起，可以研究细胞间的相互作用、基因表达调控以及细胞发育等方面的问题。
在本次实验中，我们选择了鸡血细胞作为研究对象，通过融合不同类型的鸡血细胞，探究其对细胞功能和特性的影响。
实验材料与方法1. 实验材料：- 鸡血细胞样本：从鸡体内提取鲜血样本，分离出鸡血细胞。
- 细胞培养基：含有适宜的营养物质和生长因子，维持细胞生长和分裂。
- 细胞培养器具：培养皿、离心管、移液器等。
2. 实验方法：- 细胞培养与扩增：将鸡血细胞接种于含有细胞培养基的培养皿中，放置于恒温培养箱中，控制适宜的温度和湿度，使细胞能够正常生长和分裂。
- 细胞融合：选取两种不同类型的鸡血细胞，分别标记为A和B。
将细胞A和细胞B分别收集，离心沉淀后，用细胞培养基将其悬浮于一起。
利用电融合或化学融合等方法，使细胞A和细胞B融合为一个细胞群体。
- 细胞观察与分析：观察融合后细胞的形态变化、生长速率、基因表达等特性，并与原始细胞进行对比分析。
实验结果与讨论通过实验观察和数据分析，我们得到了以下结果和结论：1. 细胞融合后形态变化融合前的细胞A和细胞B在形态上存在明显的差异。
然而，经过细胞融合后，新形成的细胞群体呈现出一种中间状态，既保留了细胞A和细胞B的一些特征，又具有自身的特点。
这表明细胞融合可以导致细胞形态的重塑和变异。
2. 细胞融合后生长速率我们观察到，在细胞融合后的细胞群体中，生长速率明显高于单独培养的细胞A和细胞B。
这可能是由于融合后细胞的互补性增强，使得细胞能够更有效地利用培养基中的营养物质和生长因子。
3. 细胞融合后基因表达通过实时荧光定量PCR等技术，我们检测了融合后细胞中一些关键基因的表达水平。
结果显示，融合后细胞的基因表达模式发生了明显的变化，一些基因的表达水平显著上调或下调。
这表明细胞融合可以影响基因的转录水平，从而影响细胞的功能和特性。
鸡血细胞融合实验报告
鸡血细胞融合实验报告鸡血细胞融合实验报告引言：细胞融合是生物学领域中的一个重要研究课题，通过将两种或多种细胞融合在一起，可以产生新的细胞，从而探索细胞的特性和功能。
本实验旨在通过将鸡血细胞进行融合，观察融合细胞的形态特征和生理功能，以期对细胞融合的机制和应用进行深入研究。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康成年鸡作为实验对象。
2. 细胞培养：从鸡体内提取血液样本，分离出鸡血细胞，并进行细胞培养。
3. 细胞融合：选择适当的融合剂，将两种不同来源的鸡血细胞进行融合。
4. 观察与记录：通过显微镜观察融合细胞的形态特征，记录细胞的大小、形状、颜色等信息。
结果与讨论：通过实验观察，我们发现融合细胞在形态上与原始细胞有所不同。
融合细胞的大小较原始细胞更大，形状也更加不规则，颜色也呈现出混合的特征。
这表明细胞融合可能导致细胞的形态改变，从而影响其生理功能。
为了进一步验证融合细胞是否具有新的生理功能，我们进行了一系列实验。
首先，我们检测了融合细胞的代谢活性。
结果显示，融合细胞的代谢活性明显增强，相比于原始细胞，其能够更快地吸收营养物质并释放代谢产物。
这表明细胞融合可能导致代谢途径的改变，从而增强细胞的生理功能。
接下来，我们对融合细胞进行了增殖实验。
结果显示，融合细胞的增殖速度明显加快，相比于原始细胞，其能够更快地分裂并形成新的细胞。
这表明细胞融合可能导致细胞增殖机制的改变，从而增强细胞的生长能力。
此外，我们还对融合细胞进行了细胞凋亡实验。
结果显示，融合细胞的凋亡率明显降低，相比于原始细胞，其更容易存活并继续进行细胞分裂。
这表明细胞融合可能导致细胞凋亡途径的改变，从而增强细胞的生存能力。
综上所述，通过鸡血细胞融合实验，我们发现融合细胞在形态特征和生理功能上与原始细胞有所不同。
细胞融合可能导致细胞形态的改变、代谢活性的增强、增殖速度的加快以及凋亡率的降低。
这些发现为细胞融合的机制和应用提供了新的线索，有望在组织工程、再生医学等领域发挥重要作用。
实验一：鸡血细胞融合
实验一：鸡血细胞融合一、实验目的1、熟悉细胞融合的理论；2、掌握PEG诱导的细胞融合方法。
二、实验原理1、细胞融合原理两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。
在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。
利用PEG介导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。
学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起相临的重排质膜在修复时相互合并在一起,使两细胞的胞质沟通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。
不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。
细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合。
2、细胞融合方法诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
1. 病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。
PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。
观察鸡血切片实训报告范文
一、实验目的1. 学习并掌握动物组织切片的基本原理和操作技术。
2. 观察鸡血细胞的结构特点，了解细胞核、细胞质等基本结构。
3. 培养观察和描述实验现象的能力。
二、实验原理动物组织切片是生物学研究中的重要技术之一，通过将组织切成薄片，可以观察到细胞和细胞器的微观结构。
本实验采用石蜡切片法，将鸡血组织切成薄片，经过染色处理后，在显微镜下观察其结构。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡血、石蜡、二甲苯、酒精、盐酸、苏木精、伊红等。
2. 实验仪器：切片机、显微镜、解剖剪、镊子、刀片、离心管、离心机、烧杯、试管等。
四、实验步骤1. 取材：取新鲜鸡血，用生理盐水制成10%的悬液。
2. 固定：将鸡血悬液加入固定液（10%甲醛溶液）中，室温固定24小时。
3. 脱水：将固定后的鸡血悬液依次浸泡在70%、80%、90%、95%、100%酒精中，各30分钟。
4. 透明：将鸡血悬液浸泡在二甲苯中，透明30分钟。
5. 包埋：将透明后的鸡血悬液滴加石蜡，制成石蜡块。
6. 切片：将石蜡块切成5-10微米的薄片，贴附在载玻片上。
7. 染色：将切片放入染色液中，依次进行苏木精染色、盐酸酒精分化、伊红染色、水洗。
8. 封片：将染色后的切片放入封片液中，封片。
五、实验结果与分析1. 显微镜观察：在显微镜下观察鸡血切片，可见细胞核、细胞质、细胞膜等结构。
2. 细胞核：鸡血细胞核呈圆形或椭圆形，核膜明显，核仁清晰可见。
3. 细胞质：细胞质呈淡蓝色，细胞质内有红细胞和白细胞。
4. 红细胞：红细胞呈双凹圆盘状，无细胞核，内含血红蛋白。
5. 白细胞：白细胞呈圆形或椭圆形，细胞核呈蓝色，细胞质呈红色。
六、讨论1. 鸡血细胞融合实验是一种常用的细胞学技术，可以用于研究细胞核、细胞质等结构的变化。
2. 鸡血细胞核的融合可以观察到细胞核的形态、大小和染色质分布等方面的变化。
3. 鸡血容易获取，且量多，是进行细胞学实验的良好材料。
4. 在鸡血细胞融合实验中，PEG作为一种细胞融合剂，可以促进细胞核的融合。
实验十一 鸡血细胞融合
1
实验目的
掌握细胞融合原理 应用聚乙二醇（PEG）融合细胞的方法 细胞融合率的计算。
2
实验用仪器及材料
实验仪器及材料
一、材料 鸡红细胞 二、器材和仪器：显微镜、离心机、水浴箱、 刻度离心管、试管、载玻璃片、盖玻片 三、试剂 50％PEG(MW4,000)、Hanks液(pH7.4)
3
实验原理
细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理 的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人 工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于 它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融 合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。 细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的 重要手段。 细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)、电脉冲和激光诱导。 目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。 PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极 性基团发生结构重排。
6
数据记录
结果观察 在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜 融合在一起，形成一个异核体细胞。 融合的各个阶段：部分融合、全部融合 要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。 融合率的计算 在高倍镜下随机计数100个细胞(包括融合的与未融合的 细胞)，以融合细胞(含两个或两个以上的细胞核的细胞) 的细胞核数除以总细胞核数(包括融合与未融合的细胞核) 即得出融合率。公式如下：
7Leabharlann 业在显微镜下按顺序绘制所观察到的细胞融 合各阶段，并注明主要特点。 你测定的细胞融合率为多少?
细胞生物学实验报告-鸡红细胞的融合
click
四、实验步骤
（1）鸡血与Alsever溶液按1:4混匀，4℃冰箱中 保存
（2）取1ml细胞悬液，加Alsever溶液稀释20~25 倍
（3）取上稀释悬液1ml，加5ml0.85%生理盐水混 匀
（4）1000rpm离心上述溶液5min，去上清液， 重复操作3次
4混匀4冰箱中保存2取1ml细胞悬液加alsever溶液稀释2025wwwthemegallerycom20211241000rpm离心上述溶液5min去上清液重复操作3次5第三次离心去上清液后加gkn05ml制成10悬液放在37水浴箱预热23min6逐滴025ml的50的peg溶液边加边摇匀37恒温静置15min7取上述液一滴盖上盖玻片镜检wwwthemegallerycom202112五数据记录及处理观察四个视野中的细胞记录鸡血细胞融合情况如下表所视野细胞核总数视野内融合细胞核数2核细胞3核细胞所有细胞核总数所有融合细胞核总数10512wwwthemegallerycom2021122数据处理
2核细胞 3核细胞
视野细胞核 总数
视野内融合 细胞核数
所有细胞核 总数
所有融合细 胞核总数
1 2
30 26
4 3
2 0
0 1
3
4
28
31
2
3
1
0
0
1
105
12
2、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合 的细胞核数为12个，视野内所有细胞核总数为 105个，由公式： 融合率=视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细 胞核数× 100%
（5）第三次离心去上清液后，加GKN 0.5ml 制成10%悬液，放在37℃水浴箱预热2~3min
细胞生物学实验-鸡血细胞的体外融合
鸡血细胞的体外融合
应用领域（微生物）： 对微生物而言，细胞融合技术主要用于改良微生物菌种特性、提高目的
鸡血细胞的体外融合
细胞融合的方法： 聚乙二醇诱导融合：聚乙二醇具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质
的作用，能够有效地促进植物原生质体和动物细胞的融合。在不同种类的动 物细胞混合液中加入聚乙二醇，就会发生细胞凝集作用，在稀释和除去聚乙 二醇的过程中，就会发生细胞融合。聚乙二醇诱导细胞融合的分子机理还不 太清楚。作为化学试剂，聚乙二醇使用起来很方便，诱导细胞融合的频率比 较高，但是它有一定毒性，对有些细胞（如卵细胞等）不适用。
鸡血细胞的体外融合
成纤维细胞
Байду номын сангаас
鼠肿瘤细胞
植物细胞A
植物细胞B
仙台病毒 融合培养基
融合
去掉细胞壁
原生质体A
原生质体B
形成杂种细胞
在选择性培养 基中杂种细胞 增殖形成克隆
异核体 杂种细胞
原生质体融合 再生细胞壁
杂种细胞 细胞分裂
愈伤组织
杂种细胞克隆
杂种植株
鸡血细胞的体外融合
实验器材：
普通光学显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、滤纸、胶头吸管、 离心机、血细胞计数板、水浴锅、烧杯、容量瓶、酒精灯。
鸡血细胞的体外融合
应用领域（动物细胞）：
1. 用于基因定位和绘制人类基因图谱：根据杂种细胞中某一染色体或其片段的存 在与否和细胞的某一性状表达与否相联系，从而可以实现把基因定位于某一染 色体或某一区段上。
鸡血细胞体外融合的影响因素研究
１ ． ２ ． ５ 鸡 血细胞 悬液 的 配制【 ‘ ３ Ｉ
红， ＧＫＮ 液． 血 细胞 计 数 板 ， 刻度离心管 ， 离心机 ， 水 浴锅 ， 盖 玻片 ， 容量 瓶 ， 载玻片， 移 液管 等．
１ ． ２ 实 验 方 法
１ ． ２ ． １ ０ ． ８ ５ Ｎａ Ｃ１ 溶 液 的 配 制
１ ． ２ ． ３ Ｈａ ｎ ｋ ｓ液 的 配 制 。 。 。
原 液 Ａ： 称取 Ｎ ａ Ｃ １ １ ６ ． ０ ｇ 、 Ｋ Ｃ １ ８ ． ０ ｇ 、 Ｍｇ Ｓ Ｏ ４・ ７ Ｈ２ ０ ２ ． ０ ｇ 、 Ｍｇ Ｃ １ ２・６ Ｈ２ Ｏ ２ ． ０ ｇ 、 Ｃ ａ Ｃ １ ２ （ 无水 ）
称取 Ｎ ａ Ｃ １ ８ ． ０ ｇ 、 葡 萄糖 ２ ． ０ ｇ 、 Ｎａ ２ ＨＰ Ｏ ・
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４～０ ５—１ ７ ； 修 回 日期 ： ２ ０ １ ４—０ ６—２ ０
（ ２ ） 向 抗 凝 全 血 的 试 管 中加 入 ４倍 体 积 的
４ ． ０℃ ：
原液 Ｂ ： 葡 萄糖 ２ ０ ． ０ ｇ 、 Ｎａ ＨＰ Ｏ ・１ ２ Ｈ２ Ｏ
０ ． ０ ６ ｇ 、 ＫＨ ２ Ｐ Ｏ １ ． ２ ｇ 、 双 蒸水 ８ ０ ０ ｍＬ， 用 滤 纸 过
学 内容ｌ 】 ］ ． 在实 际 操作 中 ， 该 方 法 易 受 许 多 因 素 的
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 实 验 材 料 及 仪 器
公鸡 全 血， Ｐ Ｅ Ｇ， Ｎａ Ｃ １ ， Ｈａ ｎ ｋ ｓ液 ， ０ ． ５ 酚
（ ３ ）向 ４个小 烧杯 中分 别加 入 预热 至 ５ Ｏ℃ 的
Ｇ ＫＮ 液 混 匀 ， 配制成 １ ０ ， ３ Ｏ ， ５ ０ ， ７ ０ 的
细胞生物学实验手册：细胞融合实验原理及步骤
实验十一细胞融合【实验目的】掌握细胞融合原理、应用PEG融合细胞的方法以及细胞融合率的计算。
【实验用品】一、材料鸡红细胞二、器材和仪器：显微镜、离心机、水浴箱、刻度离心管、试管、载玻璃片、盖玻片三、试剂 50％PEG(MW4,000)、Hanks液(pH7.4)【实验内容】一、原理细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。
由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。
目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。
PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。
二、方法(1)取新鲜鸡血以0.85％生理盐水制成10％的悬液。
(2)称取0.5克PEG(MW=4,000)放入试管内，在酒精灯上融化之，迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀制成50％的PEG溶液。
放入37℃水浴中待用。
(3)取上述10％的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，再加入5ml Hanks液混匀，然后以1,000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。
(4)取上述50％PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液，边加边轻轻摇动混匀。
待PEG全部加入后静置1分钟左右。
此全部过程都要求在37℃水浴内进行。
鸡血细胞的体外融合
四、实验方法与步骤
2. 鸡离心管中， 吸取 鸡血细胞悬液放入离心管中 4mlHanks液混匀，1000rpm离心 液混匀， 离心5min。弃去上清液， 液混匀 离心 。弃去上清液， 用手指轻弹离心管底部，使沉淀的血细胞团块松散。 用手指轻弹离心管底部，使沉淀的血细胞团块松散。
1. 高Ca2+浓度能够提高细胞融合率。有些抗凝剂中含有 浓度能够提高细胞融合率。 结合的化合物，与血液中的Ca 和Ca2+结合的化合物，与血液中的 2+形成难解离的 可溶性络合物，导致血液中的Ca 浓度降低， 可溶性络合物，导致血液中的 2+ 浓度降低，故起抗 凝血作用，但同时会造成细胞的融合率较低。 凝血作用，但同时会造成细胞的融合率较低。 2. 必须严格控制 必须严格控制PEG的作用时间，通常处理细胞 ～ 的作用时间， 的作用时间 通常处理细胞1～ 2min。PEG和二甲基亚砜（DMSO）并用，可以提高 和二甲基亚砜（ 。 和二甲基亚砜 ）并用， 细胞的融合率。 细胞的融合率。 3. 融合细胞继续培养就变成一个杂种细胞，它的染色体 融合细胞继续培养就变成一个杂种细胞， 数不是两核的倍数，因为一些染色体会逐渐消失。 数不是两核的倍数，因为一些染色体会逐渐消失。
1. 鸡血细胞悬液的制备
从家鸡的翼根静脉采血制备抗凝全血。 加入4倍体 从家鸡的翼根静脉采血制备抗凝全血。 加入 倍体 积的0.85 %NaCl溶液，制成红细胞储备液，保存于 溶液， 积的 溶液 制成红细胞储备液， 4℃。取鸡血细胞储备液 ℃ 取鸡血细胞储备液1ml，加入 ，加入4ml 0.85 %NaCl 溶液，混匀后， 离心5min，弃去上清液， 溶液，混匀后，1200rpm离心 离心 ，弃去上清液， 再加入5ml 0.85 %NaCl溶液按上述条件离心一次。最 溶液按上述条件离心一次。 再加入 溶液按上述条件离心一次 弃去上清液，加入10ml的GKN溶液制成鸡血细 后，弃去上清液，加入 的 溶液制成鸡血细 胞悬液。 鸡血细胞悬液， 胞悬液。取0.5ml鸡血细胞悬液，用GKN溶液稀释至 鸡血细胞悬液 溶液稀释至 1X107个/ml，备用。 ，备用。
实验八 鸡红细胞融合
六、讨论
• 血细胞悬液密度与融合率的关系？ • 查阅近期资料，了解如何提高融合率？ • 本实验为什么用鸡血？
• 目前, 诱导细胞融合的方法有三种：病毒(Okada, 1958)、聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG) (Pontecorvo, 1975)和电激(Zimermann, 1980)。
• PEG能改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触 部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结 构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此 间表面张力的作用，引起两个细胞邻接位置的重排 质膜在修复时相互合并在一起, 使两细胞的胞质沟 通, 从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
实验八 鸡红细胞融合实验
一、实 验 目 的 1. 通过PEG介导的鸡血细胞融合实验, 理解
体细胞融合原理 2. 掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技
术，并观察细胞融合过程。
二、实验原理
• 细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization) 是指真核细胞通过介导和培养，两 个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。
1 器材：
三、实验用品
• 离心机，水浴锅，普通光学显微镜；量筒， 滴管，刻度离心管，等。
2 材料 ：新鲜鸡血
五、 实验结果
• 经PEG处理后，显微镜下，可观察到未融合的 单核细胞、融合后的双核细胞和融合后的多核细
胞。绘图说明各个时期。细胞融合后可观察到 哪几种类型的细胞？
• • 细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生
实验六鸡血原生质体融合
实验六鸡血细胞的体外融合2017.11.10 6.1实验结果
A B C
D E F
图1.鸡血细胞体外融合情况
A：开始融合的两个鸡血细胞B：融合中期的两个鸡血细胞
C：完成融合的两个鸡血细胞D：完成融合的三个鸡血细胞
E：多细胞融合后涨破F：未发生融合的鸡血细胞
A B
C D
图2鸡血细胞体外融合
（1）统计图2可得鸡血细胞体外融合率为：融合细胞数/细胞总数=23/223=10.31％
（2）分析：总体来说，细胞融合率较低。
从观察结果来看，存在许多多个细胞融合后涨破的现象而单个未融合的细胞较少，所以我认为应该是由于加入PEG后或是水浴后没有很好地分散细胞团，从而导致多个细胞融合使面积过大从而涨破最终导致细胞融合率较低；也有可能是因为离心速度过高从而破坏了细胞使融合率降低。
6.2回答问题
为了提高融合率，某同学打算选用5种分子量PEG、各设5种浓度、5个融合时间，探索最佳条件组合。
按常规设计，共5*5*5=125组合，因而工作量大。
请你帮助该同学找到一种设计方法，能够科学地减少组合而不影响结果；列出组合表，用一句话解释该设计的原理。
答：设5种相对分子质量分别为：M1，M2，M3，M3，M4，M5
5种浓度分别为：c1，c2，c3，c4，c5
5个时间为t1，t2，t3，t4，t5
步骤一：
步骤二：
2.探究细胞融合最适PEG浓度
表
步骤三：
通过计算细胞融合率可得细胞融合最适时间T，最适浓度C，最适相对分子质量M，则最佳组合为（T，C，M）
设计原理：三个变量是独立的，其对细胞融合的作用不存在相互影响。
实验五 鸡血细胞融合
实验五鸡血细胞融合一、实验目的掌握细胞融合技术二、实验原理PEG是乙二醇的多聚化合物，PEG可与水分子以氢键结合，在高浓度（50％）的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合三、实验用品（1）器材：离心机显微镜水浴锅血球计数板离心管滴管注射器盖玻片载玻片（2）试剂：①Alsever溶液：葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.80g Nacl 0.42g 溶于100Ml,ddH2O中②0.85％生理盐水③GKN溶液：Nacl 8g Kcl 0.4g Na2HPO4·12H2O 3.75g NaH2PO4·2H2O0.78g 葡萄糖2g 酚红0.01g 溶于100ML ddH20中④苏木精和伊红（HE）染液⑤ 50％PEG溶液，，取一定量PEG（WM=4000）水域加热溶解后（50℃）与GKN（50℃）等体积混合⑥鸡血四、方法与步骤注射器吸2ML Alsever 溶液取鸡血2ML→加入离心管→加入6MLAlsever （1:4）→取1 ML鸡血悬浮液加4ML 0.85％Nacl→离心1500r／min 3 min 后弃去上清液反复三次→加GKN 4 ML离心弃去上清液→加GKN（1：9）制成10％悬液→利用血球计数板计数控制在3-4×107个／ML取1 ML于离心管→37℃水浴同时水浴温度恒温（3-4 min）→加入50％PEG液0.5 ML（慢慢沿离心管流下融合），边加边摇匀放入水浴锅中→20-30 min后加GKN至8 ML（沿器壁）静止水浴锅中20 min→1500r／min 3 min 离心，弃上清液加GKN溶液离心→弃上清液加适量混匀取少量于载玻片上进行HE染色（可在水浴锅上适当烤片）,进行观察。
五、作业1、计算融合率融合率=视野内发生融合的细胞核总数／视野内所有细胞核总数2、绘图显示能观察到的细胞融合（要注明是何倍数下的结果）附：HE染色 1、染色划片晾片 2、苏木精（蒸馏水冲洗）15-20 min 3、伊红3 min（蒸馏水冲洗）。
实验五 鸡血细胞融合
实验五鸡血细胞融合一、实验目的掌握细胞融合技术二、实验原理PEG是乙二醇的多聚化合物，PEG可与水分子以氢键结合，在高浓度（50％）的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合三、实验用品（1）器材：离心机显微镜水浴锅血球计数板离心管滴管注射器盖玻片载玻片（2）试剂：①Alsever溶液：葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.80g Nacl 0.42g 溶于100Ml,ddH2O中②0.85％生理盐水③GKN溶液：Nacl 8g Kcl 0.4g Na2HPO4·12H2O 3.75g NaH2PO4·2H2O0.78g 葡萄糖2g 酚红0.01g 溶于100ML ddH20中④苏木精和伊红（HE）染液⑤ 50％PEG溶液，，取一定量PEG（WM=4000）水域加热溶解后（50℃）与GKN（50℃）等体积混合⑥鸡血四、方法与步骤注射器吸2ML Alsever 溶液取鸡血2ML→加入离心管→加入6MLAlsever （1:4）→取1 ML鸡血悬浮液加4ML 0.85％Nacl→离心1500r／min 3 min 后弃去上清液反复三次→加GKN 4 ML离心弃去上清液→加GKN（1：9）制成10％悬液→利用血球计数板计数控制在3-4×107个／ML取1 ML于离心管→37℃水浴同时水浴温度恒温（3-4 min）→加入50％PEG液0.5 ML（慢慢沿离心管流下融合），边加边摇匀放入水浴锅中→20-30 min后加GKN至8 ML（沿器壁）静止水浴锅中20 min→1500r／min 3 min 离心，弃上清液加GKN溶液离心→弃上清液加适量混匀取少量于载玻片上进行HE染色（可在水浴锅上适当烤片）,进行观察。
五、作业1、计算融合率融合率=视野内发生融合的细胞核总数／视野内所有细胞核总数2、绘图显示能观察到的细胞融合（要注明是何倍数下的结果）附：HE染色 1、染色划片晾片 2、苏木精（蒸馏水冲洗）15-20 min 3、伊红3 min（蒸馏水冲洗）。
实验十一鸡血细胞融合PPT课件
细胞形态比较
比较不同处理组之间的细胞形态差异，分析诱导因素对 细胞形态的影响。
诱导因素对细胞融合的影响
诱导因素分析
分析不同诱导因素对细胞融合的作用，如化 学物质、物理因素等。
诱导因素比较
比较不同诱导因素对细胞融合的影响程度， 确定最佳诱导条件。
05 实验总结与展望
实验总结
实验原理
鸡血细胞融合实验涉及细胞生物学、 遗传学和分子生物学等多个领域，通 过实验，我们深入了解了细胞融合的 过程和机制。
疾病治疗
通过细胞融合技术可以制备具有 特定功能的细胞系，用于治疗某 些遗传性疾病、肿瘤和免疫系统
疾病等。
药物研发
利用细胞融合技术可以制备具有特 定功能的细胞系，用于药物筛选和 药效研究，有助于发现新的药物和 治疗方案。
生物材料
通过细胞融合技术可以制备具有特 定功能的生物材料，如人工皮肤、 骨骼和器官等，用于医学和生物工 程领域。
细胞融合的诱导和检测
诱导细胞融合
将分离出的细胞用细胞融合诱导剂处 理，诱导细胞融合。
检测细胞融合
使用荧光染料或免疫学方法检测细胞 融合的情况，观察融合细胞的形态和 数量。
细胞融合的鉴定和观察
鉴定细胞融合
通过检测细胞膜的连续性和荧光染料的 分布情况，鉴定细胞是否融合成功。
VS
观察融合细胞
在显微镜下观察融合细胞的形态、生长情 况及功能表现，记录相关数据。
实验十一鸡血细胞融 合ppt课件
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 •胞融合的过程
鸡血细胞融合是指将两个或多个鸡血细胞通过特定手段融合成一个细胞的过程。 这个过程涉及到细胞膜的改变和细胞内物质的交换，是研究细胞结构和功能的重 要手段。
鸡细胞融合实验报告
一、实验目的1. 了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2. 通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技术。
3. 观察鸡细胞融合过程中的细胞行为与变化。
二、实验材料与用品1. 实验材料：鸡红细胞、Hanks液、PEG（聚乙二醇）。
2. 实验用品：生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、试管、离心管、滴管、酒精灯、载玻片、盖玻片、生理盐水、剪刀、镊子等。
三、实验方法1. 准备鸡红细胞悬液：取新鲜鸡血，用生理盐水稀释至10%的悬液。
2. 制备PEG溶液：称取0.5克PEG（分子量4000）放入试管内，在酒精灯上融化，迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀，制成50%的PEG溶液。
放入37℃水浴中待用。
3. 处理鸡红细胞：取10%的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，加入5ml Hanks液混匀，以1000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。
4. 诱导细胞融合：取上述50%的PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液中，边加边轻轻摇动混匀。
待PEG全部加入后静置1分钟左右。
此过程均在37℃水浴中进行。
5. 终止PEG作用：缓慢滴加9ml Hanks液以终止PEG的作用，在37℃水浴中静置5分钟。
6. 离心弃上清：离心弃去上清，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。
四、实验结果与分析1. 镜检观察：在显微镜下观察，可见鸡红细胞融合后的细胞呈现球形，细胞膜较厚，细胞质较为均匀。
2. 实验结果分析：本实验成功诱导鸡红细胞融合，说明PEG诱导细胞融合技术在鸡细胞融合实验中具有可行性。
鸡红细胞融合后的细胞形态较为规则，细胞膜完整，细胞质均匀，说明细胞融合过程较为顺利。
五、讨论1. 鸡红细胞融合实验的成功，为细胞融合技术的研究提供了实验依据。
本实验采用PEG诱导细胞融合技术，具有操作简便、效果显著等优点。
2. 鸡红细胞融合实验过程中，PEG的浓度、处理时间等因素对细胞融合效果有较大影响。
实验中，PEG浓度为50%，处理时间为1分钟，能够获得较好的融合效果。
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鸡血细胞 的体外融合
一、实验目的
1. 熟悉细胞融合的理论 2. 掌握PEG诱导的细胞融合方法
二、实验原理
• 细胞融合又称细胞杂交，
是指真核细胞通过介导
或培养，两个或多个细
胞合并成一个双核或多核细胞的过程。异核
细胞可进入有丝分裂，使来自两个亲本细胞
的基因组合在一起，形成只含一个细胞核的
杂种细胞。
3. 弃上清液(用吸管吸去)，加1mL0.85％Nacl，混匀后1500r／min离心 5min。
4. 重复上述条件，再离心洗涤1次（10min)。 5. 收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入1mLGKN液使红细胞重新悬浮。 6. 取悬液1ml到1个试管中，加入0.5～0.8ml预热的50％PEG混匀，置于 37℃水浴中温浴2-5min； 7. 加入GKN5ml以终止PEG的作用，在37℃水浴中静止平衡5min. 8. 取血细胞悬液1滴滴于载玻片上，再加入0.2%次甲基蓝溶液1滴,用牙签混 均，3min后，盖上盖玻片，高倍镜下观察细胞融合情况。 9. 进行多个视野的测定，统计平均融合率。
四、方法与步骤
1. 鸡血红细胞悬液的制备：用注射器吸入 1mL Alsver液后从鸡翼下静脉取 鸡血2mL，注 入刻度离心管内，按照3：1(V／V)加入Alsver液混匀，放 入4℃冰箱保存。 2. 取细胞悬液0.2，移入EP管内，加入0.8mL0.85％Nacl混匀，1500r／min 离心5 min。
依据融合过程采用的助融剂不同，细胞融合可
分3种类型：
病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒（HVJ）
化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（PEG）；
电场诱导的细胞融合；
病 毒 诱 导 的 细 胞 融 合 过 程
利 用 细 胞 融 合 培 育 杂 种 植 物
• PEG溶液作为助融剂介导动物细胞融 合的原理为：PEG可改变各类细胞的 膜结构，使两细胞接触点处脂类分子 发生疏散和重组，引起细胞融合。
l 利用PEG介导的细胞融合，其融合效果 受以下因素影响： ① PEG的分子量与浓度：D=4000、50％ ② PEG的处理时间：2－5分钟 ③ 融合时的温度：37－40度
④ PEG的 pH值：8.0-8.2
三、实验仪器、材料和试剂
1.仪器、用具：注射器、 离心机、水浴锅、EP管 2.材料：成年家鸡 3.试剂：Alsver溶液 0.85％Nacl GKN溶液 50％PEG溶液 0.2％次甲基兰
五、实验结果的观察与计算
• 细胞融合的观察，可通过观察细胞内核的数目来
进行鉴别。细胞内只有一个核，定为未融合细胞； 有二至多个核，定为融合细胞。 • 细胞的融合率指在显微镜的视野内，已发生融合 的细胞的核的总数与此视野内所有细胞的细胞核 的融合细胞. 2.计算细胞的融合率： 融合率=融合的细胞核的个数 总的细胞核的个数 3. 你认为PEG介导的细胞融合实验的关键步骤 是什么？说明理由。