第三节免疫检测技术的基本原理
免疫检测原理
免疫检测原理免疫检测是一种常用的生物学实验技术，通过检测抗体与抗原之间的相互作用来确定特定物质的存在。
这种检测方法通常用于诊断疾病、监测生物分子的表达水平以及研究生物分子相互作用等领域。
免疫检测的原理主要基于免疫学中的抗体-抗原相互作用原理，下面将详细介绍免疫检测的原理及其应用。
1. 免疫检测的原理免疫检测的原理基于抗体与抗原之间的特异性相互作用。
抗体是免疫系统产生的一种蛋白质，可以识别并结合特定的抗原分子。
当抗体与抗原结合时，会发生特定的免疫反应，形成抗原-抗体复合物。
免疫检测利用这种抗原-抗体相互作用来检测特定的生物分子。
常见的免疫检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光等。
2. ELISA检测原理ELISA是一种常用的免疫检测方法，其原理基于酶与底物之间的特异性相互作用。
在ELISA实验中，首先将待检测的抗原或抗体吸附在微孔板上，然后加入特异性抗体或抗原，使其与待检测物相结合。
接着加入与特异性抗体结合的酶标记二抗，形成抗原-抗体-酶标记二抗复合物。
最后加入底物，酶与底物发生反应产生可测量的信号，通过测量信号强度来确定待检测物的存在量。
3. Western blot检测原理Western blot是一种用于检测蛋白质的免疫检测方法，其原理基于蛋白质的分子量和特异性抗体的结合。
在Western blot实验中，首先将待检测的蛋白质经电泳分离并转移到膜上，然后将膜与特异性抗体结合，形成蛋白质-抗体复合物。
接着加入与特异性抗体结合的辅助抗体，再加入底物产生可视化的信号，通过检测信号强度来确定待检测蛋白质的存在量。
4. 免疫检测的应用免疫检测在医学诊断、生物学研究和生物工程等领域有着广泛的应用。
在医学诊断中，免疫检测可以用于检测病毒、细菌和肿瘤标志物等，帮助医生诊断疾病。
在生物学研究中，免疫检测可以用于检测蛋白质表达水平、研究蛋白质相互作用等。
在生物工程中，免疫检测可以用于检测重组蛋白质的纯度和活性等。
免疫学检测技术基本原理
荧光免疫检测技术(FI)的基本原理
荧光免疫检测技术与FIA类似，但是不需要标记酶和底物，而是直接标记荧光染料，通过检测荧光信号 随时间变化的曲线来判断样品中免疫分子的存在和浓度。
无需酶标记
荧光免疫检测不需要使用 酶标记荧光素酶，避免了 潜在的酶和底物污染。
高通量检测
荧光免疫检测可以在低浓 度下完成快速检测，适用 于高通量和大规模的样品，可以 标记多种不同的免疫分子， 提高检测的多元性和特异 性。
放射免疫检测技术(RIA)的基本原理
放射免疫检测技术利用放射性标记的免疫分子来检测样品中目标免疫分子的存在和浓度。
1
放射性标记
将免疫分子与放射性元素标记如131I、125I等结合。
2
孵育和分离
将标记的免疫分子与待测样品反应孵育，通过分离获得实验的反应产物。
免疫学检测技术基本原理
免疫学检测技术是一种检测生物体内免疫分子的方法，应用广泛于临床诊断、 生命科学、农业、环境监测和食品安全等领域。
免疫学检测技术的定义和概述
免疫分子的来源
免疫分子包括抗体、补体和细 胞因子等，都是免疫系统特异 性抗原识别和应对的产物。
检测方法的基本原理
通过与特定抗原或抗体结合来 检测样品中目标免疫分子的存 在和浓度。
免疫学检测技术的应用
广泛应用于疾病诊断、药物开 发、生物学研究和疫苗制备等 领域，成为现代生物技术发展 的重要手段。
免疫学检测技术的常见方法
直接法
直接使用标记的抗体或抗原检测样品中的免 疫分子。
间接法
利用未标记的抗体与样品中的免疫分子结合， 再使用标记的二抗或蛋白A/G结合物检测。
竞争法
利用抗原或抗体与样品中的免疫分子竞争结 合，测定中目标免疫分子的含量。
免疫检测技术的基本原理
免疫检测技术的基本原理1.抗原与抗体的特异性结合：免疫检测首先需要获得特定的抗体，该抗体与特定的抗原结合。
抗原可以是病原体的蛋白质或其他特定分子，也可以是细胞表面的标记分子。
抗体与抗原结合时形成免疫复合物，这种结合是高度特异性的，可以通过这种复合物实现对抗原的检测。
2.标记物的选择：在免疫检测中，通常需要选择一种标记物来标记抗体或抗原。
常用的标记物包括放射性同位素、荧光染料、酶和金纳米颗粒等。
标记物的选择需要考虑到标记物的稳定性、灵敏度和安全性等因素。
3.免疫反应的检测方法：免疫检测方法包括放射免疫测定法（RIA）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、荧光免疫测定法和免疫组化等。
不同的检测方法适用于不同的实验需求，选择适当的方法可以提高检测的灵敏度和特异性。
4.检测结果的定量或定性分析：通过检测生成的信号，可以对抗原或抗体进行定量或定性分析。
定量分析通常测定免疫反应的信号强度来判断抗原或抗体的浓度，定性分析则仅判断免疫反应是否发生。
免疫检测技术在临床诊断、疫苗研发、药物研发等领域有着广泛的应用。
例如，在临床上，免疫检测技术可以用于检测病毒感染、细胞因子水平、肿瘤标志物等，为疾病的早期诊断和治疗提供依据。
在疫苗研发中，免疫检测可以评估疫苗的免疫原性和免疫保护效果。
在药物研发中，免疫检测可以用于评估药物对免疫系统的影响。
总而言之，免疫检测技术是一种基于免疫学原理的生物学技术，基于抗原与抗体之间的高度特异性和亲和性进行定量或定性检测。
通过选择合适的抗体和标记物，并使用适当的检测方法，可以实现对抗原或抗体的准确检测和分析，为生物学研究和临床诊断提供有力的工具。
免疫检测技术的分子原理与应用
免疫检测技术的分子原理与应用随着科技的发展，检测技术越来越普及，其中免疫检测技术被广泛应用于医学、生化、环境等领域。
免疫检测技术是一种基于抗原和抗体的特异性相互作用的检测原理，其实现的核心是免疫反应。
本文将分别从分子原理和应用实例两个方面进行探讨。
一、分子原理1、免疫反应基本原理人体内会产生一种生物大分子叫做抗体，具有对抗体原的特异性和亲和力。
当体内感染病原体后，机体的抗原呈现细胞表面，诱导淋巴细胞活化并分泌抗体。
抗体的结构上分为两个部分，即变量区和恒定区，其中变量区对应着不同的抗原特异性。
在免疫反应中，抗原与抗体特异性结合形成抗原-抗体复合物，这种结合不同于其他非特异性相互作用，具有高度的特异性和亲和力。
免疫检测技术基于抗体和抗原特异性相互作用，检测所需要的物质含有被检测物质特异性表位，且成分足够纯净，以保证反应特异性和稳定性。
2、免疫检测技术分子原理免疫检测技术的原理在于利用标记的抗原和抗体进行免疫反应，被检测物质的存在与否通过检测标记上的物质来体现。
分子标记可选择放射性同位素和酶等，最常见的是荧光染料、酶标记和金标记等。
其中，荧光染料最被广泛应用。
这种方法简便易行，灵敏度也比较高，同时多个参数可以同时得到反应结果。
另外，在实际应用中，原位杂交（FISH）和免疫组织化学技术（IHC）是比较常用的技术。
其中，FISH是用标定了特定DNA序列基因探针进行特异性探测；而IHC是采用抗体作为检测物质，利用抗体对特定蛋白质结构的特异性识别，进行蛋白质的异常表达和定位研究。
二、应用实例1、医学应用在医学诊断中，免疫检测技术被广泛应用。
比如，甲状腺功能异常是一种常见的内分泌疾病，而免疫测定可以测量血液中的三种特定血清素水平，从而诊断并区分疾病。
此外，免疫测定也被广泛应用于检测其他某些疾病的特定抗体，如AIDS病毒抗体、乙肝病毒抗体和丙肝抗体等。
2、生化应用在生化应用中，免疫检测技术也被广泛应用。
比如，目前最先进的肿瘤标记物检测技术利用了蛋白质和多肽检测。
免疫学检验的基本原理与方法
免疫学检验的基本原理与方法免疫学检验是一种常见的实验室技术，在医学、生物学等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫学检验的基本原理和常用的方法，并探讨其在疾病诊断、病毒检测和药物研发中的应用。
一、免疫学检验的基本原理免疫学检验基于机体免疫系统的特性，利用抗原与抗体之间的特异性结合反应来检测和定量分析抗原或抗体的存在。
其基本原理如下：1. 特异性识别：抗体可以识别并结合与之对应的抗原，形成特异性的抗原-抗体复合物。
2. 高度敏感性：免疫学检验可以检测极低浓度的抗原或抗体，提供高度敏感的结果。
3. 双重验证：通过采用一对互补的抗原和抗体，可以用于验证检测结果的准确性。
二、常见的免疫学检验方法在免疫学检验中，常用的方法包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹（Western Blotting）、免疫荧光等。
下面将对这些方法进行具体介绍：1. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种常见且广泛应用的免疫学检验技术。
它利用酶标记的抗体与待检测样品中的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标记物复合物。
通过添加底物，酶标记物能够催化底物的反应，产生可测量的信号。
ELISA可用于定量或半定量测定目标物的浓度，并可应用于多种领域，如感染性疾病的诊断、蛋白质的定量等。
2. 免疫印迹（Western Blotting）免疫印迹是一种常用于检测特定蛋白质的免疫学技术。
该方法通过将复杂的蛋白质混合物经SDS-PAGE电泳分离后，将之转移到固体载体上。
然后，用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过酶标记的二抗与一抗结合，产生可见的信号。
免疫印迹可用于诊断疾病、检测蛋白质相对分子质量和检测表达水平等。
3. 免疫荧光免疫荧光是一种利用抗体对荧光染料标记的抗原进行特异性识别的免疫学技术。
该技术通过与荧光探针结合并激发荧光信号，来检测细胞或组织中特定抗原的定位和表达。
免疫荧光广泛应用于免疫组织化学、细胞信号转导、病毒感染等领域，可用于研究细胞和组织的结构、功能以及疾病的发生机制。
免疫学检测技术的基本原理及其应用
免疫学检测技术的基本原理及其应用免疫学检测技术是一种通过测定机体中的抗体或抗原来进行诊断、监测或研究的检测方法。
其基本原理是利用人体免疫系统的特性，通过抗原与抗体的特异性结合来检测和定量分析抗原或抗体的存在与水平。
下面将详细介绍免疫学检测技术的基本原理及其主要应用。
一、免疫学检测技术的基本原理1.直接免疫检测方法：直接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体标记物直接反应，利用标记物发出的信号来检测目标物质。
常用的标记物有放射性同位素、荧光物质、酶和金等。
2.间接免疫检测方法：间接免疫检测方法是通过将待检测样品与已知特异性抗体反应后，再经过第二抗体与标记物结合的方式来检测目标物质。
这种方法主要应用于寻找含有多重抗原决定簇的抗原。
二、免疫学检测技术的主要应用1.临床应用：免疫学检测技术在临床上应用广泛，例如用于检测病毒、细菌、寄生虫等病原体的感染，常见的如乙肝、艾滋病、流感等病毒的检测。
此外，免疫学检测技术还可用于检测肿瘤标志物、自身免疫性疾病、免疫功能检测等。
2.生物制药与生物工程：免疫学检测技术在生物制药与生物工程中有着重要应用。
例如，通过免疫学检测技术来检测和定量分析生物制药产品中的杂质和残留物，确保产品质量和安全性。
另外，免疫学检测技术还可用于基因工程草甘膦抗性作物的筛选和鉴定。
3.食品安全监测：免疫学检测技术在食品安全监测中起到重要作用。
通过免疫学检测技术可以检测食品中的有害物质或者过敏原，如重金属、农药、酒精、过敏原等，确保食品的质量和安全。
4.动物疫病监测：免疫学检测技术在兽医领域有着广泛应用。
例如，可以通过免疫学检测技术来检测动物体内的病原体感染，如猪瘟、狂犬病、禽流感等，及时采取措施进行防治。
5.环境监测：免疫学检测技术还可用于环境污染物的监测。
例如，通过检测水体、大气中的有害物质，判断环境中的污染程度和对人体的危害。
总结起来，免疫学检测技术基于抗原与抗体的特异性结合反应，可以应用于临床诊断、药物开发、食品安全监测、动物疫病监测和环境监测等多个领域。
免疫学检测技术的基本原理及其应用PPT
免疫反应链
了解单克隆和多克 隆抗体在免疫反应 中的作用。
信号放大
揭示检测技术如何 利用信号放大机制 来增强检测敏感性。
检测方法
介绍常见的免疫学 检测方法，如 ELISA、免疫印迹 和流式细胞术。
免疫学检测技术的主要应用领域
探索免疫学检测技术在医学领域中的主要应用领域，包括诊断疾病、疫苗开发和药物监测。
1 定义
免疫学检测技术是一组用于检测和测量免疫反应的实验细胞生物学的深入研究。
免疫学检测技术的基本原理
深入了解免疫学检测技术的基本原理和机制，包括抗原-抗体相互作用、免疫反应链、信号放大和检测 方法。
抗原-抗体相 互作用
抗原与特定抗体之 间的相互作用是这 些技术的基础。
诊断疾病
了解免疫学检测技术在早期疾病诊断和监测中的重要作用。
疫苗开发
探索免疫学检测技术在疫苗研发和效力评估中的应用。
药物监测
了解如何利用这些技术来监测药物治疗的有效性和副作用。
免疫学检测技术的具体方法和步骤
深入了解免疫学检测技术的具体方法和步骤，包括样本收集、试剂准备、标记和检测分析。
1
样本收集
收集样本是免疫学检测的第一步，通常涉及血液、尿液或组织样本。
免疫学检测技术在医学领域的应用案例
探索免疫学检测技术在医学领域中的实际应用案例，包括癌症诊断、自身免疫疾病和传染病。
癌症诊断
了解如何利用免疫学检测技术 来识别和分类不同类型的癌症 细胞。
自身免疫疾病
探索免疫学检测在自身免疫疾 病诊断和治疗中的关键作用。
传染病
了解免疫学检测技术在传染病 预防、控制和治疗中的应用。
免疫学检测技术的基本原 理及其应用
本演示文稿将介绍免疫学检测技术的基本原理及其在医学领域中的应用。了 解这些关键概念和案例将有助于您更好地理解和应用免疫学检测技术。
免疫检测技术的基本原理
免疫检测技术的基本原理免疫检测技术是一种通过检测人体的免疫反应来诊断疾病或监测健康状况的方法。
它基于人体对外来物质（如细菌、病毒、抗原）产生免疫应答的原理，并利用特定的抗体-抗原反应来实现检测。
免疫检测技术包括许多不同的方法，如免疫层析、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光、流式细胞术和免疫组织化学等。
免疫检测技术的基本原理就是利用抗体和抗原之间的特异性反应来进行检测。
抗体是由机体产生的一类蛋白质分子，具有特异性结合抗原的能力。
抗原则是能够诱导机体产生抗体的分子或物质。
在免疫检测试剂中，会添加含有特异性抗体的试剂。
当待测样品中存在与抗体结合的抗原时，抗体-抗原结合反应发生。
根据不同的检测方法，这种结合反应可以被可视化、测量或定量。
以ELISA为例，ELISA是一种常用的免疫检测技术。
它的基本原理是在试管或微孔板上固定一个特定的抗原，然后加入待测样品。
如果样品中含有与抗原结合的抗体，那么抗原-抗体复合物就会形成。
然后，通过加入与抗体结合的酶标记二抗，利用酶标记物的催化作用来检测复合物的形成。
最后，通过加入底物，可以测量酶标记物产生的信号（如颜色变化），从而确定待测样品中的抗体水平。
除了ELISA，还有其他的免疫检测方法。
例如，免疫层析是一种简单快速的检测方法，适用于现场和急诊检测。
在免疫层析中，抗原和荧光染料被固定在薄膜上。
待测样品通过薄膜时，如果样品中存在与抗体结合的抗原，那么抗原-抗体复合物就会形成并被固定在薄膜上。
通过观察薄膜的颜色变化或读取设备的信号，可以判断样品中是否存在目标物质。
在免疫检测技术中，关键的一步是制备高度特异性的抗体。
这可以通过动物免疫、单克隆抗体技术或体外进化技术来实现。
动物免疫是通过将抗原注入动物体内，刺激动物产生抗体。
然后，从动物的体液中提取抗体。
单克隆抗体技术则是通过体外培养和克隆抗体产生的B细胞，得到具有单一特异性的抗体。
体外进化技术是一种通过体外选择和增强抗体亚类的技术，能够产生具有更好性能的抗体。
第三节免疫检测技术的基本原理
第三节免疫检测技术的基本原理免疫检测技术是一种利用机体免疫系统对抗入侵病原体的能力进行疾病诊断和评估的方法。
该技术主要基于抗原与抗体之间的高度特异性结合反应，通过检测抗体或抗原的存在来确定其中一种疾病是否存在或预测其中一种疾病的发展趋势。
免疫检测技术的基本原理主要包括两大类：免疫层析和免疫荧光。
免疫层析（immunochromatography）是一种利用抗原与抗体反应在试纸上形成可见免疫复合物的技术。
它使用特定的膜或纸质载体，上面含有抗体、抗原或标记物，形成不同测试区域。
当待检样品进入试纸后，如存在目标抗原，则会与试纸上的抗体发生特异性结合。
在试纸上形成特定结合的复合物，被标记物所发出的染色信号或带测结果的线条可见，从而判断是否存在该抗原。
常见的免疫层析方法包括单克隆抗体纸胶片法和双特异性抗体纸胶片法，广泛应用于尿液、血液、唾液等体液的检测。
免疫荧光（immunofluorescence）是一种利用特定的荧光标记物对抗原或抗体进行检测的技术。
它通过将特定标记的抗体与待检样品中的抗原或抗体反应，产生与待检物质特异性结合的荧光信号。
该荧光信号可以使用荧光显微镜或相关设备进行观察和分析。
免疫荧光技术具有高度敏感性和高度特异性的优势，特别适用于寻找病原体感染或自身免疫疾病的抗核抗体、抗DNA抗体等。
除了以上两种基本原理外，免疫检测技术还有其他几种常见的方法。
酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种利用酶作为标记物来检测抗原或抗体的技术。
该方法通过将酶标记的抗体与待检样品中的抗原或抗体进行特异性结合，再加入相关底物产生反应，并通过酶底物产生的染色或荧光信号的强度或颜色来判断待测物的含量或存在与否。
ELISA广泛应用于疾病的诊断、药物检测和食品安全等领域。
免疫印迹（immunoblotting）是一种将待检样品中的蛋白质分离、转移到膜上，然后使用特异性抗体与膜上的蛋白质进行反应的技术。
免疫学检测技术的基本原理
免疫学检测的应用领域
医学诊断
免疫学检测可以用于早期疾病诊断、感染病毒和细 菌的检测，以及血型鉴定等。
生物学研究
在生物学研究中，免疫学检测可用于研究蛋白质的 表达、细胞信号传导和免疫系统功能。
免疫学检测的优势和局ຫໍສະໝຸດ 性高灵敏度与特异性免疫学检测具有高度敏感性和特异性，可准确识别和定量多种分子。
操作简便
免疫学检测方法简单易行，不需要复杂的设备和操作步骤。
免疫学检测技术的基本原 理
免疫学检测技术是通过检测抗体和抗原之间的相互作用，来识别和量化特定 分子的方法。
常见的免疫学检测方法
酶联免疫吸附试验（ELISA）
常用于检测抗体和特定抗原之间的结合，可应 用于医学诊断和生物学研究。
免疫印迹（Western blot）
通过将蛋白质分离并与特异性抗体结合，检测 目标蛋白的存在和浓度。
免疫荧光染色
利用荧光标记的抗体来定位和检测细胞内的特 定抗原和抗体。
免疫组织化学
将抗体标记物应用于组织切片，用于研究细胞 和组织中特定抗原的表达。
免疫学检测的工作原理
1 抗原-抗体反应
免疫学检测基于抗原与抗体之间的特异性结合，形成可观察的信号。
2 特异性识别与结合
通过选择性地使用特定抗体来识别和结合目标分子，达到特异性检测的目的。
第三节 免疫检测技术的基本原理
酶联免疫吸附试验
原理：利用酶与底物反应产生颜色 变化，检测抗原或抗体
应用：广泛应用于临床诊断、科研 等领域
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特点：灵敏度高，特异性强，操作 简便
局限性：需要专业设备，操作复杂， 成本较高
荧光免疫技术
原理：利用荧光标记抗体与抗原结合，通过荧光信号检测抗原 优点：灵敏度高，特异性强，检测速度快 应用：广泛应用于临床诊断、科研等领域 局限性：需要特殊设备，成本较高
信号放大系统
原理：通过抗体与抗原结合，产生信号 信号放大：通过酶催化反应，放大信号 检测：通过检测信号强度，判断抗原是否存在 应用：广泛应用于医学、生物技术等领域
检测信号的转换和读取
免疫反应：抗原 与抗体结合，产 生特异性结合物
信号转换：通过 酶联免疫吸附试 验（ELIS）、化 学发光免疫分析 （CLI）等方法， 将免疫反应信号 转换为可检测的
免疫检测技术的基 本原理
XX,
汇报人：XX
ห้องสมุดไป่ตู้
目录
CONTENTS
01 添加目录标题 02 免疫检测技术的概述 03 免疫检测技术的分类 04 免疫检测技术的原理 05 免疫检测技术的优缺点
06 免疫检测技术的发展趋势和未来展望
单击添加章节标题
第一章
免疫检测技术的概述
第二章
免疫检测技术的定义
免疫检测技术是一种利用抗原-抗体反应来检测生物样品中特定物质的方法。 抗原-抗体反应是指抗原与抗体结合后产生的特异性反应。 免疫检测技术可以应用于医学、生物学、食品科学等领域。 免疫检测技术的主要类型包括酶联免疫吸附试验（ELIS）、免疫荧光技术、免疫印迹技术等。
第三节免疫检测技术的基本原理PPT文档87页
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
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第三节免疫检测技术的基本原理
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
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（二）间接法 间接法是检 测抗体最常用的方 法，其原理为利用 酶标记的抗抗体以 检测已与固相结合 的受检抗体，故称 为间接法。
酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)
包被固相载体: 用已知抗原包被 固相载体
加待检标本: 使相应抗体与固相抗原结合 洗涤，除去无关的物质
加底物 显色
加酶标抗抗体: 与固相载体上抗原抗体 复合物结合；洗涤，除去 未结合的酶标抗抗体
河豚毒素
苯并芘
食源性病原菌检测试剂盒
大肠杆菌检测 沙门氏菌检测 单增李斯特菌 金黄色葡萄球菌
食品其他检测： 转基因成份的检测：如转基因玉米中中的cry9e蛋白 转基因大豆中的CP4 EPSPS蛋白质．
肉制品的掺假检测： 以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋A 抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉检测14种 畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和马肉等，在 掺假率为1%时即可检出
ELISA的种类和变化
（一）双抗体夹心法 （二）间接法 （三）竞争法 （四）双位点一步法 （五）捕获法测IgM抗体 （六）应用亲和素和生物素的ELISA
（一）双抗体夹心法
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原
获得待分析物的未标定抗体
将特异性抗体与固相 载体连接形成固相抗体 洗涤除去未结合的 抗体及杂质
• 3、 谌志强, 段惠莉, 王新为, 等. 大肠埃希 菌O157:H7的胶体金免疫渗滤法检测[J]. 中国公共卫生, 2005, 21(4): 705-706. • 4、 谢昭聪, 宋志强, 吕敬章, 等. 应用胶体 金免疫层析法检测水产品中霍乱弧菌的研 究[J]. 中国国境卫生检疫杂志, 2005, 28(3): 163-165.
斑点金免疫层析试验（一）
兔抗鼠IgG
手持端
鼠抗HCG单抗 金标鼠抗HCG单抗 尿液浸湿标志线
斑点金免疫层析试验（二）
质控线 测试线
尿样
阳性
弱阳性
阴性
无效
ICA——双抗体夹心法测抗原
ICA--- 竞争法测抗原
免疫层析试验竞争法测小分子抗原原理图
ICA 竟争法结果观察
阴性 阳性
无效
ICA——间接法测抗体
ICA 结果观察
阳性 阴性
无效
IFA与ICA的比较
IFA 试剂形式 试剂保存 操作步骤 观察时间 阳性反应颜色 浓度 渗滤装置及附 加试剂 4~8℃ 6个月 3~5 3 min 操作结束颜色 不变 ICA 试剂条 室温一年 1 3~20 min 颜色逐渐加深
IFA 穿流（FLOW THROUGH）
抗体-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶
抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶
抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗体
酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶
戊二醛交联法（二步法）
COH-（CH2）3-COH + NH2-酶
抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶
免疫标记技术
• 酶免疫标记技术 • 荧光免疫分析技术 • 放射免疫分析技术 • 免疫金标记技术
酶联免疫吸附试验
• 1971年瑞典学者Engvail和Perlmann, 荷兰学者Van Weerman和Schuurs分 别报道将免疫技术发展为检测体液中微量 物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸 附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA)
对照管由于只加酶标抗原，与固 相抗体充分结合，故分解底物显色深； 测定管的显色程度则随待测抗原和酶 标抗原与固相抗体竞争结合的结果而 异。如待测抗原量多，竞争性地抑制 酶标抗原与固相抗体结合，使固相上 结合的酶标抗原量减少。因此，加入 底物后显色反应较弱。
ELISA在饲料安全检测中的应用
饲料中盐酸克伦特罗的测定 饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素， 简曲霉毒素 ） 饲料中有害微生物的快速筛检 （如沙门氏 菌 ）
玻片直接凝集试验
试管法半定量试验
2.间接凝集法
先将可溶性抗原或抗体吸附在颗粒载体上 ( 如 RBC, 乳胶颗粒 ) ，再与相应抗体或抗 原反应，出现凝集为阳性结果。 临床常用的有间接血凝试验、乳胶凝集试 验等。
待检样品
抗原吸附血球 或乳胶颗粒 反应凝集物
+
→
3.间接凝集抑制试验
先将待检抗原与已知的抗体反应，再加入用已知 抗原吸附的载体颗粒，不出现凝集为阳性结果。 例：乳胶凝集抑制试验检测HCG (妊娠诊断)
一、胶体金制备
胶体金（colloidal gold）的制备一般采用 还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗 坏血酸、白磷、硼氢化钠等。向一定浓度的金 溶液内加入一定量的还原剂使金离子还原成金 原子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶（gold
solution）。
胶体金的制备及特性
胶体金粒径 （nm) 16 1%柠檬酸钠加入量 （ml)* 2.00 胶体金特性 呈色 橙色 lmax(nm) 518
显色 反应
橘红色 黄色 棕色 兰色 蓝绿色
测定波长
492 460 449 425 642 400 500 405 420 360,450 420
碱性磷酸酯酶 葡萄糖氧化酶 β-Ｄ－半乳糖 苷酶
黄色 红色 黄色 深蓝色 荧光 黄色
• 2、标记方法 • 戊二醛交联法 • 过碘酸盐氧化法
戊二醛交联法 (一步法）
抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶
过碘酸盐氧化法
O
NaIO4
O O
O O
O
酶-五炭糖环
+ NH2抗体
NaBH4
O
O OH N 抗体
O
O N 抗体
H2O
O
N OH
O OH 抗体
O
Schiff碱
标记免疫物的分离与鉴定
1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度
第三节免疫检测技术的基本原理
• 抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原 检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未 知的抗原 . • 将免疫反应与现代测试技术结合 • 超微量的检测
免疫学检测技术的优点
• 高度的灵敏性 • 高度的特异性
免疫分析技术的应用
• 常用的诊断技术 血凝试验 酶联免疫吸附试验 胶体金免疫技术 放射免疫分析技术
根据颜色反应的程度进行 该抗原的定性或定量测定
（三）竞争法
此法可用于抗原和半抗原的定 量测定，也可用于测定抗体 。
用已知特异性 抗体包被 固相载体
测定管加待测抗原和 一定量的酶标抗原使二者与 固相抗体竞争结合
对照管只加一定量酶标抗原 与固相抗体直接结合
加底物显色
分别洗涤 除去未结合 的成分
分别测定两管的吸光度值， 根据对照管与测定管吸光度值之比， 计算标本中待测抗原含量
24.5
41 71.5
1.50
1.00 0.70
橙红色
红色 紫色
522
525 535
*还原100 ml0.01%HAuCl4 所需量
胶 体 金（Colloidal Gold） 15~60 nm
优 质 劣 质
胶体金结合物（Conjugate）
一、免疫渗滤测定(IFA)
斑点渗漏法
•
其原理与层析法相类同，中心圆点为一株 单抗，边上小点为抗鼠二抗。先将待测样 品滴在其中，若有抗原即被结合在中心圆 点，洗去未结合抗原，再滴加金标另一株 单抗，若有抗原则形成金-Ab-Ag•薄膜的红 色斑点，而边上是金-Ab-Ab2•薄膜的质控 点，是为金标二步法。
已知抗体 待检标本
＋
＋ 抗原吸附 乳胶颗粒
步骤 1 ：将已知抗体 与待检标本混匀
步骤2：加入抗原吸 附的乳胶颗断：
凝集反应
2.沉淀反应
概念：可溶性抗原与相应抗体结合后出 现沉淀物称沉淀反应。
类型： ★单向免疫扩散 ★双向免疫扩散 ★对流免疫电泳 ★免疫比浊法
免疫金标记技术
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度 的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测。这一反应也可以通 过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色 （immunogold silver staining，IGSS）。
ELISA用于农药残留的检测 甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析
农药的检测：
主要有除草剂与杀虫剂两大类 例如杀暝松（ FN ）、 甲氟磷酸异已酶（ SOMAN ）、 草不绿（ Alachor ）、 西维因（ Carbaryl ）、 多菌灵及克菌丹（ Captan ）等。 植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素
ICA 横流（LATERAL FLOW）
• 1、 罗立新, 缪珑, 潘力, 等. 快速检测产单核 李斯特菌免疫胶体金层析法的研究[J]. 中国卫 生检验杂志, 2006, 16(2): 154-156. • 2、 赖卫华, 熊勇华, 陈高明, 等. 应用胶体金 试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究[J]. 食品 科学, 2005, 26(5): 204-207.
酶及其底物 酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原 在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败 的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的 免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物 放大作用，但不同的酶选用不同的底物 ， 将得到不同的颜色反应.
酶
辣根过氧化物酶
底 物
邻苯二胺 四甲替联苯胺 氨基水杨酸 邻联苯甲胺 2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻 唑啉磺酸-6)铵盐 4-硝基酚磷酸盐(PNP) 萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐 ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰 甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG) 硝基酚半乳糖苷(ONPG)