育种学实验报告

实验一、牧草田间性状鉴定和亲本选配

一：目的和意义

学习牧草和草坪草田间农艺性状和生产性能测定的方法。能够设计育种计划，选择适宜的亲本，进行亲本选配。要求学生提前复习已做过的实验内容，了解本实验的操作程序及注意事项。

二：材料和用具

1.材料

不同种属、不同生活年限的豆科、禾本科或其他科人工草地饲料作物地。2.用具

电子天平、斤秤、镰刀、菜刀、线绳、塑料袋、剪刀、钢卷尺。

三：方法

豆科、禾本科、其他科牧草的田间农艺性状测定

（一）产草量的测定：刈割法

在牧草地取样4处，每处0.25~1m2，用镰刀或剪刀齐地面（生物原产量）或距地面3~4cm（经济产量割下）或剪下牧草并立即称重得鲜草产量，从鲜草中称取1000g装入布袋阴干，至重量不变时称重即为风干重。再从风干或鲜草中称取500g，放入105℃烘箱内经10min后降温到65℃，经24h，烘至恒重，即为干物质重（绝干重）。因为测定的目的不同，时间规定也不一样，按时间特征来归纳，可以有3种产量的测定：

（1）平均产量是在人工草地利用的成熟时期测定第一次产量，当牧草生长到可以再次利用的高度时，再测定其再生草产量。再生草可以测1次、2次乃至多次。各次测定的产量相加，就是全年的产量，再除以次数，即为平均产量。

（2）实际产量也叫利用前产量，即比测定平均产量早一些或晚一些所测定的产量叫实际产量。第一次测定后每次刈割或放牧时重复测定产量，各次测定的产量之和，就是全年实际产量。

（3）动态产量是在不同时期测定的一组产量。在进行这项工作时，要在一定的地段，设立有围栏保护的定位样地，在样地上根据设计并预先布置样方，进行定期的产量测定。动态产量的测定可按牧草的生育期，也可按一定的时间间隔，如10d、15d、1个月或1个季度测定1次。

生育期是指刈割时的生长发育阶段。

（二）种子产量测定

（1）选定样方6~10个，总面积为6~10m2

（2）调查每样点有效株数，平均之，再求每亩株数。公式为：

每亩株数=取样点平均株数（株/m2）

（3）调查每株平均粒数（代表性植株20株平均）。

（4）通过千粒重的测定，求出每千克粒数。公式为：

每千克粒数=1000（g）/千粒重（g）×1000

（5）根据下列公式求出每公顷草地种子产量：

种子产量（㎏/h㎡）=每公顷株数×每株平均粒数/每千克粒数

或者将样方内植株全部刈割后脱粒、称重再折算成公顷产量

（四）植株高度和生长速度的测定

1.植株高度

牧草的株高与产草量成正比。牧草的株高与牧草的利用方式（刈割、放牧或兼用）、草层高度与各草种在混播草地中的比例有密切关系。植株高度分为：（1）草层高度：大部分植株所在的高度。

（2）绝对高度：植株和地面垂直时的高度。即把植株拉直后植株的长度。（3）自然高度：即牧草在自然生长状态下的高度，测定时从植株生长的最高部位到垂直地面的高度。

植株高度从地面量至（开花前）或花序顶部，禾本科牧草的芒和豆科牧草的卷须不算在内。株高的测定采用定株或随机取样法，取代表性的植株40株平均。测定时间可根据不同的测定目的在各物候期进行或每10d测定1次。

2.牧草生长速度

指单位时间内牧草增长的高度。其测定多结合株高测定进行，采用定株法，每10d测定1次，然后计算出每天增长的高度。随机取样时如2次测定时间过短，也可能出现负增长。

（五）分蘖（分枝）数的测定

牧草从分蘖节或根颈上长出侧枝的现象称为分蘖（分枝）。分蘖（分枝）数的多少不仅与播种密度、混播比例有关，且直接关系到产量的高低。分蘖（分枝）数的测定，根据不同目的可在不同物候期进行，一种方法是在测定过产草量的样方内区代表性植株10株，连根拔出（拔5~10cm深即可），数每株分蘖（分枝）数，进行平均；二是取代表性样段3行，每行内定50~100cm长，然后数每行样段内每一单株的分蘖（分枝）数，平均之。

（六）亲本选择

用作母本的植株应具有该品种典型性状，生长健壮，无病虫害。

实验二、CTAB提取DNA

一、实验原理

TAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来.

二、实验器材

1、121.1g Tris溶于800ml无菌水中，加浓HCL调pH到8.0，定容至

1L，高压灭菌。

2、186.1g EDTA-Na·2H2O溶于800ml无菌水中，需用磁力搅拌器剧

烈搅动，用NaOH调pH值到8.0（约20g），定容至1L，高压灭菌。

3、204.75g NaCL溶于1L无菌水中，高压灭菌。

4、10% CTAB溶液

10gCTAB溶于80ml无菌水中，定容至100mL，高压灭菌。

5、氯仿-异戊醇（24:1体积比）

7、RNAaseA

8、异丙醇

9、无水乙醇

10、3mol/L醋酸钠

11、1×TE缓冲液

实验仪器：

液氮罐、1.5ml离心管、1.5ml离心管架、恒温水浴摇床、枪及枪头（1ml 和200ul）、离心机（转速可调至4000rpm和10000rpm）、剪刀

三、实验步骤

1、65℃预热CTAB 45分钟，在1.5毫升离心管中加入600微升CTAB和

20微升乙醇，放入45℃水中40-60分钟，期间每隔几分钟晃动离心管，以便叶片与CTAB 充分反应。

2、在离心管中加入630微升氯仿异戊醇，晃动10分钟，摇匀，否则DNA

量明显减少，可以在振荡器上混匀。

3、在25℃、10000转每分钟离心10分钟。

4、用剪过的枪头抽取上清液450微升到另一只灭菌后的离心管中，加入提

前冷却的异丙醇150微升，轻摇几下，看见白色絮状物最好，刚入-20℃冰箱中冷冻1小时。

5、取出离心管，在4℃、10000转每分钟条件下离心10分钟。

6、倒掉液体后加入500微升TE溶解，20分钟后加入500微升氯仿异戊

醇，轻摇10分钟。

7、4℃、10000转每分钟条件下离心10分钟。

8、取上清液400微升到新的离心管中，加入1000微升污水乙醇和40微升

醋酸钠，轻摇几下，可见白色絮状物，放入-20℃条件下冷冻几小时或过