LDH同工酶
儿童血清LDH及同工酶分析
Ｐ ａｔ ａ ｌ ｉ ｌ ｄｃ ｒｃｉ ｌ ｉ ｃ ｉ ｎ ！ ｃ Ｃ ｎ ａ Ｍｅ ｉ
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・
７９ ・
儿童血清 Ｌ ＤＨ 及 同工 酶 分 析
朱 小 明
（ 景德镇 市妇 幼保健 院儿科 ， 西 景 德镇 ３ ３ ０ ） 江 ３ ０ ０ 摘 要 ：目的 分析和研究儿童乳酸脱氢酶（ Ｄ 的临床检测意义， Ｌ Ｈ） 并设置出景德镇市妇幼保健院的正常参考范
３ ． ， ＤＨ ７９ ～ ２ ． ， ＤＨ４ ． ～ １ ． ， Ｄ ． ～ ７ １ ； 人 ： Ｄ ７ ． ～ ２４ ０Ｕ Ｉ， Ｄ ７ ４ Ｌ １ ． ２３ Ｌ ８ ６ １０ Ｌ Ｈ５ ７ ４ ． 成 Ｌ Ｈ １０ ０ ． ／ Ｌ Ｈｌ
２． ～ ３． ，Ｄ ８２ ～３ ． ％ ， ＤＨ３１． ～ ２ ． ， Ｄ ． ～ １． ， Ｄ ． ～ １． 。 儿 ０３ ２ １ Ｌ Ｈ２ ． ２ ８８ Ｌ ３７ １ ７ Ｌ Ｈ４８ ７ ６ ７ Ｌ Ｈ５ ４ ７ ６０
２ 结 果
儿 童 参 考 范 围 ： ＤＨ ９ ．１～ ２ ４ ５ Ｕ／ Ｌ １６ ５ ． Ｌ，
Ｌ ＤＨ１ ６ ２ ～ ３ ． ％ ， ＤＨ２３ ． ～ ３ ． ， ． ２ ２８ Ｌ ４ ０ ７４
１ 对 象 与 方 法
１ １ 对 象 ．
Ｌ ＤＨ３１ ． Ｖ ～ ２ ． ％ ， ＤＨ４６ ％ ～ １ ． ％ ， ７ ９ｏ ２３ Ｌ ．８ １０
２０ ０ ５年 １ Ｏ月 一２ ０ ０ ８年 ２月 ， 市第 一 幼儿 园 、 本
童与成人 的 Ｌ ＤＨ 活 力 有 显 著 性 差 异 （ ＜ Ｏ０ ） Ｐ ． １ 。儿 童 与 成 人 的 Ｌ ＤＨ 同 工 酶 的 分 布 顺 序 一 致 ， ： ＤＨ２ Ｌ Ｈ 即 Ｌ ＞ Ｄ
乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因
乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）同工酶高在临床检测中是常见的现象，常见于多种疾病和健康问题。
本文将从多个角度探讨乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因，分析可能的病因，以及对策和建议。
一、乳酸脱氢酶（LDH）同工酶高的原因1. 炎症反应乳酸脱氢酶属于细胞内酶，其同工酶高常见于组织损伤和炎症反应。
细胞受损或炎症导致细胞膜通透性增加，LDH释放入血液中，引起其同工酶浓度升高。
2. 心肌梗死急性心肌梗死时，心肌组织受损，LDH从心肌细胞释放入血液中，导致其同工酶浓度升高。
3. 肝脏疾病肝脏疾病如黄疸、肝炎、肝硬化等也会导致LDH同工酶高。
肝脏受损使得LDH释放入血液中增加。
4. 肌肉损伤肌肉损伤如挫伤、拉伤、运动过度等也会导致LDH同工酶高。
肌肉损伤使得细胞内LDH释放入血液中增加。
二、肌酸激酶（CK）同工酶高的原因1. 肌肉损伤肌酸激酶同工酶高的最常见原因是肌肉损伤，特别是骨骼肌损伤。
运动过度、挫伤、拉伤等导致的肌肉损伤可以使得肌酸激酶释放到血液中，引起其同工酶浓度升高。
2. 心肌梗死与LDH类似，心肌梗死导致心肌细胞损伤，CK释放到血液中增加，导致其同工酶浓度升高。
3. 肌无力慢性肌无力症患者也常伴有CK同工酶高。
肌无力症导致肌细胞的破坏和修复过程不断进行，CK不断释放入血液中。
4. 药物一些药物如他汀类药物、胰岛素等在长期或过量使用时也会导致CK同工酶高。
三、其他因素除了上述常见原因外，还有一些其他因素也可能导致LDH和CK同工酶高，如高温、中毒、代谢性疾病、感染、内分泌疾病等。
总结起来，乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因非常多样化，包括炎症反应、肌肉损伤、心肌梗死、肝脏疾病、肌无力、药物等因素均可能导致同工酶水平升高。
在临床实践中，对于LDH和CK同工酶高的患者，需要仔细分析病史，结合其他相关检查，以明确疾病的诊断和治疗方案。
通过合理的用药、规范的运动、健康的生活习惯等方式，可以预防LDH和CK同工酶高的发生。
肌酸酶同工酶 乳酸脱氢酶 肌酸激酶-概述说明以及解释
肌酸酶同工酶乳酸脱氢酶肌酸激酶-概述说明以及解释1.引言1.1 概述肌酸酶同工酶、乳酸脱氢酶和肌酸激酶都是人体内重要的酶类蛋白质，它们在细胞内发挥着关键的生物学功能。
肌酸酶同工酶是一类酶体蛋白质，其功能涉及多种代谢过程，乳酸脱氢酶参与乳酸代谢并调节酸碱平衡，而肌酸激酶则与能量代谢密切相关。
肌酸酶同工酶的定义和功能广泛存在于人体的各种组织中，特别是肌肉组织中含量最丰富。
它们是一类催化酶，在细胞内负责催化肌酸转化为肌酸磷酸盐的反应。
肌酸是细胞内的一种重要能源储备物质，通过肌酸酶同工酶的催化作用，能够将肌酸转化为肌酸磷酸盐，进而参与细胞能量代谢过程中的肌酸磷酸盐-肌酸间的往复转化。
肌酸储备量与细胞能量代谢水平息息相关，对于维持肌肉健康功能起着重要作用。
乳酸脱氢酶在体内主要参与乳酸代谢的过程。
它可以催化乳酸的氧化还原反应，将乳酸氧化为丙酮酸，从而调节体内乳酸的产生和消耗。
乳酸是细胞糖酵解代谢过程中产生的副产物，过量的乳酸堆积会导致酸中毒，而乳酸脱氢酶的存在可以有效调节体内乳酸浓度，维持酸碱平衡。
肌酸激酶在细胞内是一种催化酶，主要参与肌酸磷酸盐-肌酸间的往复转化反应，并且与ATP合成相关。
肌酸激酶能够催化肌酸磷酸盐的合成反应，将肌酸与磷酸盐结合形成肌酸磷酸盐，并且ATP在此过程中起到能量供应的作用。
肌酸激酶的活性与细胞能量需求紧密相关，它在细胞能量代谢及肌肉功能方面发挥重要作用。
综上所述，肌酸酶同工酶、乳酸脱氢酶和肌酸激酶作为酶类蛋白质在细胞内发挥着重要的生物学功能，它们在相关代谢过程中起到调节和催化的作用，对于细胞能量代谢、酸碱平衡以及肌肉等方面的正常功能维持具有重要意义。
对这些酶类蛋白质的深入研究有助于更好地理解细胞代谢及人体健康的相关机制。
文章结构是一个长文中的组织框架，它有助于读者了解全文的整体架构和各个部分之间的关系。
本文的结构如下：1. 引言1.1 概述1.2 文章结构1.3 目的2. 正文2.1 肌酸酶同工酶2.1.1 定义和功能2.1.2 作用机制和重要性2.2 乳酸脱氢酶2.2.1 定义和功能2.2.2 作用机制和重要性2.3 肌酸激酶2.3.1 定义和功能2.3.2 作用机制和重要性3. 结论在这个文章结构中，引言部分将提供一个简要的背景介绍和研究目的，为读者提供整篇文章的背景和意义。
乳酸脱氢酶(ldh)正常值范围
乳酸脱氢酶(ldh)正常值范围
乳酸脱氢酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的重要指标之一，正常值范围是109-245U/L。
如果乳酸脱氢酶数值偏高，则需要警惕肝脏疾病、心脏疾病等，及时去医院咨询进行进一步检查确定数值增高的病因，数值偏低则不需要过度担心。
乳酸脱氢酶是催化乳酸和丙酮相互转化的同工酶，存在于肝脏、心脏、肾脏中。
乳酸脱氢酶偏低有可能是因为内分泌失调或者由过于劳累、睡眠不好、心情不好等原因引起，乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重，经过调理即可恢复。
但是如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了，常见原因如下：
1、乙肝患者血清中乳酸脱氢酶含量就会出现增高，这
是由肝细胞受损引起的。
2、肌营养不良的患者血清中可以观察到偏高的乳酸脱
氢酶。
3、肝脏疾病、肺部疾病、心脏疾病、肾脏疾病等都可
能会引起乳酸脱氢酶偏高。
医学知识之同工酶
同工酶同工酶(isoenzyme)是指催化的化学反应相同，酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。
这类酶存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织、甚至同一组织或细胞中。
现已发现有数种同工酶。
如6-磷酸葡萄糖脱氢酶、乳酸脱氢酶、酸性和碱性磷酸酶、谷丙转氨酶和谷草转氨酸、肌酸磷酸激酶、核糖核酸酶、过氧化酶和胆碱酯酶等。
其中乳酸脱氢酶最为大家所熟悉，乳酸脱氢酶(LDH)有五种同工酶，它们的分子量在130，000～150，000范围内，都由四个亚基组成。
LDH的亚基可以分为两型：骨骼肌型(M型)和心肌型(H型)。
M、H亚基的氨基酸组成有差别，可用电泳分离。
其免疫抗体无交叉反应。
两种亚基以不同比例组成五种四聚体即为一组LDH同工酶LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)和LDH5(M4)。
电泳时都移向正极，其速度以LDH1为最快，依次递减，以LDH5为最慢。
若用12M尿素或5M盐酸胍溶液处理，M亚基和H亚基可以分开，但此时LD H无酶的活性。
【注意事项】大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
大家以后在服用药物的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。
本文到此结束，谢谢大家!。
第四章实验五乳酸脱氢酶_LDH_同工酶的分离纯化
NAD+：10 mL NBT：10 mL PMS：2 mL 0.5 M PH7.6 Tris-HCl: 15 mL 0.5 M乳酸钠：15 mL 0.1NaCl：5 mL 去离子水：43 mL
共计100 mL
四、实验操作
1.样品处理：1 g 组织切碎，加 pH 7.4 Tris-HCl缓 冲液10 mL，匀浆，10,000 g ，4℃，离心10 min，上
离子交换剂结构：以Sephadex-QAE A-50为例
葡聚糖 -N+(CH3)3 –Cl基质 功能基团 平衡离子
电荷基团 反离子
离子交换剂的种类
1 按基质种类不同： 离子交换树脂，离子交换纤维素，离子交换凝胶等
2 按功能基团不同： 强酸型 含磺酸基团 (R-SO3H)， 中等酸型 含磷酸基团 (-O-PO2H4) 弱酸型 含酚基、羧基 强碱型 含季胺基团 [-N+(CH3)3]，弱碱型 含叔胺、伯胺基团[-N(CH3)2] 3 按平衡离子的性质不同：
ABC
D
E
A280
5 10 15 20 25 30 35 40 50
洗脱体积
4.聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定：活性电泳 只做分离胶，胶倒好直接插上试样梳，进行聚合
编号 1 2 3 4 5
总体积
溶液名称 30% Acr –0.8% Bis pH 8.9 Tris -HCl TEMED 10% AP H2O
三、实验试剂
1、20 mM Tris-HCl，pH 7.4缓冲液； 2、A液: 20 mM Tris-HCl，pH 6.3缓冲液 3、B液: A液含60 mM NaCl 4、C液: A液含100 mM NaCl 5、D液: A液含150 mM NaCl 6、E液: A液含240 mM NaCl 7、QAE-Sephadex A-50准备：取1克QAE-Sephadex A-50于烧杯中加入100 mL A
乳酸脱氢酶;肌酸激酶;肌酸激酶同工酶
乳酸脱氢酶、肌酸激酶和肌酸激酶同工酶是人体生理过程中不可或缺的重要酶类。
它们在能量代谢、肌肉损伤和疾病诊断等方面发挥着重要的作用。
本文将分别从乳酸脱氢酶、肌酸激酶和肌酸激酶同工酶的功能、结构及临床应用等方面进行介绍和探讨。
一、乳酸脱氢酶1.功能乳酸脱氢酶（LDH）是一种存在于细胞质中的酶，它参与了乳酸的代谢过程。
在有氧环境下，LDH将乳酸转化为丙酮酸，从而释放出能量。
而在缺氧环境下，LDH则参与乳酸的产生过程，帮助细胞维持能量代谢的平衡。
2.结构LDH是由四个亚基构成的四聚体蛋白质，这四个亚基可以分为两种类型：M亚基和H亚基。
在人体中，有5种不同的亚基组合形式，它们分别存在于不同的组织和细胞中。
3.临床应用LDH在临床上是一个重要的生化指标，它可以用于辅助诊断心肌梗死、溶血性贫血、癌症和肝脏疾病等疾病。
通过LDH的测定，可以帮助医生判断疾病的严重程度、进行病情的监测和评估治疗效果。
二、肌酸激酶1.功能肌酸激酶（CK）是一种主要存在于肌肉组织中的酶，它参与了肌肉中肌酸磷酸酶系统的能量代谢过程。
在肌肉受损或缺氧的情况下，肌酸激酶会被释放到血液中，因此成为了一种用于诊断和监测肌肉损伤的生化指标。
2.结构肌酸激酶是一个由两个亚基构成的二聚体酶，这两个亚基分别被称为B亚基和M亚基。
在人体中，有三种不同类型的肌酸激酶异构体，它们分别被称为CK-MM、CK-MB和CK-BB。
3.临床应用在临床实践中，CK的测定常用于评估心肌梗死、肌肉疾病、运动损伤、中风和肝脏疾病等疾病。
通过监测血清中CK水平的变化，可以帮助医生对患者的病情进行评估和诊断。
三、肌酸激酶同工酶1.功能肌酸激酶同工酶（CK-M）是肌酸激酶中的一种同工酶，与肌酸激酶具有相似的生物学功能和结构。
它主要存在于心肌组织和脑组织中，因此也被用作评估心肌和脑组织损伤的生化指标。
2.结构肌酸激酶同工酶和肌酸激酶有着相似的二聚体结构，但其在组织分布和生物学特性上有所不同。
(修改版)琼脂糖电泳检测LDH同工酶
一、实验目的
1. 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 及琼脂糖凝胶板的制备； 2. 熟悉琼脂糖凝胶电泳分离LDH同工酶的方法 及组织匀浆的制备、制点样槽、点样、 显色。
二、实验原理
带电粒子在直流电场中向所带电荷相反的方 1.电泳：
向移动的现象。
能催化功能相同而酶的分子结构、理化 2.同工酶： 性质及免疫学特性不同的一组酶，称为同工酶。
六、实验结果
乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱
七、方法学评价
(一)电泳法
琼脂糖凝胶法
1. 优点：灵敏度高，样品取量少，无拖尾现象。 2. 缺点：点样不能过多，否则影响区带效果。 醋酸纤维薄膜法 1.优点:应用普遍、简便、快速、分离清晰
2.缺点：点样量少，LDH4和LDH5易受电热的影响而失活。
聚丙烯酰胺凝胶法 1.优点：分辨率高 2.缺点：试剂昂贵，有一定的毒性，操作繁琐
八、临床意义
八、临床意义
1.急性心肌梗死：LDH1、 LDH3↑
LDH1/ LDH2 ↑>1 2.肝细胞受损:LDH ↑ LDH5 ↑↑ LDH4↑
3.胃癌、结肠癌、胰腺癌:LDH3↑ 4.前列腺癌: LDH5/ LDH4↑>1 5.骨骼肌急性损伤: LDH4、 LDH5↑
思考题
正常成年人血清LD同工酶活力电泳结果为
电泳结束后，加显色凝胶加载凝胶玻片上，
置37℃烤箱中，15分钟。
五、注意事项
1. 标本需新鲜，室温保存，PBS液浸泡。 2. 底物显色液须临用前配制，用棕色试剂瓶装， 避光保存于50 ℃水浴箱，复溶后无效。 3. LDH4、LDH5对冷热均敏感，应严格控制温 度，底物显色液如超过50℃，血清标本放置 温度过低，均容易破坏LDH4、LDH5。
肌酸酶同工酶 乳酸脱氢酶升高的原因
肌酸酶同工酶乳酸脱氢酶升高的原因肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶是人体内两种重要的酶类物质，它们的升高往往与一些特定的原因相关。
本文将就肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶升高的原因展开探讨。
我们来了解一下肌酸酶同工酶的概念。
肌酸酶同工酶，简称CK，是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与肌肉细胞内肌酸磷酸化反应。
当肌肉受到损伤或疾病侵袭时，肌酸酶同工酶会释放到血液中，导致其浓度升高。
乳酸脱氢酶，简称LDH，是一种存在于细胞质中的酶，参与乳酸的产生和消耗。
乳酸脱氢酶的升高通常是由于细胞损伤或炎症反应引起的。
那么，肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶升高的原因有哪些呢？第一，肌肉损伤是导致肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶升高的常见原因之一。
例如，剧烈运动、外伤或肌肉炎症等情况会导致肌肉组织的损伤，使得肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶释放到血液中，导致其浓度升高。
第二，心肌梗死也是肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶升高的重要原因之一。
心肌梗死是指冠状动脉阻塞导致心肌供血不足，心肌细胞死亡。
在心肌梗死发生的过程中，肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶会释放到血液中，因此其浓度会显著升高。
第三，肝脏疾病也是导致肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶升高的原因之一。
肝脏是乳酸脱氢酶的重要代谢器官，当肝功能受损时，乳酸脱氢酶的清除能力减弱，导致其浓度升高。
此外，肝脏疾病也会导致肌酸酶同工酶的升高，因为肌酸酶同工酶也存在于肝脏细胞中。
第四，其他疾病也可能导致肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶升高。
例如，急性胰腺炎、肌无力、肌肉疾病等都可能导致肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶浓度的升高。
肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶升高的原因主要包括肌肉损伤、心肌梗死、肝脏疾病以及其他疾病等。
当发现肌酸酶同工酶和乳酸脱氢酶升高时，应及时就医，找出具体的原因，并进行相应的治疗。
实验六.LDH同工酶的电泳分离.ppt
心 35~70 28~45 2~16 0~6 0~5
肝
0~8
2~10
3~33 6~27 30~8
骨骼肌 1~10 4~18
8~38 9~36 40~97
正常血清 27.1±2.8 34.7 ± 4.3 20.9 ± 2.4 11.7 ± 3.3 5.7 ± 2.9
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
a
2
12
b
酶活性 酶活性
3
1 4 5
量少肉眼观察不到
LDH 4 3.9%
LDH 3 18.5%
LDH 2 42.8%
LDH 1 33.4%
溴酚蓝电 泳指示剂
+
hhhhhhhhhhhhhhmmhhhhmmmmhhmmmmmmmmmmmmmmldhldh11hh44ldhldh22hh33mmldhldh33hh22mm22ldhldh44hmhm33ldhldh55mm44乳酸脱氢酶的同工酶乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶ldhldh11ldhldh55人体心肝和骨骼肌ldh同工酶谱组织器官ldh1ldh2ldh3ldh4ldh5占总ldh活性的百分比28452160605心肝357008210333627308骨骼肌正常血清271283474320924117335729110418838936409712345酶活性迁移位置酶活性迁移位置abaldh同工酶电泳图谱ba正常人ldh同工酶电泳图谱b心肌梗塞病人血清ldh同工酶电泳图谱12345生理及临床意义生理及临床意义在代谢调节上起在代谢调节上起着重要的作用
2. 显色：电泳终止前10 min，将凝胶缓冲液：显 色液：0.5 M 乳酸钠溶液=67:53 :20(V:V:V)的比例 配置染色液。
电泳结束后，取出载玻片，放入培养皿中。
血清乳酸脱氢酶(LDH)—生化检测项目
血清乳酸脱氢酶（LDH）
一、检测原理
LDH催化L-乳酸氧化成丙酮酸，同时NAD还原成NADH+，引起340nm吸光度的升高，与样品中LDH的活性成正比。
二、参考区间
血清：109—245U/L
三、临床意义
1、乳酸脱氢酶，属于糖酵解酶的一种，可以在人体的血液、骨骼以及心脏大量存在。
2、乳酸脱氢酶的临床意义较大，可以作为诊断心肌疾病、慢性肝炎以及肝癌等病症的诊断依据。
3、乳酸脱氢酶有5种同工酶的形式，即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4和LDH5，在人体的心肌、肾脏以及红细胞中LDH1、LDH2含量比较高，这两项升高常见于心肌炎、心肌梗死、恶性贫血、急性肾皮质坏死。
肝脏和横纹肌以LDH
4、LDH5为主，当升高的时候常见于肝硬化、肝炎以及骨骼肌的损伤等，
LDH3在胰腺、脾脏、甲状腺、肾上腺当中较多，当异常升高时常见于胰腺癌等疾病。
4、血清LDH活性检测可判断白血病的疗效和转归。
血清LDH同工酶测定
同工酶的应用
是否人种间在差异呢？这个答案不 得而知，但有一点是明确的，那就是LDH同
工酶在人体不同器官和组织间是有差异的，
从医学角度来讲，利用这种特异性临床上对
LDH同工酶的检测可作为某些疾病诊断的依据
之一。
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同工酶的应用
在临床检验方面，通过观测病人血清中LDH同
工酶的电泳图谱，辅助诊断哪些器官组织发生病变 ，远较单纯测定血清LDH总活性的方法敏感。例 如，心肌受损病人血清LDH1含量上升，肝细胞受 损者血清LDH5含量增高。
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6、图谱分析-1
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6、图谱分析-1
正常： LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5
参考值(琼脂糖电泳法)：
LDH1（28.4〒5.3）%； LDH2（41.0〒5.0）%； LDH3（19.0〒4.0）%； LDH4（6.6〒3.5）%； LDH5（4.6〒3.0）%。
LDH4活性极高时，常示预后不良；原发性肝癌以血清LDH4＞LDH5较为常见
，阻塞性黄疸时LDH4 与LDH5 均增高，但以LDH4 尤为明显。
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6、图谱分析-3
文献：血清乳酸脱氢酶同工酶在肝脏疾病中的检测及意义 摘要:目的 探讨血清乳酸脱氢酶同工酶检测在肝脏疾病中的临床意义。方法 LDH 同工酶测定采用琼脂糖电泳法，统计学处理采用t检验。结果 LDH1在急性肝炎
LDH同工酶广泛存在于动植物及微生物中，动物
各组织中LDH同工酶各组分含量不同，具有明显
的物种间差异可作为动物分类的生化依据。
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同工酶的应用
文献：鲿科四种鱼LDH同工酶谱的研究 【摘要】：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对鲿科四种 鱼血清中LDH同工酶进行电泳分析,结果表明:四种鱼 血清LDH同工酶图谱的区带分布具有种的特异性;四 种鱼血清LDH同工酶A、B亚基比例关系反映的各品种 间亲缘的关系与形态学特征分析结果吻合,为鲿科四 种鱼分类提供进一步的理论依据.
实验八 乳酸脱氢酶
实验八乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的琼脂糖凝胶电泳一、实验目的了解琼脂糖凝胶电泳的方法和原理，学会分离LDH同工酶的方法。
二、原理同工酶是指能够催化相同的化学反应，但酶分子的结构理化特性乃至免疫学性质不同的一组酶，同工酶这种差异是由于酶蛋白的编码基因不同或基因相同但转录、翻译或后加工有别所造成的。
同工酶存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织，甚至同一组织或细胞的不同亚细胞结构中。
人们已发现几百种同工酶。
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase LDH）是人们认识的第一个同工酶。
LDH是糖酉孝解中的一个酶，它催化的反应如下。
COOH COOHHO—C—H+NAD＋C＝O＋NADH＋H+CH3 CH3LDH有五种同工酶，分子量在13万～15万之间，由四个亚基组成。
LDH的亚基有两种类型，一种是心肌型亚基（H型）（B基因），另一种是骨骼肌型亚基（M型）（A基因）。
两类亚基以不同比例可组成五种四聚体。
即LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(H1M3)、LDH5(M4)。
H型亚基与M型亚基的氨基酸组成有差异，前者含酸性氨基酸残基多，故LDH可用电泳的方法进行分离。
本实验用pH8.6的缓冲液，在此条件下电泳，LDH的五种同工酶均净带负电荷，向正极泳动，但LDH1最快，依次减慢，LDH5最慢。
在哺乳动物体内，一般厌氧性组织中，如骨骼肌、肝脏中，LDH5含量高；在非厌氧性组织中，如心、脑中，LDH1含量高。
本实验用琼脂糖凝胶，LDH的五种同工酶在琼脂糖凝胶板上分离后，进行酶促反应，使乳酸脱氢生成NADH，NADH将人工递氢体PMS还原，还原型PMS 最终将NBT还原。
NADH++H++PMS=====NAD++PMSH2PMSH2＋NBT======PMS＋NBTH2NBTH2为蓝色化合物。
三、实验器材（一）、仪器1、电泳仪1、水平电泳槽2、离心机3、玻璃匀浆器5、恒温箱6、微量移液器7、吸量管四、材料与试剂1、小白鼠（成年）2、白瓷盘3、剪子4、镊子5、载玻片6、滤纸7、生理盐水8、0.01mol/l pH7.4磷酸钠缓冲液：取0.01mol/L NaH2PO419ml和0.01mol/L Na2HPO481ml混合即可。
同工酶的概念及其在临床诊断中的应用
同工酶的概念及其在临床诊断中的应用同工酶（isozyme，isoenzyme）广义是指生物体内催化相同反应而分子结构不同的酶。
按照国际生化联合会（IUB）所属生化命名委员会的建议，则只把其中因编码基因不同而产生的多种分子结构的酶称为同工酶。
最典型的同工酶是乳酸脱氢酶（LDH）同工酶。
同工酶的基因先转录成同工酶的信使核糖核酸，后者再转译产生组成同工酶的肽链，不同的肽链可以不聚合的单体形式存在，也可聚合成纯聚体或杂交体，从而形成同一种酶的不同结构形式。
同工酶是指催化相同的化学反应，但其蛋白质分子结构、理化性质和免疫性能等方面都存在明显差异的一组酶。
应用在生物学中，同工酶可用于研究物种进化、遗传变异、杂交育种和个体发育、组织分化等。
例如最原始的脊椎动物七鳃鳗（Lamprey）只有一种LDH肽链，进化到较高级的鱼类才有A、B两类肽链。
又如通过对地理分布不同的物种间某一同工酶谱的普查可以推测物种的地理来源。
动、植物的遗传变异可通过子代和亲代同工酶谱的比较来鉴别。
法医学中也可用多种同工酶谱的分析来鉴定亲子关系。
细胞杂交或植物杂交育种后是否出现新品种也可用同工酶谱的比较来确定。
在个体发育中，从胚胎到出生，再到成年，随着组织的分化和发育，各种同工酶谱也有一个分化转变的过程。
某型同工酶在胚胎的大多数组织中出现，成为主要型式，称为原始型同工酶。
但出生后在某些组织中逐渐减少而被另一型同工酶取代，后者在胚胎组织中几乎不存在或含量极微，只在分化成熟的少数组织中存在，称为成年型同工酶。
在植物的不同发育阶段，同样可见同工酶谱的相应改变。
在医学方面，同工酶是研究癌瘤发生的重要手段，癌瘤组织的同工酶谱常发生胚胎化现象，即合成过多的胎儿型同工酶。
如果这些变化可反映到血清中，则可利用血清同工酶谱的改变来诊断癌瘤。
此外。
因同工酶谱有脏器特异性，故测定血清同工酶常可较特异地反映某一脏器的病变，如血清的LDH1（B4）或MB 型肌酸激酶（CK-MB）增加是诊断心肌梗塞较特异的指标，较测定血清LDH或肌酸激酶（CK）总活力更为可靠。
肝中富含的ldh同工酶
肝中富含的ldh同工酶肝中富含的LDH同工酶LDH是一种酶，全称为乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase）。
LDH同工酶是指在不同的组织和器官中，由同一种酶基因编码的LDH 分子，因其在电泳上的迁移速度不同而被分离出来的不同同分异构体。
LDH同工酶在临床诊断中有着重要的应用价值，特别是在肝脏疾病的诊断中。
肝脏是人体内最重要的代谢器官之一，它参与了人体内的多种代谢过程。
肝脏细胞内含有大量的酶，其中LDH同工酶是肝脏细胞内含量最高的酶之一。
LDH同工酶由五种亚基组成，包括H亚基、M亚基、H1亚基、M1亚基和H4亚基。
其中，H亚基和M亚基是LDH同工酶的两种主要亚基，它们的比例在不同的组织和器官中有所不同。
在肝脏疾病的诊断中，LDH同工酶的检测可以帮助医生确定肝脏疾病的类型和程度。
例如，在肝细胞损伤的情况下，肝细胞内的LDH同工酶会释放到血液中，导致血液中LDH同工酶的含量升高。
通过检测血液中LDH同工酶的含量，可以判断肝细胞损伤的程度和肝脏疾病的类型。
此外，LDH同工酶的检测还可以用于监测肝脏疾病的治疗效果和预后评估。
除了肝脏疾病的诊断，LDH同工酶的检测还可以用于其他疾病的诊断。
例如，在心肌梗死的情况下，心肌细胞内的LDH同工酶会释放到血液中，导致血液中LDH同工酶的含量升高。
通过检测血液中LDH同工酶的含量，可以判断心肌梗死的程度和预后评估。
总之，LDH同工酶是一种重要的酶，在肝脏疾病的诊断中有着重要的应用价值。
通过检测血液中LDH同工酶的含量，可以帮助医生确定肝脏疾病的类型和程度，监测治疗效果和预后评估。
此外，LDH同工酶的检测还可以用于其他疾病的诊断，如心肌梗死等。
因此，LDH同工酶的检测在临床诊断中具有重要的意义。
实验八 乳酸脱氢酶
实验八乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的琼脂糖凝胶电泳一、实验目的了解琼脂糖凝胶电泳的方法和原理，学会分离LDH同工酶的方法。
二、原理同工酶是指能够催化相同的化学反应，但酶分子的结构理化特性乃至免疫学性质不同的一组酶，同工酶这种差异是由于酶蛋白的编码基因不同或基因相同但转录、翻译或后加工有别所造成的。
同工酶存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织，甚至同一组织或细胞的不同亚细胞结构中。
人们已发现几百种同工酶。
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase LDH）是人们认识的第一个同工酶。
LDH是糖酉孝解中的一个酶，它催化的反应如下。
COOH COOHHO—C—H+NAD＋C＝O＋NADH＋H+CH3 CH3LDH有五种同工酶，分子量在13万～15万之间，由四个亚基组成。
LDH的亚基有两种类型，一种是心肌型亚基（H型）（B基因），另一种是骨骼肌型亚基（M型）（A基因）。
两类亚基以不同比例可组成五种四聚体。
即LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(H1M3)、LDH5(M4)。
H型亚基与M型亚基的氨基酸组成有差异，前者含酸性氨基酸残基多，故LDH可用电泳的方法进行分离。
本实验用pH8.6的缓冲液，在此条件下电泳，LDH的五种同工酶均净带负电荷，向正极泳动，但LDH1最快，依次减慢，LDH5最慢。
在哺乳动物体内，一般厌氧性组织中，如骨骼肌、肝脏中，LDH5含量高；在非厌氧性组织中，如心、脑中，LDH1含量高。
本实验用琼脂糖凝胶，LDH的五种同工酶在琼脂糖凝胶板上分离后，进行酶促反应，使乳酸脱氢生成NADH，NADH将人工递氢体PMS还原，还原型PMS 最终将NBT还原。
NADH++H++PMS=====NAD++PMSH2PMSH2＋NBT======PMS＋NBTH2NBTH2为蓝色化合物。
三、实验器材（一）、仪器1、电泳仪1、水平电泳槽2、离心机3、玻璃匀浆器5、恒温箱6、微量移液器7、吸量管四、材料与试剂1、小白鼠（成年）2、白瓷盘3、剪子4、镊子5、载玻片6、滤纸7、生理盐水8、0.01mol/l pH7.4磷酸钠缓冲液：取0.01mol/L NaH2PO419ml和0.01mol/L Na2HPO481ml混合即可。
肝富含的ldh同工酶
肝富含的ldh同工酶
肝富含的LDH同工酶
LDH同工酶是一种存在于细胞中的酶，能够催化糖酵解途径中的反应。
肝脏是一个高活性的代谢器官，具有高度的酶活性，其中肝富含的
LDH同工酶可分为几种类型，具有不同的催化活性和对代谢过程的贡献。
下面按类划分，简要介绍一下肝富含的LDH同工酶。
1. LDH-1
LDH-1是肝脏中最常见的同工酶，也是最活跃的酶之一。
它主要参与
乳酸和丙酮酸之间的互相转化，对人体的运动和能量代谢有重要作用。
此外，LDH-1也参与肝脏的脂肪代谢，对糖原分解和肝脏代谢有一定
的作用。
2. LDH-2
LDH-2是肝脏中另一种重要的同工酶。
它的催化活性较低，主要参与
肝细胞中的丙酮酸转化。
此外，LDH-2还参与肝脏中氨基酸的代谢，
对肝脏解毒有一定的作用。
3. LDH-3
LDH-3在肝脏中占比较小，但仍具有一定的生理作用。
它在糖酵解途
径中扮演着弱催化作用的角色，同时也可参与肝细胞内的氨基酸代谢
和解毒反应等过程。
4. LDH-4
LDH-4是一种新的肝脏同工酶，其在肝细胞代谢中的具体作用还不是很清楚。
目前的研究表明，LDH-4可能参与肝脏糖原的合成和分解，对肝脏糖代谢有一定的影响。
总结：
肝富含的LDH同工酶在肝脏代谢中发挥着重要的作用，不同的同工酶在不同的代谢途径中具有不同的功能。
了解每种LDH同工酶的特点和作用，有助于我们更好地了解肝脏的生理过程，并有助于预防和治疗与肝脏代谢相关的疾病。
乳酸脱氢酶肌酸氢酶
乳酸脱氢酶肌酸氢酶
乳酸脱氢酶（LD或LDH）是一类NAD依赖性激酶，有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基，可构成6种四聚体同工酶。
动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体，常见的A、B两种亚基构成的5种LDH同工酶（LDH1-5），C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。
它是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。
肌酸激酶（CPK）和乳酸脱氢酶（LDH）是心肌损伤、肝损伤以及其他肌肉伤害时血液中所广泛用于测定的两种指标。
一般来说，当肌肉发生疾病或损伤时，CPK和LDH的浓度会显著增加并用于评估疾病的活动度。
血清LDH同工酶测定
和亚急性重型肝炎中显著低于正常下限(P<0.001)，LDH2在急性肝炎、慢性肝炎
、慢性肝炎、亚急性重型肝炎和肝硬化中明显低于正常值(P<001)，LDH3在急性 肝炎、慢性肝炎、亚急性重型肝炎、慢性重型肝炎和肝硬化的患者中显著低于正
常下限(P<0．001)，LDH4在慢性肝炎、慢性重型肝炎、肝硬化和原发性肝细胞
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同工酶的应用
是否人种间在差异呢？这个答案不 得而知，但有一点是明确的，那就是LDH同
工酶在人体不同器官和组织间是有差异的，
从医学角度来讲，利用这种特异性临床上对
LDH同工酶的检测可作为某些疾病诊断的依据
之一。
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同工酶的应用
在临床检验方面，通过观测病人血清中LDH同
工酶的电泳图谱，辅助诊断哪些器官组织发生病变 ，远较单纯测定血清LDH总活性的方法敏感。例 如，心肌受损病人血清LDH1含量上升，肝细胞受 损者血清LDH5含量增高。
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6、图谱分析-3
LDH5↑：骨骼肌损伤(杜氏肌营养不良、横纹肌融解症、肌肉外伤) 煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1、LDH2下降，LDH4、LDH5升高 肾髓质以LDH4和LDH5活性较强。患急性肾小管坏死、慢性肾盂肾
炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时，血清LDH5均可↑
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①操作简单，电泳速度快
②凝胶结构均匀，含水量大，对蛋白质吸附极
少，电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
③电泳区带易染色，可透明直接扫描、可长期
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保存等优点。
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1、琼脂糖凝胶电泳法原理
根据LD同工酶一级结构和等电点的差异， 在一定电泳条件下，使LD在支持物上被分离。 利用酶促反应进行显色，显色深浅与酶活性成
血清乳酸脱氢酶同功酶化学抑制法测定作业指导书
血清乳酸脱氢酶同功酶化学抑制法测定作业指导书1. 实验原理L-乳酸+ NAD+丙酮酸+ NADH + H+LDH反应体系中加有抑制物，能抑制LDH2、LDH3、LDH4和LDH5的活性，测定结果为LDH1。
2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
草酸盐对LDH 有抑制作用，不宜用草酸盐抗凝血浆做标本。
3. 标本存放：血清标本存放4℃,2-3天酶活力无显著降低。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂宁波慈城LDH1测定试剂盒（试剂 1 90ml+试剂2 10ml）6.1.1 试剂组成试剂1（R1）：L-乳酸50mmol/L硫氰酸胍210 mmol/L N-甲基-右旋糖酐缓冲液pH9.3 325mmol/L 试剂2（R2）：NAD+10mmol/L6.1.2试剂准备试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于4℃，若无污染，可稳定1年。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
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LDH同工酶
定义1：具有相同底物，但电泳迁移率不同的酶。
可来简介
用电泳方法将LDH同工酶分离，分析其酶谱，发现脊椎动物各组织中有五条酶带。
每条酶带的酶蛋白都是由四条肽链组成的四聚体，LDH有两类肽链，A（M）或B（H），各有不同同工酶
的免疫性质，按排列组合可形成符合于电泳酶带数的五种同工酶。
LDH1及LDH5分别由纯粹的4条B链（B4）和4条A链（A4）形成，称为纯聚体；而LDH2、LDH3和LDH4都是由两类肽链杂交而成的，分别可写成AB3、A2B2、A3B，称为杂交体。
编辑本段分类
基因性同工酶或原级同工酶
由不同基因产生的肽链而衍生的同工酶。
这里所指的不同基因可以在不同染色体或在同一染色体的不同位点上，例如LDH中A、B两条肽链的基因分别在第11及第12对染色体上，唾液淀粉酶和胰淀粉酶的基因在第1对染色体的不同位点上。
这类同工酶因分子结构差异较大，彼此间无交叉免疫。
但同工酶的不同基因也可以是同源染色体的等位基因，这种成对的等位基因上两个基因结构不同的情况，在遗传学上称为杂合子。
杂合子在同一个体中可合成同一种酶的两种不同
肽链，或亚基，这两种亚基尚可杂交，形成同工酶。
在生物群体的不同个体中，有时同一基因位点上的一个（对杂合子来说）或一对（对纯合子来说）基因也可发生遗传变异，从而产生变异的酶，出现群体中的遗传多态。
不同个体中这些遗传变异的酶也属于基因性同工酶。
其在免疫学上常有交叉反应。
由同一基因转录出前体核糖核酸（前体RNA），经过不同的加工剪接过程而生成多种不同的mRNA，再转译出多种肽链，从而组成同工酶。
这类同工酶因发现较晚，在国际上尚无统一命名，彼此间也有交叉免疫。
次生同工酶或转译后同工酶
由同一基因、同一mRNA转译生成原始的酶蛋白，再经过不同的化学修同工酶试剂
饰，如酰胺基水解、磷酸化、肽链断裂、糖链上的糖基增减等形成不同结构的酶蛋白，它们的免疫性往往相同。
国际生化协会命名委员会（CBN）建议只将原级同工酶列为同工酶，而将次生同工酶称为共合酶，但不少生化学家还是把上述各类酶的不同结构形式都包括在广义的同工酶概念中。
编辑本段功能
在动、植物中，一种酶的同工酶在各组织、器官中的分布和含量不同，形成各组织特异的同工酶谱，叫做组织的多态性，体现各组织的特异功能。
大多数基因性同工酶由于对底物亲和力不同和受不同因素的调节，常表现不同的生理功能，例如动物肝脏的碱性磷酸酯酶和肝脏的排泄功能有关，而肠粘膜的碱性磷酸酯酶却参与脂肪和钙、磷
的吸收。
对LDH催
化的可逆反应，心肌中富含的LDH1及LDH2在体内倾向于催化乳酸的脱氢，而骨骼肌中丰富的LDH4及LDH5则有利于丙酮酸还原而生成乳酸。
所以同工酶只是做相同的“工作”（即催化同一个反应），却不一定有相同的功能。
编辑本段应用
在生物学中，同工酶可用于研究物种进化、遗传变异、杂交育种和个体发育、组织分化等。
例如最原始的脊椎动物七鳃鳗（Lamprey）只有一种LDH肽链，进化到较高级的鱼类才有A、B两类肽链。
又如通过对地理分布不同的物种间某一同工酶谱的普查可以推测物种的地理来源。
动、植物的遗传变异可通过子代和亲代同工酶谱的比较来鉴别。
法医学中也可用多种同工酶谱的分析来鉴定亲子关系。
细胞杂交或植物杂交育种后是否出现新品种也可用周工酶谱的比较来确定。
在个体发育中，从胚同工酶图谱
胎到出生，再到成年，随着组织的分化和发育，各种同工酶谱也有一个分化转变的过程。
某型同工酶在胚胎的大多数组织中出现，成为主要型式，称为原始型同工酶。
但出生后在某些组织中逐渐减少而被另一型同工酶取代，后者在胚胎组织中几乎不存在或含量极微，只在分化成熟的少数组织中存在，称为成年型同工酶。
在植物的不同发育阶
段，同样可见同工酶谱的相应改变。
在医学方面，同工酶是研究癌瘤发生的重要手段，癌瘤组织的同工酶谱常发生胚胎化现象，即合成过多的胎儿型同工酶。
如果这些变化可反映到血清中，则可利用血清同工酶谱的改变来诊断癌瘤。
此外。
因同工酶谱有脏器特异性，故测定血清同工酶常可较特异地反映某一脏器的病变，如血清的LDH1（B4）或MB型肌酸激酶（CK-MB）增加是诊断心肌梗塞较特异的指标，较测定血清LDH或肌酸激酶（CK）总活力更为可靠。
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