美国微生物测试USP51-和USP61
微生物计数检查法USP61中英对照版
非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法61中英对照版<61> :非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法导言.以下所描述的这些检测将使得对在有氧的条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数成为可能。
a . , , , .这些检测主要设计用于测定一种物质或制备品是否符合已确立的微生物质量标准。
当用于此类目的时，需遵照以下所给的说明，包括待取样品的数量，并且按照下面所述解释结果。
.这些方法不适用于以活菌作为活性成分的产品。
, , , .可以使用替代的微生物规程，包括自动化方法，只要已经证明它们与药典方法具同等作用。
通用规程12 . .在经过设计可避免外来微生物污染供试产品的条件下，进行此项测定。
用于避免污染的这些预防措施是必须做到，它们不会影响任何试图在此项检验中揭示的微生物。
, , , . , .如果供试产品具有抗菌活性，则此活性需在尽可能的范围内去除或中和。
如果将灭活剂用于这个目的，则必须证实它们的功效和对微生物不具毒性。
, .如果表面活性物质用于样品制备，则必须证实它们对微生物不具毒性以及与所使用的任何灭活剂的兼容性。
计数法, . () ; , , .按规定，使用膜过滤法或多个平板计数法中的一种。
液体稀释法（）通常对微生物计数而言是最不准确的方法；然而，对具备非常低生物载荷的特定产品类型，它可能是最合适的方法。
a . a . .方法的选择基于某些因素，例如产品的性质和微生物的要求限度。
所选的方法必须能够对充足的样本量进行检测，以判断与质量标准的符合性。
所选方法的适用性必须被建立。
1.表1. 供试微生物的制备和使用生长促进在产品存在的情况下计数方法的适用性微生物供试菌株的制备总好氧微生物计数总酵母菌和霉菌计数总好氧微生物计数总酵母菌和霉菌计数6538, 9518, 4.83, 13276金黄色葡萄球菌如： 6538, 9518, 4.83, 或 13276300-350 18-24大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 18-24 小时≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350 ≤3 天≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物培养基（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350 ≤3 天9027, 8626 82.118, 13275绿脓杆菌如 9027, 8626 82.118, 或 13275300-350 18-24大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 18-24 小时≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350≤3 天≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物琼脂培养基（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350≤3 天6633, 8054, 52.62, 3134枯草芽孢杆菌如 6633, 8054, 52.62, 或 3134300-350 18-24大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 18-24 小时≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350≤3 天≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物琼脂培养基（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350≤3 天10231, 3179, 48.72, 1594白色念珠菌如 10231, 3179, 48.72, 或 1594200-250 2-3（沙氏）葡萄糖琼脂培养基或（沙氏）葡萄糖肉汤培养基≤100 300-350≤5 大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100 300-350≤5 天≤100 200-250≤5（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100 200-250≤5 天≤100 300-350≤5 :大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100 300-350≤5 天 (最大几率数)：不适用≤100 200-250≤5（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100 200-250≤5 天16404, 149007, 1431.83, 9455黑曲霉如 16404, 149007, 1431.83, 或 9455200-250 5-7 ,（沙氏）葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基200-250 5-7天,或直到实现良好的产孢≤100 300-350≤5大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100 300-350≤5 天≤100 200-250≤5（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100 200-250≤5 天≤100 300-350≤5 :大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100 300-350≤5 天(最大几率数)：不适用≤100 200-250≤5（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100 200-250≤5 天生长促进试验和计数方法的适用性通用考虑因素.在供试产品存在的情况下，必须确立检测微生物的试验能力。
微生物计数USP61中文版
微生物计数检测需氧菌总计数USP<61>USP<61>中文版美国药典微生物限量61）微生物限度检测（MICROBIAL LIMIT TESTS）此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。
如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。
在样品检测过程中须进行无菌操作。
若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。
准备实验 (Preparatory Testing)本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。
因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。
方法如下：将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于 10-3 稀释的微生物培养物，加 1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。
相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序：（1）增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者（2）中和一定数量的干扰因子；或者（3）结合（1）、（2）得出适当条件，使接种物得以生长。
以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用：大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯 20（polysorbate 20, 4.0%）。
美国微生物测试USP51和USP61+62
美国微生物测试USP51 和USP61＋62 介绍(2009/12/22 18:31)美国微生物测试USP51 和USP61＋62 介绍玩具需作微生物测试的材料：用于玩具中的化妆品、液体、糊状物、油灰（putties)、凝胶和粉末（艺术品材料，如粉笔、蜡笔、墨水等除外）1. USP<61>微生物限量测试*1- 测试目的: 检验材料本身受微生物污染的情况（也即微生物洁净度情况）- USP<61>包括以下六个微生物测试：(1) Total aerobic microbial Count 菌落总数(定量）(2) Mould and Yeast Count 霉菌和酵母菌数(定量）(3) Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌(定性）(4) Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌（定性）(5) Salmonella 沙门氏菌（定性）(6) Escherichia Coli 大肠杆菌（定性）USP61 Limit Requirement:(1)+(2) < 5000 CFU/g ( if the material was used in baby product or eye area product, the limit should be < 500 CFU/g)(3)/(4)/(5)/(6) should be “ABSENT per 10g “2. USP<51>防腐剂抗菌效力测试- 测试目的为防止的材料在保存过程中或使用过程中发生微生物*现象，须在材料中加入适量的防腐剂，而防腐剂效果如何则需通过USP《51》测试进行评价。
-USP<51>测试简述：将标准指定编号的以下菌种接入样品，然后在第7 天，第14 天，第28 天分别检验每种菌的存活数量，存活数量越少，其防腐剂抗菌效果越好。
Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌Escherichia coli 大肠杆菌Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌Candida albicans 白色念株菌Aspergillus niger 黑曲霉USP51 Limit requirement (for toy):细菌(Staphylococcus aureus/ Escherichia coli / Pseudomonas aeruginosa)14 天细菌减少≥2.0 LOG (99%)28 天不再繁殖真菌(Candida albicans /Aspergillus niger)14 天和28 天不再繁殖Remark: LOG REDUCTION = LOG10 (INITIAL COUNT / NO. OFMICRO-ORGANISM RECOVERED)*1 Remark:最近，美国药典（USP）发布了重大调整，原第61章“微生物限量测试”被拆分成两部分，即第61章“非灭菌产品中微生物测试：微生物计数检测”和第62章“非灭菌产品中微生物测试：特定微生物检测”。
USP2022年版〈61〉非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法-中文版
USP43 <61>非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法介绍下文所述的试验将允许在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的定量计数。
这些测试主要用于确定一种物质或制剂是否符合既定的微生物质量标准。
当用于此类目的时，应按以下的规定进行，包括要样品取样量，和解释判断如下所述结果。
本方法不适用于含有活微生物作为活性成分的产品。
可采用包括自动化方法在内的替代微生物学方法，前提是已经证明与药典方法等效。
一般程序在避免待检产品的受到外来微生物污染的条件下进行测定。
防止污染的措施必须确保不会影响待检产品中微生物的检出。
如果待检产品具有抗菌活性，则应尽可能将其去除或中和。
如果灭活剂用于此目的，必须证明其微生物有效性和无毒性。
如果表面活性物质用于样品制备，应确认其对微生物无毒性，并且与所用的任何灭活剂相容性。
计数方法按照说明，使用薄膜过滤法或平板计数法之一。
最可能数(MPN)法通常用于微生物计数准确度较差；但是，对于某些生物负荷非常低的产品，这可能是最合适的方法。
方法的选择是基于产品的性质和微生物限度标准等因素。
所选方法必须允许测试足够的样本量，以判断是否符合质量标准。
所选方法的适用性必须经确认。
生长促进试验、计数方法和阴性对照的适用性一般要求必须建立检测待测产品中微生物的能力。
如果引入了可能影响测试结果的测试性能或产品变化，则必须确认其适用性。
试验菌株的制备使用试验菌株的标准化稳定悬浮液或按如下所述进行制备。
采用适宜的菌种保藏技术，以确保用于接种的微生物的传代次数不超过5代。
如表1所述，分别培养每种细菌和真菌测试菌株。
霉孢子悬浮，可将0.05%的聚山梨醇酯80加入该缓冲液中。
悬浮液在2h之内使用，或存放在2～8℃条件下24h内使用。
作为制备并稀释黑曲霉或枯草杆菌营养细胞的新鲜悬浮液的替代方法，可制备稳定的孢子悬浮液，然后将适量的孢子悬浮液用于试验接种。
稳定的孢子悬浮液可在2～8℃下保存，保存期需经过时间验证。
美国微生物测试USP51和USP61+62
美国微生物测试USP51 和USP61＋62 介绍(2009/12/22 18:31)美国微生物测试USP51 和USP61＋62 介绍玩具需作微生物测试的材料：用于玩具中的化妆品、液体、糊状物、油灰（putties)、凝胶和粉末（艺术品材料，如粉笔、蜡笔、墨水等除外）1. USP<61>微生物限量测试*1- 测试目的: 检验材料本身受微生物污染的情况（也即微生物洁净度情况）- USP<61>包括以下六个微生物测试：(1) Total aerobic microbial Count 菌落总数(定量）(2) Mould and Yeast Count 霉菌和酵母菌数(定量）(3) Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌(定性）(4) Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌（定性）(5) Salmonella 沙门氏菌（定性）(6) Escherichia Coli 大肠杆菌（定性）USP61 Limit Requirement:(1)+(2) < 5000 CFU/g ( if the material was used in baby product or eye area product, the limit should be < 500 CFU/g)(3)/(4)/(5)/(6) should be “ABSENT per 10g “2. USP<51>防腐剂抗菌效力测试- 测试目的为防止的材料在保存过程中或使用过程中发生微生物*现象，须在材料中加入适量的防腐剂，而防腐剂效果如何则需通过USP《51》测试进行评价。
-USP<51>测试简述：将标准指定编号的以下菌种接入样品，然后在第7 天，第14 天，第28 天分别检验每种菌的存活数量，存活数量越少，其防腐剂抗菌效果越好。
Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌Escherichia coli 大肠杆菌Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌Candida albicans 白色念株菌Aspergillus niger 黑曲霉USP51 Limit requirement (for toy):细菌(Staphylococcus aureus/ Escherichia coli / Pseudomonas aeruginosa)14 天细菌减少≥2.0 LOG (99%)28 天不再繁殖真菌(Candida albicans /Aspergillus niger)14 天和28 天不再繁殖Remark: LOG REDUCTION = LOG10 (INITIAL COUNT / NO. OFMICRO-ORGANISM RECOVERED)*1 Remark:最近，美国药典（USP）发布了重大调整，原第61章“微生物限量测试”被拆分成两部分，即第61章“非灭菌产品中微生物测试：微生物计数检测”和第62章“非灭菌产品中微生物测试：特定微生物检测”。
USP微生物试验说明
美國藥典微生物試驗說明Essentials of USP Microbiological Testing研討會大綱I.基礎微生物學II.良好微生物實驗室規範III.藥典協同之改變IV.IV.滅菌滅菌滅菌與無菌保證與無菌保證V.微生物方法之確效微生物學研究微小生命形式的生物學分支研究微小生命形式的生物學分支。
典型的微小生命形式是單細胞的生命形式的微小生命形式是單細胞的生命形式，，也包括非常少也包括非常少量量的多細胞生物體 新陳代謝基本需求能量(如光、硫、一氧化碳或氨一氧化碳或氨))碳、氮、鈣、磷、硫、鎂、鉀和鈉 水(即使真菌也需要0.6 Aw 以上的游以上的游離離水)分類學生物環境多樣性嗜低溫菌嗜中溫菌嗜高溫菌生物環境多樣性嗜酸性菌嗜中性菌嗜鹼性菌依DNA在細胞中的情況可將細胞分為兩大類：真核細胞Eukaryotic cells原核細胞Prokaryotic cells原核生物Prokaryotic cells大部分細菌對人體無害如: 乳酸菌但, 也有微生物會致病細菌(分2界) 古細菌 真細菌原核生物革原核生物革蘭蘭氏分類氏分類法法Hans C.J. Gram –丹麥細菌學家(1853-1938).發現發現了了細胞學上的染色和染色技術細胞學上的染色和染色技術（（革蘭氏染色染色），），），用於區分細菌的分用於區分細菌的分用於區分細菌的分類類學組群學組群。
脂多糖(相對耐熱)如果進入人體，能導致發燒、白血球減少、腹瀉、休克（熱原Pyrogen）(內毒素Endotoxin)革蘭氏陽性結構革蘭氏陰性結構什麼是芽孢?在惡劣惡劣的環境條件下產生的有再生能的環境條件下產生的有再生能的環境條件下產生的有再生能力力的細胞或細胞群的細胞或細胞群。
特徵特徵：：–厚壁–耐惡劣惡劣環境環境–非常緩慢的代謝速非常緩慢的代謝速度度分4界原生動物 動物植物真菌真菌-特徵皆為化學異異營菌皆為化學具強大的酵素 (腐生或寄生腐生或寄生) ) ) 具強大的酵素pH5））酸性的生活環境（（pH5 比細菌比細菌更更酸性的生活環境高鹽、、高糖環境中生長高鹽黴菌和蕈是多細胞酵母是單細胞新陳代謝Metabolism 依據分解代謝是否能夠使用O2為什麼了解微生物對新陳代謝的需求很重要？為的是想培養微生物生長更為的是防止微生物生長USP微生物相關務必遵守章節<51> 防腐效力/Antimicrobial Preservatives –Effectiveness耐受力力測試<55> 生物指示劑–耐受Biological Indicators –Resistance Performance Tests微生物計數數試驗非無菌產品的微生物檢驗：：微生物計<61> 非無菌產品的微生物檢驗Microbiological Examination of Nonsterile Products:Microbial Enumeration Tests<62> 特定菌的微生物檢查/ Microbiological Proceduresfor Absence of Specified Microorganisms<71> 無菌試驗/ Sterility Tests<85> 細菌內毒素試驗Bacterial Endotoxins TestUSP微生物相關章節建議遵循<1035> 滅菌生物指示劑<1072> 消毒劑與殺菌劑<1111> 非無菌產品的微生物評估<1112> 水活性應用<1116> 清淨室和其他管制環境的微生物評估<1117> 微生物實驗室規範 <1207> 無菌產品包裝–完整性評估 <1209> 滅菌–化學和物理化學指示劑，及綜合指示劑<1211> 滅菌與無菌保證<1222> 最終滅菌藥品–參數放行 <1223> 微生物方法確效<1227> 藥物的微生物回收率確效 <1231> 製藥用水<2021> 微生物計數試驗–營養和膳食補充劑<2022> 特定菌的微生物檢查–營養和膳食補充劑<2023> 非無菌營養和膳食補充劑的微生物評估EP & USP & JP 藥典方法的國際協合International Harmonization of Pharmacopoeia時限–現行的EP 只維持到2008年12月31日–USP 將維持至2009年4月影響行適用性試驗並需重新進行–各藥廠將必需提早因應,並需重新進批產品來來測試其一致性.( Suitability Test),以至少3 批產品此協合後的方法不不僅在產品( non-sterile)的稀釋液此協合後的方法及預試驗,生長試驗上有改變,在部份培養基的組成有所改變,甚至新增一些檢驗項目與培養基,在有些品管菌株及接種量量都有改變品管菌株及接種微生物限量(USP <61> & EP 2.6.12) Microbial Enumeration TestTAMC= Total aerobic microbial count (on TSA, incl. fungi)TYMC= Total combined yeast/mould count (on Sab.4%-Dextrose Agar, incl. bacteria)特定微生物USP <62> & EP 2.6.13 Tests for Specific Microorganisms目前–Escherichia coli–Salmonella–Pseudomonasaeruginosa–Staphylococcusaureus 協調後–Escherichia coli–Salmonella–Pseudomonas aeruginosa–Staphylococcus aureus–Clostridia 產芽孢梭菌–Bile-tolerant Gram-negative bacteria 耐膽鹽革耐膽鹽革蘭蘭氏陰性菌–Candida albicans白色白色念念珠菌Test for Escherichia coli:Presence/Absence (Current USP Method)Test for Escherichia coli:Presence/Absence (Harmonized Method)<1112> 水活性應用水活性是水活性是什什麼?–產品中水的蒸氣壓P 與相同溫與相同溫度度下純水中的蒸氣壓Po 的比的比率率。
微生物检测方法-USP
<61>非无菌产品微生物检查：微生物计数检查简介：下述方法能够对在有氧条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数。
该检查主要是为了确定某种物质或剂型是否符合既定的微生物质量标准。
当以此为目的时，按照下面给出的规定进行，包括所需的样品数量以及按照下文规定的要求对结果进行描述。
此方法不适用于用活微生物作为活性成分的产品。
若使用了其他的微生物程序，包括自动方法，则应提供其等同于药典方法的证明。
一般程序为了避免外来微生物的影响，必须在设定的条件下进行微生物检查。
为避免此污染所采取的预防措施必须不影响所要进行检查的微生物。
如果待测样品具有抗微生物活性，则在可能的情况下，移除或中和这种抗微生物活性。
如果因此而是用了钝化剂，则必须证明其有效性及对微生物无毒性。
如果在处理样品时使用了表面活性剂，必须证明其对微生物无毒性及与证明其所使用的钝化剂的兼容性。
计数方法用薄膜过滤法和平皿计数法。
最大机率法（MPN）一般来说最不准确的微生物计数方法。
但是对于生物负荷非常小的确定的产品来说可能是最适合的方法。
对检查方法的选择是基于像产品的本质和微生物的限度这样一些因素。
所选择的方法必须能够用足够的样品来判断出其是否符合标准规定。
必须证明所选择的方法的适用性。
生长促进试验、计数方法的适用性和阴性对照一般原则必须证明检测方法能够从携带微生物的样品中检测出此微生物。
如果在检测过程中有了改变或会影响检测结果的产品的改变，则必须证明其适用性。
测试菌株的准备用标准化的测试菌株的稳定混悬液或用下述规定的方法准备测试菌株。
使用菌种培养维护技术（菌种系统），以使从原始主菌株中移除的用于接种的微生物不大于5个片段。
按照表1中所描述的方法分别对细菌和真菌的测试菌株进行培养。
用PH 7.0 的氯化钠-蛋白胨缓冲液或PH 7.2 磷酸盐缓冲液来配制测试混悬液；制备A. brasiliensis 孢子混悬液，可加入0.05%的聚山梨酯80。
在2小时内使用该混悬液或如果在2°－8°储存则在24小时内使用。
USP-51抗菌效力测试(完整资料).doc
【最新整理，下载后即可编辑】51ANTIMICROBIAL EFFECTIVENESS TESTING抗菌的效力测试Antimicrobial preservatives are substances added to nonsterile dosage forms toprotect them from microbiological growth or from microorganisms that areintroduced inadvertently during or subsequent to the manufacturing process. Inthe case of sterile articles packaged in multiple-dose containers, antimicrobialpreservatives are added to inhibit the growth of microorganisms that may beintroduced from repeatedly withdrawing individual doses.抗菌防腐剂是实际被添加到有菌的剂量配方里的物质，使他们不受微生物滋长或是被无意中引进到生产过程中的微生物侵害。
在无菌包装多剂量配方的容器里，抗菌防腐剂被添加用来抑制由重复添加单剂量所引进的微生物的滋长。
Antimicrobial preservatives should not be used as a substitute for goodmanufacturing practices or solely to reduce the viable microbial population of anonsterile product or control the presterilization bioburden of multidoseformulations during manufacturing. Antimicrobial preservatives in compendialdosage forms meet the requirements for Added Substancesunder Ingredients and Processesin the General Notices.抗菌防腐剂不应被作为在良好生产操作中的替代方式使用，或仅是用来减少一个有菌产品的微生物群数量，或是在生产时控制多剂量的微生物量。
哪里可以做微生物测试microbiological USP6162USP51
USP51 Limit requirement (for toy): 细菌 (Staphylococcus aureus/ Escherichia coli / Pseudomonas aeruginosa) 14 天细菌减少≥2.0 LOG (99%) 28 天不再繁殖 真菌 (Candida albicans /Aspergillus niger)? 14 天 和28= LOG10 (INITIAL COUNT / NO. OF MICRO-ORGANISM RECOVERED) *1 Remark: 最 近，美国药典（USP）发布了重大调整，原第61章“微生物限量测试” 被拆分成两部分，即第61章“非灭菌产品中微生物测试：微生物计数检 测”和第62章“非灭菌产品中微生物测试：特定微生物检测”。调整后 的两章（请参见下表），同时出口欧美的客户其测试成本将大大节约。 新USP61+62章节将于2009年5月1日生效。
USP61+62不断更新中。。
微生物测试microbiological limitsUSP616251
微生物测试USP51 和USP61＋62 玩具需作微生物测试的材料： 用于玩具中的化妆品、液体、糊状物、油 灰（putties)、凝胶 和 粉末 （艺术品材料，如粉笔、蜡笔、墨水等除外） 1. USP微生物限量测试*1 - 测试目的: 检验材料本身受微生物污染的情况 （也即微生物洁净度情况） - USP包括以下六个微生物测试： (1) Total aerobic microbial Count 菌落总数 (定量） (2) Mould and Yeast Count 霉 菌和酵母菌数 (定量） (3) Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 (定性） (4) Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌（定性） (5) Salmonella 沙门氏 菌 （定性） (6) Escherichia Coli 大肠杆菌 （定性）
各国药典微生物方法对比
各国药典微生物方法对比本篇文章旨在比较各国药典中微生物检测方法的不同之处。
微生物检测对于保证药品的质量和安全至关重要，各国药典都提供了相应的指导和标准。
然而，由于各国的文化、法律和技术差异，各国的药典在微生物检测方法上存在一定的差异。
以下将以中括号内的内容为主题，详细介绍各国药典中微生物方法对比。
[美国药典（USP）微生物方法]美国药典（USP）是全球最主要的药典之一，其微生物检测方法有着广泛的应用。
USP推荐的微生物方法主要基于美国食品药品监督管理局（FDA）的要求，主要包括细菌计数、限度测试和特定微生物检测。
其方法的特点在于简单易行、结果可靠且易于验证。
其中，细菌计数方法主要采用菲斯特计数法或冷凝液计数法。
而在限度测试方面，则主要采用的方法是逐级稀释、涂布法和培养法。
USP还明确规定了一些特定微生物的检测方法，如大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌等，其检测方法主要依赖于PCR技术和传统的培养法。
[欧洲药典（Ph. Eur.）微生物方法]欧洲药典（Ph. Eur.）是欧洲地区药典的统一标准，其微生物方法与美国药典存在一定的差异。
Ph. Eur.对微生物检测也有着详细的规定，包括细菌计数、限度测试和特定微生物检测。
在细菌计数方面，Ph. Eur.主要采用薄膜过滤法或蔗糖凝胶法。
而在限度测试方面，Ph. Eur.则主要采用稀释平板法、滚珠法和过滤膜方法。
与USP 不同的是，Ph. Eur.也明确规定了一些特定微生物的检测方法，如霉菌和酵母菌等。
这些检测方法涵盖了PCR技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）和传统的培养法。
[中国药典（ChP）微生物方法]中国药典（ChP）是中国主要的药典标准，其微生物方法也存在一定的特点。
ChP的微生物检测主要分为总菌落计数、限度测试和特定微生物检测。
与美欧药典不同的是，ChP对微生物检测方法的规定相对较为简洁。
在细菌计数方面，ChP主要采用的方法有薄膜过滤法、落下法和滚珠法等。
美国药典微生物检测精要
美国药典微生物检测精要引言微生物检测在药品生产中起着至关重要的作用。
药品的微生物污染可能对患者的健康造成严重威胁。
为了确保药品的安全性、可靠性和有效性，美国药典（United States Pharmacopeia, USP）制定了一系列用于微生物检测的指南和标准。
本文将概述美国药典微生物检测的精要内容。
检测方法目视法目视法是最简单、最常用的微生物检测方法之一。
该方法通过对样品进行肉眼观察，检验人员可以检测到样品中是否存在明显的微生物污染。
目视法的优点是操作简单，不需要特殊的设备和试剂，适用于多种药品和原料的微生物检测。
然而，目视法存在主观性和局限性，无法检测到微生物的低水平污染。
营养物质法营养物质法是一种常用的培养基法。
该方法以适宜的培养基为基础，通过对样品进行培养，利用微生物的生长特性来检测样品中是否存在微生物污染。
营养物质法可以检测到微生物的低水平污染，并且可以进一步鉴定和计数微生物。
然而，营养物质法需要一定的培养时间，且存在一定的培养基选择性和适应性的局限性。
生物化学法生物化学法是一种通过检测微生物代谢产物来判断样品中是否存在微生物污染的方法。
该方法利用微生物的代谢反应，检测样品中的特定代谢产物的存在与否。
生物化学法可以快速、准确地检测微生物污染，并且不受培养基选择性和适应性的限制。
然而，生物化学法需要特定的试剂和设备，并且对检测人员的技术要求较高。
检测标准美国药典对药品的微生物检测制定了一系列的标准和要求。
这些标准主要包括微生物限度试验、总微生物数试验、鉴别试验和特定微生物试验等。
微生物限度试验微生物限度试验旨在确定样品中存在的微生物数量的限度。
该试验要求将样品接种在适当的培养基中，经过一定的培养时间后，观察并计数生长的微生物数量。
美国药典针对不同类型的药品和原料制定了不同的微生物限度指标，以确保药品的微生物安全性。
总微生物数试验总微生物数试验用于确定样品中所有可培养的微生物的数量。
该试验要求将样品接种在适当的培养基中，经过一定的培养时间后，观察并计数生长的微生物数量。
美国药典微生物试验说明
更為的是防止微生物生長
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USP微生物相關
務必遵守章節
<51> 防腐效力/Antimicrobial Preservatives – Effectiveness <55> 生物指示劑–耐受力測試
Biological Indicators – Resistance Performance Tests <61> 非無菌產品的微生物檢驗：微生物計數試驗
而是通過適當滅菌工程或無菌充填過程確效， 並嚴格執行製程規定（cGMP）才可得到的。
–環境的微生物控制 –原料和組成分的微生物控制 –所有微生物控制的整合 –人員的微生物控制 –製程的微生物控制 –最終成品的微生物控制
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無菌的概率possibility
每批產品的無菌性是根據概率推定的，即有產 品被污染的可能性也是微乎其微的
通常被接受的無菌保證度（SAL）是 10-6 的 微生物存活率或更低，即保證經滅菌的物品或 劑型中有活的微生物的可能性不超過百萬分之 一。
我們能做到比 10-6 更好嗎?
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滅菌前的生物負荷
對熱不安定的物品，透過了解滅菌前物品的生物負 荷，經過 適當的時間週期，及足夠的滅菌前產品批 數，才足以建立滅 菌製程。
<2023> 非無菌營養和膳食補充劑 的微生物評估
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EP & USP & JP 藥典方法的國際協合
International Harmonization of Pharmacopoeia
United States Pharmacopeia
European Pharmacopoeia
USP微生物限度检查 中文
USP微生物限度检查中文61）微生物限度检测（MICROBIAL LIMIT TESTS）此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。
如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。
在样品检测过程中须进行无菌操作。
若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱内培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。
准备实验 (Preparatory Testing)本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。
因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。
方法如下：将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于10-3稀释的微生物培养物，加1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。
相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序：（1）增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者（2）中和一定数量的干扰因子；或者（3）结合（1）、（2）得出适当条件，使接种物得以生长。
以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用：大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysorbate 20, 4.0%）。
微生物计数检查法USP61中英对照版
非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法USP61中英对照版<61> MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: MICROBIAL ENUMENRATION TESTS非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法INTRODUCTION 导言The tests described hereafter will allow quantitative enumeration of mesophilic bacteria and fungi that may grow under aerobic conditions.以下所描述的这些检测将使得对在有氧的条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数成为可能。
The tests are designed primarily to determine whether a substance or preparation complies with an established specification for microbiological quality. When used for such purposes, follow the instructions given below, including the number of samples to be taken, and interpret the results as stated below.这些检测主要设计用于测定一种物质或制备品是否符合已确立的微生物质量标准。
当用于此类目的时，需遵照以下所给的说明，包括待取样品的数量，并且按照下面所述解释结果。
The methods are not applicable to products containing viable microorganisms as active ingredients.这些方法不适用于以活菌作为活性成分的产品。
USP 61 微生物限度检测——计数法
Use the Membrane Filtration method or one of the Plate-Count Methods, as directed. The Most-
Probable-Number (MPN) Method is generally the least accurate method for microbial counts; however, for certain product groups with very low bioburden, it may be the most appropriate method.
2. GENERAL PROCEDURES通用规程
Carry out the determination under conditions designed to avoid extrinsic microbial contamination of the product to be examined. The precautions taken to avoid contamination must be such that they do not affect any microorganisms that are to be revealed in the test. 微生物计数环境应能防止外来微生物对供试品的污染。防止污染的措施不能影响供试品中微生物 的检出。
<61>MICONSTERILE PRODUCTS: MICROBIAL ENUMERATION TESTS
非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
1. INTRODUCTION导言
The tests described hereafter will allow quantitative enumeration of mesophilic bacteria and fungi that may grow under aerobic conditions. 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和霉菌的定量计数。
美国药典微生物试验说明
實驗數據判讀
不合格原因
–實驗室錯誤 –產品失敗 無論上述何種情況，管理階層必須立即被告知
OOS調查
–數據偏離的程度(嚴重性？) –實驗室環境 –取樣方法 –物料的特性(存活的污染微生物？) –留樣的評估
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<1211>滅菌和無菌保證
每批產品不是通過<71>無菌試驗就可得到無 菌保證。
<1209> 滅菌–化學和物理化學指 示劑，及綜合指示劑
<1211> 滅菌與無菌保證
<1222> 最終滅菌藥品–參數放行
<1223> 微生物方法確效
<1227> 藥物的微生物回收率確效
<1231> 製藥用水
<2021> 微生物計數試驗–營養和 膳食補充劑
<2022> 特定菌的微生物檢查–營 養和膳食補充劑
Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests <62> 特定菌的微生物檢查 / Microbiological Procedures for Absence of Specified Microorganisms <71> 無菌試驗 / Sterility Tests <85> 細菌內毒素試驗 Bacterial Endotoxins Test
劑型 (投藥途徑) 口服固體 口服液劑
外用或鼻腔用藥
陰道用藥
直腸用藥 藥品主成分&賦型劑
<61> TAMC [CFU/g or CFU/ml]
USP61
非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法USP61中英对照版<61> MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: MICROBIALENUMENRATION TESTS非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法INTRODUCTION 导言The tests described hereafter will allow quantitative enumeration of mesophilic bacteria and fungi that may grow under aerobic conditions.以下所描述的这些检测将使得对在有氧的条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数成为可能。
The tests are designed primarily to determine whether a substance or preparation complies with an established specification for microbiological quality. When used for such purposes, follow the instructions given below, including the number of samples to be taken, and interpret the results as stated below.这些检测主要设计用于测定一种物质或制备品是否符合已确立的微生物质量标准。
当用于此类目的时，需遵照以下所给的说明，包括待取样品的数量，并且按照下面所述解释结果。
The methods are not applicable to products containing viable microorganisms as active ingredients.这些方法不适用于以活菌作为活性成分的产品。
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美国微生物测试USP51 和USP61＋62 介绍(2009/12/22 18:31)
美国微生物测试USP51 和USP61＋62 介绍
玩具需作微生物测试的材料：
用于玩具中的化妆品、液体、糊状物、油灰（putties)、凝胶和粉末（艺术品材料，如粉笔、蜡笔、墨水等除外）
1. USP<61>微生物限量测试*1
- 测试目的: 检验材料本身受微生物污染的情况（也即微生物洁净度情况）
- USP<61>包括以下六个微生物测试：
(1) Total aerobic microbial Count 菌落总数(定量）
(2) Mould and Yeast Count 霉菌和酵母菌数(定量）
(3) Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌(定性）
(4) Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌（定性）
(5) Salmonella 沙门氏菌（定性）
(6) Escherichia Coli 大肠杆菌（定性）
USP61 Limit Requirement:
(1)+(2) < 5000 CFU/g ( if the material was used in baby product or eye area product, the limit should be < 500 CFU/g)
(3)/(4)/(5)/(6) should be “ABSENT per 10g “
2. USP<51>防腐剂抗菌效力测试
- 测试目的
为防止的材料在保存过程中或使用过程中发生微生物*现象，须在材料中加入适量的防腐剂，而防腐剂效果如何则需通过USP《51》测试进行评价。
-USP<51>测试简述：
将标准指定编号的以下菌种接入样品，然后在第7 天，第14 天，第28 天分别检验每种菌的存活数量，存活数量越少，其防腐剂抗菌效果越好。
Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌
Escherichia coli 大肠杆菌
Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌
Candida albicans 白色念株菌
Aspergillus niger 黑曲霉
USP51 Limit requirement (for toy):
细菌(Staphylococcus aureus/ Escherichia coli / Pseudomonas aeruginosa)
14 天细菌减少≥2.0 LOG (99%)
28 天不再繁殖
真菌(Candida albicans /Aspergillus niger)
14 天和28 天不再繁殖
Remark: LOG REDUCTION = LOG10 (INITIAL COUNT / NO. OF
MICRO-ORGANISM RECOVERED)
*1 Remark:
最近，美国药典（USP）发布了重大调整，原第61章“微生物限量测试”被拆分成两部分，即第61章“非灭菌产品中微生物测试：微生物计数检测”和第62章“非灭菌产品中微生物测试：特定微生物检测”。
调整后的两章（请参见下表），同时出口欧美的客户其测试成本将大大节约。
新USP61+62章节将于2009年5月1日生效。
USP 61章：
非灭菌产品中微生物测试：微生物计数测试微生物
(1) 好氧微生物总数Total Aerobic Microbial count
(2) 酵母菌和霉菌总数Total Yeasts and Molds count
USP 62章：
非灭菌产品中微生物测试：特定微生物检测
(3) 耐胆汁酸革兰氏阴性菌Bile-tolerant Gram-negative bacteria（新!）
(4) 埃希氏大肠杆菌Escherichia Coli
(5) 沙门氏菌Salmonella
(6) 铜绿假单胞菌Pseudomonas Aeruginosa
(7) 金黄色葡萄球菌Staphylococcus Aureus
(8) 梭菌Clostridia（新!）
(9) 白色假丝酵母菌Candida albicans（新!）。