实验二血红蛋白测定白细胞计数实验文稿演示
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实验二血红蛋白测定白细胞计数实验
实验二血红蛋白测定白细胞计数实验一、实验目的本实验旨在通过血红蛋白测定方法，对白细胞计数进行实验，并掌握相关的操作技巧和实验原理。
二、实验原理血红蛋白测定是通过草酸亚铁试剂与血红蛋白中的铁离子发生络合反应，形成血红蛋白-草酸亚铁络合物，进而测定出血红蛋白的含量。
通过对样品的均匀悬浮液进行比色测定，得出血红蛋白的浓度，从而实现对白细胞计数的目的。
三、实验仪器和试剂1. 仪器：血常规分析仪2. 试剂：0.2%草酸亚铁溶液、双氯加乙酰胺稀溶液、磷酸盐缓冲液、去离子水、血样四、实验步骤1. 操作前准备：(1) 调节血常规分析仪为透射光测定模式，设置好相应的波长。
(2) 准备好0.2%草酸亚铁溶液、双氯加乙酰胺稀溶液、磷酸盐缓冲液。
(3) 使用去离子水将血常规分析仪的反应池冲洗干净。
2. 样品制备：(1) 取一定量的血样，并避免气泡的产生。
(2) 将血样与双氯加乙酰胺稀溶液按比例混合，使其完全混合均匀。
(3) 用磷酸盐缓冲液稀释血样，制成不同浓度的样品液。
3. 实验操作：(1) 将制备好的不同浓度的样品液分别注入预先准备好的试管中。
(2) 同时，在一组试管中加入适量的去离子水作为空白对照。
(3) 将试管放入血常规分析仪中，按照仪器要求进行测量。
4. 记录结果：(1) 通过血常规分析仪测得各样品的吸光度数值。
(2) 画出吸光度与样品浓度的标准曲线。
(3) 根据标准曲线，计算出待测样品的血红蛋白浓度。
五、实验数据处理根据血红蛋白浓度的计算公式，将实验测得的吸光度数值代入，计算出不同样品的血红蛋白浓度。
通过对标准曲线的拟合，进一步计算出待测样品的白细胞计数。
六、实验注意事项1. 操作过程中避免气泡的产生，以免影响实验结果的准确性。
2. 严格按照实验步骤进行操作，确保实验的可重复性和准确性。
3. 注意安全操作，避免试剂的误食或皮肤接触。
4. 注意保持实验环境的清洁，避免实验样品的污染和交叉污染的发生。
七、实验结果与讨论根据实验数据计算得出的血红蛋白浓度及白细胞计数可以用于评估人体的健康状况。
实验室检验优质课件PPT
手册》
其余：时玉声 等主编《兽医 临诊检验手册》
2021/02/01
10
红细胞（RBC）计数
❖是将一定量的供检血液经一定倍数稀释 后，计数一定容积内的红细胞数，并换 算为每 1 L 血液中的红细胞数。
❖主要用于贫血性疾病的判定。
2021/02/01
11
❖ 计数法：用显微镜计数法
1. 红细胞稀释液
2. 试剂：0.1mol/L盐酸溶液：浓盐酸8.5ml加蒸馏 水至1000ml。
3. 操作：
1) 于测定管内加入0.1mol/L盐酸溶液至百分刻度 “20“或重量刻度“2“处。
2021/02/01
8
2) 用沙利氏吸血管吸取被检血液至“20“刻度处， 并用棉球或纱布拭去管壁外血液。迅速将沙利 氏吸血管插入测定管底部盐酸液中，缓慢挤出 血液，再吸取上部清液，反复冲洗沙利氏吸血 管2~3次，并混匀，静置10min。
2021/02/01
• 如病畜精神稍差，口粘膜轻度干涩，皮肤弹性实验 持续时间2~4S，血浆蛋白8％~9%，PCV达50％，可 提示为轻度脱水。
• 病畜精神差，喜卧少动，口粘膜干涩，皮肤弹性实 验持续时间6~10S，血浆蛋白9％~10%，PCV达5口粘膜极干涩，皮肤弹 性实验持续时间20~45S，血浆蛋白12g％，PCV达60
1) 0.9%氯化钠溶液
2) 赫姆氏液配法为氯化钠1g，氯化汞0.5g，结晶硫 酸钠5g，加蒸馏水溶解至总量200ml，再加石炭 酸品红溶液数滴，借以与白细胞稀释液区别。
2. 计数方法
1) 血液稀释：取清洁、干燥小试管一支，加红细胞 稀释液4ml，而后用沙利氏吸血管吸取供检血液 至10刻度(10μ l)处，用棉球或纱布拭去管壁外血 液，将沙利氏吸血管插入小试管内稀释液中，挤 出血液，并吸洗2~3次，混匀。血液被稀释400倍 （因家畜红细胞比人多，200倍稀释不易计数）。
其余：时玉声 等主编《兽医 临诊检验手册》
2021/02/01
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红细胞（RBC）计数
❖是将一定量的供检血液经一定倍数稀释 后，计数一定容积内的红细胞数，并换 算为每 1 L 血液中的红细胞数。
❖主要用于贫血性疾病的判定。
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❖ 计数法：用显微镜计数法
1. 红细胞稀释液
2. 试剂：0.1mol/L盐酸溶液：浓盐酸8.5ml加蒸馏 水至1000ml。
3. 操作：
1) 于测定管内加入0.1mol/L盐酸溶液至百分刻度 “20“或重量刻度“2“处。
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2) 用沙利氏吸血管吸取被检血液至“20“刻度处， 并用棉球或纱布拭去管壁外血液。迅速将沙利 氏吸血管插入测定管底部盐酸液中，缓慢挤出 血液，再吸取上部清液，反复冲洗沙利氏吸血 管2~3次，并混匀，静置10min。
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• 如病畜精神稍差，口粘膜轻度干涩，皮肤弹性实验 持续时间2~4S，血浆蛋白8％~9%，PCV达50％，可 提示为轻度脱水。
• 病畜精神差，喜卧少动，口粘膜干涩，皮肤弹性实 验持续时间6~10S，血浆蛋白9％~10%，PCV达5口粘膜极干涩，皮肤弹 性实验持续时间20~45S，血浆蛋白12g％，PCV达60
1) 0.9%氯化钠溶液
2) 赫姆氏液配法为氯化钠1g，氯化汞0.5g，结晶硫 酸钠5g，加蒸馏水溶解至总量200ml，再加石炭 酸品红溶液数滴，借以与白细胞稀释液区别。
2. 计数方法
1) 血液稀释：取清洁、干燥小试管一支，加红细胞 稀释液4ml，而后用沙利氏吸血管吸取供检血液 至10刻度(10μ l)处，用棉球或纱布拭去管壁外血 液，将沙利氏吸血管插入小试管内稀释液中，挤 出血液，并吸洗2~3次，混匀。血液被稀释400倍 （因家畜红细胞比人多，200倍稀释不易计数）。
血红蛋白测定课件ppt
血红蛋白测定
测定方法：氰化高铁血红蛋白法
由国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐，并经 WHO确认为血红蛋白测定的参考方法。 主要优点：操作简单，结果稳定可靠，试剂容易保存， 能测定除SHb以外的所有血红蛋白，并易于建立质控 。
1. 原理 除SHb外，Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白， 再与CN-结合，生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白 HiCN，吸收峰为λ540nm毫摩尔消光系数为 44 L· mmol-1 · cm -1 。因此根据标本的吸光度，即可 求得血红蛋白总量（不含SHb）。
(2).HiCN标准液比色法测定 a.标准曲线绘制和k值计算。以标准品血红蛋白含量为横坐 标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。或求出换算常 数K.K=血红蛋白含量之和/吸光度之和。 b.标本的血红蛋白转化和比色同直接定量测定，得到标本 的A. c.通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用k值来计 算血红蛋白的浓度，即Hb(g/L)=K*A
红细胞计数和血红蛋 白测定的临床意义
红细胞与血红蛋白的增减不一定成比例，如大细胞 性贫血患者的RBC往往较Hb减少显著；而小细胞性贫血 患者则相反。 一、红细胞和血红蛋白增高 标准：成年男性RBC＞6.0 ×1012/L, Hb ＞170g/L 成年女性RBC＞5.5 ×1012/L, Hb ＞160g/L
二、红细胞和血红蛋白减低 1. 生理性贫血 妊娠中晚期：血容量增加，血液稀释 6个月至2岁：血容量增加速度大于RBC与Hb的生成 有些老年人：摄取、利用营养和造血功能减退 2. 病理性贫血 红细胞的丢失、破坏，造血原料不足，骨髓造血功能 障碍等原因 分级：轻度贫血：成年男性＜ 120g/L 成年女性＜ 100g/L 中度贫血：Hb ＜ 90g/L 重度贫血：Hb ＜ 60g/L 极度贫血：Hb ＜ 30g/L
测定方法：氰化高铁血红蛋白法
由国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐，并经 WHO确认为血红蛋白测定的参考方法。 主要优点：操作简单，结果稳定可靠，试剂容易保存， 能测定除SHb以外的所有血红蛋白，并易于建立质控 。
1. 原理 除SHb外，Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白， 再与CN-结合，生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白 HiCN，吸收峰为λ540nm毫摩尔消光系数为 44 L· mmol-1 · cm -1 。因此根据标本的吸光度，即可 求得血红蛋白总量（不含SHb）。
(2).HiCN标准液比色法测定 a.标准曲线绘制和k值计算。以标准品血红蛋白含量为横坐 标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。或求出换算常 数K.K=血红蛋白含量之和/吸光度之和。 b.标本的血红蛋白转化和比色同直接定量测定，得到标本 的A. c.通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用k值来计 算血红蛋白的浓度，即Hb(g/L)=K*A
红细胞计数和血红蛋 白测定的临床意义
红细胞与血红蛋白的增减不一定成比例，如大细胞 性贫血患者的RBC往往较Hb减少显著；而小细胞性贫血 患者则相反。 一、红细胞和血红蛋白增高 标准：成年男性RBC＞6.0 ×1012/L, Hb ＞170g/L 成年女性RBC＞5.5 ×1012/L, Hb ＞160g/L
二、红细胞和血红蛋白减低 1. 生理性贫血 妊娠中晚期：血容量增加，血液稀释 6个月至2岁：血容量增加速度大于RBC与Hb的生成 有些老年人：摄取、利用营养和造血功能减退 2. 病理性贫血 红细胞的丢失、破坏，造血原料不足，骨髓造血功能 障碍等原因 分级：轻度贫血：成年男性＜ 120g/L 成年女性＜ 100g/L 中度贫血：Hb ＜ 90g/L 重度贫血：Hb ＜ 60g/L 极度贫血：Hb ＜ 30g/L
实验三红细胞计数、血红蛋白测定及白细胞分类计数上课用
〔四〕结果报告
1. A/44 /1 ×64458/1000 ×251=A ×367.7 〔g/L〕
2..标准曲线法测定参考标准品的A值，以Hb 浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制通过零 点的曲线，查表。
3. K值法: K=Hb总和 /A值总和 Hb浓度= A ×K
〔五〕质量保证 1.丙球蛋白异常，白细胞异常增多，SHb疾病
时，测定液体发生浑浊，可增加NaCl，消 除影响。 2.废液的处理 每升加次氯酸钠35ml，敞开过夜。 CN-氧化成CO2和N2，或水解CO32-和NH4+。 3、对分光光度计相关参数的校正。
〔六〕方法学评价
该方法结果稳定可靠，操作简便，为标准 方法，但有一定毒性。除了该方法外，还 有SDS-Hb法和沙利氏法等，但SDS本身质 量差异大，摩尔消光系数、标准液有待研 究，为次选方法。沙利氏法误差大，已经 被根本淘汰。
6、血细胞中的各种有机物质特别是蛋白质对染色环境中氢离子浓 度十分敏感。染色环境偏酸，增强伊红着色，红细胞和嗜酸粒细 胞偏红，细胞核呈淡蓝或不着色，染色环境偏碱，增强天青着色， 所有细胞呈灰蓝色，颗粒深蓝。
白细胞分类计数
实验原理： 血细胞经涂片、固定和染色后，根据不同的形态和染色特征可
将各种白细胞区分开来，计数一定数量的白细胞并进展分类、汇 总，可计算出各种白细胞所占的百分比。 实验步骤： 1、血涂片的制备与染色。 2、镜检：使用低倍镜浏览全片，观察细胞的着色、分布情况。高 倍镜检查有无异常或外来细胞。最后选择血涂片体尾交界处染色 良好、分布均匀的区域，滴香柏油一滴，在油镜下按一定顺序对 视野中所见的白细胞进展分类。要防止重复计数或漏计，不可主 观选择视野。共计数100-200个白细胞。计数时还要观察血细 胞的形态、分布、染色情况，并注意有无寄生虫及其他异常改变。 3、结果汇总：统计各类白细胞所占百分率，并计算绝对值。
白细胞计数实验报告
白细胞计数实验报告
白细胞是我们体内重要的免疫细胞，它们可以抵御病毒、细菌等外来入侵，保持身体健康。
因此，白细胞计数是一项十分重要的检查项目，可用于检测我们身体免疫力的水平。
实验目的：
本次实验的目的是测量白细胞计数，进而了解免疫力水平。
实验原理：
白细胞计数是一项常见的临床检查，其原理是利用荧光显微镜或血球计数板，对染色的外周血片进行计数，得出医学意义上的白细胞计数。
实验步骤：
1.将血液样本收集在抗凝剂管中，并摇匀。
2.将样本均匀涂在干燥的玻璃片上，并晾干。
3.制作Wright染液，将玻璃片在染液中浸泡5-10分，取出后用纯净水冲洗干净。
4.将玻璃片擦干，并放入显微镜下观察。
通过计数，在镜头下
将白细胞进行计数，并用计算器记录下细胞数量。
实验结果：
经过检测，共计算出600个白细胞，平均白细胞数为100个/ul。
按照临床标准，该白细胞计数在正常范围内，说明免疫力水平良好。
实验结论：
通过本次实验，我们了解到白细胞计数是一项非常重要的生物
学指标。
合理、准确的白细胞计数可以反映我们身体的免疫状况，外来威胁时能够及时发现问题。
这项检查可以为我们的健康提供
可靠保障。
白细胞计数实用ppt课件
白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。
超过上述标准者支为不持合堤格 上。 2稀拇释指液和和中（采指血4夹量）住要吸充准头确计中，下充数端分，池混示匀 指，盖充将住液吸小适头量试小，孔无管，不拇轻足、、微中外指溢振轻和微荡气挤泡2压，m排细出i胞n适分，量布空均立气匀；即。 以一次性微量吸管吸取 白细胞数量过高混时，匀可后加大的稀释白倍细数，胞白细悬胞液数量，过低充时入，可计计数数8个池大方内格。的白静细胞置数2或-取3m双倍in血，量。使细胞沉于计
微量吸管的使用
n 1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气； n 2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、
中指轻微挤压排出适量空气； n 3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血
液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有 气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指； n 4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确）， 轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度； n 5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血 液，用上清液冲洗管内余血23次，轻摇试管混匀； n 6拔出微量吸管弃入污物桶。
1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。 白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10％。 注意事项
弓形移动 n 中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区
2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气； ⊙稀释液，小试管、计数板 ⊙ WBC过少 （2）采血、稀释 用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试 管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等 其溶血。
超过上述标准者支为不持合堤格 上。 2稀拇释指液和和中（采指血4夹量）住要吸充准头确计中，下充数端分，池混示匀 指，盖充将住液吸小适头量试小，孔无管，不拇轻足、、微中外指溢振轻和微荡气挤泡2压，m排细出i胞n适分，量布空均立气匀；即。 以一次性微量吸管吸取 白细胞数量过高混时，匀可后加大的稀释白倍细数，胞白细悬胞液数量，过低充时入，可计计数数8个池大方内格。的白静细胞置数2或-取3m双倍in血，量。使细胞沉于计
微量吸管的使用
n 1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气； n 2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、
中指轻微挤压排出适量空气； n 3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血
液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有 气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指； n 4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确）， 轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度； n 5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血 液，用上清液冲洗管内余血23次，轻摇试管混匀； n 6拔出微量吸管弃入污物桶。
1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。 白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10％。 注意事项
弓形移动 n 中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区
2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气； ⊙稀释液，小试管、计数板 ⊙ WBC过少 （2）采血、稀释 用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试 管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等 其溶血。
白细胞计数实验课件(1)
用显微镜计数法计数白细胞的质量控制，除严格遵守 操作规程，掌握操作计数外，至今尚无完善精确的质控方 法，目前应用的方法有： 【1】经验质控：
将白细胞计数结果与血涂片中的分布情况相对照，看 两者是否相符，不符者，说明计数结果可能存在偏差，应 予复查。
【1】经验质控：白细胞总数与白细胞分布的关系
白细胞总数
白细胞计数
（ white blood cell count ，WBC ）
目的
• 掌握显微镜法白细胞计数的原理及方法
原理
用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，将 稀释液充入血细胞计数板，在显微镜下计数 一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血 液中的白细胞数量。
器材：一次性微量吸管、乳胶吸头、试管、棉球、 2ml移液管，显微镜、改良Neubauer计数板
×100%
评价: 白细胞≤ 4×109/L者， 白细胞在（4.1~14.9）×109/L 白细胞≥15 ×109/L者 超过上述标准者为不合格
RCS＜30% RCS＜20% RCS＜15%
参考值
成人 ： （4~10）×109/L 新生儿： （15~20）×109/L 6月-2岁：（11~12）×109/L
试剂：白细胞稀释液 ：2%冰乙酸溶液中加入 10g/L结晶紫（或亚甲蓝）3滴。
标本：末梢血或静脉血
操作
1. 加稀释液：吸取白细胞稀释液0.38ml于试管中。 2. 吸取血液： 用微量吸管吸取末梢血（或抗凝静脉血） 20ul ，
擦去管外余血。将吸管插入含白细胞稀释液试管的底部，轻 轻放血，并吸取上层稀释液洗管 2～3次 。
3. 混匀： 将试管中血液与稀释液充分混匀，直至变成深棕色。
4. 准备计数板：用拭净血细胞计数板和盖玻片，采用推压法从 计数板下缘向前平有组织液，应擦去。不能过度挤压，以免组织液混 入引起血液凝固或造成计数结果不准确。
将白细胞计数结果与血涂片中的分布情况相对照，看 两者是否相符，不符者，说明计数结果可能存在偏差，应 予复查。
【1】经验质控：白细胞总数与白细胞分布的关系
白细胞总数
白细胞计数
（ white blood cell count ，WBC ）
目的
• 掌握显微镜法白细胞计数的原理及方法
原理
用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，将 稀释液充入血细胞计数板，在显微镜下计数 一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血 液中的白细胞数量。
器材：一次性微量吸管、乳胶吸头、试管、棉球、 2ml移液管，显微镜、改良Neubauer计数板
×100%
评价: 白细胞≤ 4×109/L者， 白细胞在（4.1~14.9）×109/L 白细胞≥15 ×109/L者 超过上述标准者为不合格
RCS＜30% RCS＜20% RCS＜15%
参考值
成人 ： （4~10）×109/L 新生儿： （15~20）×109/L 6月-2岁：（11~12）×109/L
试剂：白细胞稀释液 ：2%冰乙酸溶液中加入 10g/L结晶紫（或亚甲蓝）3滴。
标本：末梢血或静脉血
操作
1. 加稀释液：吸取白细胞稀释液0.38ml于试管中。 2. 吸取血液： 用微量吸管吸取末梢血（或抗凝静脉血） 20ul ，
擦去管外余血。将吸管插入含白细胞稀释液试管的底部，轻 轻放血，并吸取上层稀释液洗管 2～3次 。
3. 混匀： 将试管中血液与稀释液充分混匀，直至变成深棕色。
4. 准备计数板：用拭净血细胞计数板和盖玻片，采用推压法从 计数板下缘向前平有组织液，应擦去。不能过度挤压，以免组织液混 入引起血液凝固或造成计数结果不准确。
红细胞计数、白细胞计数实验报告
一.实验原理用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。
用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。
将稀释的血液注入血红细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。
二.实验内容与步骤1、红细胞计数（1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板（2）试剂：RBC稀释液①Hayem稀释液：NaCI, Na2SO4, HgCI2②枸橼酸钠甲醛盐水溶液：枸橼酸钠，甲醛，NaCI③生理盐水或含1%P醛的生理盐水：仅在急诊或无上述两种稀释液时临时使用（3）标本：外周血或抗凝血（EDTA抗凝）（4）操作步骤：①小试管加RBC ffi释液2.0 ml。
②采血，取血10卩l。
③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立即混匀。
④混匀后充入计数室，静置3~5 min，高倍镜下计数（用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数。
）2 、白细胞计数（1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板（2）试剂：WB（稀释液：冰醋酸3.0 mL （破坏红细胞）；蒸馏水97.0 mL ；亚甲蓝（染色）（3）标本：新鲜全血或末稍血（4）操作步骤：①小试管加WB（稀释液0.38 mL。
②采血，微量吸管取血20卩L。
③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立即混匀。
④混匀后充入计数室，静置2~3 min，低倍镜下计数（用低倍镜计数出计数池内四角大方格中的白细胞总数。
）三.实验结果RBC/L405/100 1012 4.05 1012LWBC/L 112/20 109 5.6 109L实验结果：RBC 4.05 X 1012/ LWBC : 5.6 X 109/ L四.讨论1、从实验结果与正常范围比较，实验结果没有超出正常范围，提示被采血者无病理或生理性异常。
红细胞检查ppt课件
(3.8～5.3)×1012/L （120～180）g/L （34～48）% （80～100）fL （27～32）pg
（320～360）g/L
＜15%
19
概述
造血微环境
Epo
骨髓造血干细胞----红系祖细胞----原红细胞----
早幼--中幼----晚幼----网织红细胞----成熟红细胞
20
①细胞的逐渐成熟； ②细胞数量的增加；
贫血的分类
重视红细胞 形态学检查
形态学类型 MCV(fl)
正常细胞性 80~100
贫血
小细胞低色 <80
素性贫血
单纯小细胞 <80
性贫血
大细胞性贫 >100
血
MCH(pg) MCHC
病因
27~34
320~360 急性失血，再障，骨髓病
性贫血，溶贫
<27
<320
缺铁性贫血，慢性失血，
珠蛋白合成障碍性贫血
5
二 、实验诊断的临床应用
1、为疾病的诊断和鉴别诊断提供实验室筛检或 确诊 的客观依据。
2、为疾病治疗方案的制定及疗效监测和预后判断提 供依据。
3、为预防疾病及健康保健提供检测依据。 4、为科学研究提供医学检验基本数据，基本检验方
法和操作技能。
6
三 、学习实验诊断的要求
①掌握常见实验检查的参考值和临床意义。 ②能进行检验结果的分析，并将分析的结论用于疾
.
实验诊断学
1
2
（一）实验诊断定义和主要内容
1 实验诊断学定义： 实验诊断学（clinical examination）是运用物理学、
化学、生物学、免疫学、遗传学及分子生物学等技术，对 人体的血液、骨髓、体液、分泌物、排泄物及脱落细胞等 进行检验，以获得疾病的病因、病理变化、器官功能状态 等资料的一门科学。
（320～360）g/L
＜15%
19
概述
造血微环境
Epo
骨髓造血干细胞----红系祖细胞----原红细胞----
早幼--中幼----晚幼----网织红细胞----成熟红细胞
20
①细胞的逐渐成熟； ②细胞数量的增加；
贫血的分类
重视红细胞 形态学检查
形态学类型 MCV(fl)
正常细胞性 80~100
贫血
小细胞低色 <80
素性贫血
单纯小细胞 <80
性贫血
大细胞性贫 >100
血
MCH(pg) MCHC
病因
27~34
320~360 急性失血，再障，骨髓病
性贫血，溶贫
<27
<320
缺铁性贫血，慢性失血，
珠蛋白合成障碍性贫血
5
二 、实验诊断的临床应用
1、为疾病的诊断和鉴别诊断提供实验室筛检或 确诊 的客观依据。
2、为疾病治疗方案的制定及疗效监测和预后判断提 供依据。
3、为预防疾病及健康保健提供检测依据。 4、为科学研究提供医学检验基本数据，基本检验方
法和操作技能。
6
三 、学习实验诊断的要求
①掌握常见实验检查的参考值和临床意义。 ②能进行检验结果的分析，并将分析的结论用于疾
.
实验诊断学
1
2
（一）实验诊断定义和主要内容
1 实验诊断学定义： 实验诊断学（clinical examination）是运用物理学、
化学、生物学、免疫学、遗传学及分子生物学等技术，对 人体的血液、骨髓、体液、分泌物、排泄物及脱落细胞等 进行检验，以获得疾病的病因、病理变化、器官功能状态 等资料的一门科学。
实验诊断学PPT诊断血液学课件
①红细胞生成减少。②红细胞破坏过多。③急、慢 性失血。
贫血的病因和发病机制分类
红细胞生成减少
1.干细胞增殖分化障碍，包括再生障碍性贫血，纯红再障，MDS等。 2.造血物质缺乏或利用障碍，包括缺铁性贫血，铁粒幼细胞性贫血，和巨幼红 细胞贫血。 3.骨髓被异常组织侵害，如骨髓病性贫血（白血病、骨髓瘤、癌转移、骨髓纤 维化等引起的贫血为骨髓病性贫血）。 4.骨髓造血功能低下，如继发性贫血（肾病、肝病、感染性疾病、内分泌疾病 等，这些疾病均可抑制骨髓增殖，尤其对红系抑制等）。
＞170g/L ＞160g/L
红细胞及血红蛋白的增多因素
1.RBC/Hb相对性增多： 由于RBC增高和Plasma↓
严重呕吐、腹泻、大量出汗、大面积烧伤、慢性肾 上腺皮质功能减退、甲亢危象糖尿病酮症酸中毒 等。
2. RBC/Hb绝对性增多：
根据有无病因可分为原发性和继发性。
原发性包括真性红细胞增多症（PV）和原发性单纯 红细胞增多症。前者为造血干细胞异常克隆所致 的骨髓增殖性疾病（MPD）。后者为单独红系增生。
ESR↑ ③组织损随晚期肿瘤出现 ，明显增快提示肿瘤转移。
⑤高球蛋白血症： ESR↑可＞100/h，见于 MM和巨球蛋白血症，肾病综合征时清蛋白 丢失，球蛋白相对增高。
⑥其他 :贫血，<90g/L时， ESR↑伴有胆固 醇↑疾病， ESR↑
MCH = Hb / RB参考值：成人 26~33 pg ，儿童35~42 pg
2.红细胞平均参数
平均红细胞血红蛋白浓度（mean cell
hemoglobin concentration,MCHC）指单位容积
红细胞的平均血红蛋白浓度
以g/L为单位
MCHC = Hb / HCT 参考值：成人320~360g/L，儿童320~360g/L
贫血的病因和发病机制分类
红细胞生成减少
1.干细胞增殖分化障碍，包括再生障碍性贫血，纯红再障，MDS等。 2.造血物质缺乏或利用障碍，包括缺铁性贫血，铁粒幼细胞性贫血，和巨幼红 细胞贫血。 3.骨髓被异常组织侵害，如骨髓病性贫血（白血病、骨髓瘤、癌转移、骨髓纤 维化等引起的贫血为骨髓病性贫血）。 4.骨髓造血功能低下，如继发性贫血（肾病、肝病、感染性疾病、内分泌疾病 等，这些疾病均可抑制骨髓增殖，尤其对红系抑制等）。
＞170g/L ＞160g/L
红细胞及血红蛋白的增多因素
1.RBC/Hb相对性增多： 由于RBC增高和Plasma↓
严重呕吐、腹泻、大量出汗、大面积烧伤、慢性肾 上腺皮质功能减退、甲亢危象糖尿病酮症酸中毒 等。
2. RBC/Hb绝对性增多：
根据有无病因可分为原发性和继发性。
原发性包括真性红细胞增多症（PV）和原发性单纯 红细胞增多症。前者为造血干细胞异常克隆所致 的骨髓增殖性疾病（MPD）。后者为单独红系增生。
ESR↑ ③组织损随晚期肿瘤出现 ，明显增快提示肿瘤转移。
⑤高球蛋白血症： ESR↑可＞100/h，见于 MM和巨球蛋白血症，肾病综合征时清蛋白 丢失，球蛋白相对增高。
⑥其他 :贫血，<90g/L时， ESR↑伴有胆固 醇↑疾病， ESR↑
MCH = Hb / RB参考值：成人 26~33 pg ，儿童35~42 pg
2.红细胞平均参数
平均红细胞血红蛋白浓度（mean cell
hemoglobin concentration,MCHC）指单位容积
红细胞的平均血红蛋白浓度
以g/L为单位
MCHC = Hb / HCT 参考值：成人320~360g/L，儿童320~360g/L
实验五红细胞计数、hb测定幻灯片PPT
〔三〕血红蛋白测定方法及评价
血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的总浓
度。
氰化高铁血红蛋白〔HiCN〕测定法
十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白
目前常用方法
〔SLS-H法
叠氮血红蛋白〔HiN3〕测定法
溴代十六烷基三甲胺〔CTAB〕血红蛋白测定法
血细胞分析仪法
氰化高铁血红蛋白〔HiCN〕测定法
血红蛋白及其衍生物
氧合Hb〔Hb02〕：呈鲜红色； 复原Hb〔Hbred〕：呈暗红色； 碳氧Hb〔HbCO〕：呈樱桃红色； 高铁Hb〔Hi〕：呈红褐色； 氰化高铁Hb〔HiCN〕：呈棕红色，540nm处有一较
宽吸收峰。
血红蛋白测定方法及评价
血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的总浓 度。 氰化高铁血红蛋白〔HiCN〕测定法 十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白 〔SLS-Hb〕测定法 碱羟血红蛋白〔AHD575〕测定法 叠氮血红蛋白〔HiN3〕测定法 溴代十六烷基三甲胺〔CTAB〕血红蛋白测定法 血细胞分析仪法
③普通生理盐水或加1%甲醛的 生理盐水
急时用。
参考值
成年男性 成年女性
新生儿
红细胞数（×1012/L） 4.0～5.5 3.5～5.0 6.0～7.0
白细胞的影响
一般情况下，实际影响较小，可忽略不计； 白细胞过高者〔WBC＞100×109/L〕，应校正。 实际红细胞数=RBC－WBC； 高倍镜下注意识别，计数时勿将白细胞计入。
实验五
一、红细胞显微镜计数 二、血红蛋白测定
一、红细胞计数
红细胞计数 指测定单位体积血液中红细 胞的数量。
显微镜计数法 血细胞分析仪法
〔三〕红细胞计数方法
红细胞计数 指测定单位体积血液中红细 胞的数量。
动物生理实验-白细胞计数ppt课件
细胞悬液滴入计数室的液量要适当。过多则混悬液溢出并流入两侧 深槽内，使盖玻片浮起，导致计数不准。滴入量过少则不能充满计 数室，反复充液可能造成计数室内有气泡，影响计数室体积，此时 应洗净计数板，干燥后重做。
计数室内细胞分布要均匀。如果发现各大格的白细胞数目相差8个以 上，表示血细胞分布不均匀，应重做。
所用吸管、试管、计数板等必须十分干净，各种稀释液严防混入杂 质或有细菌生长。计数板等用过之后，必须立即洗涤干净。
2018/11/20
10
【实验报告书写要求】
实验一 XXXX
1.
题目
一、实验目的 XXXX
2.
3. 4. 5. 6. 7.
实验目的
实验原理 材料设备 方法步骤 实验结果 思考题
二、实验原理 XXXX 三、材料设备 XXXX ……
8
【方法步骤】
正常值范围： 成人为（4.0~10.0）×109个/L
2018/11/20
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【注意事项】
采血部位消毒后，涂一层凡士林可以使血液成滴便于吸收。 吸血时将吸管下端开口放入血液中部，尽量利用毛细管现象使血液 自动进入吸管内。血液加入试管后，须充分摇匀，动作要轻，避免 出现气泡和破坏血细胞。
•
• •
4到14岁为8× 109个/L
成人为（4.0-10.0）×109个/L
临床意义： 增多：常见于急性细菌性感染、严
为免疫细胞，存在于血液、淋巴及血管、淋巴管以外
的组织中。白细胞在人体中担负许多重任，它具有吞 噬异物并产生抗体的作用，机体伤病的损伤治愈能力， 抗御病原体入侵的能力，对疾病的免疫抵抗力等。人 身体有不适时，经常会通过白细胞数量的显著变化而 表现出来。因此到医院看病很多情况下需要化验血常 规，血常规检查中最多用途的就是白细胞计数和分类。
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【材料】
1．器材：采血针、试管、刻度吸管 、微量吸管、 吸头、分光光度计。
2．试剂：氰化高铁血红蛋白(HiCN) 转化液 （文齐液）
实验内容
【实验方法】
（1） 取血20μl，加入5ml转化液中充分混匀，静置5min。
（2） 分光光度计，波长540n m处，光径（比色杯内径）1.0厘米 ，HiC N 转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）。
实验内容
分光光度计使用： 1．打开722分光光度计的开关，将比色 池的盖子打开，通电20分钟使仪器预热 。 以722型分光光度计为例，其基本的操 作步骤为： 2．将波长旋至测定的波长。
3．将空白液、 校准液或待测液 放入比色池，将 空白液置于光路 中。
4．将开关置 于T位，打开 比色池盖子， 用光量粗调和 光量细调调节 T为0.0，关上 比色池盖子， 调节T为100.0。
（3） 计算： Hb（g／L）＝测定管吸光度×64458／44000 ×251＝测定管吸
光度×367.7。
注：式中：64458是国际公认的血红蛋白分子量，64458mg/L即为 1mmol/L血红蛋白的物质浓度，除以1000换算为g/L。 44是1mmol/L血红蛋白在1.00cm光径，540nm条件下的吸光 系数。251是稀释倍数。
5．将开关置于A，用消光调零调节A为0.0。
6．将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸 光度（A）。
实验内容二 白细胞测定
【原理】用白细胞稀释液将血液稀释一定 的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释 的血液注入血细胞计数板，在显微镜下 计数一定体积内的白细胞数，经换算即 可求出每升血液中的白细胞数量。
2当外周血出现大量有核红细胞时应予以校正： 白细胞校正值/L=（100/100+有核红细胞） ×校正前白细胞数
【结果】
将你计算出的结果如实的填写在实验 报告册上。
en
【意义】
白细胞有吞噬，产生抗体以及参与细胞免 疫等功能。它在血液中的含量较稳定， 当外来刺激因子作用于机体时，造血器 官可出现兴奋和抑制两种不同的反应， 表现为白细胞计数的增多或减少，这对 疾病的诊断、鉴别诊断及病情的观察都 有一定的价值
实验二血红蛋白测定白细胞计数实验文稿演示
实验内容一 血红蛋白测定
【原理】
在血红蛋白转化液中，除硫化血红蛋白外，其 余血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红 蛋白，再与氰离子（CN-）结合，生成稳定的 复合物氰化高铁血红蛋白（hemoglobin cyanide，HiCN）。棕红色的氰化高铁血红蛋 白在波长540nm处有吸收峰，可用校准的高 精度分光光度计进行直接测定，或用HiCN参 考液进行比色法测ห้องสมุดไป่ตู้，根据标本的吸光度即可 求出血红蛋白浓度。
实验报告
将你计算出的血红蛋白浓度及白细 胞计数的结果如实的填写在实验报 告册上。如实验失败积极总结原因 ，写出实验小结。
思考题
1白细胞的正常参考值范围？ 2如何充液才能使白细胞在计数池内分布均匀？ 3白细胞计算公式中为什么乘以0.05？ 4显微镜白细胞计数时，常见的技术误差的原因 有哪些？ 5白细胞的生理变化有哪些？
0.1mm deep
White cell count (WBC)
1mm
1mm
Counting area
Counting ruler
2．试剂
白细胞稀释液： 冰乙酸
2.0ml
10g/L亚甲蓝 数滴
蒸馏水
加至100ml
【实验方法】
1、加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中。
2、用微量吸管吸取20ul血液。
【材料】
1．器材
（1）采血针、微量吸管、吸头、试管、5ml吸管
（2）普通光学显微镜
（3）计数板、盖玻片（专用）
改良Neubauer计数板，有两个计数池。每个计数 池分为九个大方格。每个大方格的边长为1mm，高度 为0.1mm，面积为1mm2,容积为0.1mm3。四角的 每个大方格被分为16个中方格；中央大方格被分为25 个中方格，而每个中方格又被分为16个小方格。
5、计算 白细胞/L= N/4×10 ×20×106/L = N×0.05×109/L
式中：N 为4个大方格内白细胞总数 ÷4 为1大方格（即0.1ul）内白细胞记数 ×10 1个大方格的容积为0.1ul，换算成1ul ×20 血液的稀释倍数 ×106 将ul换算成L
注意事项：
1计数池内细胞分布每大方格数不能超过四大 格均值的+10%，白细胞数小于3×109/L 时要扩大计数区域或重新加倍取血计数；白细 胞大于15×109/L时，要增加稀释倍数，重 新计数。
擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部， 轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管3 次（注意每次不能冲浑稀释液），混匀。
3、用微量吸管或玻璃棒取混匀的细胞悬液1滴， 充入计数池与盖片的缝隙中，静置2-3min， 使白细胞下沉。
4、低倍镜计数四角4个大方格内白细胞总数，数 细胞规则“数上不数下，数左不数右”。
White cell count (WBC)
Counting Chamber’ s structure
The area of counting is 1mm2 and the depth of it is 0.1mm,so the volume is 0.1ul.(1mm3=1uL)
coverslip