实验二血红蛋白测定白细胞计数实验文稿演示
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（3） 计算： Hb（g／L）＝测定管吸光度×64458／44000 ×251＝测定管吸
光度×367.7。
注：式中：64458是国际公认的血红蛋白分子量，64458mg/L即为 1mmol/L血红蛋白的物质浓度，除以1000换算为g/L。 44是1mmol/L血红蛋白在1.00cm光径，540nm条件下的吸光 系数。251是稀释倍数。
2当外周血出现大量有核红细胞时应予以校正： 白细胞校正值/L=（100/100+有核红细胞） ×校正前白细胞数
【结果】
将你计算出的结果如实的填写在实验 报告册上。
en
【意义】
白细胞有吞噬，产生抗体以及参与细胞免 疫等功能。它在血液中的含量较稳定， 当外来刺激因子作用于机体时，造血器 官可出现兴奋和抑制两种不同的反应， 表现为白细胞计数的增多或减少，这对 疾病的诊断、鉴别诊断及病情的观察都 有一定的价值
5、计算 白细胞/L= N/4×10 ×20×106/L = N×0.05×109/L
式中：N 为4个大方格内白细胞总数 ÷4 为1大方格（即0.1ul）内白细胞记数 ×10 1个大方格的容积为0.1ul，换算成1ul ×20 血液的稀释倍数 ×106 将ul换算成L
注意事项：
1计数池内细胞分布每大方格数不能超过四大 格均值的+10%，白细胞数小于3×109/L 时要扩大计数区域或重新加倍取血计数；白细 胞大于15×109/L时，要增加稀释倍数，重 新计数。
0.1mm deep
White cell count (WBC)
1mm
1mm
Counting area
Counting ruler
2．试剂
白细胞稀释液： 冰乙酸
2.0ml
10g/L亚甲蓝 数滴
蒸馏水
加至100ml
【实验方法】
1、加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中。
2、用微量吸管吸取20ul血液。
White cell count (WBC)
Counting Chamber’ s structure
The area of counting is 1mm2 and the depth of it is 0.1mm,so the volume is 0.1ul.(1mm3=1uL)
coverslip
实验报告
将你计算出的血红蛋白浓度及白细 胞计数的结果如实的填写在实验报 告册上。如实验失败积极总结原因 ，写出实验小结。
思考题
1白细胞的正常参考值范围？ 2如何充液才能使白细胞在计数池内分布均匀？ 3白细胞计算公式中为什么乘以0.05？ 4显微镜白细胞计数时，常见的技术误差的原因 有哪些？ 5白细胞的生理变化有哪些？
5．将开关置于A，用消光调零调节A为0.0。
6．将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸 光度（A）。
实验内容二 白细胞测定
【原理】用白细胞稀释液将血液稀释一定 的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释 的血液注入血细胞计数板，在显微镜下 计数一定体积内的白细胞数，经换算即 可求出每升血液中的白细胞数量。
实验内容
分光光度计使用： 1．打开722分光光度计的开关，将比色 池的盖子打开，通电20分钟使仪器预热 。 以722型分光光度计为例，其基本的操 作步骤为： 2．将波长旋至测定的波长。
Leabharlann Baidu
3．将空白液、 校准液或待测液 放入比色池，将 空白液置于光路 中。
4．将开关置 于T位，打开 比色池盖子， 用光量粗调和 光量细调调节 T为0.0，关上 比色池盖子， 调节T为100.0。
【材料】
1．器材
（1）采血针、微量吸管、吸头、试管、5ml吸管
（2）普通光学显微镜
（3）计数板、盖玻片（专用）
改良Neubauer计数板，有两个计数池。每个计数 池分为九个大方格。每个大方格的边长为1mm，高度 为0.1mm，面积为1mm2,容积为0.1mm3。四角的 每个大方格被分为16个中方格；中央大方格被分为25 个中方格，而每个中方格又被分为16个小方格。
实验二血红蛋白测定白细胞计数实验文稿演示
实验内容一 血红蛋白测定
【原理】
在血红蛋白转化液中，除硫化血红蛋白外，其 余血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红 蛋白，再与氰离子（CN-）结合，生成稳定的 复合物氰化高铁血红蛋白（hemoglobin cyanide，HiCN）。棕红色的氰化高铁血红蛋 白在波长540nm处有吸收峰，可用校准的高 精度分光光度计进行直接测定，或用HiCN参 考液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可 求出血红蛋白浓度。
擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部， 轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管3 次（注意每次不能冲浑稀释液），混匀。
3、用微量吸管或玻璃棒取混匀的细胞悬液1滴， 充入计数池与盖片的缝隙中，静置2-3min， 使白细胞下沉。
4、低倍镜计数四角4个大方格内白细胞总数，数 细胞规则“数上不数下，数左不数右”。
【材料】
1．器材：采血针、试管、刻度吸管 、微量吸管、 吸头、分光光度计。
2．试剂：氰化高铁血红蛋白(HiCN) 转化液 （文齐液）
实验内容
【实验方法】
（1） 取血20μl，加入5ml转化液中充分混匀，静置5min。
（2） 分光光度计，波长540n m处，光径（比色杯内径）1.0厘米 ，HiC N 转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）。
光度×367.7。
注：式中：64458是国际公认的血红蛋白分子量，64458mg/L即为 1mmol/L血红蛋白的物质浓度，除以1000换算为g/L。 44是1mmol/L血红蛋白在1.00cm光径，540nm条件下的吸光 系数。251是稀释倍数。
2当外周血出现大量有核红细胞时应予以校正： 白细胞校正值/L=（100/100+有核红细胞） ×校正前白细胞数
【结果】
将你计算出的结果如实的填写在实验 报告册上。
en
【意义】
白细胞有吞噬，产生抗体以及参与细胞免 疫等功能。它在血液中的含量较稳定， 当外来刺激因子作用于机体时，造血器 官可出现兴奋和抑制两种不同的反应， 表现为白细胞计数的增多或减少，这对 疾病的诊断、鉴别诊断及病情的观察都 有一定的价值
5、计算 白细胞/L= N/4×10 ×20×106/L = N×0.05×109/L
式中：N 为4个大方格内白细胞总数 ÷4 为1大方格（即0.1ul）内白细胞记数 ×10 1个大方格的容积为0.1ul，换算成1ul ×20 血液的稀释倍数 ×106 将ul换算成L
注意事项：
1计数池内细胞分布每大方格数不能超过四大 格均值的+10%，白细胞数小于3×109/L 时要扩大计数区域或重新加倍取血计数；白细 胞大于15×109/L时，要增加稀释倍数，重 新计数。
0.1mm deep
White cell count (WBC)
1mm
1mm
Counting area
Counting ruler
2．试剂
白细胞稀释液： 冰乙酸
2.0ml
10g/L亚甲蓝 数滴
蒸馏水
加至100ml
【实验方法】
1、加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中。
2、用微量吸管吸取20ul血液。
White cell count (WBC)
Counting Chamber’ s structure
The area of counting is 1mm2 and the depth of it is 0.1mm,so the volume is 0.1ul.(1mm3=1uL)
coverslip
实验报告
将你计算出的血红蛋白浓度及白细 胞计数的结果如实的填写在实验报 告册上。如实验失败积极总结原因 ，写出实验小结。
思考题
1白细胞的正常参考值范围？ 2如何充液才能使白细胞在计数池内分布均匀？ 3白细胞计算公式中为什么乘以0.05？ 4显微镜白细胞计数时，常见的技术误差的原因 有哪些？ 5白细胞的生理变化有哪些？
5．将开关置于A，用消光调零调节A为0.0。
6．将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸 光度（A）。
实验内容二 白细胞测定
【原理】用白细胞稀释液将血液稀释一定 的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释 的血液注入血细胞计数板，在显微镜下 计数一定体积内的白细胞数，经换算即 可求出每升血液中的白细胞数量。
实验内容
分光光度计使用： 1．打开722分光光度计的开关，将比色 池的盖子打开，通电20分钟使仪器预热 。 以722型分光光度计为例，其基本的操 作步骤为： 2．将波长旋至测定的波长。
Leabharlann Baidu
3．将空白液、 校准液或待测液 放入比色池，将 空白液置于光路 中。
4．将开关置 于T位，打开 比色池盖子， 用光量粗调和 光量细调调节 T为0.0，关上 比色池盖子， 调节T为100.0。
【材料】
1．器材
（1）采血针、微量吸管、吸头、试管、5ml吸管
（2）普通光学显微镜
（3）计数板、盖玻片（专用）
改良Neubauer计数板，有两个计数池。每个计数 池分为九个大方格。每个大方格的边长为1mm，高度 为0.1mm，面积为1mm2,容积为0.1mm3。四角的 每个大方格被分为16个中方格；中央大方格被分为25 个中方格，而每个中方格又被分为16个小方格。
实验二血红蛋白测定白细胞计数实验文稿演示
实验内容一 血红蛋白测定
【原理】
在血红蛋白转化液中，除硫化血红蛋白外，其 余血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红 蛋白，再与氰离子（CN-）结合，生成稳定的 复合物氰化高铁血红蛋白（hemoglobin cyanide，HiCN）。棕红色的氰化高铁血红蛋 白在波长540nm处有吸收峰，可用校准的高 精度分光光度计进行直接测定，或用HiCN参 考液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可 求出血红蛋白浓度。
擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部， 轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管3 次（注意每次不能冲浑稀释液），混匀。
3、用微量吸管或玻璃棒取混匀的细胞悬液1滴， 充入计数池与盖片的缝隙中，静置2-3min， 使白细胞下沉。
4、低倍镜计数四角4个大方格内白细胞总数，数 细胞规则“数上不数下，数左不数右”。
【材料】
1．器材：采血针、试管、刻度吸管 、微量吸管、 吸头、分光光度计。
2．试剂：氰化高铁血红蛋白(HiCN) 转化液 （文齐液）
实验内容
【实验方法】
（1） 取血20μl，加入5ml转化液中充分混匀，静置5min。
（2） 分光光度计，波长540n m处，光径（比色杯内径）1.0厘米 ，HiC N 转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）。