HER2免疫组化检测的质量控制
乳腺癌标本处理SOP
乳腺癌改良根治术标本处理SOP1.目的：及时、充分固定组织标本，保证HER2免疫组化和FISH检测质量。
2.操作者：乳腺科手术医师和病理科负责取材的技术员、病理医师3.步骤3.1乳腺切除标本的及时固定：手术医生必须在标本离体后半小时内将标本放入10％中性福尔马林液体固定（要求液体量至少为切除标本的4-5倍），或者立刻将标本送至病理科（新鲜标本按《冰冻送检乳腺肿瘤切除标本处理SOP》进行处理）。
3.2标本签收：病理科负责接收标本技术员核对患者基本信息、标本类型与送检单描述是否相符后给予签收（包括签收人姓名及时间）；3.3标本取材3.3.1取材医师在取材前再进行一次核对，先登记、编号再取材，记录者应对申请单上的各项内容逐一加以叙述。
如有不一致的情况，应及时与送检手术医师联系，在取得联系前不宜进行取材。
若对标本的病变、解剖关系或送检要求等有不明确之处，可邀请手术医师共同参与取材。
3.3.2确定标本的方位，将标本安放在切板上，皮瓣面向上，以腋窝脂肪作为乳房外侧的标志，确定乳腺标本的四个象限。
大体摄像（要求照片充分反应标本原始情况，包括正反面，背景干净，有标尺）。
3.3.3观察外表形态特征，触扪标本内有无肿块或结节。
3.3.4将标本底部朝上，第一刀需经乳头中央底部（但保持皮肤完好），在与肿瘤中心的连线处用长利刀切开乳房，再以第一刀平面的两侧每隔1cm作与第一刀平行的多个切面，顺序地展开薄片，并保持其方位，仔细检查每一薄片并新鲜取材。
如需固定过夜，用纱布分隔每一个切面，保证固定液足量。
3.3.5乳头及皮肤取材：在乳头基底部横切面取组织一块，乳头再平行纵切成4-5块全部取材。
皮肤如有病变则代表性取材。
3.3.6切缘取材：按解剖方位放好标本，内、外、上、下及基底部切缘各取一块。
3.3.7病变取材：先对病变处进行摄像，然后取材（要求照片充分反应病变情况，背景干净，有标尺）。
肿瘤取材按最大径为几厘米则至少取材几块，必要时多取材；3cm以下的肿瘤要求全部取材；其他四个象限分别检查并代表性取材。
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
该抗体着色为棕色 DAB 染色，定位于细胞膜。是一种半定量免疫组化分析方法，适用 于考虑接受曲妥单抗治疗患者的辅助评价方法。
人 HER2 基因（也称之为 ERBB2 或 NEU）编码蛋白通常称之为 HER2 或 p185HER2。 HER2 蛋白是一种膜受体酪氨酸激酶，与表皮生长因子受体（EGFR 或 HER1）具有同源性 (1-8)。HER2 蛋白通常由各种表皮细胞表达，是一种正常组织成分（8）。
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
胃癌胃镜活检标本HER-2检测中国专家共识2023版解读PPT课件
指导靶向治疗
HER-2阳性胃癌患者可接受针对HER2的靶向治疗，如曲妥珠单抗等，以 改善生存预后。
阴性结果处理建议
01
排除HER-2过表达
阴性结果表示胃癌细胞中HER-2蛋白表达水平较低或无表 达，可排除HER-2过表达的可能性。
THANKS
感谢观看
01
加强标作流程和结果判读标准，提高 HER-2检测的准确性和可靠性。
02
提高活检标本质量和 数量
通过改进活检技术、优化标本处理流 程等措施，提高活检标本的质量和数 量，为HER-2检测提供更加可靠的依 据。
03
加强临床医生培训和 教育
通过加强临床医生的培训和教育，提 高其对HER-2检测的认知水平和应用 能力，推动HER-2检测在临床实践中 的广泛应用。
胃癌胃镜活检标本HER-2检测中国 专家共识2023版解读
汇报人：xxx 2024-02-21
目录
• 引言 • HER-2基因与蛋白结构功能 • 胃癌胃镜活检标本采集与处理 • HER-2检测方法与技术 • 结果判读与临床意义 • 专家共识内容解读 • 挑战与展望
01
引言
背景与目的
胃癌是全球范围内发病率和死亡率较 高的恶性肿瘤之一，严重影响人类健 康。
新型检测技术将不断涌现
随着生物技术的不断发展，未来将会出现更加灵敏、特异、便捷的新型HER-2检测技术 ，为胃癌的精准治疗提供更加有力的支持。
HER-2检测将与免疫治疗等新型治疗手段相结合
未来HER-2检测将与免疫治疗等新型治疗手段相结合，为胃癌患者提供更加个性化的治 疗方案。
提高HER-2检测水平策略
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
说明
1×22 mL
过氧化物酶阻断剂。 3%的过氧化氢，含有15 mmol/L的叠氮钠（NaN3）。
1×12 mL
1×22 mL
兔抗人HER2多克隆抗体。 即用型亲和分离的抗体,保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 1%BSA, 酒 石黄(Tartrazin), 专利蓝V(Patentblue V), 15 mmol/L NaN3, pH 7.2溶液中。 免疫原：合成的HER2蛋白的C-末端（细胞质部分）片段部分，并偶联至血蓝蛋 白上。
2×22 mL
阴性质控试剂。
与HER2抗体等价蛋白浓度下的正常兔血清免疫球蛋白成分，保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3, pH 7.2，并含有1%BSA稳定剂的溶液 内。
1×1mL
DAB底物缓冲液。 50 mM咪唑, 1mM N, N'-乙基双 (2-[2-羟基苯基]甘氨酸) (EDHPA), 0.1%乙基苯基 聚乙二醇（Nonidet P-40）, 0.02% 过氧化氢, 0.01% 氯化苯二甲烃铵, pH 7.5。
【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
HER2的IHC判读和要点分析
>10%的浸润癌细胞呈现弱至中等强度、完整但不均匀的细 IHC 2+ 胞膜棕黄着色，或≤10%的浸润癌细胞呈现强且完整的细胞 （不确定） 膜棕褐着色 IHC 3+ （阳性） >10%的浸润癌细胞呈现强的（低倍镜下可见）、完整的细 胞膜棕褐着色
Wolff.JCO.2013.50.9984
乳腺癌HER2检测指南2014
修订后的活检样本肿瘤细胞中的细胞膜反应临界值
胃癌特异性评分标准并未规定活检样本肿瘤细胞中的细胞膜反应临界百分比
这是由于胃癌活检样本中 HER2 染色的高度异质性 如果至少五个细胞簇显示细胞膜 HER2 染色，则样本的分值应为 HER2 阳性
胃癌活检样本 HER2 IHC 3+ 染色
胃癌HER2检测IHC辅助判读方法
胃癌IHC染色范例：手术标本
IHC 3+ 染色范例
IHC 2+ 染色范例
IHC 1+ 染色范例
胃癌 IHC 染色范例：活检标本
IHC 3+ 染色范例
（经放大）
IHC 3+ 染色范例（经放大）
IHC 2+ 染色范例
IHC 2+ 染色范例（经放大）
乳腺癌 IHC 染色范例
乳腺癌标本中的 IHC 染色
肿瘤细胞组颗粒（非线性） 不明确膜染色
谢谢！
2
3
BC/GC IHC 判读要点分析
HER2检测在胃癌和乳腺癌中的不同
两者在组织病理学上的不同使得胃癌HER2的阳性判断标准需要修正
胃癌组织显示更多的 免疫组化染色显示腺管样排列的 胃癌肿瘤细胞显示不完全性（仅 基底和侧面）膜阳性
异质性
Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797 Rüschoff J, et al. Pathologe. 2010;31(3):208
乳腺癌免疫组化内容
乳腺癌免疫组化内容
一、标记物选择
在乳腺癌免疫组化实验中，通常会选择以下标记物：
1.ER（雌激素受体）：用于评估乳腺癌对激素治疗的反应性。
2.PR（孕激素受体）：与ER一起评估激素治疗的反应性。
3.HER2（人类表皮生长因子受体2）：用于评估乳腺癌的恶性程度和预测化疗效果。
4.Ki-67：反映肿瘤细胞的增殖活性。
5.p53：与肿瘤恶性程度和预后相关。
二、实验步骤
1.样本处理：将乳腺癌组织样本进行固定、脱水、透明、浸蜡等处理，以便进行免疫组化实验。
2.切片制备：将处理好的组织样本切成薄片，附着在载玻片上。
3.抗原修复：使用抗原修复液对组织切片进行加热，以暴露抗原并使其易于与抗体结合。
4.抗体孵育：将标记物抗体与组织切片混合，并在适宜温度下孵育一定时间，使抗体与抗原结合。
5.信号转化：使用酶或其他介质将抗原-抗体复合物转化为可见信号，以便在显微镜下观察。
6.染色观察：对组织切片进行染色，并在显微镜下观察标记物的表达情况。
7.结果分析：根据染色强度、阳性细胞比例等因素对结果进行分析，评估乳腺癌的生物学特性。
注意事项：
1.免疫组化实验需要使用特定的抗体，不同的抗体可能对不同的抗原具有特异性，因此选择合适的抗体非常重要。
2.实验过程中需要注意温度、时间和pH值等条件，以确保抗体与抗原的结合和信号转化的顺利进行。
3.免疫组化实验结果需要进行客观、准确的评估，避免出现假阳性或假阴性结果。
免疫组化检测ki-67、her-2、cd44、ck20在膀胱非浸润性乳头状尿路上皮癌
２．１ 低级别组和高级别组中 Ｋｉ６７、ＨＥＲ２、ＣＤ４４、 ＣＫ２０的表达 低级别组总病例数为 ４１８例，其中
·１３１０·
临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏห้องสมุดไป่ตู้ ２０１９Ｎｏｖ；３５（１１）
网络出版时间：２０１９－１１－１３１４：５７ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０１９１１１３．１４５６．０１０．ｈｔｍｌ
免疫 组 化 检 测 Ｋｉ６７、ＨＥＲ２、ＣＤ４４、ＣＫ２０在 膀 胱 非 浸 润性乳头状尿路上皮癌分级中的应用
接受日期：２０１９－０８－１２ 作者单位：上海交通大学医学院附属仁济医院病理科，上海 ２００１２７ 作者简介：夏 骏，男，医师。Ｅｍａｉｌ：ｓｃｈｅｄｕｌｅ５５＠ｈｏｔａｍａｉｌ．ｃｏｍ
刘 强，男，主任医师，通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｑｉａｎｇ＠ｒｅｎｊｉ． ｃｏｍ
路上皮肿瘤中，也不例外，而本实验主要探讨使用免 疫组化标记 Ｋｉ６７、ＨＥＲ２、ＣＤ４４、ＣＫ２０用于非浸润 性乳头状尿路上皮癌的分级有效性。
１ 材料与方法
１．１ 临床资料 收集 ２０１６年 ７月 １日 ～２０１８年 １２月 ３１日在上海交通大学医学院附属仁济医院诊 断为非浸润性乳头状尿路上皮肿瘤的病例（包括低 度恶性潜能尿路上皮乳头状肿瘤、低级别乳头状尿 路上皮癌、高级别乳头状尿路上皮癌）。所有 ＨＥ切 片均经两位病理医师诊断，其中分级明确组 ６４２例 （患者年龄 ２０～９１岁，平均 ６４岁），两位医师均诊 断为高级别乳头状尿路上皮癌者归于高级别组，合 计 ２２４例；两位医师均诊断为低级别乳头状尿路上 皮癌或低度恶性潜能尿路上皮乳头状肿瘤之一归为 低级别组，合计 ４１８例。另外，若两位医师至少有一 位诊断中出现 ＷＨＯⅡ级、局灶高级别或两位医师诊 断不一致者归为分级不确定组，将初发的行电切的 患者根据预后（５７例，患者年龄 ３１～９２岁，平均 ６５ 岁）分为高危组 ４７例和低危组 １０例，高危组是指患 者复发并且诊断为高级别或进展期病变。 １．２ 免疫组化 标本均经 １０％ 中性福尔马林固 定，常 规 石 蜡 包 埋，连 续 切 片，ＨＥ染 色，光 镜 下 观 察。采用免疫组化 ＥｎＶｉｓｉｏｎ法检测 Ｋｉ６７、ＨＥＲ２、 ＣＤ４４、ＣＫ２０的 表 达。ＨＥＲ２抗 体 购 自 罗 氏 公 司，
her2过表达标准
her2过表达标准关于HER2过表达标准的文章（1500-2000字）引言：HER2基因是一种与乳腺癌发生相关的重要基因，在许多乳腺癌患者中都会出现过表达的情况。
HER2过表达会导致肿瘤的恶性程度增加，并且预示着患者的预后可能较差。
因此，准确判断HER2过表达的标准对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义。
本文将从HER2过表达的定义、检测方法、相关标准和治疗策略等方面逐步解析。
一、HER2过表达的定义：HER2基因位于人体第17号染色体上，是一种编码成蛋白质的基因。
HER2（人体表皮生长因子受体2）是一种细胞膜上的受体蛋白质，参与调控乳腺细胞的生长和分化。
当HER2基因发生异常，出现拷贝数扩增或突变等情况时，会导致HER2过表达。
HER2过表达的乳腺癌细胞具有更强的增殖能力和侵袭能力，从而增加患者的复发风险和死亡率。
二、HER2过表达的检测方法：目前常用的HER2过表达检测方法主要有免疫组化（IHC）和原位杂交（ISH）两种。
1. 免疫组化（IHC）：免疫组化是通过对乳腺癌组织样本进行染色，检测HER2蛋白在肿瘤细胞膜上的表达情况。
根据IHC的染色结果，HER2过表达通常被分为0-3级。
IHC 0级表示无HER2表达，IHC 1+级表示低表达，IHC 2+级表示中等表达，IHC 3+级表示强烈表达。
2. 原位杂交（ISH）：原位杂交是通过对乳腺癌组织样本进行染色，检测HER2基因的扩增情况。
常用的ISH方法包括荧光原位杂交（FISH）和辣根过氧化物酶原位杂交（CISH）。
FISH技术利用荧光标记的探针与HER2基因发生结合，形成特定的荧光信号，从而判断HER2基因是否扩增。
CISH技术则使用酶标标记的DNA探针，通过染色反应形成可见的颜色信号，评估HER2基因扩增的情况。
三、HER2过表达的相关标准：根据乳腺癌患者HER2表达情况的不同，可将HER2分为HER2阴性（-）、HER2低表达（+）、HER2中度表达（2+）和HER2强烈表达（3+）四个等级。
免疫组化在临床诊断中的应用
免疫组化在临床诊断中的应用在临床病理诊断中，免疫组织化学（IHe）是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。
但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。
深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥最大的辅助作用。
在病理诊断中，随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现，免疫组化在肿瘤诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。
由于免疫组化技术也存在一些局限性，因此，深入研究免疫组化原理和技术，并努力实现规范化的操作，才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床治疗中的作用。
1.免疫组化技术观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况，对抗原进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学，由于抗原与抗体特异性结合，因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂（酶、荧光素、同位素、金属离子等等）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）。
IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本，其中制作组织标本最常用、最基本的方法是石蜡切片。
石蜡切片对于组织形态保存好，有利于各种染色对照观察，而且能长期保存；石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
2.免疫组化技术在临床诊断中的作用目前免疫组化技术应用于临床主要有以下几个方面：2.1肿瘤良恶性的判断对于反应性增生还是肿瘤性增生，可用免疫球蛋白（Ig）的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。
在滤泡反应性增生时，滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白（bc1-2）,be1-2阴性；而在滤泡性淋巴瘤中，由于90%以上肿瘤性滤泡细胞有bc1-2的高表达，bc1-2阳性。
HER-2染色在两种不同免疫组化染色平台结果不一致的分析
HER-2染色在两种不同免疫组化染色平台结果不一致的分析申敬伟董芳莉杨海军安阳市肿瘤医院病理中心，河南455000通信作者：杨海军，Email：【摘要】目的分析HER-2染色在两种不同免疫组化染色平台结果不一致的原因。
方法收集2019年1—9月本院病理科存档的肿瘤标本40例，25例浸润性乳腺癌和15例胃癌在Roche VentanaXT和Leica Bond Max全自动免疫组化仪上分别进行HER-2染色，其结果严格参照HER-2检测指南进行判读。
结果25例浸润性乳腺癌HER-2在Roche Ventana XT和Leica Bond Max全自动免疫组化仪的染色结果比较差异有统计学意义（P＜0.05），Kappa值0.135，一致性较差。
15例胃癌HER-2在Roche Ventana XT和Leica Bond Max全自动免疫组化仪的染色结果比较差异无统计学意义（P＞0.05），Kappa值0.186，一致性较差。
结论不同免疫组化染色平台染色效果存在一定的差异，为了提高病理切片质量，推进规范化操作流程，针对不同的抗体选用合适的染色平台。
【关键词】染色平台；免疫组织化学；HER-2Inconsistent analysis of HER-2staining results in two different immunohistochemical staining platformsShen Jingwei,Dong Fangli,Yang HaijunPathological Center,Anyang Tumor Hospital,Anyang455000,ChinaCorresponding author:Yang Haijun,Email:【Abstract】Objective To analyze the reasons of the inconsistent results of HER-2 staining in two different immunohistochemical staining platforms.Methods HER-2staining was performed in25cases of invasive breast cancer and15cases of gastric cancer on Roche Ventana XT and Leica Bond Max automatic immunohistochemistry autostainer,respectively,and the results were interpreted strictly in accordance with the HER-2guidelines.Results The staining results of HER-2 in Roche Ventana XT and Leica Bond Max staining platforms of25cases of invasive breast cancer showed statistically significant difference and poor consistency(P<0.05,Kappa=0.135).In15cases of gastric cancer,there was no statistically significant difference(P>0.05),but the consistency was poor(Kappa=0.186).Conclusion In order to improve the quality of pathological sections and promote the standardized operation process,appropriate staining platforms should be selected for different antibodies.【Key words】Staining platform;Immunohistochemistry;HER-2人表皮生长因子受体-2（HER-2）是定位于染色体17q12-21，32上的原癌基因-人表皮生长因子受体2基因（C-erbB-2基因）编码的相对分子质量为185000的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。
荧光原位杂交技术与免疫组化对乳腺癌HER2检测的对比研究
荧光原位杂交技术与免疫组化对乳腺癌HER2检测的对比研究杨光明;杨列;蒋丽;代云;张建平【摘要】目的:对比分析荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)与免疫组化(immunohistochemistry,IHC)法对乳腺癌人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)检测的效果,为临床检测乳腺癌HER2蛋白的方法选择提供理论依据.方法:随机选取2014年1月至2016年1月到医院就诊并确诊患乳腺癌的患者80名记为实验组,无乳腺疾病患者80名记为对照组.所有患者皆取乳腺石蜡标本,均采用IHC和FISH法检测,观察比较2组患者在不同检测方式下的HER2蛋白检出率的差异,对2种检测手段的应用效果进行评价.结果:观察组患者使用FISH后的阳性率为97.50％,使用IHC 的阳性率为88.75％,FISH的阳性检出率大大高于IHC,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组患者使用FISH的阴性率为80.0％,而使用IHC的阴性率为92.50％,IHC的阴性率明显高于FISH,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:FISH有较高的阳性检出率,能够明显减少假阴性的发生,适用于乳腺癌的确诊实验和对转移及预后的评估;IHC有较高的阴性率,能够明显减少假阳性的发生,更适合于乳腺癌的筛查和排除诊断.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2016(037)011【总页数】3页(P72-74)【关键词】乳腺癌HER2基因;荧光原位杂交;免疫组化【作者】杨光明;杨列;蒋丽;代云;张建平【作者单位】213300江苏溧阳,溧阳市人民医院病理科;213300江苏溧阳,溧阳市人民医院病理科;213300江苏溧阳,溧阳市人民医院病理科;213300江苏溧阳,溧阳市人民医院病理科;200040上海,复旦大学附属华山医院外科【正文语种】中文【中图分类】R318;R446乳腺癌（breast carcinoma）是一种乳腺上皮恶性肿瘤，其发病率在女性肿瘤中位居第一[1]。
乳腺癌HER2免疫组化判读及报告SOP
广东省人民医院病理医学部病理科乳腺癌HER2免疫组化判读及报告SOP1.目的：保证乳腺HER2判读的准确。
2.责任人：负责乳腺癌治疗相关指标专项报告的责任医生。
3.步骤：3.1拿到切片后，常规核对编号、标识等资料；3.2低倍镜（2×或4×）扫描整个切片（包括阴性及阳性对照片），查看有无掉片、皱褶、缺损等影响判读的情况；3.3低倍镜观察，评估组织的质量，对浸润癌进行大致定位，浸润癌的大致范围，染色效果；3.4观察阳性及阴性对照片的染色效果，如果正常，进行下一步观察；3.5观察正常乳腺导管的着色情况，应该无染色或弱(至多弱－中度强度)染色，且整个切片对比鲜明，间质无着色，再进行下一步观察；3.6在10×观察，判断浸润癌着色细胞的比例；3.720×（必要时40×）观察膜染色的完整性，染色的深浅，再按标准进行评分；3.8评分标准（中国乳腺癌HER2检测指南2009版）：0: 无着色；1+：任何比例的浸润癌细胞膜的呈现微弱、不完整的细胞膜着色；2+：>10%的浸润癌细胞呈现弱－中等强度、完整但不均匀的细胞膜棕黄着色或<30%的浸润癌细胞呈现强且完整的细胞膜棕褐着色；3+：>30%的浸润癌细胞呈现强且完整的细胞膜棕褐着色；3.9报告的内容：患者信息，标本信息（病理号和蜡块号），标本类型，标本固定液的种类，标本固定前时间，标本固定的时间，抗体信息（克隆号及生产商），使用方法（检测方法及生产商），对照片情况，样本量是否足够用于评估，判读标准（乳腺癌HER2检测指南2009版），判读结果及结论，注释。
4.质量控制：4.1两名判读医生交互阅片，计算两人的一致率，需达95％以上；4.2每月统计分析HER2评分的分布情况，与文献报道及既往本科室的HER2评分的分布不能有太大的偏差；4.3每月分析HER2免疫组化与FISH结果的一致性，达到ASCO/CAP的标准。
免疫组化的质量控制【最新版】
免疫组化的质量控制免疫组化染色切片的好坏直接影响着病理医生对其染色结果的判断，进而影响病理诊断，所以制作一张良好的免疫组化切片至关重要，它需要病理医生与病理技师两者间的相互协调，密切配合和共同努力，病理医生选择抗体，设置对照，判读结果，指导技术;而技术人员进行实验操作，保证染色质量。
在免疫组化切片的制作过程存在多个环节，每一环节的失误都可能影响最终的检测结果，如抗原保存，蛋白酶消化，增强技术及对抗体的管理、使用和试剂的浓度等等，因此制作一张高质量的免疫组织化学切片是多方面相互配合的结果。
为了保证免疫组化染色结果的可靠性，每个实验室都必须进行有效的质量控制，规范免疫组化操作流程与步骤，应注意以下几点:(1)规范行为技术标准:例如使用中性福尔马林(添加PBS的4%福尔马林) 固定，并且固定及时、烤片不宜时间过长及浸蜡温度不宜过高等等，温度过高会破坏抗原决定簇，产生假阴性;(2)试剂最佳浓度:试剂最佳浓度的确定受到固定方法、时间、组织处理过程的影响;最合适的稀释度是以得到最大强度的特异性染色和最弱的背景染色为标准;(3)为了保证免疫染色的质量，主要的步骤便是对照的设立，包括阳性对照、阴性对照和空白对照，须同时设立，以达到最佳的质控效果。
对已知存在抗原的阳性对照组，如含抗原的正常组织，最好是使用含少量抗原的瘤组织作为对照，使与所检测切片中的抗原水平趋于一致，而且后者可能含有表达抗原的非瘤组织，可以作为内部对照;阴性对照应用缺乏抗原的组织切片;空白对照可以采用非免疫血清，缓冲液取代初级抗原的位置。
总之，只有阳性对照染色阳性，阴性对照组织阴性，这样的免疫组化染色结果才有说服力;(4)抗原修复的一致性:抗原热修复工具选用微波炉或高压锅，修复温度及修复时间要尽量一致，修复温度至少要达到100℃，且修复总时间不低于15min;修复液的PH值在7.0~8.0之间，如Tris(pH7~8)、EDTA(pH8.0)修复液;(5)熟悉抗体的阳性定位:每种抗体均有阳性定位，染色之前应确定该抗体阳性位置，是胞浆、胞膜或胞核，如ER、PR、P53、Ki-67定位于细胞核，若胞质或胞膜阳性也为假阳性;CD4、CD5、CD8、CD20、CD30、C-erb B-2等定位于细胞膜，若胞质弥漫阳性或细胞核阳性则为假阳性;还有的抗体可表现为二种阳性反应类型。
HER2免疫组化检测的质量控制培训
质量控制培训效果评估
培训满意度
培训内容：是否全面、实用、易懂
培训方式：是否灵活、ຫໍສະໝຸດ 动性强培训效果：是否提高检测技能和准确率
培训反馈：是否及时、有效、有针对性
知识掌握程度
培训后，员工对HER2免疫组化检测相关知识的掌握程度
员工对检测结果的分析和解读能力
员工在实际操作中，对检测流程的熟练程度
员工对检测过程中可能出现的问题的解决能力
结果判读：根据染色强度和阳性细胞比例进行评分
01
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检测方法
免疫组化染色法：使用抗体与组织切片上的抗原结合，通过显色反应显示抗原的存在和分布
荧光免疫组化染色法：使用荧光标记的抗体与组织切片上的抗原结合，通过荧光显微镜观察抗原的存在和分布
酶联免疫吸附试验（ELISA）：使用酶标记的抗体与组织切片上的抗原结合，通过酶催化底物产生颜色反应显示抗原的存在和分布
实际操作能力
01
操作流程：熟悉检测流程，掌握关键步骤
02
操作技巧：掌握操作技巧，提高检测效率
03
结果分析：准确解读检测结果，判断检测质量
04
问题解决：能够解决实际操作中遇到的问题，提高检测质量
谢谢
演讲人
HER2免疫组化检测的质量控制培训
01.
02.
03.
04.
目录
HER2免疫组化检测概述
质量控制要点
质量控制培训内容
质量控制培训效果评估
1
HER2免疫组化检测概述
检测原理
HER2蛋白表达：HER2基因扩增或过表达
免疫组化技术：利用抗体与抗原结合的原理进行检测
检测步骤：样本处理、抗体孵育、显色、结果判读
免疫组化实验流程审批
免疫组化实验流程审批免疫组化实验是一种常用的生物学和医学研究技术，它对于疾病的诊断、治疗和研究具有重要意义。
为了确保实验的准确性、可靠性和安全性，需要建立一套严格的实验流程审批制度。
一、免疫组化实验的基本原理和应用免疫组化实验基于抗原与抗体特异性结合的原理。
通过将特定的抗体与组织或细胞中的抗原结合，再利用显色反应或荧光标记等方法，使抗原所在的位置得以显示。
这一技术广泛应用于肿瘤诊断、病理学研究、神经科学、免疫学等领域。
在肿瘤诊断中，免疫组化可以帮助确定肿瘤的类型、来源、分化程度以及预测肿瘤的预后和对治疗的反应。
例如，乳腺癌中雌激素受体、孕激素受体和HER2 的检测，对于治疗方案的选择具有重要指导意义。
二、实验前的准备工作1、实验人员资质从事免疫组化实验的人员应具备相关的专业知识和技能，经过系统的培训，并熟悉实验室的安全操作规范。
实验人员需要了解免疫组化的基本原理、实验步骤、常见问题及解决方法。
2、实验材料和试剂选择合适的组织样本、抗体、显色剂等实验材料和试剂至关重要。
组织样本应保证新鲜、固定良好，并经过正确的处理和保存。
抗体的选择应根据实验目的和样本类型，确保其特异性和亲和力。
显色剂应具有良好的稳定性和显色效果。
3、实验设备和仪器准备齐全且性能良好的实验设备和仪器，如切片机、孵育箱、显微镜等。
设备应定期进行维护和校准，以保证实验结果的准确性和可靠性。
三、免疫组化实验流程1、组织样本处理（1）取材：从生物体中获取组织样本时，应遵循无菌操作原则，避免样本受到污染。
（2）固定：将组织样本迅速放入适当的固定液中，如福尔马林，以保持组织的形态和结构。
（3）脱水：通过梯度酒精脱水，去除组织中的水分。
（4）包埋：将脱水后的组织样本包埋在石蜡中，便于切片。
2、切片制作使用切片机将包埋好的组织切成薄切片，通常厚度为 4-6 微米。
切片应平整、完整，无褶皱和裂痕。
3、脱蜡和水化将切片放入二甲苯中脱蜡，然后依次经过梯度酒精进行水化。
荧光原位杂交与免疫组化联合检测乳腺癌组织HER-2价值评价
荧光原位杂交与免疫组化联合检测乳腺癌组织HER-2价值评价摘要目的分析荧光原位杂交（FISH）与免疫组化（IHC）联合使用对乳腺癌患者HER-2检测的效果。
方法选取我院收治的乳腺癌患者96例作为实验组，另选取96名健康志愿者作为对照组，对比两种检测方法检测效果。
结果 FISH与IHC检出率差异较大，其中FISH能够阳性检出率远高于IHC，而IHC阴性检出率远高于FISH，两种方法合用检出正确率为100%。
结论 FISH、IHC联合使用能够有效避免假阴性和假阳性的发生，具有更高的检出准确率。
关键词乳腺癌；荧光原位杂交；免疫组化HER-2乳腺癌是目前影响女性生命健康的最常见的肿瘤，据世界卫生组织统计，乳腺癌的发病已经不仅局限于女性，在男性身上也发现了乳腺癌，对乳腺癌的研究刻不容缓，目前尚没有一种机制能够完全证明乳腺癌的发生、发展，但HER-2的异常是乳腺癌患者的共同特征，因此，把HER-2作为检出乳腺癌的重要指标[1]。
在本次研究中重点分析FISH、IHC联合使用对乳腺癌患者HER-2检测的效果，现将试验流程以及结果分析如下：1基本资料和分析方法1.1基本资料选取我院收治的乳腺癌患者96例作为实验组，另选取96名健康志愿者作为对照组，其入选标准是：年龄在23～65岁；均为首次接受治疗，具有较高的治疗依从性；除乳腺癌以外没有其他肿瘤疾病或心血管、心肝肾功能异常。
两组患者乳腺癌症状、发病位置等对研究没有影响。
1.2分析方法两组研究对象在入院以后按照分组进行试验，两组研究对象分别接受FISH、IHC两种方法检查，均采用乳腺石蜡切片标本检查，保证检测方法、时间等一致性，确保没有无关变量。
制作石蜡标本：取患者标本，浸泡福尔马林24h，然后采用酒精由低浓度到高浓度进行梯度脱水，然后浸蜡，包埋后切成石蜡片[2]。
FISH检测方法：取切片保温24h，采用高浓度大低浓度脱水，然后使用酸性亚硫酸钠处理、SSC洗片2次，蛋白酶孵育，再次洗片、脱水，然后风干后加入探针封片，保温24h杂交，再次洗片、乙醇（70%）浸泡，风干后滴加染色剂观察；IHC检测方法：取切片采用高浓度大低浓度脱水，使用PBS冲洗2次、高温修复、再次冲洗2次，加入过氧化物酶阻滞液中孵育，再次冲洗2次，滴加HER-2一抗孵育1h后再次冲洗2次，加入链霉菌抗生素-过氧化酶溶液孵育10min后再次冲洗2次，然后经过染色、二次复染、冲洗后封片观察[3-4]。
分析绝经前子宫内膜癌病理免疫组化特征
分析绝经前子宫内膜癌病理免疫组化特征绝经前子宫内膜癌（endometrial carcinoma）是一种发生在绝经前女性子宫内膜上皮的恶性肿瘤，并具有异质性和不同分子亚型。
病理免疫组化技术可用于鉴别和分类子宫内膜癌，以指导治疗和评估预后。
本文将分析绝经前子宫内膜癌的病理免疫组化特征。
病理免疫组化技术主要用于检测肿瘤标记物在组织切片中的表达情况，从而帮助确定细胞类型、分化程度、分子亚型和预后。
在绝经前子宫内膜癌中，常用的免疫组化标记物包括ER、PR、Ki-67、p53、HER2和p16等。
1. 雌激素受体（ER）和孕酮受体（PR）：ER和PR是子宫内膜癌中常见的核受体。
它们的阳性表达与较好的预后和对激素治疗的敏感性相关。
绝经前子宫内膜癌中ER和PR的阳性表达率较高。
2. Ki-67：Ki-67 是一种核抗原，可作为细胞增殖标记物。
高 Ki-67的表达与肿瘤的恶性程度相关，预后较差。
Ki-67的高表达与绝经前子宫内膜癌的低分化和侵袭性生长相关。
3. p53：p53 是一种肿瘤抑制基因，具有重要的调节细胞生长和凋亡的功能。
p53基因突变与细胞凋亡途径异常和细胞增殖失控相关。
绝经前子宫内膜癌中p53突变常见，与较差的预后和复发率增加相关。
4. HER2：HER2是一种细胞膜受体酪氨酸激酶，参与细胞生长信号传导。
HER2的过表达与子宫内膜癌的侵袭性和预后不良相关。
5. p16：p16 是一个细胞增殖和凋亡的抑制因子。
p16的阳性表达与动态内膜粘附的改变和不良预后相关。
综合上述免疫组化标记物的表达情况，可以对绝经前子宫内膜癌进行分类和分级。
细胞表达ER和PR、低 Ki-67、p53和HER2的阴性表达、以及p16的阴性表达，可能与良性或低度恶性的内膜癌相关。
相反，细胞表达ER和PR的减少、高 Ki-67、p53和HER2表达的增加以及p16阳性表达，可能与高度恶性的内膜癌相关。
需要注意的是，病理免疫组化技术并非诊断绝经前子宫内膜癌的唯一依据，还需结合临床表现、病理形态学特征和其他辅助检查结果进行综合分析。
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• 设立适当对照组
• 难以确定的检测病例 1) 重新检测2) 将免疫组化检测结果与原位杂交检测结果对比3) 咨询外部实验室
• 设立适当对照组
• 难以确定的检测病例 1) 重新检测2) 将免疫组化检测结果与原位杂交检测结果对比3) 咨询外部实验室
• 使用标准化检测报告表 • 记录任何:
– 与标准化标本处理步骤相违背的不当操作 – 难以确定病理诊断的病例
a) 对相关从业人员进行教育培训 b) 每年重新检测约5%的阳性和阴性病例 c) 参与Ring研究
– 乳腺癌： 最多1小时
组织处理
– 胃癌： 20–30分钟之内
检测前
HER2检测偏倚
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118–145; ; 《乳腺癌HER2检测指南（2009版）》编写组 乳腺癌HER2检测指南（2009版）中华病理学杂志 2009,38(12):836–840.
质保
• 旨在改善总体检测操作 • 与其他检测中心相比较
质控/质保原则（推荐）
内部质量控制 a) 染色
b) 评分
c) 实验室 d) 检测步骤 e) 记录
持续质量评价
• 严格遵守免疫组化或原位杂交操作步骤 • 设立对照组:
– 细胞系和组织标本免疫组化评分0/1+, 2+, 3+ 需经原位杂交确定 • 若对照组检测未能达标，需重新进行实验
过分固定1
持续性自发性荧光; 信号较弱或缺失
染色步骤
消化封闭不完全2
较强自发性荧光；背景亦呈现 较强非特异性染色
1. Abbott供图; 2. Ventana供图.
影响HER2检测结果之因素
报告内容
评分系统
取样
判读标准
检测后
使用图像 分析
HER2检测偏倚
组织处理
固定时间
检测前
固定方式
检测方 法验证
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118–145.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
取样
– 原发性乳腺癌
• 最好为手术切除而非活检 标本，包含癌旁乳腺组织
• 避免细针穿刺活检取样
– 转移性乳腺癌
• 穿刺活检取样
– 胃癌
• 经内镜活检取样或经手术 切除之标本
实验条件 对照
实验试剂
检测中
抗原修复类型
检测仪器精准度 实验室步骤 检测人员
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118─145.
HER2检测的影响因素：检测前
影响HER2检测结果之因素: 检测前
取样
组织处理 固定时间
Pr检e-测an前alytic 固定方式
• 使用标准化检测报告表 • 记录任何:
– 与标准化标本处理步骤相违背的不当操作 – 难以确定病理诊断的病例
a) 对相关从业人员进行教育培训 b) 每年重新检测约5%的阳性和阴性病例 c) 参与Ring研究
Adapted by permission from Macmillan Publishers Ltd; Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173─182. © 2003.
标本固定较差1 染色不均
标本点状假阳性染色2 棕色点状染色为胞质染色而非胞膜染色
细胞质染色, IHC 02 弥散性非均一性细胞质染色
标本边缘假阳性染色1 肿瘤标本边缘染色而中心无染色
1. W Hanna供图; 2. Dako供图.
影响FISH检测结果之常见问题
标本制备
固定不完全1
片状染色;信号较弱或缺失
《胃癌HER2检测指南》编写组 胃癌HER2检测指南 中华病理学杂志 2011;40(8):553-557.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
固定时间
– 乳腺癌
• 最少6小时 • 不超过48小时
– 胃癌
• 穿刺活检最少1小时 （以便充分固定）
质控/质保原则（推荐）
内部质量控制 a) 染色
b) 评分
c) 实验室 d) 检测步骤 e) 记录
持续质量评价
• 严格遵守免疫组化或原位杂交操作步骤 • 设立对照组:
– 细胞系和组织标本免疫组化评分0/1+, 2+, 3+ ，2+需经原位杂交确定 • 若对照组检测未能达标，需重新进行实验
• 评价: – 若正常组织检测为阴性而肿瘤组织检测细胞膜膜染色阳性，则免疫组化检测 即以足够 – 胃癌或胃食管交界癌：选择代表性区域 – 不均匀: 选择代表性区域 – 异质性特异区域: 按最高分评分
– 通过与其他实验室检测结果相比较而得到的检测技术评价的方式 （例如，外部控制）
Bilous M, et al. Mod Path 2003;16:173–182.
质量控制与质量保证有何区别？
质控
• 达到和/或维持目标质量 • 在检测中每个步骤均进行样品检
查，从而决定是否进行相关改进 • 操作步骤的内部验证 • 每批实验都应进行 • 确保每个检测结果均准确
Adapted by permission from Macmillan Publishers Ltd; Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173─182. © 2003.
HER2检测质量的影响因素
影响IHC检测结果之常见问题
• 诸多因素会影响IHC结果的评估
内容提要
• HER2检测的质量控制和质量保证
– HER2检测质量的影响因素
• 检测前 • 检测中 • 检测后
– HER2检测的质量保证
• 内部质保 • 外部质保 • Ring研究
ห้องสมุดไป่ตู้
HER2检测的质量控制和质量保证
质量体系－定义
• 质量控制 （QC）
– 用以确保HER2检测结果正确性的内部验证步骤
• 质量保证 （QA）
取样
HER2检测偏倚
检测前
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118–145.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
组织处理方式
•提供新鲜及已定位之标本或切除后迅速经甲醛固定之标本
– 立即转送至备检实验室:
• 尽量缩短从标本切除至浸入10%NBF固定之间的时间，通常控制在20–30分钟以内