达科为IL-2 ELISA试剂盒说明书
小鼠白介素-2(IL-2)ELISA试剂盒说明书

小鼠白细胞介素-2(IL-2)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中小鼠白细胞介素-2(IL-2)含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的小鼠白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入小鼠白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记的IL-2抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的IL-2呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素2(IL-2)浓度。
试剂盒组成:样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
达科为 ELISPOT 说明书

Mouse IL-4precoated ELISPOT kitCat#:2210403/2210404产品描述:深圳市达科为生物工程有限公司生产的达优®系列ELISPOT预包被试剂盒采用原装进口高亲和力高效价抗体对,经预包被PVDF板、低温干燥、真空密封包装等工艺流程制备。
成品PVDF板上预包被的抗体分布均匀、效价稳定,2-8ºC可存放12个月。
达优®系列预包被ELISPOT试剂盒使实验检测时间从3天缩短为2天,大幅度减少无菌操作的实验步骤,减轻实验者的劳动强度和减少污染的几率。
使得实验者能够轻松、高效地完成复杂的ELISPOT检测实验。
试剂盒提供的试剂、规格:名称22104032210404规格×数量规格×数量Biotinylated Antibody100μL×5支100μL×5支Streptavidin-HRP500μL×1支500μL×1支Dilution Buffer R(10×)18mL×1瓶18mL×1瓶Washing Buffer(50×)75mL×1瓶75mL×1瓶AEC Dilution50mL×1瓶50mL×1瓶AEC SolutionⅠ(20×)3mL×1瓶3mL×1瓶AEC SolutionⅡ(20×)3mL×1瓶3mL×1瓶AEC SolutionⅢ(200×)500μL×1支500μL×1支阳性刺激物/50T×5瓶预包被PVDF板5块5块实验者自备的试剂与仪器:1.RPMI-1640基础培养基(需要添加双抗)2.无血清培养基(完全培养基,即用型),推荐使用达优®ELISPOT无血清培养基。
3.货号2210403试剂盒无阳性刺激物,推荐使用达优®阳性刺激物PHA或PMA+Ionomycin。
小鼠白细胞介素2IL

小鼠白细胞介素2(IL-2)试剂盒使用方法检测范围:96T30 ng/L -1200 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的小鼠白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素2(IL-2)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(2400ng/L)0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
1200 ng/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液600 ng/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液300 ng/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液150 ng/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液75 ng/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
人Human白细胞介素-2IL-2ELISA检测试剂盒使用方法

人(Human) 白细胞介素-2(IL-2)ELISA 检测试剂盒使用方法用途:人IL-2 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-2 。
本试剂盒可以检测天然和重组的IL-2 。
本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。
试验原理:人IL-2 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IL-2 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将IL-2 和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中IL-2 的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制自备材料1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1.此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性,但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病,依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。
2.避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
3.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
4.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
biosharp 人IL-2 ELISA 试剂盒使用说明书

一、产品简介 ������������������� ���������二、检测原理 ������������������� ���������三、试剂盒组分 ������������������� ���������四、储存条件 ������������������ ����������五、注意事项 ������������������ ����������六、其它实验材料 ������������������� ��������七、使用说明 �������������������� �������7.1、样品收集、处理及保存方法 �������������������� � 7.2、试剂准备 �������������������� ������� 7.3、操作步骤 �������������������� ������� 7.4、操作流程图 �������������������� ������� 7.5、操作要点提示 �������������������� ���7.6、结果判断 �������������������� �������八、常见问题分析及解决 ���������� ������������� 2 2 3 3 3 4 4 4 4 5 6 6 6 8目 录全国统一热线:400-600-4213 Elisa试剂盒使用说明书本试剂盒用于定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中天然和重组IL-2浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分,如有任何疑问请与北京兰杰柯科技有限公司或经销商联系,公司将为您提供强有力的技术支持。
仅供研究,不用于临床诊断。
二、检测原理本实验采用双抗体夹心ELISA,用抗人IL-2单克隆抗体预包被酶标板,加入适度稀释的样本和标准品,其中IL-2会与其单抗结合,洗去游离成分;加入生物素化的抗人IL-2抗体,抗人IL-2抗体与结合在单抗上的人IL-2结合而形成免疫复合物,洗去游离的成分;加入辣根过氧化物酶标记的亲合素,生物素与亲合素特异性结合,洗去未结合的酶结合物;加入显色剂,若反应孔中有IL-2,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色;加终止液变黄。
IL-2,白介素2,大鼠白介素2ELISA试剂盒kit说明书

IL-2,白介素2,大鼠白介素2ELISA试剂盒kit说明书ELISA常用的方法:双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。
IL-2,白介素2,大鼠白介素2ELISA试剂盒kit说明书培养细胞检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
适应:科研实验保存温度: 2~8°规格:96T/48T96T指可以做94个标本,2个标准对照48T指可以做47个标本,1个标准对照96T-84个样本主要组织相容性复合体Ⅰ类48T-42个样本引起ELISA 试剂盒测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。
引起ELISA 试剂盒测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。
重复性:<15% ,规格: 96T/48T ,标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
白介素2检测动物种类:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、猴,植物类,鸟类等检测标本类型:血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液、唾液、关节滑液、肺泡灌洗液等检测指标:趋化因子、生长因子、抑制因子、炎症因子、营养因子、脂肪因子、血管生成因子、动脉粥样硬化因子、基质金属蛋白酶等实惠点:选用进口材料:专业的技术支持,可靠的实验结果,优秀的产品质量,低廉的市场价格,实惠、经济、可靠。
优点:高灵敏度、高精密度,高重现性,高特异性。
不仅有高可靠性的实验结果,更为您节约实验成本和时间。
技术服务:。
大鼠白细胞介素2IL2酶联免疫分析

大鼠白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T100ng/L-1800ng/L使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本白细胞介素2(IL-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的大鼠白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞介素2(IL-2)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
白介素2受体,IL-2R,山羊白介素2受体ELISA试剂盒使用说明书

白介素2受体,IL-2R,山羊白介素2受体ELISA试剂盒使用说明书性状:试剂盒kit(含试剂+酶联板+覆膜等)。
ELISA:2-8℃,六个月白介素2受体,IL-2R,山羊白介素2受体ELISA试剂盒使用说明书(1)要注意避免出现严重溶血。
血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色。
(2)样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,一则细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
白介素2受体,IL-2R,山羊白介素2受体ELISA试剂盒使用说明书在elisa实验前的注意事项:1 仔细阅读说明书2 确定试剂盒在有效期内3 按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)4 标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。
短期内无法实验者,注意低温保存。
白介素2受体,IL-2R,山羊白介素2受体ELISA试剂盒使用说明书试剂盒分两种规格48T/96T,每次实验的标准曲线一般设7个不同浓度,加上空白孔,标准曲线一共需要8个孔。
因此,一个48T试剂盒最多可以测定40个样本(不做重复且一次用完),一个96T试剂盒最多可以测定88个样本(不做重复且一次用完)。
可以根据实际样本数量和实验计划选择合适的产品规格。
的比色测定由酶标仪进行。
有的同行可能会认为,既然由酶标仪进行,那么此时便可以万事大吉了,其实不然,因为当代较为先进的酶标仪,均有较多的功能,使用不当,会得到令人难以理解的实验结果。
如使用酶标仪比色测定后,有许多的阴性测定孑L的吸光度值为负数;或测定假阳性率大大增加等等。
这主要是没有正确地理解和使用酶标仪所致。
此外,在加入底物开始显色反应前,好是先检查一下底物溶液的有效性,即可将A和B两种液各加1滴于清洁的空板孔或eppendorf管中,观察是否有显色出现,如有,则说明底物已变质。
人Human白细胞介素2IL2ELISA检测试剂盒利用方式

人(Human) 白细胞介素-2(IL-2)ELISA 检测试剂盒利用方式用途:人IL-2 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各类体液中的IL-2 。
本试剂盒能够检测天然和重组的IL-2 。
本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。
实验原理:人IL-2 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IL-2 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将IL-2 和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再通过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中IL-2 的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制自备材料1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
平安性1.此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性,但没有实验室可完全保证此血制品可不能传染肝炎、AIDS或其它传染病,依据本地的平安条例处置本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。
2.幸免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
3.实验中不要吃喝、抽烟或利用化妆品。
4.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1.试剂应按标签说明书贮存,利用前恢复到室温。
稀稀事后的标准品应抛弃,不可保留。
2.实验中不用的板条应当即放回包装袋中,密封保留,以避免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前利用。
4.利用一次性的吸头以避免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,幸免利用带金属部份的加样器。
5.利用干净的塑料容器配置洗涤液。
利用前充分混匀试剂盒里的各类成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反映孔中吸水。
7.底物A应挥发,幸免长时刻打开盖子。
底物B对光灵敏,幸免长时刻暴露于光下。
达科为生物技术 ELISA 辅助试剂盒(1 块板)说明书

达科为生物技术有限公司 ELISA 说明书达科为生物技术有限公司 地址:深圳市南山区南油登良路天安工业区5栋3B 邮编:518054 Tel:8008304366/0755-********Fax:0755-********Web:E-mail:*************1/1ELISA 辅助试剂盒(1块板)说明书产品编号:DKW-F1 产品描述:ELISA 辅助试剂包含ELISA 试剂盒中的8个主要辅助成分,不含抗体、酶、标准品及其它对照物。
使用前请检查试剂组成成份,若有任何疑问请与达科为生物技术有限公司联系, E-mail :*************。
产品构成:试 剂(中英文) 规格 配 制 和 推 荐 使 用 Coating buffer (包被缓冲液) 12ml ×1瓶 即用型, 100ul/孔 Blocking diluent (封闭液) 25ml ×1瓶 即用型,250ul/孔 TMB(单组分显色底物)10ml ×1瓶 即用型,100ul/孔Dilution buffer R(1×)(稀释液) 10ml ×3瓶 即用型Washing buffer(50×) (浓缩洗涤液 50X)15ml ×1瓶 150∶ 用蒸馏水稀释成工作液,300ul/孔Stop solution (终止液) 10ml ×1瓶即用型,100ul/孔 ELISA 板 1块 高亲和力,可拆卸板封板膜2张说明书 1*所有试剂2~8℃保存,保质期为12个月。
使用说明:1. 该产品可以满足1块ELISA 板的使用,开启包装后,请在2个月内用完。
2. 即用型试剂为工作液,直接使用。
3. 浓缩液先按照说明稀释成工作液后使用。
4. 每孔使用量以实际需求量使用,推荐使用量仅供参考。
5. TMB 防止污染,有毒,避免皮肤接触。
6. 终止液含硫酸,有腐蚀性,避免皮肤接触。
鸡白细胞介素2IL

鸡白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定鸡血清,血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡白细胞介素-2(IL-2))水平。
用纯化的鸡白细胞介素-2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入鸡白细胞介素-2(IL-2),再与HRP标记的IL-2抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的鸡白细胞介素-2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡白细胞介素-2(IL-2)浓度。
试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
人白细胞介素2(IL-2)说明书

人白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T40pg/ml-1200pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的人白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白细胞介素2(IL-2)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
ELISA检测试剂盒使用指南

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的免疫学实验方法,用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势,被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南,包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书:在使用试剂盒前,仔细阅读说明书,了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备:根据实验要求,准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平,可以采集血液样本,离心分离血清;如果需要检测细胞培养上清中的分子,将上清收集,并使其清晰,避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理:根据实验需求,对样本进行必要的预处理。
例如,可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本,以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品:制备阳性和阴性控制样品,用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备:准备所需实验器材,如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整,并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备:根据说明书要求,将试剂从冰箱中取出,并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭,并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作:按照说明书的要求,将试剂加入到酶标板中,并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量,并计算出浓度。
3.孵育:根据试剂盒的要求,将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤:使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液:在洗涤完成后,加入辣根过氧化物酶标况稀释液,促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育:根据试剂盒的要求,将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止:根据试剂盒的要求,加入相应的停止液,停止酶反应。
CD25)ELISA试剂盒简介说明

人白介素2可溶性受体α链(IL—2sRα/CD25)ELISA试剂盒简介说明中文简称:人白介素2可溶性受体α链(IL2sRα/CD25)ELISA试剂盒英文简称:IL2sRα/CD25)ELISAKIT特异性:HuIL2sRa;检测范围:62.5pg/ml~4000pg/ml;灵敏度:30pg/ml;标本用量:100ul/well;本试剂盒采纳双抗体夹心ELISA法的原理制备,适用于体外定量检测人血清、血浆、组织、体液或细胞培育上清液中的天然和重组的IL2sRa浓度。
白介素2(IL2)是通过结合多分子细胞受体复合物发挥生物活力的。
多年来,这个受体复合物被认为是由IL2Rα与IL2β两个糖蛋白链构成的,两个亚基相互结合在一起形成一个高亲和力受体来传递IL2信号的。
IL2Rα(也称为Tac抗原或CD25),是一个分子量为55kD跨膜糖蛋白,有351个氨基酸构成。
IL2β在1989年被克隆出来,它是个由575个氨基酸构成的跨膜糖蛋白,分子量为75kD,其中有286个氨基酸位于胞浆内,更显著地参加了细胞信号传导作用。
常认为它是IL2一种弱抑制剂。
在任何情况下,体液中增高的可溶性IL2Rα常跟随这T细胞与B细胞的加添与免疫系统的激活。
ELISA试验原理人白介素2可溶性受体α链(IL2sRα/CD25)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素2可溶性受体α链(以下简称“A物质”)水平。
用纯化的A物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入A物质再与HRP标记的A物质抗体结合,形成抗体抗原酶标抗体复合物,经过彻di洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的A物质呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中A 物质含量。
ELISA试剂盒构成人白介素2可溶性受体α链(IL2sRα/CD25)ELISA试剂盒包含:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对比品和阳性对比品(定性测定中),参考标准品和掌控血清(定量测定中);(5)结合物及标本的稀释液;(6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;(7)酶反应停止液,常用的HRP反应停止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的最后体积而异,在板式ELISA中一般采纳2mol/L。
人白细胞介素2受体α(IL-2Rα(CD25))-ELISA试剂盒说明书

人白细胞介素2受体α (IL-2Rα/CD25)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:E-EL-H1030(本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!)声明:尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。
本产品选用世界著名生产厂家的原料,采用专业ELISA kit生产技术制造。
适用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组IL-2Rα/CD25浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分!如有疑问,请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。
用抗人IL-2Rα/CD25抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的IL-2Rα/CD25会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。
依次加入生物素化的抗人IL-2Rα/CD25抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。
抗人IL-2Rα/CD25抗体与结合在包被抗体上的人IL-2Rα/CD25结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。
用酶标仪在450nm 波长处测OD值,IL-2Rα/CD25浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中IL-2Rα/CD25的浓度。
标本收集:1.血清:全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血浆:抗凝剂推荐使用EDTA.Na2,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。
避免使用溶血,高血脂标本。
3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。
羊白细胞介素2IL-2酶联免疫分析

羊白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T0.5ng/L - 8ng/L使用目的:本试剂盒用于测定羊血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中羊白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的羊白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中羊白细胞介素2(IL-2)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
鸡白细胞介素2(IL-2) 酶联免疫分析.doc

鸡白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书检测范围:6ng/L -180 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-2(IL-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡白细胞介素-2(IL-2)水平。
用纯化的鸡白细胞介素-2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-2(IL-2),再与HRP标记的白细胞介素-2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素-2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡白细胞介素-2(IL-2)浓度。
标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
羊白细胞介素2IL-2酶联免疫分析

羊白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T0.5ng/L - 8ng/L使用目的:本试剂盒用于测定羊血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中羊白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的羊白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中羊白细胞介素2(IL-2)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
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6. 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。 7. 使用前检查试剂盒内各种试剂;试剂稀释、加样和中止反应
充分混匀或者摇匀对实验结果尤为重要,最好使用低速频 率振荡器或者反应过程中每 15 分钟手工摇匀一次。 8. 实验板孔加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应孔的孵育 时间一致。 9. 使用洁净的塑料容器盛装洗涤液。
即用型
即用型
*:96/48 Tests
4、 需要实验者自行准备的试剂与仪器:
1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热) 2. 微量加液器及吸头:P10,P50,P100,P200,P1000 3. 蒸馏水或去离子水 4. 全新滤纸 5. 旋涡振荡器和磁力搅拌器 6. 37℃温箱
-2-
5、 注意事项:
-3-
10. 洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,滤 纸上看不到水印。勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
11. TMB 对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免金属接触影 响结果。有毒,避免用手接触!准备使用的 TMB 若变为蓝 色,表明 TMB 已经污染,请丢弃。请在终止反应后 10 分 钟内读取 OD 值。
-8-
8、结果分析:
1. 有两种设定空白对照的方案: 1) 将 TMB 空白显色孔设为对照。所有的标准品和样品的 吸光值减去空白孔的吸光值后,在坐标纸上画出曲线,以吸 光值作为纵坐标,以浓度作为横坐标。 2) 将零孔设为对照。得到的数据可以直接在坐标纸上画出 曲线。
2. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使 用各种应用软件来计算。若样品 OD 值高于标准曲线上限,应 适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。
Absorption 450 nm
3.0
2.4
1.8
1.2
0.6
0.0 0
200
400
600
M ouse IL-2 Concentration (pg/mL)
注意:本图仅供参考,应以同次试验标准品所 绘标准曲线来计算标本含量。
9、试剂盒的保存:
4ºC 可稳定保存 12 个月。
-9-
10、操作步骤一览表:
1、 产品简介:
达优®小鼠 IL-2 ELISA 试剂盒是通过酶联免疫吸附技术,定量 检测细胞培养上清液和小鼠血清、血浆和其他体液中天然和重组 IL-2 的浓度。本试剂盒为预包被板,“夹心一步”完成,整个过程 孵育时间不超过 2.5 小时,洗涤 8 次,操作时间大大减少。本试剂 盒专用于科研,而非用于诊断。
(3) 雷甜甜 等.基础医学与临床,2009,29,618-621. (4) 黄凯 等.中国比较医学杂志,2009,19 (11),31-35. (5) 张榕等.中华微生物学和免疫学杂志,2007,27 (3):285-287 (6) 邱惠 等.中国免疫学杂志. 2005,21:918-923.
- 11 -
-7-
10.读板:终止后 10 分钟内,用检测波长(measurement wavelength) 450 nm 读 值 。 推 荐 用 双 波 长 即 检 测 波 长 ( measurement wavelength ) 450 nm 、 参 考 波 长 或 校 正 波 长 ( reference wavelength)610-630 nm 同时读板,测量结果会更准确。
Streptavidin-HRP 和 Cytokine standard。 ¾ TMB ¾ Stop solution
-6-
7、操作过程:
1. 使用前,将所有试剂充分混匀,避免产生泡沫。 2. 根据实验孔(空白和标准品)数量,确定所需的板条数目。
样品(含标准品)和空白都应做复孔。 3. 加样:100 μL/well 加入稀释后的 Cytokine standard 至标准品
-1-
3、 试剂盒提供的试剂:
试剂 Cytokine standard
Biotinylated antibody
Streptavidin-HRP Dilution buffer R(1×) Washing buffer(50×)
TMB Stop solution
Precoated ELISA plate 封板膜 说明书
规格 2/1 瓶*
2/1 瓶*
2/1 瓶*
3பைடு நூலகம்2 瓶* 1瓶 1瓶 1瓶
8×12 或 8×6* 2/1 张* 1份
配制 干粉状,按瓶上说明操作 1:100 用 Dilution buffer R(1×)
稀释 1:100 用 Dilution buffer R(1×)
稀释 即用型 1∶50 用蒸馏水稀释 即用型 即用型
4. Streptavidin-HRP :1∶100 用 Dilution buffer R(1×)稀释, 混匀制成 1×HRP 工作液。
-5-
5. Washing buffer(50×):1∶50 用蒸馏水稀释。 6. 即用型溶液 ¾ Dilution buffer R(1×): 用于稀释 Biotinylated antibody、
12、ELISA 测定中可能会出现的问题及解决 方法
问题
可能的原因
解决方法
1.非常 弱的结
果
(1)温育的时间或温度不 够; (2)显色反应时间太短; (3)所用配制缓冲液的蒸 馏水有问题; (4)加入抗体/酶的稀释液 浓度太低; (5)酶标仪滤光片不正确; (6)不正确的试剂储存方 式; (7)试剂盒没有充分平衡; (8)移液器吸液量不足, 吸嘴内壁挂水太多或内壁 不清洁。
加 Stop solution 100 μL/well,终止反应 10 分钟内读板
在 λ=450 nm 处读取吸光值
- 10 -
11、参考文献
(1) Goldsmith, M.A. and W.C. Greene. (1994) in The Cytokine Handbook, 2nd ed., A. Thomson editor, Academic Press, New York, p. 57.
产品信息和操作指南
Mouse IL-2 预包被 ELISA kit
Cat# : DKW12-2020-048 / DKW12-2020-096
本试剂盒专用于科研,而非用于诊断
Mouse IL-2 DKW12-2020
目录
产品简介…………………………………………………………… 1 知识背景…………………………………………………………… 1 试剂盒提供的试剂………………………………………………… 2 需要实验者自行准备的试剂与仪器……………………………… 2 注意事项…………………………………………………………… 3 试剂的配制………………………………………………………… 5 操作过程…………………………………………………………… 7 结果分析…………………………………………………………… 9 试剂盒的保存……………………………………………………… 9 操作步骤一览表…………………………………………………… 10 参考文献…………………………………………………………… 11 ELISA 测定中可能会出现的问题及解决方法……………………12 预包被 ELISA 试剂盒系列产品………………………………… 15
a. 校正温育箱温度; b. 校正定时钟准确定时; c. 使 用 新 鲜 合 格 的 蒸 馏 水; d. 按照说明书保存试剂盒
1. 试剂应按瓶上标签说明储存,使用前室温平衡 20-30 分钟。 实验前室温平衡对 Washing buffer(50×)、Dilution buffer R (1×)、Precoated ELISA plate 和 TMB 有重要意义。
2. 冻干标准品冰上操作,按照标签说明溶解干粉,充分混匀, 按照一次使用量分装,-20℃贮存,避免反复冻融。
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6、试剂的配制:
1. 提前 20 分钟将 Washing buffer(50×)和即用溶液从试剂盒中 取出,以平衡至室温。
2. Cytokine standard:Standard 为冻干粉。先按标签说明将冻 干粉溶解,静置 5-10 分钟,再用 Dilution buffer R(1×)稀 释到推荐检测浓度。标准品溶解后混匀,准确倍比稀释,严 格操作非常重要。标准品的倍比稀释最好在进口的或者硅化 的 EP 管中完成,减少非特异性吸附。在实验孔内进行倍比 稀释时,注意操作规范,枪头勿刮划预包被的孔底。母液若 没有用完请按照一次用量分装,-20℃保存。
加样品或配好的标准品,设置对照,100 μL/well 无需温育,直接进行下 一步操作
加生物素标记的抗体,50 μL/well,混匀 37℃ 温育 90 分钟; 洗4次
加亲和素-HRP 标记物,100 μL/well 37℃ 温育 30 分钟; 洗4次
加 TMB 显色液,100 μL/well 37℃ 显色 5-30 分钟
孔,100 μL/well 加入样品至样品孔,设置空白孔,用 Dilution buffer R (1×)代替样本和标准品。 4. 加检测抗体:50 μL/well 加入稀释后的 Biotinylated antibody。 混匀后,盖上封板膜,37℃温育 90 分钟。 5. 洗板:扣去孔内液体,300 μL/well 加入 1×washing buffer;停 留 1 分钟后弃去孔内液体。重复 4 次,每一次在滤纸上扣干。 6. 加酶:100 μL/well 加入稀释后的 Streptavidin-HRP。盖上封板 膜,37℃温育 30 分钟。 7. 洗板:重复步骤 5。 8. 显色:100 μL/well 加入 TMB,37℃避光温育 5-30 分钟之间, 根据孔内颜色的深浅(深蓝色)来判定终止反应。通常显色 10-20 分钟可以达到很好的效果。 9. 终止反应: 100 μL/well 迅速加入 Stop solution 终止反应。