放线菌形态的观察实验报告

山东大学实验报告2017年11月13日 ________________________________________ _________________________

科目：微生物学实验题目：放线菌的形态观察姓名：丁志康

一、目的要求

• 1.学习并初步掌握观察放线菌形态的基本方法。

• 2.初步了解放线菌的形态特征。

二、基本原理

放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能像空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。

有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。

在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。

为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持住放线菌自然生长状态下的形态特征。本试验介绍其中几种常用方法。

1.插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。

2.玻璃纸法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。

3.印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察孢子丝的形态、孢子的排列及其形状等。方法简便、但形态特征可能有所改变。

（*本次试验采用插片法）

三、器材

1、菌种：青色链霉菌，弗氏链霉菌。

2、培养基：高氏I号培养基。

3、仪器及其他用具：经灭菌的平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲，

石碳酸复红染液，显微镜等。

四、操作步骤

a)倒平板：取融化并冷却至大约50℃的高氏Ⅰ号琼脂约20mL倒平板，凝固待用

b)接种：用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上划线接种

c)插片：以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约45°角插入琼脂内（插在接种线上），插片数量

可根据需要而定。

d)培养：将插片平板倒置，28℃培养，培养时间根据观察的目的而定，通常3~5d。

e)镜检：用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接

镜检。

（*观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察；若要用油镜观察，需将有菌的一面朝下，并用胶纸将盖玻片固定在载玻片上再观察）

五、观察结果

1、实验照片

弗氏链霉菌（40×10）弗氏链霉菌（100×10，示孢子丝）

弗氏链霉菌（100×10，示气丝）青色链霉菌（100×10，示未成熟孢子丝）

六、思考题

1、试比较三种培养和观察放线菌方法的优缺点。

答：①插片法的操作最为简便，且可以看到菌体在不同的时期菌丝的形态特产，一次性插入的玻片数可多至六七片，可供观察的次数较多；②玻璃纸法也可以看到菌体不同生长时期的形态特征，但不方便分次取出观察，通常只能整张纸取出观察，次数较少；③印片法可用于观察放线菌的孢子和孢子丝，且方便染色，染色之后观察也更加清晰，但是看到的孢子丝常常为断裂状态，并不是原生状态，也很难观察到气丝和基丝。

2、玻璃纸培养和观察法是否还可用于其他类群微生物的培养和观察为什么

答：可以。因为玻璃纸是一种对于生物没有毒害作用的半透膜，将它贴在培养基上后营养物质可以通过玻璃纸让生长在其上的微生物吸收成长，所以玻璃纸法广泛应用于多种放线菌和霉菌的培养与观察。

3、镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝

答：①看颜色，气丝的颜色较暗，而基丝比较透明；②看位置，基丝通常分布在盖玻片插入端的下部，而气丝则在插入端的上部；③看形态，基丝通常分支更多，往往不断分支并与其他基丝缠绕呈网状，而气丝分支数更少，两个分支间的菌丝长度更长，看上去也比基丝更稀疏。

七、培养基的配制

可溶性淀粉 20g

硝酸钾晶体 1g

氯化钠晶体

磷酸氢二钾粉末

硫酸镁晶体

硫酸亚铁晶体

琼脂粉末 20g

水 1000 mL

pH ~

配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。