溶菌酶
溶菌酶
前景与展望： 溶菌酶是一种小分子碱性蛋白,长期以来一直被作 为一种"模型"体系,用于研究蛋白质的空间构象、 酶动力学及其与分子进化、分子免疫间的关系。 溶菌酶具有分解细菌细胞壁中的肽聚糖的特殊作 用,因而起着防腐和杀菌作用,同时溶菌酶是高盐 基蛋白质,具有一定保健作用,而且与植酸、聚合 磷酸盐、甘氨酸等结合使用,可大大提高其防腐效 果
简介:
溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质（muramidase） 或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病 菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的 N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β -1,4糖 苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽， 导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌 酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、 RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此， 该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
制备原理:
溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，鸡蛋(含量约为 2%～4%)和哺乳动物的乳汁是溶菌酶的主要来源，目前， 溶菌酶仍属于紧销的生化物质，广泛应用于医学临床，具 有抗感染、消炎、消肿、增强体内免疫反应等多种药理作 用。 溶菌酶常温下在中性盐溶液中具有较高天然活性 ，在中 性条件下溶菌酶带正电荷，因此在分离制备时，先后采用 等电点法，D152型树脂柱层析法除杂蛋白，再经Sephadex G-50层析柱进一步纯化。最后用SDS-PAGE鉴定为一条带。 采用福林酚法测蛋白含量，分光光度法测定酶活性。
步骤： 蛋清溶菌酶分离提取步骤
溶菌酶活力测定
变性与等 电点选择 性沉淀
丙烯酸处 理
乙二醇浓缩
Sephade x G-50 柱层析
蛋清溶菌酶分离提取步骤
取上述各待测酶液稀释30~50倍，进行酶活测定。 用微量进样器取酶液样品10μ L，加入0.5mL 的 0.5mol/L 磷酸缓冲液(pH6.5)，混合均匀，37℃ 预热2min，然后加入同样已预热过的菌悬液0.5mL。 37℃保温反应15min 后，用2mL 乳化剂停止反应。 反应液经3000r/min 离心10min，取清液在721型 分光光度计上进行比色(540nm)。空白管用磷酸缓 冲液替代样液。
溶菌酶
溶菌酶溶菌酶溶菌酶( Lysozyme，E．C．3.2.17)，全称为1，4-p -N -溶菌酶，又称为细胞壁溶解酶，是自然界普遍存在的一种酶，因其能溶解细菌细胞壁具有溶菌作用而得名。
（一）溶菌酶的结构及物理化学性质溶菌酶易溶于水，遇碱易破坏，不溶于丙酮、乙醚，是一种白色、无臭的结晶粉末。
相对分子质量为14.7ku，由129个氨基酸残基组成，碱性氨基酸残基及芳香族氨基酸如色氨酸残基的比例很高，含有4个二硫键，如图2 -24所示，其等电点为10~11。
在37℃条件下溶菌酶的生物学活性可保持6h，当温度较低时保持时间更长，利于溶菌酶在体内发挥作用。
禽蛋蛋清是溶菌酶的重要来源，蛋清溶菌酶的物理化学性质如表17 -1所示。
溶菌酶由两个区域组成，由一个长的α螺旋所联接，其二级结构大多是α螺旋。
N末端的区域( f40~80)由一些螺旋线组成，大多数是反平行的β折叠。
第二个区域由fl~39和f89~129氨基酸残基组成。
分子中的这两个区域被一个螺旋体（f87天冬氨酸- 114精氨酸）所分离，分子组成了内部疏水外部亲水的基本结构，对溶菌酶发挥抗菌功能起着巨大的作用。
表17 -1 蛋清溶菌酶的物理化学特性特性数值相对分子质量14 400亚基数 1氨基酸129等电点10.7二硫键数 4碳水化合物所占比例0E1%280nm 26.493℃时的D热值（每分钟破坏90%的活性）110酶活力的实验通过浑浊溶壁微球菌的细胞溶解（二）溶菌酶的来源溶菌酶在自然界中普遍存在，在人和许多哺乳动物的组织和分泌液中，均发现有溶菌酶存在，其物化性质基本相似，溶菌酶的来源如表17 -2所示。
溶菌酶主要分布于禽蛋和鸟类蛋清中，尤其是浓厚蛋白的系带膜状层中。
禽蛋中异常丰富，占整个蛋清中的 3.5%，鸡蛋蛋清是溶菌酶的主要商业来源。
表17 -2溶菌酶的来源溶菌酶的来源溶菌酶的含量鸡蛋清 2 500 ~ 3 500μg/mL鸭蛋清 1 000 ~ 1 300μg/mL鹅蛋清500 ~ 700μg/mL眼泪 3 000 ~5 000μg/mL人乳55~ 75 μg/mL牛奶10~ 15μg/mL脾脏50 ~ 160μg/kg胸腺60~ 80μg/kg胰腺20~ 35μg/kg花椰菜汁25~ 28μg/mL木瓜汁8~ 9μg/mL卷心菜汁7~8μg/mL（三）溶菌酶的溶菌机制溶菌酶是一种糖苷水解酶，专门作用于微生物细胞壁，可以破坏组成微生物细胞壁的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之间的β-1，4-糖苷键，其作用机理见图17 -1。
溶菌酶知识
溶菌酶的研究前景
溶菌酶的作用机制研究
深入探究溶菌酶的作用机制，有助于发现新的溶菌酶种类和功能，为应用研究提供更多可能性。
溶菌酶的基因工程研究
基因工程技术的发展为溶菌酶的研究提供了新的手段，通过基因工程方法改良溶菌酶的性能，提高其稳定性和活性。
溶菌酶的抗菌作用研究
溶菌酶的抗菌作用研究可以为开发新型抗菌药物提供理论基础，有助于解决当前抗生素滥用和耐药性问题。
溶菌酶可以裂解细菌细胞壁，杀死多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，包括金黄 色葡萄球菌、大肠杆菌、志贺氏菌等。
溶菌酶的抗菌作用主要通过裂解肽聚糖中的N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间 的β-1,4糖苷键，破坏细菌细胞壁，导致细菌溶解死亡。
溶菌酶的抗肿瘤作用
溶菌酶能够激活机体免疫系统，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿 瘤细胞的生长和扩散。
溶菌酶知识
xx年xx月xx日
目录
• 溶菌酶简介 • 溶菌酶的生物活性 • 溶菌酶的生产和应用 • 溶菌酶的研究进展 • 溶菌酶的前景展望
01
溶菌酶简介
溶菌酶的定义
溶菌酶是一种能够裂解细菌细胞壁的肽酶。
它具有广谱的抗菌活性，能够破坏细菌细胞 壁，导致细菌溶解死亡。
溶菌酶的发现
溶菌酶最早是在19世纪末由法国微生物学家Jules Bordet发 现。
05
溶菌酶的前景展望
溶菌酶的应用前景
生物医药领域
在生物医药领域，溶菌酶作为 天然的抗菌剂，具有良好的生 物相容性和安全性，可用于药 物开发、医疗器械灭菌等方面
。
食品安全领域
在食品安全领域，溶菌酶可以用 于食品保鲜和防腐，提高食品卫 生质量，保障食品安全。
环保领域
在环保领域，溶菌酶可以用于水处 理、污染治理等方面，提高环保治 理效果。
溶菌酶
内容1：溶菌酶简介1.1 溶菌酶溶菌酶（N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，EC3.2.1.17）又称为胞壁质酶，是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶。
溶菌酶是由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白，化学性质非常稳定。
溶菌酶存在在自然界中，溶菌酶普遍存在于鸟类、家禽的蛋清和哺乳动物的眼泪、唾液、血液、鼻涕、尿液、乳汁和组织细胞中(如肝、肾、淋巴组织、肠道等)。
从木瓜、芜青、大麦、无花果和卷心菜、萝卜等植物中也能分离出溶菌酶，其中以蛋清含量最高。
溶菌酶生理作用在生物体内溶菌酶具有抗菌消炎，抗病毒，增强机体免疫力的生理功能，还可激活血小板，改善组织局部血液循环障碍，分泌脓液，增强局部防卫功能，具有止血、消肿等作用。
它还可以作为一种宿主抵抗因子，对组织局部起保护作用2：溶菌酶的种类溶菌酶的研究最早是从尼科尔(Nicoile)1907年发表枯草杆菌溶解因子的报告开始的。
两年后，Laschtschenko指出：鸡卵白强烈抑菌作用是酶作用的结果。
1922年英国细菌学家弗莱明(Fleming)发现人的唾液、眼泪中存在这种能溶解细菌细胞壁的酶，因其具有溶菌作用，故命名为溶菌酶。
1937年由Abraham与Robinson从卵蛋白中最先分离出晶体溶菌酶，此后人们在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在。
根据来源不同，将溶菌酶分为三类（1）动物源溶菌酶⏹动物源溶菌酶包括鸡蛋清溶菌酶及人和哺乳动物溶菌酶。
⏹鸡蛋清溶菌酶是目前研究和应用最多的，在鸡蛋清中约含有3.5%左右的酶，分子量为14000，其等电点在pH10.8左右，最适效应温度在50℃，化学性质稳定，pH在1.2～11.3之间改变时对酶结构影响很小，pH在4～7范围内100℃处理1min仍有近100%的活力，在210℃条件下加热1.5h仍具有活性。
鸡蛋清溶菌酶在碱性环境条件下稳定性较差，分解G+细菌，但对G-细菌不起作用。
研究表明其它鸟类蛋清溶菌酶也是由129个氨基酸残基组成，但其排列顺序和鸡蛋清溶菌酶不同，并且活性部位也不相同。
溶菌酶的名词解释
溶菌酶的名词解释溶菌酶是一种存在于细菌、动物和植物等生物体内的酶类物质，具有分解细菌细胞壁的能力。
这种酶广泛存在于自然界中，对于维持生态平衡和机体免疫防御方面都起着重要作用。
在这篇文章中，我们将详细探讨溶菌酶的特性、功能和应用。
一、溶菌酶的特性溶菌酶是一种水解酶，主要通过水解β-1,4-糖苷键的酶解作用，切断细菌细胞壁的纤维素和肽聚糖链。
溶菌酶可以依据其作用对象分为两类：1）内源性溶菌酶：存在于许多生物体内，如人体分泌的唾液、眼泪、鼻涕中，以及动物和植物体内的细胞和体液中；2）外源性溶菌酶：来自于环境中，如一些细菌和真菌分泌的溶菌酶。
溶菌酶的分子量通常在10,000至20,000道尔顿之间，具有抗菌谱较广的特点。
它是一种相对稳定、热稳定性较好且在酸性条件下活性仍保持较高的酶类物质。
二、溶菌酶的功能溶菌酶在生物体内扮演着重要的角色，具有多种功能。
1）免疫防御：溶菌酶在机体免疫系统中起到重要的作用。
当细菌感染机体时，免疫细胞会释放溶菌酶来破坏细菌的细胞壁，从而抑制其生长和扩散。
这对于维持机体的免疫稳态具有至关重要的意义。
2）消化道健康：人体消化道中存在着多种细菌，其中一些是有益的菌群。
溶菌酶可以促进这些有益菌的生长和繁殖，维护消化道健康。
同时，它还能降低有害菌在消化道内的数量，减少感染和疾病的风险。
3）食品工业应用：由于溶菌酶对细菌具有特异性的杀菌作用，它在食品工业中具有广泛的应用前景。
比如，将溶菌酶应用于食品加工中，可以延长食品的保质期，改善产品的质量和卫生安全性。
三、溶菌酶的应用溶菌酶的研究和应用领域非常广泛，涉及生物医药、食品工业、环境科学等多个领域。
1）生物医药领域：溶菌酶已被广泛应用于临床医学中，特别是在抗生素研发和治疗上。
由于细菌在抗生素中产生耐药性的情况日益严重，溶菌酶作为一种具有独特杀菌作用的物质，被认为是改善抗生素疗效的有力补充。
此外，溶菌酶还可用于细菌感染的快速诊断和疗效评估。
2）食品工业领域：溶菌酶在食品加工过程中的应用正在得到重视。
高考溶菌酶常考知识点
高考溶菌酶常考知识点溶菌酶是一种可以破坏细菌细胞壁的酶类物质。
在高考生物考试中，溶菌酶是一个常见的知识点。
本文将介绍溶菌酶的基本概念、作用机理、应用领域以及相关实验方法。
一、溶菌酶的基本概念溶菌酶也被称为葡萄球菌溶菌酶，是一种能够裂解葡萄球菌细胞壁的酶类物质。
它主要存在于人类和动物体内的各种组织和分泌物中，是一种天然的防御机制。
溶菌酶是由细菌、真菌、植物和动物等生物体产生的一类酶，具有广泛的生物学活性。
二、溶菌酶的作用机理溶菌酶的作用机理主要是通过破坏细菌细胞壁而导致细菌死亡。
它能够降低细菌细胞壁的完整性，导致内部渗漏和细胞内容物外泄，最终导致细胞溶解。
在免疫防御中，溶菌酶可以识别病原菌细胞壁上的特定抗原，从而发挥抗菌作用。
三、溶菌酶的应用领域溶菌酶在医药领域具有广泛的应用价值。
首先，它可以作为一种抗菌剂用于治疗细菌感染性疾病。
其次，溶菌酶还可以作为一种重要的实验工具，用于细菌分子生物学研究中，如基因工程、DNA重组等领域。
此外，溶菌酶还广泛应用于食品工业、饲料工业、环境保护等领域。
四、溶菌酶相关的实验方法在研究溶菌酶时，有几种常用的实验方法可以用来检测其活性和测定其浓度。
首先是溶菌酶活性的检测，常用的方法有酶活性测定法和酒石酸盐凝胶电泳法。
其次是溶菌酶浓度的测定，常用的方法有比色法、生物学活性测定法和免疫学测定法。
五、总结通过对溶菌酶的基本概念、作用机理、应用领域和相关实验方法的介绍，可以看出溶菌酶在生物学领域中具有重要的研究和应用价值。
对于高考生物考试来说，了解溶菌酶的相关知识点，有助于理解细菌的抵抗机制以及抗菌药物的开发和应用。
同时，掌握溶菌酶相关实验方法，可以对细菌研究提供有力的实验手段。
本文对高考溶菌酶的常考知识点进行了概括性的介绍，希望对广大考生有所帮助。
在备考过程中，建议考生加强对溶菌酶相关知识的学习和理解，注重实验方法的掌握，提高解题能力和实验操作水平。
祝愿各位考生取得优异的成绩！。
高中生物：溶菌酶
溶菌酶
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,是一种能水解细菌中黏多糖的碱性酶。
溶菌酶主要通过破坏细胞壁中的N■乙酰胞壁酸和N■乙酰氨基葡萄糖之间的p-1,4糖昔键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复合体，使病毒失活。
该酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、乳汁等液体，以及微生物也含此酶，其中以蛋清含量最为丰富。
其中根据其来源的不同，可以将其分为四类，分别是植物溶菌酶、动物溶菌酶、微生物溶菌酶以及蛋清溶菌酶。
溶菌酶来自单核细胞、中性粒细胞,是一种能溶解某些细菌的酶类。
可酵解革兰氏阳性球菌壁上的乙酰氨基多糖成分,使细胞壁破裂。
其分子量为14000—15000Da,可从肾小球基底膜滤出,90%以上可被肾小管重吸收，所以尿液中很少或无溶菌酶。
用一种细菌悬液作为基质，加入待测标本后保温一定时间，如标本中含溶菌酶，则细菌被溶解，细菌悬液浊度下降或变清，可用光电比浊法测其浊度变化, 或用平皿法测定其溶菌圈的大小。
溶菌酶
眼泪中的溶菌酶能杀死细胞壁
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溶菌酶的分离与提纯
溶菌酶的纯化
离子交换层析法：离子交换层析（IEC）是基于 待分离物质的酸碱性、极性等差异，它们与离子 交换剂的亲和力不同，通过离子之间的吸附和脱 吸附而将各组分依次从层析柱中洗脱下来，从而 达到分离目的。 聚丙烯层析柱、 CM Sepharose FF（快速羧甲 基琼脂糖凝胶）、 0.5 M NaCl洗脱溶菌酶、用考 马斯亮蓝G-250检测杂蛋白的洗脱情况。
bacteria)]的细胞壁多糖是N-乙酰氨基葡糖（Nacetylglucosamine, NAG）-N-乙酰氨基葡糖乳酸 （N-acetylmuramic acid, NAM）的共聚物，其中 的NAG及NAM通过β-1，4糖苷键而交替排列。溶 菌酶对于破坏G+细菌的细胞壁较G-细菌强。 ）
溶菌酶是一种葡糖苷酶，作用底物是几丁质。 溶菌酶的内部几乎全部是非极性的 (nonpolar) 。疏水的相互作用在溶菌酶的 折叠构象中起重要作用。在溶菌酶分子的表 面，有一个比较深的裂缝，其大小恰好能容 纳多糖底物的6个单糖，这是溶菌酶的活性 部位。活性部位所在的裂缝(cleft)正好被6 个糖残基所装满，水解部位只能发生在D-E 之间。
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来源
最早对溶菌酶的研究起于 1907 年发表的枯草芽孢杆菌中的溶解 子,1922年，在人的唾液、眼泪 中存在有能够溶解细胞壁杀死细 菌的酶,因而被命名为溶菌酶。 1937年从卵蛋白中分离出溶菌 酶晶体,揭开了研究溶菌酶的历 史篇章。1965年,英国的菲利普 等用X衍射法对溶菌酶进行研究 分析,第一个完全弄清了溶菌酶 的立体结构。
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应用
溶菌酶在食品工业中的应用
替代有害人体健康的化学防腐剂（如苯甲酸及其 钠盐等），以达到延长食品货架期的目的 溶菌酶可以作为婴儿食品的添加剂，主要用于牛 乳的“人乳化”（尤其在欧洲）。 溶菌酶是一种无毒、无害的高盐基蛋白质，且具 有一定的保健作用，有抗感染和增强抗生素作用 效力，促进血液凝固及止血作用，有组织再生作 用。可以在保健食品中添加一定量以提高保健效 果。
溶菌酶配制
溶菌酶配制
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，是一种具杀菌作用的天然抗感染物质，具有抗菌、抗病毒、抗炎、增强抗生素疗效及加快组织恢复的作用。
那么你知道溶菌酶如何配制吗？下面介绍一下溶菌酶配置。
【材料】
1•无菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 10×100 试管，试管架，无菌平皿，打孔器，微量加样器，分光光度计，水浴箱，温箱等。
【方法】
1. 菌液配制：将 PBS 加入枯草芽胞杆菌斜面，置室温5-10 分钟后制成菌悬液；在波长 640nm 处，测定菌悬液的浓度，并将菌液浓度调至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶配制：称取溶菌酶标准品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱冻存，等使用时再稀释成 100m g/ml 、 50 m g/ml、 25 m g/ml和 10 m g/ml等详细规格。
以上就是溶菌酶的配置，注意一定要在无菌的情况下配置，否则会失败。
溶菌酶
用大小不同的NAG寡聚体作底物测定被溶 菌酶水解的相对速率，结果发现，少于4 个糖的寡聚体水解速率甚小，当由四聚体 增加到五聚体时，水解速率猛增500倍， 五聚体增加到六聚体，速率增加近8倍， 六聚体增加到八聚体，速率不再变化。这 种情况与X射线晶体结构分析结果一致， 活性部位所在的裂缝(cleft)正好被6个糖残 基所装满。
四·溶菌酶的制备.分离. 活力测试 · . .
溶菌酶（ 实验原理：溶菌酶（lysozyme）是由弗莱明在 ） 1922年发现的，它是一种有效的抗菌剂，全称 年发现的，它是一种有效的抗菌剂， 年发现的 溶菌酶， 粘肽N-乙酰基胞壁 为1，4-β-N-溶菌酶，又称作粘肽 乙酰基胞壁 ， 溶菌酶 又称作粘肽 酰水解酶或胞壁质酶。活性中心为天冬氨酸52 酰水解酶或胞壁质酶。活性中心为天冬氨酸 和谷氨酸35，是一种糖苷水解酶 糖苷水解酶， 和谷氨酸 ，是一种糖苷水解酶，能催化水解 粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖 乙酰氨基葡萄糖（ 粘多糖的 乙酰氨基葡萄糖（NAG）与N-乙酰 ） 乙酰 胞壁酸（ 糖苷键， 胞壁酸（NAM）间的 ，4糖苷键，相对分子 ）间的β-1， 糖苷键 质量14700Da，由129氨基酸残基构成，由于其 氨基酸残基构成， 质量 ， 氨基酸残基构成 中含有较多碱性氨基酸残基， 中含有较多碱性氨基酸残基，所以其等电点高 左右， 达10.8左右，最适温度为 左右 最适温度为50OC，最适 为6～7 ，最适PH为 ～ 左右。 的消光系数[ 左右。在280nm的消光系数 ]为13.0。该酶活 的消光系数 为 。 性可被一些金属离子Cu2+、Fe2+、Zn2+（10性可被一些金属离子 、 、 （ 5～10-3M）以及 乙酰葡萄糖胺所抑制，能被 乙酰葡萄糖胺所抑制， ～ ）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制 Mg2+、Ca2+（10-5～10-3M）、 ）、NaCl所激活。 所激活。 、 （ ～ ）、 所激活
溶菌酶
溶菌酶溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。
主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。
因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
1简介中文名称：溶菌酶中文同义词：脆壁质酶；鸡蛋白；胞壁质酶(N-乙酰胞壁质聚糖水解酶);溶菌酶(鸡蛋清)英文名称：Lysozyme,简称LZM英文同义词：REDUCED LYSOZYME,WATERSOLUBLE;MUCOPEPTIDE-GLYCOHYDROLASE;MUCOPEPTIDE GLYCOLHYDROLASE;MUCOPEPTIDEN-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE;MUCOPEPTIDEN-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE III;MUCOPEPTIDEN-ACETYLMURAMOYLHYDROLASE GRADE VI:CHLORIDE;MURAMIDASE;MURAMIDASE GRADE III[1]CAS号：12650-88-3EINECS号：235-747-3[2]分子式：无分子量：14000左右EINECS号：235-747-3相关类别：发酵剂；Enzymes;酶；生化试剂；生物化学品。
分子结构图：2性质储存条件：2-8°Cform：powdercolor：white危险品标志B安全说明23-24/25-22WGK Germany3RTECS号OL5989850F3-10白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，pI为11.0-11.35，最适pH 值6.5。
高中溶菌酶知识点总结
高中溶菌酶知识点总结一、溶菌酶的结构和功能1. 溶菌酶的结构溶菌酶是一种酶类蛋白质，其主要由氨基酸组成。
它的分子结构通常呈现出球状或者棒状，具有一定的空间构象。
溶菌酶的分子结构决定了其在水溶液中的活性和作用方式。
2. 溶菌酶的功能溶菌酶的主要功能是溶解细菌细胞壁。
细菌的细胞壁主要由肽聚糖和脂多糖构成，溶菌酶可以在特定的酶活性和pH条件下，将细菌细胞壁中的肽聚糖和脂多糖降解成小分子物质，使细菌细胞失去保护作用而死亡。
3. 溶菌酶的作用机制溶菌酶作用的主要机制是通过其对细菌细胞壁的特异性降解作用。
当细菌受到感染或者侵袭时，生物体内的溶菌酶会针对特定种类的细菌细胞壁进行降解，从而消灭或抑制细菌的生长和繁殖。
二、溶菌酶在生物防御系统中的作用1. 溶菌酶对抗微生物感染在生物体的免疫系统中，溶菌酶是一种重要的抗菌蛋白质。
它可以通过溶解细菌细胞壁的方式直接杀死细菌，起到预防和抵抗感染的作用。
溶菌酶在吞噬细胞和粒细胞等免疫细胞中起着重要的作用，可以帮助这些细胞识别和清除各种外来的病原体。
2. 溶菌酶在炎症反应中的作用当生物体受到外伤或感染时，免疫系统会产生炎症反应，溶菌酶参与其中。
溶菌酶可以通过促进炎症反应的进行，从而加速伤口愈合和抗菌作用，保护机体免受病原菌的侵害。
3. 溶菌酶对营养物质的释放在生物体内，溶菌酶还可以通过溶解细菌细胞壁的方式帮助其吸收营养物质。
当溶菌酶降解细菌细胞壁时，会释放出一些营养物质，供生物体吸收和利用，起到促进生长和维持健康的作用。
三、与溶菌酶相关的重要概念和应用1. 溶菌酶的调节机制溶菌酶的活性受到多种因素的影响，包括pH值、温度、离子强度等。
不同种类的溶菌酶对这些因素的适应性也有所不同。
因此，对溶菌酶的调节和控制是生物体内免疫系统正常运作的重要保障。
2. 溶菌酶在医药和生物技术中的应用由于溶菌酶具有一定的抗菌作用和对细胞壁的特异性降解能力，因此在医药和生物技术领域有着广泛的应用。
例如，溶菌酶可以作为一种抗菌药物用于治疗细菌感染的疾病；在生物技术中，溶菌酶可以用于细胞壁的降解和细胞的裂解，有助于分离和提取细胞内的蛋白质和核酸。
溶菌酶
溶菌酶作用机制
溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶。
它作用于N一乙酰氨基葡萄糖胺和N一乙酰胞壁酸之间的B一1，4糖苷键，能使某些细菌细胞中粘多糖成分分解。
因而具有溶菌能力。
溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能，处理革兰氏阳性细菌可得到原生质体。
溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，又具有一定的溶菌作用，因此可用作食品防腐剂。
盐析法
实验原理：高浓度的中性盐溶液中存在着大量的带电荷的盐离子，它们能中和生物分子表面的电荷，使之得以稳定的双电层受损，从而破坏分子外围的水化层；另外，大量盐离子自身的水合作用降低了自由水的浓度，从另一方面压缩了水化层的浓度，降低了它的亲水性，从而沉淀析出。
1、将预处理的蛋清倾人烧杯中，边搅拌边加入蛋白质5％的食盐粉末，促使氯化钠细粉及时溶解，以避免局部浓度过高或沉淀于容器底部，否则会引起蛋白质的变性而产生大量的白色沉淀．
2、溶解后再用0．1mol／L的NaOH溶液调节pH9．5-pH10.0。
置于4℃环境中，数天后即有溶菌酶结晶出现，将酶晶体过滤，收集结晶沉淀粉，用丙酮脱水，真空干燥即为粗产品。
3、将制得的粗品用pH4．6的醋酸溶解，然后让酶液静置24小时。
4、过滤除去不溶物，收集滤液并量出体积，按每100毫升液体加5毫克NaCl的比例加入，然后用0．1mol／L的NaOH溶液缓慢地将其pH值调节到10．8后，低温下静置结晶。
为加速结晶过程可向酶液中加入溶菌酶晶种，待结晶完全后再倾去上清液，用布氏漏过滤可得溶菌酶结晶。
如纯度不高，可重复操作提纯，直至达到所需的纯度为止，结晶于30—40℃得溶菌酶产品。
溶菌酶反应条件
溶菌酶反应条件摘要：一、溶菌酶简介1.溶菌酶的定义2.溶菌酶在生物体中的作用二、溶菌酶反应条件1.溶菌酶的激活条件2.溶菌酶的最适反应温度3.溶菌酶的最适反应pH 值4.溶菌酶的抑制剂三、溶菌酶的应用1.溶菌酶在医学领域的应用2.溶菌酶在食品工业中的应用3.溶菌酶在环境保护中的应用正文：溶菌酶是一种能够分解细菌细胞壁的蛋白质，具有抗菌、消炎、抗病毒等生物活性。
溶菌酶广泛存在于动植物和微生物中，在生物体中起到防御病原微生物的作用。
本文将详细介绍溶菌酶的反应条件及其在多个领域的应用。
首先，溶菌酶的激活条件与其来源和种类密切相关。
一般来说，溶菌酶需要在特定的激活剂作用下才能发挥活性。
例如，人类的眼泪中含有溶菌酶，可以迅速破坏细菌的细胞壁，从而具有抗菌作用。
此外，一些植物、动物和微生物产生的溶菌酶也需要在适当的条件下才能激活。
其次，溶菌酶的最适反应温度和pH 值对其活性有很大影响。
不同种类的溶菌酶的最适反应温度和pH 值有所差异，但一般来说，溶菌酶在接近中性（pH 6.5-7.5）的条件下活性最高。
最适反应温度则因溶菌酶来源不同而有所差异，一般在37℃左右。
然而，溶菌酶的活性受到某些物质的影响。
这些物质被称为溶菌酶抑制剂，可以抑制溶菌酶的活性。
例如，黏多糖和多糖类物质可以与溶菌酶结合，降低其抗菌能力。
因此，在实际应用中需要考虑溶菌酶抑制剂的影响，以保证溶菌酶的稳定性和生物活性。
溶菌酶在多个领域有广泛的应用。
在医学领域，溶菌酶被用于治疗各种感染性疾病，如皮肤感染、咽喉炎等。
在食品工业中，溶菌酶可以作为天然的防腐剂，延长食品的保质期。
此外，溶菌酶还在环境保护方面发挥作用，如降解水体中的有机污染物等。
总之，溶菌酶作为一种具有广泛生物活性的蛋白质，其反应条件对活性有很大影响。
溶菌酶的种类及其作用
溶菌酶的种类及其作用溶菌酶是一类具有溶解细菌细胞壁作用的酶，广泛存在于动物、植物和微生物体内。
它能够通过降解细菌细胞壁的主要成分——胆碱酸聚合物，从而使细菌失去保护屏障，进而导致细菌死亡。
溶菌酶在医学、食品工业和生物技术等领域具有重要的应用价值。
根据其来源和作用机制的不同，溶菌酶可以分为多个种类。
以下是常见的几种溶菌酶及其作用：1. 乳酸菌溶菌酶：乳酸菌溶菌酶是一类来源于乳酸菌的溶菌酶，主要作用于革兰氏阳性菌。
乳酸菌溶菌酶能够降解细菌细胞壁的胆碱酸聚合物，破坏细菌细胞壁的完整性，从而导致细菌死亡。
乳酸菌溶菌酶广泛应用于食品工业中的发酵过程和食品保鲜中，具有抑制细菌生长、改善食品质量的作用。
2. 枯草杆菌溶菌酶：枯草杆菌溶菌酶是一类来源于枯草杆菌的溶菌酶，主要作用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
枯草杆菌溶菌酶具有较强的抗菌活性，能够迅速破坏细菌细胞壁，引起细胞内容物泄漏，最终导致细菌死亡。
枯草杆菌溶菌酶在医学领域被广泛应用于抗感染药物的研发和生产中。
3. 葡萄球菌溶菌酶：葡萄球菌溶菌酶是一类来源于葡萄球菌的溶菌酶，主要作用于革兰氏阳性菌。
葡萄球菌溶菌酶能够降解细菌细胞壁的胆碱酸聚合物，破坏细菌细胞壁的完整性，从而导致细菌死亡。
葡萄球菌溶菌酶在医学领域被广泛应用于抗感染药物的研发和生产中。
4. 嗜肺军团菌溶菌酶：嗜肺军团菌溶菌酶是一类来源于嗜肺军团菌的溶菌酶，主要作用于革兰氏阴性杆状菌。
嗜肺军团菌溶菌酶能够降解细菌细胞壁的胆碱酸聚合物，破坏细菌细胞壁的完整性，从而导致细菌死亡。
嗜肺军团菌溶菌酶在医学领域被广泛应用于抗感染药物的研发和生产中。
除了上述几种常见的溶菌酶外，还有其他一些来源于不同微生物的溶菌酶，如链球菌溶菌酶、肺炎克雷伯杆菌溶菌酶等。
这些溶菌酶在不同领域具有不同的应用价值。
总之，溶菌酶是一类具有溶解细菌细胞壁作用的重要酶类，在医学、食品工业和生物技术等领域具有广泛应用价值。
通过降解细菌细胞壁的胆碱酸聚合物，溶菌酶能够破坏细菌细胞壁的完整性，引起细胞内容物泄漏，最终导致细菌死亡。
溶菌酶小结
溶菌酶小结溶菌酶是一种能分解细菌细胞壁的酶，属于酵母菌溶素酶家族。
它可以通过水解细菌细胞壁上的N-乙酯键，引起细菌细胞壁的溶解，并导致细菌的死亡。
溶菌酶在医药、食品、生物工程等领域具有广泛应用。
溶菌酶具有以下特点：1. 选择性作用：溶菌酶能够辨别和结合到特定细菌细胞壁上的结构，例如几丁质和骨架多聚糖。
这使得溶菌酶具有对特定细菌的高度选择性和杀菌活性。
2. 低毒性：溶菌酶对人体细胞没有毒性，对抗抗菌耐药性没有发现。
这使得溶菌酶在医疗领域具有潜力，可以作为一种新型的抗菌剂。
3. 水溶性：溶菌酶是水溶性的，易于制备和应用。
它可以在水溶液中迅速溶解，并能够在细胞表面快速作用。
4. 物理化学性质稳定：溶菌酶具有较好的物理化学性质稳定性，可以耐受一定温度和酸碱条件。
溶菌酶的应用主要包括：1. 医疗领域：溶菌酶可以用于治疗细菌感染。
它可以作为一种抗菌剂，直接杀灭细菌。
此外，溶菌酶还可以与其他抗菌剂联合使用，增强其杀菌活性。
2. 食品加工领域：溶菌酶可以用于食品加工中，用于改善食品的品质。
例如，它可以用于腌制食品，延长食品的保质期。
3. 生物工程领域：溶菌酶可以用于基因工程研究中，用于分离和纯化细胞膜上的蛋白质。
4. 养殖业领域：溶菌酶可以用于水产养殖中，作为一种抑制水产动物病原细菌生长的方法。
溶菌酶的开发和应用还面临一些挑战。
例如，溶菌酶的纯化和大规模生产仍然是困难的。
此外，由于细菌细胞壁的多样性，溶菌酶的选择性和效果也存在一定的限制。
总之，溶菌酶作为一种具有广泛应用潜力的抗菌剂，在医学、食品、生物工程等领域都有重要的应用前景。
随着对溶菌酶研究的深入，相信它将会在更多领域发挥作用，为人类健康和生活贡献更多。
溶菌酶反应条件
溶菌酶反应条件摘要：1.溶菌酶简介2.溶菌酶反应条件a.温度b.pH值c.离子强度d.反应时间3.溶菌酶反应应用a.食品工业b.医药领域c.环境保护正文：溶菌酶是一类能够水解细菌细胞壁的酶，具有抗菌、消炎、抗病毒等生物活性。
在实验室和工业生产中，溶菌酶被广泛应用于食品加工、医药制造和环境保护等多个领域。
为了充分发挥溶菌酶的性能，了解其反应条件至关重要。
首先，温度是影响溶菌酶活性的重要因素。
溶菌酶的最适工作温度一般在30℃-50℃之间，低温条件下酶活性较低，高温条件下酶容易失活。
因此，在实际应用中需要根据具体情况选择适当的温度。
其次，pH值对溶菌酶的活性和稳定性也有很大影响。
溶菌酶的最适工作pH值通常在6.5-7.5之间，酶活性会随着pH值的偏离而降低。
在极端条件下，pH值过高或过低都可能导致溶菌酶变性失活。
因此，在实验过程中需要严格控制pH值，以保证溶菌酶的性能。
再者，离子强度也会对溶菌酶的活性产生影响。
通常情况下，离子强度越高，溶菌酶的活性越低。
因此，在实验过程中应尽量选择低离子强度的缓冲体系。
最后，反应时间是溶菌酶反应效果的关键因素。
反应时间过短，溶菌酶可能无法完全发挥作用；反应时间过长，溶菌酶容易因过度作用而失活。
因此，在实际应用中需要根据实验目的和实际情况合理设置反应时间。
总之，溶菌酶反应条件包括温度、pH值、离子强度和反应时间等因素，这些条件都会影响溶菌酶的活性和稳定性。
为了充分发挥溶菌酶的性能，在实验过程中需要严格控制这些条件。
溶菌酶反应条件
溶菌酶反应条件摘要：1.溶菌酶简介2.溶菌酶反应条件a.温度b.pH 值c.离子浓度d.反应时间3.溶菌酶反应过程中的影响因素a.底物浓度b.酶浓度c.溶剂类型d.溶剂温度4.溶菌酶反应的应用a.食品工业b.医药领域c.环保产业正文：溶菌酶是一类能够水解细菌细胞壁的酶，具有抗菌、消炎、抗病毒等生物活性。
溶菌酶广泛存在于动植物、微生物等生物体中，其活性受多种因素影响，其中反应条件是关键因素之一。
1.溶菌酶反应条件溶菌酶反应条件主要包括温度、pH 值、离子浓度和反应时间。
a.温度：溶菌酶的最适活性温度通常在25°C - 40°C 之间，不同种类溶菌酶的最适活性温度有所不同。
在一定范围内，随着温度的升高，溶菌酶活性增强，但当温度超过最适温度时，溶菌酶活性会降低。
b.pH 值：溶菌酶对pH 值敏感，不同种类的溶菌酶的最适pH 值有所差异。
通常，溶菌酶的最适pH 值在6.5 - 8.0 之间。
在最适pH 值下，溶菌酶活性最高，而在pH 值过高或过低时，溶菌酶活性会受到抑制。
c.离子浓度：离子浓度对溶菌酶活性有一定影响。
某些离子如钙离子、镁离子等可以激活溶菌酶，提高其活性；而其他离子如锌离子、铅离子等则会抑制溶菌酶的活性。
d.反应时间：反应时间是影响溶菌酶活性的重要因素。
在一定范围内，随着反应时间的延长，溶菌酶活性逐渐提高，直至达到最大活性。
然而，当反应时间过长时，溶菌酶可能会因自身降解或其他因素导致活性降低。
2.溶菌酶反应过程中的影响因素a.底物浓度：底物浓度对溶菌酶活性有一定影响。
在一定范围内，随着底物浓度的增加，溶菌酶活性提高，但当底物浓度达到一定值后，溶菌酶活性趋于稳定。
b.酶浓度：酶浓度对溶菌酶活性也有影响。
在一定范围内，随着酶浓度的增加，溶菌酶活性提高，但当酶浓度达到一定值后，溶菌酶活性趋于稳定。
c.溶剂类型：溶剂类型对溶菌酶活性有一定影响。
不同溶剂对溶菌酶的溶解性和稳定性不同，因此会影响溶菌酶的活性。
溶菌酶的溶菌实验报告
1. 了解溶菌酶的溶菌原理和作用。
2. 掌握溶菌酶溶菌实验的操作步骤。
3. 通过实验验证溶菌酶对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的溶菌效果。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种天然存在的碱性蛋白酶，能够水解细菌细胞壁中的肽聚糖，导致细菌细胞壁破裂，从而使细菌溶解。
溶菌酶主要针对革兰氏阳性菌，对革兰氏阴性菌的溶菌效果较差。
三、实验材料1. 实验仪器：显微镜、恒温培养箱、离心机、移液器、烧杯、试管等。
2. 实验试剂：溶菌酶溶液、细菌培养液（革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌）、生理盐水、革兰氏染色液等。
3. 实验菌株：金黄色葡萄球菌（革兰氏阳性菌）、大肠杆菌（革兰氏阴性菌）。
四、实验方法1. 细菌培养：将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接种于肉汤培养基中，置于恒温培养箱中培养18-24小时，使细菌达到对数生长期。
2. 溶菌酶溶液制备：将溶菌酶溶解于生理盐水中，配制成不同浓度的溶菌酶溶液。
3. 实验分组：将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接种于试管中，分为以下几组：A组：金黄色葡萄球菌+溶菌酶溶液B组：金黄色葡萄球菌+生理盐水C组：大肠杆菌+溶菌酶溶液D组：大肠杆菌+生理盐水4. 溶菌实验：将各组的试管置于恒温培养箱中，观察并记录细菌溶解情况。
5. 结果观察与记录：通过显微镜观察各组的细菌溶解情况，记录细菌溶解所需时间。
1. 金黄色葡萄球菌溶菌实验：A组：细菌在溶菌酶作用下迅速溶解，溶解时间为5分钟。
B组：细菌无明显溶解现象，溶解时间为30分钟。
2. 大肠杆菌溶菌实验：C组：细菌在溶菌酶作用下溶解缓慢，溶解时间为30分钟。
D组：细菌无明显溶解现象，溶解时间为30分钟。
六、实验结论1. 溶菌酶对金黄色葡萄球菌具有明显的溶菌作用，对大肠杆菌的溶菌作用较弱。
2. 溶菌酶在细菌溶解过程中起到了关键作用，其溶菌效果与溶菌酶浓度和时间密切相关。
七、实验讨论1. 本实验结果表明，溶菌酶对革兰氏阳性菌的溶菌效果明显优于革兰氏阴性菌，这与溶菌酶的溶菌原理相符。
溶菌酶反应条件
溶菌酶反应条件溶菌酶是一种在生物体内广泛存在的酶，具有溶解细菌细胞壁的作用。
它不仅在生物体内起到免疫防御的作用，还在许多工业领域和生物技术应用中发挥着重要作用。
本文将讨论溶菌酶反应的条件、应用领域以及如何提高溶菌酶活性。
一、溶菌酶简介溶菌酶是一种碱性蛋白质，分子量在10000～70000之间。
它具有特定的空间结构，使得其具有较高的稳定性。
在人体内，溶菌酶主要存在于泪液、唾液、血清等体液中，对细菌、病毒等病原体具有溶解作用。
二、溶菌酶反应的条件1.适宜的pH值：溶菌酶的最适pH值一般在6.8～7.4之间，超出这个范围会影响其活性。
2.适宜的温度：溶菌酶在不同温度下的活性差异较大，一般在40℃左右活性最高。
过高或过低的温度都会降低其活性。
3.反应时间：溶菌酶反应时间的长短会影响其对细菌的溶解效果。
通常在反应一段时间后，溶菌酶的活性会达到最高。
4.酶浓度与底物浓度：酶浓度和底物浓度对溶菌酶的反应速率有显著影响。
适当提高酶浓度和底物浓度可以提高反应速率，但过高的酶浓度可能导致反应速率下降。
三、溶菌酶的应用领域1.医药领域：溶菌酶作为一种天然抗菌剂，可用于治疗眼部、呼吸道等感染性疾病。
此外，它还可以用于制备抗病毒药物和抗肿瘤药物。
2.食品工业：溶菌酶可作为一种安全、高效的食品防腐剂，延长食品的保质期。
3.洗涤剂：溶菌酶可用于制备具有抗菌功能的洗涤剂，减少衣物和皮肤感染的风险。
4.生物降解：溶菌酶可用于生物降解塑料、纤维等材料，减少环境污染。
四、提高溶菌酶活性的方法1.优化反应条件：根据溶菌酶的特性，调整反应体系的pH值、温度等条件，以提高酶活性。
2.酶修饰：通过化学或生物技术手段对溶菌酶进行修饰，改善其结构和活性。
3.制备突变体：通过基因工程技术制备具有更高活性的溶菌酶突变体。
4.酶固定化：将溶菌酶固定在载体上，提高其在反应体系中的稳定性和活性。
五、总结溶菌酶作为一种具有广泛应用前景的酶，其在反应条件、应用领域以及活性提高方面有许多值得研究的地方。
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溶菌酶
2010级基地班马冬珂10104109
一：溶菌酶的性质：
１９０７年，Ｎｉｃｏｌｌｅ最早发表了枯草杆菌溶菌因子的报告，两年后，Ｌａｓｃｈｔｓｃｈｅｎｋｏ指出，鸡蛋也有较强溶菌活性，并把它命名为溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ，ＥＣ３．２．１．１７）。
紧接着Ｆｌｅｍｉｎｇ和Ｍｅｙｅｒ等证实植物中也含有溶菌酶，以后人们对溶菌酶的特性有了更深入的认识。
（1）
溶菌酶是一种广泛存在于各种动植物有机物中的糖苷水解酶，作用于Ｎ一乙酰氨基葡萄糖和Ｎ一乙酰胞壁之间的８—１，４键，能使某些细菌细胞壁中的粘多糖成分分解。
是由１２９个氨基酸残基组成的碱性球蛋白，等电点在ｐＨ值１０．８左右，分子量为１４０００，化学性质非常稳定。
当ｐＨ值在１．２—１１．３的范围剧烈变化时，其结构几乎不变。
在酸性环境下，溶菌酶对热的稳定性很强；ｐＨ值低于４时，溶菌酶可以长期在室温下存放。
其纯品为白色或微黄、黄色的结晶体或无定型粉末，无异味，，微甜，易溶于水，遇碱易被破坏，不溶于乙醚. 280nm的消光系数为13.0。
酶活性可被该酶活性可被一些金属离子Cu2+，Fe2+，Zn2+（10-5～10-3M）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制，能被Mg2+,Ca2+（10-5～10-3M）、NaCl所激活。
二：提取原材料和提取方法:
溶菌酶广泛存在于家禽的蛋清、哺乳动物组织的分泌液中，一些植物（如卷心菜、木瓜等）的汁液中也有强力的溶菌酶活性。
目前一般从蛋清和蛋壳中提取溶菌酶。
提取原料：鸡蛋（含量约为2%到4%）。
鸡蛋清按水分和固形物所占比重，则含水分87%，固形物13%；固形物中大约90%是蛋白质， (2)
提取方法：
１.蛋清中溶茵酶的提取：蛋清中的溶菌酶可用吸附法提取，过程如下：蛋清过滤（９０目１００目），加入７２４型树脂吸附（每公斤蛋清加１５ｇ）一倾去蛋清一冲洗并控干树脂。
用质量分数１０％硫酸铵洗脱一洗胶液中加入晶体硫酸铵（３０ｇ／１００ｍＬ）沉淀溶菌酶，沉淀晾干即得到溶菌酶粗制品。
蛋清中的溶菌酶也可用直接结晶法制取，即在蛋清中加入食盐（ＮａＣＩ）。
使其质量分数达到５％，并调节溶液ｐＨ值至１０．０左右，加入少许溶菌酶晶体为晶种，于-４摄氏度冰箱冷却静置７ｄ一１４ｄ即可获得溶菌酶的结晶品。
这种工艺方法可获得较高纯度的溶菌酶，收率也比较高。
可广泛用于从蛋清提取溶菌酶的工业化生产。
２.蛋壳中溶茵酶的提取：蛋壳中（实际上是蛋壳膜）溶菌酶含量虽然较低，但从变废为宝的角度考虑，仍是提取溶菌酶的重要原料。
具体工艺流程如下：蛋壳一质量分数１％ＮａＣＩ抽提滤液加热去除杂蛋白，加聚丙酸凝聚（富集），溶解凝聚物，加氯化钙沉淀上清液结晶。
三：制备（重点）：
1..酸性条件下热处理法提纯溶菌酶：在酸性条件下溶菌酶具有热稳定性，不易变性失活，且溶菌酶和卵蛋白的等电点分别为11.0和4.5，由于溶菌酶和卵蛋白的性质著异，因而在实验中采用热变性和调pH值使卵蛋白沉淀的方法来探讨去除卵蛋白的较好方法。
研究发现溶菌酶和卵蛋白之间存在静电作用力，在加热
以及调等电点来除卵蛋白的时候溶菌酶会随卵蛋白一起沉淀。
加入磷酸盐缓冲液后经热处理和调pH值到卵蛋自等电点，沉淀中不再含有溶菌酶，实验证明加入磷酸盐缓冲液可以去除溶菌酶和卵蛋向之间的静电作用力。
研究得出去除卵蛋白效果最好的时候是在pH=7.5的磷酸盐缓冲液的条件下，100°C下热处理2min，上清中溶菌酶纯度可达到67.17%，远高于其它条件的磷酸盐缓冲液以及碳酸氢钠缓冲液条件下的处理效果。
该方法虽然简单成本低，但是也造成蛋清余液无法重复利用，加人了实际生产成本。
2.离子交换法提纯溶菌酶（实验教材所用，不作介绍）
3.超滤法提纯溶菌酶：超滤法是利用膜两侧的压力差，使小分子透过膜，而大分子物质留在膜内不能透过，从而实现对酶的浓缩精制。
超滤法的优点有不易引起酶变性失活．而且操作比较方便。
溶菌酶分子量14000-15000Da，相对卵清蛋白分子量45000Da是一类分子量较小的物质。
因此本实验用截留量的膜提取溶菌酶获得了较好的效果，但是超滤法在实际操作过程中超滤时间过长，超滤膜易堵塞，这限制了它进行溶菌酶工业化生产的利用。
4.溶菌酶的磁性亲和分离：很多生物分子都具有能和某些相对应的专一分子可逆地特异结合的特性（分子间通过某些次级键结合，如范德华力，疏水力，氢键等，在一定条件下又可解离）。
亲和层析正是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。
所以有人称为“生物专一吸附技术”或“功能层析技术”。
它具有分离快速，纯化效率高。
特别是对于那些含量少，杂质多，采用常规方法难于分离的生物活性分子，显示了独特的优越性。
因此，亲和层析技术已成为纯化生物分子，特别是纯化生物活性物质最重要的方法之一。
磁性介质被广泛用于分离细胞、核酸蛋白质等生物大分子和激素等小分子生物活性物质，其优点在于通过外磁场的作用可快速地实现固液及磁性介质与其它固形物间的分离，尤其是当待分离的液体样品含有其它固形物或粘度较大时。
磁性亲和分离技术是将亲和吸附的专一性、高效性与磁性材料的磁可导向性相结合的一种新型分离技术。
四：性质测定：
1.酶纯度的测定：蛋白质纯度鉴定通常采用物理化学方法，如：电泳、HPLC等。
其中常用的电泳分析方法有SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、等电聚焦、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）等。
纯的蛋白质在一系列条件下进行电泳时，都将以单一的速度泳动，它的非变性电泳图谱应只呈现一条染色带。
HPLC常用于多肽、蛋白质纯度鉴定，纯的蛋白样品在洗脱图谱上呈现出单一的对称峰。
电泳结果分析：（1）根据电泳图谱分析溶菌酶的纯化情况。
（2）根据标准蛋白的分子量和迁移率及目的蛋白的迁移率，计算目的蛋白的分子量（以lgM对迁移率R作图，其中M为蛋白质分子量）。
2.酶活力的测定：酶活力的测定采取溶菌酶能水解溶壁微球菌，使得底物悬浮液的浊度（可用450nm波长下的吸光度来衡量）下降，故可用反应液在450nm波长下吸光度下降的速度来表示酶活性的经典方法。
然后计算酶活力的单位：酶的活力单位数=△A450nm/t×0.001 比活力=酶的活力单位数/mg蛋白质8.8.8.酶含量的测定酶含量的测定酶含量的测定酶含量的测定除福林酚法外，又一方法：蛋白含量的测定用考马斯亮蓝G-250法分析溶液中可溶性蛋白的含量。
取50uL的样品液加进2.5mL的考马斯亮蓝G-250溶液，摇匀，放置5min后，在595nm 波长下测定吸光度，并根据标准曲线计算出蛋白含量。
（由标准曲线求得的回回方程为：酶样蛋白含量：b(mg/mL)=1.674×A595nm-0.0354
参考文献：
（1）溶菌酶的性质及其在食品防腐中的应用，张新宝，陈红兵; （2）溶菌酶的制备及其性质，百度文库；
（3）溶菌酶综，百度文库。