欧蒙印迹法检测ANA抗核抗体 实验报告
ana谱检查报告怎么看
ana谱检查报告怎么看ANA谱检查是一种常见的血液检查方法，被广泛用于风湿免疫系统疾病的诊断。
通过检测人体中的抗核抗体，可以判断是否存在自身免疫性疾病。
下面将介绍如何正确阅读ANA谱检查报告，并解释其中的各项指标的含义。
1. 报告基本信息在阅读ANA谱检查报告之前，首先应该注意报告上的基本信息。
这些信息包括患者的姓名、性别、年龄、就诊日期等。
确保这些信息的准确性是非常重要的，因为这涉及到后续的诊断与治疗。
2. 报告结果检测结果通常以表格的形式呈现。
表格中的不同列代表了不同的抗核抗体，而行代表了抗体浓度的级别，通常以关键词如“阳性”、“阴性”、“强阳性”等进行标注。
对于每个抗核抗体，报告通常提供了定性和定量的检测结果。
3. 定性结果定性结果用于判断某种抗核抗体的存在与否。
结果通常分为“阳性”和“阴性”两类。
阳性表示检测到相应的抗体，可能存在免疫系统疾病的风险；阴性表示未检测到相应的抗体，免疫系统疾病的风险较低。
4. 定量结果定量结果用于衡量某种抗核抗体的浓度水平。
通常以数字或者符号进行表示，例如1:80、1:160、+等。
数字表示的是抗体的稀释度，而符号则表示抗体的强度。
一般来说，数字越高或符号越大，抗体的浓度越高，与自身免疫性疾病的风险也越高。
5. 抗核抗体的常见类型及其解读在ANA谱检查报告中，常见的抗核抗体包括抗dsDNA抗体、抗核糖体P蛋白抗体、抗Sm抗体等。
下面将对其中的一些抗体进行解读： - 抗dsDNA抗体：阳性结果可能表示系统性红斑狼疮（SLE）的存在。
结果越高，与SLE的风险也越大。
- 抗核糖体P蛋白抗体：阳性结果可能提示红斑狼疮患者的肾脏损害风险增加。
- 抗Sm抗体：阳性结果很有可能说明患者患上了系统性红斑狼疮。
- 抗SSA抗体（Ro抗体）和抗SSB抗体（La抗体）：阳性结果可能与干燥综合征有关，该疾病主要影响到涉及分泌的器官和组织。
需要注意的是，ANA谱检查报告仅供医生参考，不能作为诊断疾病的唯一依据。
ANA检测
54
细胞浆纤维型
EUROIMMUN
55
胞浆纤维型（1）： 抗肌动蛋白抗体类型
EURROOIIMMMUN
56
胞浆纤维型（2）： 抗波形蛋白抗体类型
EURROOIIMMMUN
57
胞浆纤维型（3）： 抗原肌球蛋白抗体类型
EURROOIIMMMUN
58
分裂期细胞阳性
EUROIMMUN
参与mRNA前体的剪切
硬化症:
5% - 10%
EUROIMMUN
39
核仁型（3）： PM-Scl类型
EURROOIIMMMUN
40
PM-Scl
抗原:
功能: 相关疾病:
几种多肽的复合物(分子量间于20-100kDa)，主 要的靶抗原为100 kDa
(与Scl-70不同)
不清楚
硬化症:
2% - 5%
19
nRNP和Sm
U1-nRNP结构模式图
蛋白成分
RNA 成分
U1
U2
U4
U5
U6
70K
70 kDa
◊
A
32 kDa
◊
A′
31 kDa
∗
B
26 kDa
+
+
+
+
+
B′
27 kDa
+
+
+
+
+
B′′
26.5 kDa
∗
C
18.5 kDa
◊
D
13 kDa
+
+
+
+
ENA,ANA组合IgG欧盟斑点法检测试剂盒说明书
加样：
滴加50ul已稀释血清至加样板反应区，避免产生气泡，在开始温育前加完所有样本。
温育第一次：
将载片盖在加样板的凹槽里，反应即开始。确保每个样本均与载片上的膜条接触，而且样 本间没有相互接触。在300rpm旋转摇床上室温温育30分钟。
清洗：
将清洗缓冲液盛于烧杯中，流水冲洗载片后放入小杯中浸洗15分钟。
7. 底物液，四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-磷酸盐（NBT/ BCIP） ，直接使用。
8. 产品说明书 LOT 试剂批号
IVD 体外检测
规格
标志
10张
.SLIDE.
1×0.2ml 1×0.2ml 1×0.5ml 1×60ml
2×100ml
.POS CONTROL. .NEG CONTROL. .CONJUGATE 10x. .SAMPLE BUFFER. .WASH BUFFER
加样：
滴加50ul底物液于加样板的每个反应区。在开始温育前加完所有反应区。
温育第三次：
将载片从清洗缓冲液中取出，只需擦干背部及四周后置于加样板的凹槽里。确保每个样本 均与载片上的膜条接触。在300rpm旋转摇床上室温温育10分钟。
欧蒙抗核抗体谱ANA谱3临床意义
【项目名称】抗核抗体谱（ANA）『项目包含』nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMA M2，共15项。
『检测方法』欧蒙印迹法『检测样本』人血清或（经EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的）血浆。
『临床意义』抗nRNP抗体：高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率为95-100%，抗体滴度与疾病活动性相关，在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有Sm抗体。
抗Sm抗体：抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10%。
抗SS-A抗体：与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80%）、也见于系统性红斑狼疮（30-40%）和原发性胆汁性肝硬化（20%）中，偶见于慢性活动性肝炎。
此处，在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。
该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。
抗Ro-52抗体：与其它抗体（如：SS-A）同时出现时则高度提示（SS-A）的相关疾病。
抗SS-B抗体：几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为1：29。
在干燥综合征中SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。
抗Scl-70抗体：见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症），在局限型硬化症患者中未检出该抗体。
抗Jo-1抗体：见于多肌炎、阳性率为25-30%。
常与合并肺间质纤维化相关。
抗着丝点抗体（CENP B）：与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynaud病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关，阳性率为70-90%。
抗核抗体及抗核抗体谱的实验检测方法及结果分析
抗核抗体及抗核抗体谱的实验检测方法及结果分析朱凤丹;尹秀杉【摘要】Objective :To explore the value and results that using indirect immunofluorescence and immunoblottingto detect ANA andANAs .Methods :Analysis the 2 317 cases were grouped by age ,sex and the results of ANA and AN‐As .Results:In this 2 317 cases ,the positive of ANA and/or ANAs were 914 cases (39 .4% ) ,women accounted for77.7% ,males accounted for 22 .3% ,36 years and over age group ,women accounted for 50 .1% ,accounting for 16 .1%of men;ANA positive 740 cases (31 .9% ) ,ANAs tested positive for 723 cases (31 .2% ) ,ANA and ANAs were posi‐tive in 549 cases ,ANA (+ ) and ANAs (+ ) in line with the rate of 74 .2% ,ANA (-) and ANAs (-) compliance rate of 89 .0% ,the overall compliance rate of 84 .2% .Conclusion:Combined detection of ANA and ANAs ,not only can reduce the false‐negative and false‐positive rate ,but also provide the basis for more effective laboratory diagnosis and differential diagnosis of autoimmune disease .%目的：探讨分析实验室采用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测ANA和ANAs的结果及价值。
ana谱检查报告怎么看
ana谱检查报告怎么看ANA（Anti-Nuclear Antibodies）谱检查报告是一种常用的血液检查，用于检测人体免疫系统是否产生了抗核抗体。
本文将介绍如何正确理解和解读ANA谱检查报告。
一、报告基本信息ANA谱检查报告通常包含以下几方面的基本信息：患者姓名、性别、年龄、检查日期、医院名称、医生签名等。
首先，我们可以根据患者个人信息了解到本次检查是属于哪位患者的，这对于后续的结果解读非常重要。
二、检测项目及结果1. 抗核抗体（ANA）定量结果ANA定量结果用于表示抗核抗体的浓度值，一般以降低或升高倍数的形式来表达。
正常情况下，ANA呈阴性，即未检测到抗核抗体的存在。
而如果结果为阳性，则意味着机体免疫系统可能存在异常活动。
2. 具体抗核抗体类型及水平ANA谱检查可以细分出多种抗核抗体的类型，如dsDNA、SSA、SSB等。
这些抗体的阳性结果可以与特定的自身免疫疾病相关联，如系统性红斑狼疮（SLE）多见于dsDNA抗体阳性，干燥综合征多见于SSA和SSB抗体阳性等。
阳性结果的水平（滴度）也可以提供一定程度的参考，但需要综合临床情况进行判断。
3. 抗核抗体染色模式ANA抗体的染色模式可以通过间接免疫荧光法进行观察。
常见的染色模式包括颗粒样、均匀样、独角兽样、斑点样等。
具体的染色模式与相关的自身免疫疾病之间也存在一定的关联。
通过观察染色模式，可以进一步了解患者免疫系统的异常情况。
三、结果解读与临床意义1. 阴性结果如果ANA谱检查结果均为阴性，通常表示不存在抗核抗体的异常产生，说明免疫系统较为正常。
但需要注意的是，某些自身免疫疾病可能在早期阶段抗体水平较低，此时阴性结果并不能完全排除相关疾病的可能性。
2. 单一阳性结果如果仅有某一种抗核抗体阳性，而其他类型均为阴性，建议进一步观察患者的临床表现和病史，以确定是否存在特定自身免疫疾病的可能性。
相应的专科医生应根据具体情况进行综合评估和诊断。
3. 多个阳性结果如果多种抗核抗体结果均为阳性，建议进一步详细了解患者的病史、体征及其他辅助检查结果，以确定是否存在系统性自身免疫疾病的可能。
1725例血清抗核抗体及抗核抗体谱检测结果分析
免疫印迹法与间接免疫荧光法检测抗核抗体对照分析_张铁汉
是简便经济有效的 方法. LCT 是对原细 胞涂片技 术的改进。随 着 FDA 批准 LCT 应用于临床, 其在国外应用已相当广泛。本研 究结果显示, LCT 提高了宫颈早期病变的检出率, 有利于宫颈疾 病的早期诊断和治疗, 降低了宫颈癌的 发生率。阴道镜 检查可 观察宫颈上皮及血管的微小变 化, 有针对性 地进行活组 织病理 检查, 是诊断早期宫颈癌及癌前病变的重要检查手段之一, 而组 织学诊断是 宫颈 病变 诊断 的金 标准, 故应 广 泛推 广细 胞学 检 查 阴道镜下活检 病理学 检查 的宫颈 疾病 三阶梯 式诊 断程 序。
关键词: 抗核抗体; 抗可提取性核抗原; 自身抗体; 免疫印迹 中图分类号: R 593. 2 文献标识码: B 文章 编号: 1009- 9727( 2008) 4- 568- 03
Com par ison of detection of serum an tinu clear an tibody w ith imm unob lotting and ind irect immunofluorescence ( IIF) . ZHANG T ie- han, ZHAO Y ong- x in, ZHENG H u,i et a.l ( T hird A ffiliated H osp ital of X inx iang M ed ica l College, X inx iang 453003, H enan, P. R. Ch ina)
参考文献:
[ 1] H erbest A L. The B ethesda system for report ing cervical/ vagin al cyto logical d iagnoses[ J]. C l in Ob stet G yn eco,l 1992, 35( 1) : 22~ 27.
抗核抗体谱检测在自身免疫性疾病诊断中的意义(1)
抗核抗体谱检测在自身免疫性疾病诊断中的意义【摘要】目的：探析抗核抗体谱检测在自身免疫性疾病诊断过程中的意义[1]。
方法：选取我院2013年6月-2014年6月接收的251例自身免疫性病症患者，抽取110例健康体检患者的抗核抗体，并将结果与抗核抗体谱进行对比分析。
结果：在各项自身免疫性病症的诊断中抗核抗体普遍存在一定程度的阳性检出率，在系统性红斑狼疮中的检出率是最高的，阳性率为93.8%。
结论：在临床病症的诊断中，抗核抗体的使用具有一定的积极意义，但同时也有一些不足，即，特异性不够，只能用做自身的筛选试验体[2]，在自身免疫性病诊断的过程中，抗核抗体谱具有很大的价值意义。
【关键词】自身免疫性疾病；抗核抗体谱；意义前言检测出疾病的特异性或跟疾病有关的抗体是临床诊断自身免疫性病症的一项基本标准。
在当今的临床实验中，大部分的自身免疫性病症都具备特征性抗体，那些跟疾病本身有关系的自身抗体能够帮助临床医生进行更方便的诊断，它们一般以客观血清的身份存在。
近些年来随着医学技术的发展，一些发达国家利用抗核抗体谱在临床中的使用，从分子水平检测相应的抗体，大大提高了这些病症对抗体的敏感强度以及增加了特异功能检测的方式。
本文选取我院2013年6月-2014年6月接收的251例自身免疫性病症患者，将其与110例健康体检患者进行对比，现报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料选取我院2013年6月-2014年6月收治的250例自身免疫性病症患者作为实验组，其中男患者121人，女患者130人，年龄8-70岁，平均年龄（35.6±2.8）岁。
在这251例患者中，系统性红斑狼疮（SLE）有70人，混合型结缔组织（MCTD）有40人，干燥综合征（SS）有21人，自身免疫性肝炎（AIH）有34人，类风湿关节炎（RA）56人，特发性血小板减少性紫癜（TTP）20人，系统性硬化（PSS）10人。
此外，选取110例健康体检患者作为对照组，其中，男46人，女64人，年龄11-72岁，平均年龄（40.9±2.6）岁。
抗核抗体与ENA15项检测结果分析
１ 资 料与 方法 ６ ８ ５例病 人 标 本 均 来 自包 头 医 学 院第 二 附 属
医 院 门诊 及 住 院 病 人 ， 怀 疑 自身 免 疫 性 疾 病 的病
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ６ — ４— ０ ２ ７ ； 修 回 日期 ： ２ ０ １ ６ — ０ ８ — ２ １
基金项 目 ： 内蒙古 自然科学基金 （ ２ ０ １ ４ ＭＳ ０ ８ １ １ ３ ） 作者简介 ： 张丽平（ １ ９ ７ ８ 一 ） ， 女， 包 头医学院第二附属医 院检验科 主管检验师 。
中图分类号 ： Ｒ ３ ９ ２ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ： ２ ０ ９ ５ － ５ １ ２ Ｘ（ ２ ０ １ ６ ） ０ ５ － ０ ４ ７ １ － ０ ３
自身免疫性疾病是 由多因素引起机体免疫功
能紊 乱 ， 产生 自身 免疫 应答 而造 成 多系统 损 害 的疾 病 。抗核 抗体 是具 有 多种 细胞 核成 分 的 自身 抗体 ， 是 以真核 细胞 的核 成分 为靶 抗 原 的 自身 抗 体 的 总 称， 可用 于 多 种 自身 免 疫 性 疾 病 的筛 查 。 Ｅ Ｎ Ａ１ ５ 项 包 括抗 Ｕ １ Ｒ Ｎ Ｐ ／ Ｓ ｍ抗 体 ； 抗 Ｓ Ｓ Ａ抗 体 ； 抗 Ｒ ｏ ５ ２ 抗体 ； 抗Ｓ Ｓ Ｂ抗 体 ； 抗 组 蛋 白抗 体 ； 抗 着 丝 点 Ｂ蛋
６ ８ ５例 标 本 同 时做 Ｅ Ｎ Ａ１ ５项检 测 ， 阳性 数 为 １ ８ ８例 ， 阳 性 率 为２ ７ ． ４ ％（ １ ８ ８ ／ ６ ８ ５ ） 。 阳 性 标 本 出现 较 多 的 是 抗
Ｓ Ｓ Ａ、 Ｒ ｏ ５ ２ 、 Ｕ Ｒ Ｎ Ｐ ／ Ｓ ｍ和 Ａ ＭＡ— Ｍ，等， 基本 上与 荧光 法测定 Ａ Ｎ Ａ核型 的结果相符。 只有 当 Ａ Ｎ Ａ为低 滴度 （ 起 始滴度为 １ ： １ ０ ０ ） 时， Ｅ Ｎ Ａ １ ５项 为阴性 的可能性较 高。结论 ： 不 同荧光核 型的 Ａ Ｎ Ａ与 Ｅ Ｎ Ａ １ ５项之 间有一定 的关 系， 但并无 绝对 的规律 可寻 ， 间接免疫 荧光和 欧蒙印迹 法联 合应用 ， 有助 于 自身免 疫性 疾病 的诊 断和预后观察 。 关键 词 ： 自身免 疫性 疾病 ； 抗核抗体 ； Ｅ Ｎ Ａ １ ５项
10772例患者抗核抗体谱检测结果的回顾性分析
临床医学研究与实践2021年2月第6卷第6期调查分析DOI :10.19347/ki.2096-1413.202106002作者简介：秦妍妍（1982-），女，汉族，河北沧州人，副主任检验师，博士。
研究方向：临床检验。
*通讯作者：杨延敏，E -mail :yanminyang@.近年来，随着人们生活方式的改变，自身免疫性疾病（autoimmune disease,AID ）等一些慢性病的发病率呈逐年升高的趋势。
自身抗体是AID 的重要标志，每种AID 都伴有特征性的自身抗体谱，高效价自身抗体也是临床确诊该病的重要指标。
自身抗体检测在诊断AID 、判断疾病活动程度、观察治疗效果、指导临床用药等中具有重要的临床意义[1-2]。
自身抗体先于临床症状出现前若干年就已经出现在患者血清中[3]，这对患者的早期诊断、早期干预、早期治疗、提高预后及生存质量有至关重要的意义。
抗核抗体（ANA ）作为自身抗体最主要的一个成员，是一个很好的筛查项目，在大多数确诊的AID 患者中都能检测到高滴度的ANA [4]，因此ANA 在AID 检测中一直有着无可替代的作用，基于此，笔者对我院2017年6月至2019年12月进行ANA 谱检测的10772例患者的结果进行回顾性分析，以期了解ANA 谱筛查检测的重要性。
1资料与方法1.1一般资料回顾性分析本院2017年6月至2019年12月门诊和住院部进行ANA 谱检测的10772例患者的临床资料，其中女性患者6041例，年龄10~104岁，中位数61（50，73）岁；男性患者4731例，年龄15~101岁，中位数63（54，74）岁。
排除重复送检的患者标本。
所有标本均为患者的空腹静脉血，并经过了离心、分离处理，得到血清。
1.2方法采用抗核抗体谱IgG 检测试剂盒（欧蒙免疫印迹法）及欧蒙全自动免疫印迹仪EUROBlotOne 进行检测。
可检测抗nRNP/Sm 抗体、抗Sm 抗体、抗SSA 抗体、抗Ro-5210772例患者抗核抗体谱检测结果的回顾性分析秦妍妍，杨延敏*（北京丰台医院检验科，北京，100070）摘要：目的探讨抗核抗体（ANA ）谱检测结果及筛查的意义。
欧蒙抗核抗体谱（ana谱3）临床意义[解析]
![欧蒙抗核抗体谱（ana谱3）临床意义[解析]](https://img.taocdn.com/s3/m/9959a965f342336c1eb91a37f111f18583d00cd9.png)
【项目名称】抗核抗体谱（ANA）『项目包含』nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMA M2，共15项。
『检测方法』欧蒙印迹法『检测样本』人血清或（经EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的）血浆。
『临床意义』抗nRNP抗体：高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率为95-100%，抗体滴度与疾病活动性相关，在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有Sm抗体。
抗Sm抗体：抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10%。
抗SS-A抗体：与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80%）、也见于系统性红斑狼疮（30-40%）和原发性胆汁性肝硬化（20%）中，偶见于慢性活动性肝炎。
此处，在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。
该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。
抗Ro-52抗体：与其它抗体（如：SS-A）同时出现时则高度提示（SS-A）的相关疾病。
抗SS-B抗体：几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为1：29。
在干燥综合征中SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。
抗Scl-70抗体：见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症），在局限型硬化症患者中未检出该抗体。
抗Jo-1抗体：见于多肌炎、阳性率为25-30%。
常与合并肺间质纤维化相关。
抗着丝点抗体（CENP B）：与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynaud病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关，阳性率为70-90%。
欧蒙印迹法检测ANA抗核抗体 实验报告
实验1：抗ANA自身抗体的检测（欧蒙斑点法）一、实验目的及原理抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）是一组针对细胞核成分的自身抗体。
ANA阳性提示患有自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合性结缔组织病、干燥综合症、全身性硬皮病、原发性胆汁性肝硬化等。
根据细胞内各分子的理化特性和分布部位，ANA可分为抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体和抗其他细胞成分抗体。
在本实验中，抗核抗体谱（IgG）检测试剂盒（欧蒙印迹法）的检测模条上平行包被了高度纯化的自身抗原。
用于体外定性检测人血清或血浆中的抗nRNP/Sm、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1)CENPB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白和AMAM2共14种不同抗原IgG类抗体。
欧蒙印迹法的实验原理如下：样本血清与包被抗原的检测膜条温育，如果标本为阳性血清，则血清中的自身抗体将与膜条相应位点上的自身抗原特异性结合。
洗膜后添加碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗人IgG（二抗），将与结合在膜条相应抗原位点上的自身抗体（一抗）结合，形成抗原-1st Ab-2nd Ab复合物。
最后，加入酶底物 NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-磷酸盐）显色，阳性血清在对应膜条抗原条带处原位可形成蓝紫色的化合物沉淀。
二、实验材料1.包被抗原的检测膜条2.nRNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、PMScl、Jo-1、CENP B、PCNA 、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白3.阳性对照：人IgG，100 倍浓缩，1x0.02ml4.酶结合物：碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，10倍浓缩，1x3ml5.样本缓冲液，直接使用，1x100ml6.清洗缓冲液，10 倍浓缩，1x 50ml7.底物液：NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸盐），直接使用，1×30ml8.温育盘2x8槽三、实验步骤（一）预处理●试剂盒平衡至室温30分钟后使用，取出膜条。
抗核抗体(ANA)实验室检测策略(20110524) [兼容模式]
![抗核抗体(ANA)实验室检测策略(20110524) [兼容模式]](https://img.taocdn.com/s3/m/e3e69abbd1f34693daef3e1c.png)
EUROIMMUN
欧蒙研究：各风湿病ANA阳性率在不同滴度水平的分布
EUROIMMUN
欧蒙实验室推荐的ANA稀释方案
起始稀释度： 报告结果 1:100 1:1,000
EUROIMMUN EUROIMMUN
推荐一个标本平行作两个稀释度 1:100和1:1000 (1)
原因1: 高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖
着丝点
核点
EUROIMMUN
区分IIF的荧光模型
HEp-2 细胞 灵长类肝
着丝点和核点
EUROIMMUN
区分IIF的荧光模型
HEp-2细胞
Sm/RNP 相似的颗粒型 – 很难区分
SS-A/SS-B
Ku
EUROIMMUN
区分IIF的荧光模型
灵长类肝
Sm/RNP 区分荧光模型 – 容易区分
SS-A/SS-B
EUROIMMUN
ANA结果报告举例
1:100
1:1000
结果报告
核均质型：1:10:100 着丝点：1:1000
EUROIMMUN
ANA检测的注意事项（1）
ANA的滴度结果非常重要 - 所用检测系统的起始稀释度（正常参考范围）只是一个统计值，如果以 此为临界值，部分正常人也可出现阳性（5-10%），在年龄大于60岁的老年 人中，阳性率更高，但滴度较低。 - ANA滴度越高，与自身免疫性疾病的相关性就越大。
AMA (鼠肾) 抗表皮基底膜抗体 (喉舌) 抗Yo抗体 (猴小脑) pANCA (人中性粒细胞)
1:100
1:10
1:10
1:1
1:1000
1:100
1:100
EUROIMMUN
欧蒙ANCA印迹试剂盒准确性验证方案及结果分析
欧蒙ANCA印迹准确性验证方案及结果分析
1.试剂厂家：
验证试剂：抗MPO、PR3、GBM 抗体IgG 检测试剂盒(欧蒙印迹法)
比对试剂：Imtec ANCA条带试剂盒
2.临床试验类别：临床验证
3.研究目的：
本次临床验证试剂为欧蒙（德国）医学诊断有限公司生产的抗MPO、PR3、GBM 抗体IgG 检测试剂盒(欧蒙印迹法)，比对Imtec公司的免疫条带检测试剂，本次验证的目的是为了比较验证试剂与比对试剂检测结果的一致性。
4.试验设计
1、选取经IMTEC检测的标本12份，不要使用对两个系统/方法的检测有干扰的标本，如溶血、脂血标本。
分别按照验证试剂各项的说明书操作步骤进行检测，计算各项参考符合率。
2、用欧蒙试剂检测12份标本，记录结果。
5.结果分析与判读
根据两组数据，计算阳性符合率
阳性符合率=100%
判断标准：
完全符合
6、准确度数据分析
实验室编号欧蒙（欧蒙印迹法）IMTEC（免疫印迹法）
MPO PR3 GBM MPO PR3 GBM
1 阴阴++阴阴++
2 阴阴阴阴阴阴
3 阴阴阴阴阴阴
4 + ++ 阴+++阴
5 阴阴阴阴阴阴
6 + 阴阴+阴阴
7 阴阴阴阴阴阴
8 阴+++阴阴+++阴
9 阴+ 阴阴+阴
10 阴阴（+）阴（+）
11 阴阴阴阴阴阴
12 阴阴阴阴阴阴
结论：MPO阳性符合率=100%，比对试验符合要求。
PR3阳性符合率=100%，比对试验符合要求。
GBM阳性符合率=100%，比对试验符合要求。
欧蒙免疫印迹法（ANA谱3）模条本底颜色变深对结果影响2例分析
检测项目 病例 1 病例 2
ANA(S) ＜1:100 1:640
ANA核型 阴性 均质
表 1 2病例实验室检查结果
dsDNA(IU/mL) dsDNA荧光
4.58 633.34
阴性 强阳性
G(g/L) 64.3 37.6
IgG(mg/dL) -
2580
肝纤 4项 ↑ -
通讯作者：李 发 爵
有些研究中!在深色背景下!只要能观察到特 异性抗原位置条带阳性!均可视为明确阳性%若背 景颜色过深而严重影响到结果判读! 则样本不适 用于该检测体系!可考虑采用其他的检测方法(如 '3BD:)进行检测& 但本研究中血清稀释法再加上 BBC 作为补充也不失为一种简便易行的方法& 由于 观察样本例数有限! 在今后的工作中增加观察例 数及与临床的结合! 以对此类问题有一个比较全 面的了解& 参考文献
+530+
实验与检验医学 !"!# 年 $ 月第 %& 卷第 % 期 '()*+,-*./01 0.2 3045+0/5+6 7*2,8,.*9 :;<=!"!#9>51=%&9?5=%
·病例报告·
欧蒙免疫印迹法（ANA谱 3）模条本底颜色变深对 结果影响 2例分析
章晓霞 1，李发爵 2，李湘成 3，陈民 2，苏悦 2，付红 2，彭丽平 2，梁小燕 2
!"&M#N&&$"%D$&"= @MB魏 方=抗 核 抗 体 与 抗 &验 与 检 验 医
学 !""N !C & M&DM!= (收稿日期 2021-02-22Q
欧蒙印迹法检测ANA抗核抗体 实验报告
用枪头吸去槽内液体，在摇摇床上用清洗缓冲液清洗膜条3次，每次5分钟。
6.加底物溶液，反应10min
吸去槽内液体，在槽内分别加入ml底物液。常温，摇床震荡10min。
7.蒸馏水终止反应
吸去槽内液体，用蒸馏水清洗3次，次，1/次。风干15 min。
（三）判读结果
膜条干后，肉眼观察条带颜色强度；对照膜条上包被抗原位置，决定阳性抗体的种类。
二、实验材料
1.包被抗原的检测膜条
2.nRNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、PMScl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白
3.阳性对照：人IgG，100倍浓缩，
4.酶结合物：碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，10倍浓缩，1x3ml
5.样本缓冲液，直接使用，1x100ml
根据结果示意图，本次实验在质控带上出现了深紫色条带，位于从上往下数的第一区域，说明实验操作正确。
本组膜条上出现强阳性的条带有三条，分别位于从上往下数的第二区域（1条）和第九区域（2条），条带呈深紫色。对照结果示意图，说明本实验所用患者血清的抗SS-A、抗Ro-52以及抗核糖体P蛋白抗体为强阳性。
膜条上出现弱阳性的条带有一条，位于从上往下数的第八区域，条带呈淡蓝色。对应结果示意图，可知本实验所用患者血清的抗SS-B抗体为弱阳性。
欧蒙印迹法的实验原理如下：样本血清与包被抗原的检测膜条温育，如果标本为阳性血清，则血清中的自身抗体将与膜条相应位点上的自身抗原特异性结合。洗膜后添加碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗人IgG（二抗），将与结合在膜条相应抗原位点上的自身抗体（一抗）结合，形成抗原-1stAb-2ndAb复合物。最后，加入酶底物 NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-磷酸盐）显色，阳性血清在对应膜条抗原条带处原位可形成蓝紫色的化合物沉淀。
ENA,ANA组合IgG欧盟斑点法检测试剂盒说明书
10. van Venrooij, W.J., Charles, P., Maini, R.N.: The consensus workshop for the detection of autoantibodies to intracellular antigens in rheumatic diseases. Journal of Immunological Methods 140: 181-189 (1991).
4. Reimer, G.: Zellkernantigene bei systemischen Autoimmunkrankheiten: Molekulare Charakteristika und klinische Bedeutung. Zentralblatt Haut- und Geschlechtskrankheiten 153: 789-800(1987).
8. Tan, E.M.: Antinuclear antibodies: Diagnostic markers for autoimmune diseases and probes for cell biology. Advances in Immunology 44: 93-151 (1989).
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实验1：抗ANA自身抗体的检测（欧蒙斑点法）
一、实验目的及原理
抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）是一组针对细胞核成分的自身抗体。
ANA阳性提示患有自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合性结缔组织病、干燥综合症、全身性硬皮病、原发性胆汁性肝硬化等。
根据细胞内各分子的理化特性和分布部位，ANA可分为抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体和抗其他细胞成分抗体。
在本实验中，抗核抗体谱（IgG）检测试剂盒（欧蒙印迹法）的检测模条上平行包被了高度纯化的自身抗原。
用于体外定性检测人血清或血浆中的抗nRNP/Sm、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1)CENPB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白和AMAM2共14种不同抗原IgG 类抗体。
欧蒙印迹法的实验原理如下：样本血清与包被抗原的检测膜条温育，如果标本为阳性血清，则血清中的自身抗体将与膜条相应位点上的自身抗原特异性结合。
洗膜后添加碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗人IgG（二抗），将与结合在膜条相应抗原位点上的自身抗体（一抗）结合，形成抗原-1st Ab-2nd Ab复合物。
最后，加入酶底物NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-磷酸盐）显色，阳性血清在对应膜条抗原条带处原位可形成蓝紫色的化合物沉淀。
二、实验材料
1.包被抗原的检测膜条
2.nRNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、PMScl、Jo-1、CENP B、PCNA 、dsDNA、
核小体、组蛋白、核糖体P蛋白
3.阳性对照：人IgG，100 倍浓缩，1x0.02ml
4.酶结合物：碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，10倍浓缩，1x3ml
5.样本缓冲液，直接使用，1x100ml
6.清洗缓冲液，10 倍浓缩，1x 50ml
7.底物液：NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸盐），直接使用，
1×30ml
8.温育盘2x8槽
三、实验步骤
（一）预处理
●试剂盒平衡至室温30分钟后使用，取出膜条。
●清洗缓冲液，10倍稀释：30mL 清洗缓冲液+270mL DW，50ml/支分装。
●血清样本，使用前101X稀释：No.1666血清210uL +21mL 样本缓冲液→
10mL/支，分装2支；按排一组作阳性对照：0.02ml 阳性对照+2ml 样本缓冲液。
●AKP-羊抗人IgG，使用前10倍稀释：AKP-羊抗人IgG 2.1 mL + 18.9mL样本缓
冲液→10mL/支，分装2支。
（二）正式处理
1.预处理5min
用镊子取出膜条，数字面朝上放入温育槽中，每槽中加入1.5ml 样本缓冲液；
常温摇床震荡5min。
2.抗原和血清（1st抗体）温育30min
枪头吸去槽内液体，在温育槽中分别加入1.5ml 已稀释血清，常温，摇床震荡30min。
3.清洗15min
用枪头吸去槽内液体，在摇摆摇床上用1.5ml 清洗缓冲液清洗膜条3次，每次5 min。
4.加10X稀释的酶结合物（二抗），抗原-抗体-羊抗人IgG（二抗）温育30min
吸去槽内液体，在槽内分别加入1.5 ml 酶结合物。
常温摇床震荡30min。
5.清洗15min
用枪头吸去槽内液体，在摇摇床上用1.5ml 清洗缓冲液清洗膜条3次，每次
5 分钟。
6.加底物溶液，反应10min
吸去槽内液体，在槽内分别加入1.5 ml 底物液。
常温，摇床震荡10min。
7.蒸馏水终止反应
吸去槽内液体，用蒸馏水清洗3 次，1.5ml/次，1/次。
风干15 min。
（三）判读结果
●膜条干后，肉眼观察条带颜色强度；对照膜条上包被抗原位置，决定阳性抗
体的种类。
●质控带出现强的颜色反应说明实验操作正确。
膜条包被抗原的位置上出现的
白色条带应判为阴性；阳性反应在抗原包被区呈兰色或紫色条带。
●抗原带着色与质控带强度相同为强阳性、中到较强为阳性、非常弱为可疑、
无色为阴性。
四、实验结果
第8组条带如图1所示（从左至右数第一列）。
结果判读示意图如图2所示。
图1. 本次实验膜条条带图2. 结果示意图
根据结果示意图，本次实验在质控带上出现了深紫色条带，位于从上往下数的第一区域，说明实验操作正确。
本组膜条上出现强阳性的条带有三条，分别位于从上往下数的第二区域（1条）和第九区域（2条），条带呈深紫色。
对照结果示意图，说明本实验所用患者血清的抗SS-A、抗Ro-52以及抗核糖体P蛋白抗体为强阳性。
膜条上出现弱阳性的条带有一条，位于从上往下数的第八区域，条带呈淡蓝色。
对应结果示意图，可知本实验所用患者血清的抗SS-B抗体为弱阳性。
另外，膜条从上往下数第四区域出现一条白色条带，所对应检测的抗体为抗dsDNA抗体。
根据结果判读原则，应判为阴性。
五、分析与讨论
（一）实验结果分析
由上述结果判读发现，本实验所用患者血清的抗SS-A、抗Ro-52以及抗核糖体P蛋白抗体为强阳性，抗SS-B抗体为弱阳性。
SS-A抗原属于小核糖核酸蛋白，参与mRNA转变为有翻译活性分子。
抗SS-A 抗体常见于干燥综合症、（阳性率40%-80%）、系统性红斑狼疮（30%-40%）、原发性胆汁性肝硬化（10-20%）。
抗Ro-52是抗SS-A抗体的其中一类（抗SS-A包括抗Ro52和抗Ro60两种自身抗体），常见于干燥综合征、系统性红斑狼疮。
抗Ro-52如果阳性则提示复发或者优先于其它指标预警，起到预防提示作用。
SS-B抗原是细胞核中作为RNA多聚酶III的辅蛋白，研究表明SS-B抗原决定簇是SS-A抗原的一部分，故SS-B抗体常伴随SS-A抗体一起出现。
抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合症（阳性率40%-80%）和系统性红斑狼疮（10%-20%）的女性患者中。
抗核糖体P蛋白抗体（ARPA），则是系统性红斑狼疮的特异性抗体。
SLE的活动性与ARPA 的效价不具有相关性，对于有中枢神经系统症状、肾炎或肝炎的SLE患者，ARPA 的阳性率与整个SLE人群基本相同。
因此，根据不同抗核抗体所提示的疾病，以及该患者的抗核抗体谱，初步推断该患者患有自身免疫疾病，并且可能是系统性红斑狼疮（SLE）。
若要明确诊断SLE，除了抗核抗体检测之外，还需要根据患者的临床表现（如皮肤狼疮、口鼻咽部溃疡），是否有肾脏、神经病变，是否有外周白细胞或淋巴细胞减少等信息，来进一步判断。
在美国风湿协会（ACR）提出的SLE分类标准中，需同时根据临床分类标准和免疫学标准作出诊断。
（二）关于实验操作及结果判读的讨论
本次实验的膜条背景较浅，利于结果的判读。
有资料显示，在清洗时间一定的情况下，欧蒙印迹法中使用的摇床类型对于背景颜色有所影响，优先使用垂直振荡的摇摆摇床。
若使用水平振荡摇床，由于液体受力作用向两侧集中，形成典型的“哑铃状”液体分布，可能使得膜条中部的抗原和抗体反应性下降，或者膜条洗涤不充分，导致膜条背景加深，影响实验结果判读。
作为核酸分子，dsDNA抗原与其他蛋白质抗原具有完全不同的带电荷能力。
因此，dsDNA抗原包被的位置不易与血清样本中的其他物质结合。
当样本为dsDNA阴性时，抗原包被区域反应较弱或者无反应，而同一膜片上的其它区域由于吸附少量杂质导致背景加深，从而形成dsDNA条带发白的现象。
出现上述实验结果时，样本可判断为明确可靠的阴性结果。
【参考资料】
王莉等, 抗Ro52抗体和抗Ro60抗体的临床应用价值探讨. 华西医学, 2014. 29(05): 第879-882页.
李圣楠与黄慈波, 系统性红斑狼疮的诊断治疗进展. 临床药物治疗杂志, 2010(01): 第6-10页.
王炜玮等, 欧蒙免疫印迹法在实验操作中常见问题处理及结果评价. 山西医药杂志, 2015(05): 第521-523页.。