维生素C含量测定方法
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时易产生牙龈萎缩、出血。
• 预防动脉硬化：可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动脉内壁沉 积，甚至可以使沉积的粥样斑块溶解。
• 抗氧化剂：可以保护其它抗氧化剂，如维生素A、维生素E、不 饱和脂肪酸，防止自由基对人体的伤害。
• 治疗贫血：使难以吸收利用的三价铁还原成二价铁，促进肠道对 铁的吸收，提高肝脏对铁的利用率，有助于治疗缺铁性贫血。
• 提高人体的免疫力：白细胞含有丰富的VC，当机体感染 时白细胞内的VC急剧减少。VC可增强中性粒细胞的趋化 性和变形能力，提高杀菌能力。促进淋巴母细胞的生成， 提高机体对外来和恶变细胞的识别和杀灭。参与免疫球蛋 白的合成。提高CI补体酯酶活性，增加补体CI的产生。
• 促进干扰素的产生，干扰病毒mRNA的转录，抑制病毒的 增生。
• 注意 ！ 测定时：加HAC使溶液呈弱酸性
• 原因: • (1) Vc还原性很强，在空气中很容易被氧
化，在碱性介质中更甚
• (2)I2在碱性介质中会发生歧化反应 • 加HAC可减少VC的副反应，避免实验误
差
电位滴定法
原理：根据滴定过程中电池
电动势的变化来确定反应终 点. Pt为指示电极，甘汞作参比 电极 E池＝E+-E-+E液接电位＝EI2/I+k(常数)
• 防癌：丰富的胶原蛋白有助于防止癌细胞的扩散；VC的抗氧化 作用可以抵御自由基对细胞的伤害防止细胞的变异；阻断亚硝酸 盐和仲胺形成强致癌物亚硝胺。
• 保护作用：在人的生命活动中，谷胱甘肽和酶保证细胞的完整性 和新陈代谢的正常进行至关重要。
• 酶：谷胱甘肽是由谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸组成的短肽， 在体内有氧化还原作用。它有两种存在形式，即氧化型和 还原型，还原型对保证细胞膜的完整性起重要作用。VC 是一种强抗氧化剂，其本身被氧化，而使氧化型谷胱甘肽 还原为还原型谷胱甘肽，从而发挥抗氧化作用。
• 维生素C具有还原性 的烯二醇基，我们通 过氧化还原滴定来测 定维生素C
CC
O
Cl
C
HO C O
HO C
+
HC
HO C H
CH2OH
O Cl
OC OCO
N
OC
====
HC
HO CH
OH
CH2OH
维生素C （还原型）
2,6-二氯酚靛酚 （氧化型，粉红色）
维生素C （氧化型）
OH
Cl
Cl
N
+
OH
2,6-二氯酚靛酚 （还原型）
4）稳定性试验 同一测试样品，在120min内，每隔3min测定 一次差示旋光度。 文献结果：差示旋光度基本不变
5）回收率试验 精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL 容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及 磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。 文献结果：平均回收率为97.8％，变异系数cv为1.03％
电位滴定法
右图：电位滴定法基 本仪器装置
• 计算式：(与碘量法相
同) • Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/Байду номын сангаас
m(vc ) *100%
• 优点：
• 解决了滴定分析中遇 到有色或浑浊溶液时 无法指示终点的问题
2，4一二硝基苯肼分光光度法
• 原理： • 维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被
氧化成脱氢抗坏血酸
• 2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色， 在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。
碘量法
• 原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强
的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VC • EC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535
• 终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即
为终点
• 反应式：
维生素C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又 叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物 中的维生素C被人体小肠上段吸收。一旦吸
收，就分布到体内所有的水溶性结构中， 正常成人体内的维生素C代谢活性池中约有 1500mg维生素C，最高储存峰值为3000mg 维生素C。
• 胶原蛋白的合成：胶原蛋白的合成需要维生素C参加， • 治疗坏血病 • 预防牙龈萎缩、出血：牙龈是软组织，当缺乏蛋白质、钙、VC
目前研究维生素C测定方法的报道 较多，如滴定法、光度分析法、高 效液相色谱法等，各种方法各有特 点。特别是高效液相色谱法是近年 来发展较快的一种方法。
测定方法
滴定法测定 分光光度测 高效液相色谱法 维生素C 定维生素C 测定维生素C
2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
OH OH
• 维生素C能还原2,6二氯酚靛酚染料。
• 样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处 理
• 500nm处测吸光度 • 下图：721型分光光度计
差示旋光法
选定pH为 2.2和6.2
2）差示旋光度与溶液浓度关系 吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各 两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲 液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后, 用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光 度(△a)。 文献结果：线性方程为△a=0 205*C+ 0．05，r=0．9964
• 反应式：
HO
HH
HO
O O
C CC
C
H HH
OO C C OO H
• pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮 古洛糖酸
• 二酮古洛糖酸
• 脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝 基苯肼生成可溶于硫酸的脎
• 脎在500nm波长有最大吸收 • 脎的结构：
H
R CN N
RCNN
H
分光光度法
• 提高机体的应急能力：人体受到异常的刺激，如剧痛、寒 冷、缺氧、精神强刺激，会引发抵御异常刺激的紧张状态。 该状态伴有一系列身体，包括交感神经兴奋、肾上腺髓质 和皮质激素分泌增多。肾上腺髓质所分泌的肾上腺素和去 甲肾上腺素是有酪氨酸转化而来，在此过程需要VC的参 与。
维生素C在抗病毒和预防病毒性 传染病方面具有很高的应用价 值。如果我们普遍认识到维生 素C预防和治疗病毒传染病症的 原理并且按量服用，就可以预 防很多病毒的传播。
3）辅料干扰试验 取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、EDTA、糊精等按 处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用 pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲 液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。 文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素 C含量的测定不干扰。
• 预防动脉硬化：可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动脉内壁沉 积，甚至可以使沉积的粥样斑块溶解。
• 抗氧化剂：可以保护其它抗氧化剂，如维生素A、维生素E、不 饱和脂肪酸，防止自由基对人体的伤害。
• 治疗贫血：使难以吸收利用的三价铁还原成二价铁，促进肠道对 铁的吸收，提高肝脏对铁的利用率，有助于治疗缺铁性贫血。
• 提高人体的免疫力：白细胞含有丰富的VC，当机体感染 时白细胞内的VC急剧减少。VC可增强中性粒细胞的趋化 性和变形能力，提高杀菌能力。促进淋巴母细胞的生成， 提高机体对外来和恶变细胞的识别和杀灭。参与免疫球蛋 白的合成。提高CI补体酯酶活性，增加补体CI的产生。
• 促进干扰素的产生，干扰病毒mRNA的转录，抑制病毒的 增生。
• 注意 ！ 测定时：加HAC使溶液呈弱酸性
• 原因: • (1) Vc还原性很强，在空气中很容易被氧
化，在碱性介质中更甚
• (2)I2在碱性介质中会发生歧化反应 • 加HAC可减少VC的副反应，避免实验误
差
电位滴定法
原理：根据滴定过程中电池
电动势的变化来确定反应终 点. Pt为指示电极，甘汞作参比 电极 E池＝E+-E-+E液接电位＝EI2/I+k(常数)
• 防癌：丰富的胶原蛋白有助于防止癌细胞的扩散；VC的抗氧化 作用可以抵御自由基对细胞的伤害防止细胞的变异；阻断亚硝酸 盐和仲胺形成强致癌物亚硝胺。
• 保护作用：在人的生命活动中，谷胱甘肽和酶保证细胞的完整性 和新陈代谢的正常进行至关重要。
• 酶：谷胱甘肽是由谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸组成的短肽， 在体内有氧化还原作用。它有两种存在形式，即氧化型和 还原型，还原型对保证细胞膜的完整性起重要作用。VC 是一种强抗氧化剂，其本身被氧化，而使氧化型谷胱甘肽 还原为还原型谷胱甘肽，从而发挥抗氧化作用。
• 维生素C具有还原性 的烯二醇基，我们通 过氧化还原滴定来测 定维生素C
CC
O
Cl
C
HO C O
HO C
+
HC
HO C H
CH2OH
O Cl
OC OCO
N
OC
====
HC
HO CH
OH
CH2OH
维生素C （还原型）
2,6-二氯酚靛酚 （氧化型，粉红色）
维生素C （氧化型）
OH
Cl
Cl
N
+
OH
2,6-二氯酚靛酚 （还原型）
4）稳定性试验 同一测试样品，在120min内，每隔3min测定 一次差示旋光度。 文献结果：差示旋光度基本不变
5）回收率试验 精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL 容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及 磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。 文献结果：平均回收率为97.8％，变异系数cv为1.03％
电位滴定法
右图：电位滴定法基 本仪器装置
• 计算式：(与碘量法相
同) • Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/Байду номын сангаас
m(vc ) *100%
• 优点：
• 解决了滴定分析中遇 到有色或浑浊溶液时 无法指示终点的问题
2，4一二硝基苯肼分光光度法
• 原理： • 维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被
氧化成脱氢抗坏血酸
• 2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色， 在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。
碘量法
• 原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强
的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VC • EC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535
• 终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即
为终点
• 反应式：
维生素C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又 叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物 中的维生素C被人体小肠上段吸收。一旦吸
收，就分布到体内所有的水溶性结构中， 正常成人体内的维生素C代谢活性池中约有 1500mg维生素C，最高储存峰值为3000mg 维生素C。
• 胶原蛋白的合成：胶原蛋白的合成需要维生素C参加， • 治疗坏血病 • 预防牙龈萎缩、出血：牙龈是软组织，当缺乏蛋白质、钙、VC
目前研究维生素C测定方法的报道 较多，如滴定法、光度分析法、高 效液相色谱法等，各种方法各有特 点。特别是高效液相色谱法是近年 来发展较快的一种方法。
测定方法
滴定法测定 分光光度测 高效液相色谱法 维生素C 定维生素C 测定维生素C
2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
OH OH
• 维生素C能还原2,6二氯酚靛酚染料。
• 样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处 理
• 500nm处测吸光度 • 下图：721型分光光度计
差示旋光法
选定pH为 2.2和6.2
2）差示旋光度与溶液浓度关系 吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各 两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲 液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后, 用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光 度(△a)。 文献结果：线性方程为△a=0 205*C+ 0．05，r=0．9964
• 反应式：
HO
HH
HO
O O
C CC
C
H HH
OO C C OO H
• pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮 古洛糖酸
• 二酮古洛糖酸
• 脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝 基苯肼生成可溶于硫酸的脎
• 脎在500nm波长有最大吸收 • 脎的结构：
H
R CN N
RCNN
H
分光光度法
• 提高机体的应急能力：人体受到异常的刺激，如剧痛、寒 冷、缺氧、精神强刺激，会引发抵御异常刺激的紧张状态。 该状态伴有一系列身体，包括交感神经兴奋、肾上腺髓质 和皮质激素分泌增多。肾上腺髓质所分泌的肾上腺素和去 甲肾上腺素是有酪氨酸转化而来，在此过程需要VC的参 与。
维生素C在抗病毒和预防病毒性 传染病方面具有很高的应用价 值。如果我们普遍认识到维生 素C预防和治疗病毒传染病症的 原理并且按量服用，就可以预 防很多病毒的传播。
3）辅料干扰试验 取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、EDTA、糊精等按 处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用 pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲 液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。 文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素 C含量的测定不干扰。