微生物检验中菌落总数的不确定度评定

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微生物分析测量不确定度评定

微生物分析测量不确定度评定一、概述与通常的测量相比较，微生物测量的特点是测量结果相差极大。

与平均值之偏差高达105。

因此用常规的直接根据平均值得到标准偏差的方法显得有些不合理。

通常的做法是取对数以后进行计算。

同样情况可能会出现在增益和衰减的测量不确定度评定中。

由于微生物分析测量结果散发极大，因此仅考虑由散发引起的测量不确定度，其它不确定度来源均可以忽略不计。

二、数学模型测量是直接数微生物菌落总数，所以数学模型为y=x三、单一样品重复测量1 测量结果对同一样品重复测量10次，测量结果列于表一，取10次测量的平均值作为最后测量结果。

2计算过程(1) 列出测量结果x i。

(2) 取对数logx i ，得到对数logx i 的平均值为log 4.72245x = (3) 求残差log log i x x -(i=1，2，…，10)。

(4) 求残差平方和1021(log log ) 3.35169i i x x =-=∑(5) 求平均值的实验标准差1021(log log )3.35169(log )0.193010(101)10(101)ii x x s x =-===--∑。

(6) 求平均值的标准不确定度平均值的标准不确定度等于一倍平均值的实验标准差，所以(log )(log )0.1930u x s x ==(7) 求扩展不确定度如前所述，全部测量过程只有一项不确定度，所以直接由平均值的标准不确定度给出测量结果的扩展不确定度。

取置信概率p=95%，根据自由度n=9，由t 分布表得到包含因子k=2.26。

于是得到扩展不确定度U 95＝k×u(x log )=2.26×0.193=0.4361(8) 取反对数，由logx 坐标换算回x 坐标由于logx 与x 之间的非线性关系，不能直接求扩展确定度U 95的反对数。

因此首先应确定logx 的取值范围为x log =4.7224±0.43614.2864≤x log ≤5.1536再取反对数后，得测量结果x 分布区间为1.9×104≤ x ≤1.4×105(9) 测量结果报告由于测量结果散发极大，不能准确报告测量结果和测量不确定度。

食品微生物学检测中菌落总数测定测量结果的不确定度评定

食品微生物学检测中菌落总数测定测量结果的不确定度评定依据JJF1059－1999《测量不确定度评定与表示》、CNAL/AG06《测量不确定度政策实施指南》和CNAL/AR11《测量不确定度政策》分析一、测量方法按照国家标准GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》规定的检测程序进行。

检测过程为：1）以无菌操作将检样25g（mL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其它稀释液灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做出1：10的均匀稀释液。

固体检样在加入稀释液后，最好置均置器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min，做出1：10的均匀稀释液。

2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其它稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做出1：100的稀释液。

3）另取1mL灭菌吸管，按上条操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。

4）根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2个～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。

5）稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46℃±1℃水浴保温）注入培养皿约15mL，并转动培养皿使混合均匀。

同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液灭菌培养皿内作空白对照。

6）待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48h±2h。

7）作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。

在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

8）选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。

一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。

食品中菌落总数检测的不确定度评定

分析检测食品中菌落总数检测的不确定度评定刘　黎，徐清溪，肖常国，郑　惠（青岛市黄岛区市场监督管理局，山东青岛 266500）摘　要：本文对标准方法《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》（GB/T 4789.2—2022）的测量不确定度进行了分析与评定。

根据方法的原理和操作步骤建立了相应的数学模型，找出了不确定度的主要来源，计算了每个测量不确定度分量，并对总的不确定度进行了合成。

评价结果表明，培养基、培养温度和时间等是影响测试结果的主要因素，因此相关操作人员需要在试验中注意对各种因素的控制，提高检测结果的准确性。

关键词：不确定度评定；菌落总数；食品Evaluation of Uncertainty in the Detection of Aerobic BacterialCount in FoodLIU Li, XU Qingxi, XIAO Changguo, ZHENG Hui(Qingdao Huangdao District Market Supervision and Administration Bureau, Qingdao 266500, China)Abstract: In this paper, the uncertainty of the determination of the total bacterial count in food by the method of GB/T 4789.2—2022 was analyzed and evaluated. According to the principle and operation steps of the method, a corresponding mathematical model was established to identify the main sources of uncertainty, calculate each measurement uncertainty component, and synthesize the total uncertainty. The evaluation results indicate that culture medium, culture temperature, and time are the main factors that aﬀect the test results. Therefore, relevant operators need to pay attention to controlling various factors in the experiment to improve the accuracy of the test results.Keywords: uncertainty; aerobic plate count; food测量不确定度是评定实验室检测水平的重要指标，常用来表征实验室数据的可靠性，以及评定不同实验室数据间的可比性[1]。

浅析饮用纯净水微生物检验中菌落总数的不确定度检验

浅析饮用纯净水微生物检验中菌落总数的不确定度检验发表时间：2019-08-15T09:31:21.717Z 来源：《中国医学人文》(学术版)2019年3月下第6期作者：孙宗祥姜勇波蔡路王蕾于丹[导读] 在本文中，首先介绍了引用纯净水微生物检验中菌落总数实验，然后在实验中应用了不确定度检验，对菌落总数进行检验，实验结果表明，不确定度检验的方法具备的简便性是非常好的，适合微生物检验。

哈尔滨市疾病预防控制中心 150056【摘要】在进行微生物检验时，应用不确定度检验的目前还很少，通过此种检验方法的应用，可以有效的提升微生物检验结果的科学性，增强检验结果的可用性。

在本文中，首先介绍了引用纯净水微生物检验中菌落总数实验，然后在实验中应用了不确定度检验，对菌落总数进行检验，实验结果表明，不确定度检验的方法具备的简便性是非常好的，适合微生物检验。

【关键词】引用纯净水；微生物检验；菌落总数；不确定度检验ABSTRACT：In microbial testing，the application of uncertainty testing is still rare. The application of this method can effectively improve the scientificity of microbial testing results and enhance the usability of testing results. In this paper，the total number of bacteria in the microbial test of purified water is introduced firstly，and then uncertainty test is applied in the experiment to test the total number of bacteria. The experimental results show that the method of uncertainty test is very simple and suitable for microbial test.Key words：citing pure water；microbial testing；total number of colonies；uncertainty testing前言：在进行微生物检验时，不确定度是一个重要的参数，与测量结果具有很大的关联性，被测量值的分散性都是通过不确定度的表征来赋予的，而且赋予具备合理性，通过不确定度的正确测量和评定，提升了测量结果分析的有效性。

水质检测中菌落总数测定的不确定度评定

水质检测中菌落总数测定的不确定度评定摘要：目的：为了减少实验误差，提高检测的精确度，评定水质检测中菌落总数的不确定度，确定水样的置信区间。

方法：对于某一水样，根据GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》和CCBLAC/AG05附录规定的方法进行检测，采用对数的平均值评定菌落总数的不确定度。

结果：该水样本次检测结果的置信区间为（1400—1700）CFU/ml。

结论：根据本次检测结果的置信区间说明，当菌落总数的离散程度高时，应该采用对数平均值评定菌落总数的不确定度。

关键词：菌落总数；不确定度由于测量值不可避免地会偏离准确值，因此研究不确定度变得有意义，通过不确定度表示被测量真值所处的量程范围。

在近些年来，不确定度在理化检测相对比较成熟，集中。

然而在微生物检测方面对于不确定度的评定相对较少。

因此针对在水质检测中关于微生物检测以生活饮用水为例评定菌落总数的不确定度，同时采用平均值和对数平均值的方法评定菌落总数的不确定度，比较得出结论。

1、原理与方法1.1、测试原理：不确定度定义为表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相联系的参数。

不确定度包括合并标准不确定度和扩展不确定度，通常情况下，不确定度采用扩展不确定度表示。

根据CCBLAC/AG05附录规定进行菌落总数测试要求：每个样品都包含可计算得出数目的微生物；在实验室由不同人员按照规定的测试方法进行一段时间的测试[1]，测试样品是均匀的，每个样品均做平行样，必须由同一测试人员进行操作。

根据GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》定义，菌落总数是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48小时，所得1ml水样所含菌落的总数[2]。

1.2、测试方法：根据中华人民共和国国家标准GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》进行测试。

对于生活饮用水，菌落总数在适宜计数的范围内，应该以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样和培养基充分混匀，每次检测做一个平行样对照，同时一个平皿倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

能力验证菌落总数测定结果不确定度的评定

设备。１．２方法
００５７７４／１＝０．００５７７４。
合成相对标准不确定度为：１．２．１检测依据。食品中微生物学能力验证计划参试指导书，４ｕＪ．ｔ（ｒ）＂＋＂ｉｒｍａ（Ｄ）＂＋ｔｑｔｒｔｌ（Ｋ）＂＋ｔｑｔｔ￣（ＶＧＢ４７８９．２ —２０ｌＯ《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数ｌ＿ｏ０Ｏ９６Ｏ６测定》。实验测得菌落总数对数平均值为ｌｇｘ＝５．２４８８，则检测结果的合成１．２．２实验过程。在无菌的环境下打开西林瓶，将３ｍＬ的稀释溶液加人到西林瓶中溶解，稀释溶液一共有４０ｍＬ。等待溶解完成后，将溶解不确定度为：鞠ｉ — 吣０５０４２
２结果３讨论
一
般测量不确定度的地点为理化性的实验室，虽然相关专家已经提出了测量不确定度的实验要求，但是在具体的实验以及检测工作中，并没有落实下来。通过本次实验可以有效地对自邑力验证进行检测，本次其中，样品菌落的总数为Ｙ，稀释倍数记为Ｋ，在检测稀释度的平的实验中，为了避免实验样品中的琼脂的表面有以弥漫的生长方式生板上检测的聚落数量记为ｘ，在—定的稀释度下的样品的体积记为Ｖ。长出的菌落，因此在琼脂的表面覆盖了一层培养基，另外还进行了直接２．３判定。由于重复１０次检测的菌落总数结果相差较大，因此对倾注法作为对比陛的实验。在琼脂的外部的培养基呈固体状时，对平板根据—定的培养条件进行培养。结合实验结果来观测这两种检测结果取对数后，再计算检测结果对数值的样本标准偏差。按Ａ类进行翻转，评定，根据贝塞尔公式，得到检测结果对数值的样本标准偏差。对比实验可以发现，两种实验的实验结果相差不多，因此本次的实验效

乳粉中菌落总数的测量不确定度评定

乳粉中菌落总数的测量不确定度评定摘要：目的菌落总数是重要的卫生质量指标之一, 建立乳粉中菌落总数的测量不确定度评定方法具有非常重要的意义,可以有效客观判定产品卫生质量指标是否真正符合标准。

根据RB/T 151-2016 《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》、GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》作为依据，对乳粉中菌落总数的不确定度来源进行分析, 保证测试样品均匀，每个样品都含可计数的微生物。

[1]每个样品均做平行样，由同一操作员进行操作，测试完成后得到的测试结果取对数。

结果乳粉中菌落总数的扩展不确定度为 0.040(以对数计)。

关键词：乳粉；菌落总数；测量不确定度实验部分1.实验原理[2]食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g检样中形成的微生物菌落总数。

2.样品市售奶粉3.仪器设备恒温培养箱SPX-250，YXQ-LS-70A型高温蒸汽灭菌锅，生物安全柜BSC-1000IIA2，无菌均质器SCIENT-11L，电子天平YP120N4.培养基PCA，北京陆桥，2002245.方法与结果分析5.1菌落总数检验过程图，见图1。

图1 菌落总数检验过程图5.2不确定度来源分析不确定度的来源包括重复性(测试环境、培养时间、培养温度、修约、样品的均匀性、取样的重复性、人员的计数)、培养条件(培养时间允差、培养适度的允差)、取样(稀释体积、取样体积)等，根据RB/T 151-2016 《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》不考虑偏倚，采用统计学的方法评定测量不确定度。

5.3重复测量结果将10个样品的平行检验结果取对数后进行分析，结果见表1。

表1 检验结果及分析[3]5.4再现性标准差为：5.5扩展不确定度5.6报告结果当检测结果的扩展不确定度为 0.040，其样品菌落总数测试结果报告见表2。

微生物检验中菌落总数的不确定度如何评定

微生物检验中菌落总数的不确定度如何评定在ISO/IEC17025《校准和检测实验室能力的通用要求》中明确指
出实验室出具的检测报告应包含有关评定校准或测试结果的不确定度说明，故对测量结果进行不确定度的评定成为检测实验室的重要内容。

下面是yjbys 小编为大家带来的关于微生物检验中菌落总数的不确定度如
何评定的知识，欢迎阅读。

1 .检验方法
依据GB 4789.2-2010 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中要求以无菌操作取检样25 g(ml)剪碎放于含有225 ml 灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液中，经振摇或研磨做成1︰10 的均匀稀释样液，按照标准要求制备10 倍系列稀释样品匀液。

根据污染情况的估计，选择2～3 个稀释度，每个稀释度作2 个平皿，每个平皿注入培养
基约15~20 ml，并转动培养皿使混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48 h±2 h。

计数后以同稀释度的各平板平均菌落总数报告。

2. 数学模型
设菌落总数为A，检测结果为X，则A=X CFU/g(ml)。

3 .计算不确定度
3.1 在微生物检验中，样品中细菌分布的均匀性和重复测量带来的不确定度是影响检验结果准确度的主要原因，而B 类不确定度分量对合成不确定度影响较少。

按GB 4789.2-2010 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中方法，同一样品每个稀释度作两个平衡样，因此可以采用合并样本标准差求检测结果的不确定度见表1。

3.2 从检验结果可知，如直接用贝塞尔公式计算合并样本标准。

菌落总数测定结果不确定度评估报告

废水菌落总数测定结果不确定度评估1. 实验前准备1.1 设备：恒温培养箱、无菌吸管10ml（具0.1ml刻度）、微量移液器、无菌锥形瓶、无菌培养皿1.2 培养基及试剂：平板计数琼脂、无菌生理盐水1.3 因浓缩苹果清汁中一般菌落不容易生长，故用废水作为样品检测。

2. 检测依据及步骤2.1依据：GB4789.2—2010《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》2.2步骤：定量吸取废水，制备成15份均匀的检测样品，每份样品做两个平行样。

↓↓↓↓3. 不确定度来源分析检测步骤主要包括样品的吸取、稀释（移液器）、培养、计数、及结果修约等，由于结果发散性较大的特点，在本次实验中，我们只对样品吸取、重复测定结果的不确定度进行量化分析。

3.1 样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度u rel （V ） 3.1.1 吸管体积校准引入的标准不确定度u （V ）在吸取样品的过程中均使用经检定合格的10ml 刻度吸管，其允许误差为±0.05ml ，故10ml 吸管体积校准引起的不确定度按矩形分布（k=3）为： u 1（V ）=305.0=0.029ml则样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度： u rel （V ）=()V V u =10029.0=0.0029ml 3.2 重复测定结果的标准不确定度菌落总数测定结果不确定度评定3.2.1 对测定结果X 1、X 2分别取对数，得到lg X 1和lg X 23.2.2 每一个样品的残差(在重复性条件下得出n 个观测结果X k 与n 次独立观测结果的算术平均值X 的差)平方和：()221lg lg ∑=-i iX X式中：i X lg —每一个样品测定结果的对数值；X lg —每一个样品测定结果对数的平均值。

3.2.3 根据《JJF —1999测量不确定度评定》中4.3,计算15个样品的合并标准偏差： ()=X S lg ()()()X u XX n m m j ni i lg lg lg 11112=--∑∑==式中：m —测定样品总个数，本次实验共15个；n —对每个样品的独立测定次数，本次实验每个样品平行测定两次。

菌落总数测定不确定度分析

菌落总数测定不确定度分析作者：聂庆丽樊云霄来源：《中国食品》2021年第21期隨着经济的高速发展和GDP的不断增长以及人们生活水平的不断提高，人们对于饮食的安全性要求也在不断提高。

食品中微生物的检测已经得到了有关部门的高度重视，特别是食品中菌落总数的测定已经被国家列为食品检测的强制检测项目。

因此，菌落总数测定不确定度分析是很有必要的。

为了减少实验误差，提高检测结果准确性，检测实验室应具有并应用评定测量不确定度的程序。

微生物检验的性质决定其无法运用计量学和统计学正确评估测量的不确定度，但我们旨在找出影响不确定度的各个分量，并评估出它们对结果的影响程度，从而作出合适的质量控制。

微生物不确定度的评定主要针对定量测试。

测量的目的是为了得到测量结果是否准确或者有效。

如果报告中只表述测量结果而未给出其可信程度或者可信的范围，则测量结果是不准确的。

判断测量结果是否准确需要多次测量结果的重复性，也就是测量的质量和准确度，这就需要使用不确定度来表示。

文章主要介绍了测量不确定度的方法程序，分析了不确定度来源等。

一、测量方法程序实验室依照ISO《测量不确定度表示指南》2005版分析评估本实验室菌落总数测试的测量不确定度的评定方法与结果。

程序如下：（1）培养基及稀释液配制;（2）样品稀释;（3）样品培养;（4）菌落计数。

二、建立数学模型根据测量原理及计算公式，建立测定不确定度评定所需数学模型：三、不确定度分析来源菌落总数测定主要是称/吸取25g（mL）样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌袋中，均质，制成1∶10的样品匀液。

用1mL无菌吸管吸取1∶10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管内，混匀，制成1∶100的样品匀液。

以此类推梯度稀释。

选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平行。

同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

及时将15-20mL冷却到50℃的平板计数琼脂倾注平皿，并混合均匀。

微生物检验中菌落总数的不确定度评定

第３Байду номын сангаас卷第８期２０１０年８月
宜春学院学报
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｉｅｈｕｎＣｏｌｌｅｇｅ
Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．８Ａｕｇ．２０１０
微生物检验中菌落总数的不确定度评定
黄筠喻（庆阳市质检所，甘肃西峰７４５０００）
摘要：为减小实验误差，提高检验精确度，采用合并样本标准偏差计算检验结果的不确定度。实验表明，采用合并样本标准偏差计算检验结果的不确定度方便且适用。
水质菌落总数检验中不确定度的主要来源有：重复性，包括检验环境、培养时间、培养温度、样品的均匀性、取样的重复性、人员计数、数值修约等。培养条件，包括培养时间的允差和培养湿度的允差；取样，包括稀释体积和取样体积；仪器与试剂，包括吸管和培养基等；样品保存条件，包括保存温度和保存时间等。由于在微生物检验中，Ｂ类不确定度分量对合成不确定度贡献较小，重复测量带来的不确定度占主要部分，所以，主要考虑重复测量带来的不确定度，即采用统计的方法（Ａ类）评定测量不确定度。
恒温培养箱。１．４试验方法：依据ＧＢ／Ｔ５７５０．１２—２００６《生活饮用水标准检验方法微生物指标》的方法进行检验。以无菌操作方法吸取１ｍｌ充分混匀的水样，注入盛有９ｍｌ无菌生理盐水的试管中，混匀制成１：１０的稀释液；吸取１：１０的稀释液ｌｍｌ注入盛有９ｍｌ灭菌生理盐水的试管中，混匀成１：１００稀释液；按同法依次稀释成１：１０００，１：１０００稀释液等备用；用灭菌吸管取未稀释的水样和２～３个适宜稀释度的水样ｌｍｌ，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。然后在平皿内注入４５℃左右营养琼脂约１５ｍｌ，立即旋摇混匀。同时做营养琼脂空白对照；待琼脂凝固后，翻转平皿，置（３６±１）℃ 培养箱内培养４８ｈ，进行菌落计数；选择菌落数在３０～３００稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数作为检测结果。数学模型：设菌落总数为Ａ，检测结果为ｘ，则：Ａ＝Ｘｃｆｕ／ｍｌ。２不确定度的来源分析

食品微生物学菌落总数检验中不确定度的评定

52·FOOD INDUSTRY调查研究　田霞重庆市黔江食品药品检验所食品微生物学菌落总数检验中不确定度的评定将采用无菌操作进行称量２５ｇ的样本，取含量为２２５ｍｌ的灭菌生理盐水三角瓶，将样本放入瓶内，随即进行振摇，当振摇充分后，将其制作成为均匀的稀释液，为１∶１０。

（２）将样品进行稀释在稀释的过程中，将采用１ｍｌ的灭菌吸管吸取１：１０的稀释液１ｍｌ，沿着管壁注入含量为９ｍｌ的灭菌生理盐水试管内，随即进行振摇，当振摇充分后，将其制作成１：１００均匀的稀释液；取另外一根１ｍｌ的灭菌吸管，按照同样的操作顺序，以十倍的递增顺序进行稀释液的制作，在制作稀释液中，每一次稀释，将换一根灭菌吸管。

（３）稀释倍数的选择依照样品卫生的情况在１∶１０００以及１∶１００的稀释程度中选取，在做十倍递增的稀释同时，采取灭菌的平皿将经灭菌吸管吸取的稀释液进行注入，其稀释液的含量为１ｍｌ，每个稀释将做二个平皿，取４５℃的平板计数琼脂培养基注入到含有稀释液平皿当中，其平板计数琼脂培养基含量为１５ｍｌ，随即对其进行转动，将其混匀，于此同时进行空白对照的制作，琼脂凝固之后，将其放在孵箱内进行培养，其孵箱温度为３６℃±１℃，培养时间为４８ｈ±２ｈ。

（４）对菌落进行技术计数将每个平皿中菌落数进行计数，其计数方式为采用菌落计数器进行记录，菌落数则在３０～３００ＣＦＵ之间稀释度中进行选择，乘以稀释倍数为报告菌落的总数。

评定奶粉菌落总数测定中的不确定度在本次实验中，由实验人员取２０个奶粉的小样，在时间间隔较短的时间内，依照ＧＢ／４７８９．２－２０１０的方法进行重复的测试，将２０个样品的总菌落数测试的结果进行得出，在本次实验的过程，在取样时依照ＧＢ／４７８９．２－２０１０的规定中严格的执行，可确保样品时稳定、均匀的。

以下为不确定度的因素来源分析，如下。

（１）在称量中，使用天平进行检定合格，基本没有影响；（２）样品的均匀性，对样本稀释后，为稀释液，大致均匀，基本没有影响；（３）在样品培养时的温度，经过校对以后，其波幅是处于正常的范围，没有影响；（４）其样品培养的时间，均在正常的范围，没有影响；（５）人员的不同，在这的：食品微生物学菌落总数检验中不确定度的评定。

食品检验中菌落总数的测量不确定度评定

４’ ６６Ｏ０００１４１Ｏ７６４２２４Ｏ ’ ２８１１１６７４８
８
９
１４６ＯＯ
１８７００
１３０００１３８０Ｏ４｛６４
１８３ＯＯ１８ ∞ Ｏ４２７２
认其测定结果的不确定度和置信空间。
关键词：不确定度食品微生物检测准确度中图分类号：ＴＳ２０７．４文献标识码：Ａ
文章编号：ｌ６７２ — ５３３６（２０ｌ４）１２ — ００２６ — ０２
３３０００２７８００
４１０００２９９ＯＯ
３７Ｏ０Ｏ２８８５Ｏ
４５｛９４４４４
４６１３４４７６
４５６６４４６０
０００４４４５ＳｏｏＯ２８ｓ０Ｏ４５０５
７ ’ ４９００１４４００１４６５Ｏ４１７３
４３９８
４５８
４４５２Ｏ００５７４３９３３４５０９７２４７３７３２３４０
４６ ∞
４５７３０００１７４５１４９４６３１３３２７２４
ＯＯＯ ∞ ４６２７５４７４３９４２，１１５
４２７８２
５５４５２
３４
分析检测
食品检验中茵落总数的测量不确定度评定

食品检验中菌落总数的不确定度评定

Peng Yongyan (Xuanwei Market Supervision and Administration, Xuanwei 655400, China)
摘要：菌落总数指的是菌落形成的基本单位，是影响食品安全的重要因素。通常情况下，通过对食品中菌落总数的检测能够对其中的污染物和食品污染程度作出评价。本文在深入分析现阶段我国食品菌落总数检测方法原理的基础上，对其中影响检测结果的因素进行探究，并最终提出提升检测准确度的方案，对于进一步研究食品检测中菌落总数不确定度具有重要意义。
ｄｏｉ：１０．１６７３６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｎ４１－１４３４／ｔｓ．２０１７．０８．０２８
Modern F
ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＵｎｃｅｒｔａｉｎｔｙｏｆＣｏｌｏｎｙＣｏｕｎｔｉｎＦｏｏｄＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎ
◎ 彭永艳（宣威市市场监督管理局，云南宣威 655400）
2.3 菌落总数不确定度计算
本次试验中，一共测试了 20 组食品样品，总的数据容量是 20，经过实验人员的计算，最终得到 20 组实验数据的合并标准差为 0.036，食品检测中菌落总数的不确定度为 0.025。在扩展不确定度的求解过程中，选取 95% 为置信水平，自由度最终确定为 20，在此情况下，求得扩展不确定度为 0.052。
１食品菌落总数检测方法分析
我国颁布了《食品微生物学检验菌落总数测定》，
菌落总数的培养条件包括培养基的成分、培养的温度、时间、pH 及需氧性质等。在食品菌落总数不确定度的评定实验中，菌落的培养条件对整个实验起到关键作用，如果在实验过程中，实验人员没有很好的控制好实验条件，就会影响到结果的准确性和可靠性 [1]。
在本文的检测中，影响微生物菌落检测准确度的因素主要有两大类，分别是细菌的分布和检测的重复性，在这两类因素导致的菌落检测不确定度中，两类因素的影响都很重要 [2]。在实验中，检测人员需要严格按照《食品微生物学检验菌落总数测定》中的相关要求，对菌落总数进行计算，然后分析其导致的不确定度。要求对于同一个样品的每个稀释度都进行两个平行样，然后使用合并标准差的方式求解。

菌落总数测定的不确定度评定

菌落总数测定的不确定度评定摘要目的:是为了评定食品中菌落总数测定的不确定度,确定细菌菌落数置信区间。

方法根据GB4789.2-2016对待检食品样品中菌落总数进行计算,计算检验结果的不确定度与样品菌落总数置信空间。

结果测定:结果显示1号样品菌落置信区间为4500～6900CFU/g,2号为3300～5100CFU/g,3号为3700～5700CFU/g,4号为4000～6100CFU/g,5号为3200～4900CFU/g。

所取样品各种不确定度为1.1547 、0.0049、0.0046、0.0089。

结论:检验样本中菌落总数测定的不确定度的评定是一种比较科学的方法,在同类样品菌落总数的检验中进行不确定度评定尤为适合。

关健词:菌落总数;不确定度;评定前言菌落总数即菌落形成单位数。

其检测结果通常以单位重量的菌落数(CFU/g)表示。

测量不确定度是评定测量水平的指标,是判定测量结果的依据,因此,正确评定测量不确定度对客观分析测量结果具有重要意义。

食品中菌落总数含量是衡量食品质量好坏的重要指标之一,因此对其进行测量不确定度的评定也是很重要的。

本文依据GB4789.2-2016《食品微生物学检验菌落总数测定》和JJF1059-1999《测定不确定度评定与表示》[1]来建立该不确定度评定方法,还探讨了其各种不确定度的分量来源。

1材料与方法1.1材料取5份样品，在实验室条件下制备食品样品的均匀液样,采用平板计数琼脂进行培养。

1.2检测方法每份样品分别25g+225mL高温灭菌过的生理盐水中，制成0.1稀释液，吸取1mL该稀释液,然后加入9mL高温灭菌过的生理盐水中,混匀制成0.01的稀释样,以此类推进行10倍递增的稀释。

分别吸取1mL上述制备好的稀释液于无菌培养皿中,倾入15mL降温至46℃的平板计数（PCA）琼脂,混匀，同时制备空白对照样。

待培养基凝固后将培养皿翻转放入36℃的恒温培养箱中培养48小时。

1.3菌落计算与不确定度评定选择稀释度为30～300的平皿菌落，按照GB4789.2-2016操作要求记录下每个平皿的菌落数[2]。

能力验证菌落总数测定结果不确定度评定

能力验证菌落总数测定结果不确定度评定作者：张虹仙来源：《中国食品》 2018年第11期一、材料与方法材料。

（1）样品：奶粉〔（CFAPA-230能力验证样品（菌落总数175）），由大连中实国实检测技术有限公司提供；（2）培养基：平板计数琼脂（规格：500g；批号：3104066），广东环凯微生物科技有限公司生产，所用培养基在有效期内，适用性检查结果符合要求。

（3）主要仪器：GHP-9270电热恒温培养箱、50KB-Ⅲ蒸汽压力灭菌器。

实验方法。

（1）样品溶液制备。

无菌开启西林瓶，立即（1分钟内）加入少量（2ml－4ml）稀释液进行溶解，待溶解后，吸出放入无菌瓶中，反复用余下的稀释液清洗西林瓶内壁，回收清洗液放入上述的无菌瓶中，合计用稀释液40ml。

该40ml液体即为待测原液，即10o。

以无菌吸管吸取25mL待测原液置盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶中充分混匀，制成1:10的样品匀液。

（2）样品溶液稀释。

用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中，混匀，依次制成1:103、1:104、1:105、1:106、1:107的稀释液备用。

在稀释的同时吸取1mL样品匀液于无菌平皿内。

1:104、1:105、1:106的稀释液做10个平皿，其它稀释度做2个平皿。

同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

（3）培养。

在平皿内倾注15mL左右46℃平板计数琼脂培养基，并转动平皿使其混合均匀。

待琼脂凝固后将平板翻转，36℃培养箱内培养48h。

（4）计算菌落总数。

选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数进行报告，计算样品中菌落总数。

二、不确定度的分析一是建立数学模型：Y=κX/V。

其中，Y——样品的菌落总数，cfu/ml；κ——稀释倍数；X——某稀释度检测平板上的菌落数，cfu；V——某稀释度下取样体积，ml。

二是不确定度来源分析。

微生物不确定度评定

微生物分析之量测不确定度评估1、引言：由于微生物检测的特殊性，因此该例只讨论了单一样品重复测定菌落总数不确定度的评估。

2、技术说明：该技术说明简单描述了菌落总数测定过程以及单一样品重复测试与其他所依赖的参数的关系。

测定过程；检样做成几个适当倍数的稀释液选择2—3个适宜稀释度，各以1ml分别加入灭菌平皿内每皿内加入适量营养琼脂（36±1°C、48±2h）菌落计数报告计算；做平板菌落计数时，用肉眼观察，在记下平板的菌落数后，求出稀释度的各平板平均菌落总数。

3、不确定度来源和量化；校准（1ml移液管）：根据标准查到A级1ml±0.007 ml移液管的不确定度(假设三角形分布)0.007 ml/√6=0.0028 ml由于该例是同一样品单一重复测试的结果，而由于培养引起的不确定度因素在此忽略。

由于微生物的称量是粗称，故由称量引起的不确定度在此也忽略。

由稀释起的不确定度分量与计数相比在此贡献较小故也忽略。

稀释和培养称量一个样品经过微生物测试后得到下列结果：3.3×1049.8×10³3.0×105 2.0×105 6.5×1049.6×10³5.0×1048.8×1049.0×10³3.5×105由微生物学的角度来看，这些结果的差异性并不大。

然而将这些数值平均后发现会产生以105为单位之不合理偏差。

算术平均值及log平均值所表示出的不同结果如表1所列：表 1由以上数值可得到开log后的平均值等于4.7225 具体计算如表2所列；表 2n (xi-x)2使用公式S=[ ∑]1/2 (1)i=1 (n-1)3.35166S=√ =0.610310-1查表得知于95%信赖区间时t=2.26。

此微生物测试以log的方式表示，2.26×0.6其结果= 4.7225±= 4.7225±0.4361√10这说此结果分布于4.2864及5.1586之间。

菌落总数不确定度评定方案

污水中菌落总数测定结果的不确定度评定1、引用标准依据GB/T 5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》的方法。

2、适用范围污水及生活饮用水中菌落总数的测定3、检测方法以无菌操作方法吸取1ml充分混匀的水样，注入盛有9ml无菌生理盐水的试管中，混匀制成1：10的稀释液；吸取1：10的稀释液1ml注入盛有9ml无菌生理盐水的试管中，混匀制成1：100稀释液；按同法依次制成1：1000、1：10000的稀释液备用；用灭菌吸管取未稀释的水样和2～3个适宜稀释度的水样1ml，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度作2个平皿。

然后在平皿内注入45℃左右营养琼脂约15ml，立即旋摇混匀，同时做营养琼脂空白对照；待琼脂凝固后，翻转平皿，置36±1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数；选择菌落数在30～300稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数作为检测结果。

本次实验选取一个水样（已预试验），制备成1：10的稀释液，分别稀释13次，制备13管备用，每管均做两个平行，吸取另一管时需换枪头，测得的结果乘以稀释倍数后再进行分析。

4、建立数学模式y=x5、不确定度来源分析水样菌落总数检验中不确定度的来源有：样品保存条件，包括保存温度和保存时间；试剂，如培养基等；培养条件，包括培养时间的允差和培养湿度的允差；取样，包括稀释体积和取样体积；测量重复性。

样品中菌落总数测定的不确定度主要取决于细菌分布的均匀性，表现为测量的重复性，其他诸多影响因素相对于测量重复性可忽略不计。

因此本实验仅考虑测量重复性引起的标准不确定度。

6、不确定度的评估由于微生物测量结果分散性很大，其最大值与最小值之间可相差到1个数量级，因此不能直接利用测量数据做不确定度评估，而需要对数据做对数处理。

实验编号平皿1 平皿2Si ² x 1j lgx 1j x 2j lgx 2j 1 15360 4.1864 12460 4.0955 0.0041 2 1160 3.0645 1980 3.2967 0.0270 3 2040 3.3096 3220 3.5079 0.0196 4 3760 3.5752 2320 3.3655 0.0220 5 1320 3.1206 1220 3.0864 0.0006 6 2140 3.3304 1070 3.0294 0.0453 7 6760 3.8299 2870 3.4579 0.0692 8 2810 3.4487 4270 3.6304 0.0165 9 12400 4.0934 9780 3.9903 0.0053 10 5790 3.7627 4270 3.6304 0.0087 11 1500 3.1761 6180 3.7910 0.1890 12 1290 3.1106 1480 3.1703 0.0018 13 5290 3.7235 4640 3.6665 0.0016 求和45.731545.71810.4109具体计算过程如下：（1）共测量13个样品，每个样品测量两次。