无菌室消毒灭菌操作规程
无菌室消毒灭菌操作规程
无菌室消毒灭菌操作规程无菌室是医疗和实验环境中非常重要的空间，其内部必须保持无菌状态以确保实验的准确性和研究的可靠性。
为了维护无菌室的洁净环境，以下是一份无菌室的消毒灭菌操作规程。
一、概述无菌室是为了保证实验的可靠性和研究的准确性而建立的，其主要功能是提供无菌环境、防止交叉污染。
无菌室的消毒灭菌操作规程是对无菌室内环境进行灭菌和消毒的操作流程进行规范化，以达到无菌室工作区域的最佳无菌状态。
二、消毒灭菌操作规程1. 打开无菌室的门前，请先用肥皂和流动水洗手，重点清洁指甲，并用75%酒精消毒。
2. 确保无菌室内部及工作台面干燥，座椅、工作台等物品无明显污染。
3. 使用具有高效消毒性能的消毒剂进行表面消毒。
消毒剂可选用过氧乙酸或乙酸烯丙酯等高效消毒剂，按照说明书的要求使用。
4. 消毒操作时，应准备好必要的防护措施，包括穿戴无菌手套、口罩和帽子等个人防护装备。
5. 将所需器具和试剂放在经过消毒处理的无菌室桌面上。
6. 操作前应将试验所需的器械、试剂等进行高温湿热灭菌处理，或使用已经灭菌的无菌装置进行操作。
7. 在操作过程中，不能将无菌室内的工作区域长时间暴露在外界空气中，以防止污染。
8. 消毒和灭菌操作结束后，及时清理无菌室内的废弃物，并用适当的消毒剂对工作区域进行再次消毒。
9. 定期对无菌室内和周围环境进行清洁和消毒，保持无菌室的干净整洁。
10. 若无菌室内出现明显污染或破损，请及时更换或修理，以确保无菌室的正确使用。
三、注意事项1. 消毒操作应严格按照规程进行，不得擅自增减或改动。
2. 涉及到的消毒剂和灭菌器材应符合相关行业标准。
3. 操作人员应经过相关培训，了解相关操作要求和流程。
4. 消毒剂应储存在干燥、通风的地方，避免阳光直射。
5. 操作过程中，应注意个人防护，避免操作失误导致交叉感染。
6. 定期检查无菌室内的设备设施是否正常工作，如有问题及时进行维修或更换。
7. 检查无菌室的温湿度和过滤装置的工作情况，保持合适的无菌室环境。
无菌室清洁消毒标准操作规程
无菌室清洁消毒标准操作规程1一、目的：建立洁净室清洁、消毒程序，防止样品被环境中的微生物污染影响检测结果的准确性。
二、适用范围：适用于品管部洁净室的清洁、消毒。
三、责任人：品质管理部洁净室工作人员。
四、正文：1 清洁部位：层流净化台、地面、墙面、天花板、门窗及玻璃、把手等。
2 清洁频率：操作前、操作后、每两周最后一个工作日。
3 清洁工具：水桶、拖布、毛刷、海绵、清洁巾、橡胶手套等。
4 清洁剂：取洗涤剂加纯水配成适宜浓度摇匀即可。
5 消毒剂（每月轮换使用）：%新洁尔灭溶液：取新洁尔灭适量加饮用水配制成 %溶液，摇匀即可75%酒精溶液：95%乙醇加饮用水稀释成 75%溶液，摇匀即可。
6 清洁方法：操作前的清洁消毒：操作前对工作间内各种表面、空气进行清洁或消毒。
6.1.1 层流净化台：用湿纱布擦拭后，用消毒剂擦拭消毒。
6.1.2 桌面：用湿纱布擦拭后，用消毒剂消毒。
6.1.3 地面：用清洁剂溶液擦拭后，用消毒剂擦拭消毒。
6.1.4 空气消毒：洁净室清洁、消毒后，打开层流净化台，使其开始运转，开启层流净化台紫外灯及洁净室紫外灯照射消毒 30 分钟，关闭紫外灯后，方可进行操作。
6.2操作结束后的清洁消毒：6.2.1整理工作台面：将使用过的器具放入清洁液缸内浸泡12小时后清洗。
收集各种废弃物，经消毒或灭菌后处理。
6.2.2分别用清洁剂、消毒剂擦拭台面、桌面、地面。
6.2.3所有废弃的活菌培养物以及盛装活菌培养物的器皿，均应放入蒸汽灭菌锅内高压灭菌后，再按规定处理。
不能高压灭菌的器皿应在清洁液内浸泡 12 小时以上取出清洗晾干备用。
6.2.4 空气消毒：洁净室清洁、消毒后，开启洁净室及层流净化台紫外灯，照射消毒 30 分钟。
每两周工作结束后的清洁消毒：6.3.1 先用清洁剂、消毒剂擦拭室内各种表面：层流净化台、桌面、台面、所有门窗、墙壁、天花板、地面等。
6.3.2开启紫外灯照射 30-60 分钟。
7 清洁工具的清洗及存放：将清洁工具用洗涤剂清洗干净，并用消毒剂消毒后，置指定位置晾干备用。
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程标题：无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物实验和细胞培养的重要场所，为保证实验结果的准确性和可靠性，操作规程十分关键。
本文将详细介绍无菌实验室的操作规程，包括实验室准备、操作流程、设备消毒、个人防护和废物处理等方面。
一、实验室准备1.1 清洁实验室环境：无菌实验室应保持干净整洁，定期清洁地面、台面和设备，避免灰尘和细菌污染。
1.2 检查实验室设备：在进行实验前，要检查实验室设备是否正常运转，确保无菌实验室的各项设备都处于良好状态。
1.3 准备所需材料：提前准备好所需的培养基、试剂和实验用具，确保实验进行顺利。
二、操作流程2.1 洗手消毒：进入无菌实验室前，必须先进行手部消毒，避免将细菌带入实验室。
2.2 穿戴个人防护用具：穿戴实验服、手套、口罩和护目镜等个人防护用具，避免污染实验样品。
2.3 严格按照实验操作规程进行：在进行实验时，要按照操作规程的要求进行，避免操作失误导致实验失败。
三、设备消毒3.1 消毒实验台面：在进行实验前，要将实验台面用75%乙醇或其他消毒液擦拭消毒，避免细菌污染。
3.2 消毒实验用具：使用完实验用具后，要及时用高温或消毒液进行消毒，确保下次使用时无菌。
3.3 定期消毒实验室设备：定期对实验室设备进行消毒，保持实验室的无菌状态。
四、个人防护4.1 穿戴个人防护用具：在进行实验时，必须穿戴好实验服、手套、口罩和护目镜，避免接触细菌。
4.2 避免交叉污染：在实验过程中，要避免将实验用具和试剂带到其他实验室，避免交叉污染。
4.3 定期进行健康检查：实验人员要定期进行健康检查，确保身体健康，避免将疾病传播到实验室。
五、废物处理5.1 分装废物：在进行实验后，要将废物分类分装，避免混合造成交叉感染。
5.2 定期清理实验室废物：实验室废物要定期清理，避免细菌滋生和传播。
5.3 合理处理废物：将实验室废物交由专业机构处理，避免对环境和人体造成危害。
结论：无菌实验室操作规程十分重要，只有严格遵守规程，才能确保实验结果的准确性和可靠性。
无菌室操作规程
操作程序1、微生物检验的准备工作1.2操作前的准备:1.2.1无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。
以保证无菌室的洁净度符合要求。
1.2.2微生物检验玻璃仪器的清洗1.2.2.1按技术要求将各种玻璃仪器进行清洗，可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。
热的肥皂水去污能力更强，可有效地洗去器皿上的油污。
洗衣粉和去污粉较难冲洗干净而常在器壁上附有一层微小粒子，故要用水多次甚至10次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗，然后倒置于磁盘或木架上，在室内晾干，放烘箱烘干。
1.2.2.2玻璃器皿经洗涤后，若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。
1.2.2.3装有固体培养基的器皿应先将其弃去，然后洗涤。
带菌的器皿在洗涤前先浸在2％煤酚皂溶液（来苏尔）或0.25％新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤。
带病原菌的培养物最好先行高压蒸汽灭菌，然后将培养物倒去，再进行洗涤。
1.2.2.4盛放一般培养基用的器皿经上法洗涤后，即可使用，若需精确配制化学药品，或做科研用的精确实验，要求自来水冲洗干净后，再用蒸馏水淋洗三次，晾干或烘干后备用。
1.2.2.5准备好所用的各种试剂，做好普通营养琼脂或其他选择的培养基。
1.3消毒、灭菌微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法。
1.3.1．高压蒸汽灭菌:工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理1.3.2．火焰灭菌：接种针、接种环等可直接火焰灭菌1.3.3．高温干燥灭菌：各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时。
1.3.4．一般消毒:无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。
JY-2.5-13无菌室操作规程
无菌室操作规程1 目的为确保微生物检验中匀样、取样和接种等操作是在无菌条件下进行，以保证检验结果准确可靠。
2 范围适用于本企业化验室微生物检验的操作和检验质量监控。
3 无菌室的一般要求3.1 无菌室是食品微生物检验的重地，检验、接种必须在一个无杂菌的环境中进行严格的无菌操作。
无菌室室内环境的无菌程度决定着检验结果的准确性。
应严格遵守《食品安全管理手册:实验室管理制度》的规定，无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，严格无菌操作，防止微生物污染：3.2 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物、与检验不相关的和多余的物品，以防污染。
3.3 无菌室在使用前，必须对室内进行灭菌，包括缓冲室及工作服、帽、鞋。
灭菌操作见4。
3.4 无菌室的无菌程度，应每半月检测一次，若无菌室内的细菌总数超过4个（见3无菌程度评价操作规程），则应进行彻底灭菌处理，以保证检验数据的准确性。
3.5 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。
3.6 进入实验室必须穿工作服，进入无菌室须在缓冲室中穿（换）上白色的无菌工作服、帽、鞋，戴好口罩。
非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。
3.7 实验完毕，脱（换）下无菌工作服、帽挂于缓冲室墙上，鞋留于缓冲室。
口罩带出无菌室，清洗消毒后才可再用。
如工作服、帽、鞋，一般1个星期清洗、消毒一次。
4 无菌室的日常灭菌操作4.1 在开始工作前，开启紫外灯30 min 以上，关灯后再等30 min ，检验人员方可进入无菌室进行检验操作。
一般连续工作（不多于）4 h 后，需重新开启紫外灯进行灭菌消毒。
4.2 每天工作结束，应按微检室洁净要求及时清理无菌室，然后离开无菌室关闭各门，再开启紫外灯30 min 以上灭菌，关灯，保持。
4.3 注意：4.3.1 无菌室的紫外灯开关，应安装在无菌室外。
4.3.2检验员须确认关灯后方可进入无菌室，否则会损害人身健康。
5 无菌室的彻底灭菌处理操作5.1 甲醛和高锰酸钾混合熏蒸法5.1.1 用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每立方米需36～40％甲醛10毫升，高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。
无菌室标准化规程及验收规范
化并冷却至约 ４ ￣ 的营养琼脂培养基约 １ｍｌ 至凝 固后 ， ５Ｃ ５ ，放
３ 安 全 注意 事项
严格 无菌操作 ， 防止微 生物污 染 ： 操作 人员 进入 无菌室 应先关掉紫外灯 。
倒置 于 ３ ～ ５ ０ ３ ℃培养箱培养 ４ ８小 时 ， 明无菌后 ， 证 取平板 ３ ～ ５个 ， 分别放置工作位置 的左 中右等处 ． 开盖暴露 ３ ０分 钟后 ， 倒置 于 ３ ～ ５Ｃ ０ ３ ￣培养箱培养 ４ ８小时 ， 出检查 。０ 取 １０级洁净区
Ｓ ｉｎ ｅ ＆ Ｔｅ ｈ ｏｏ ｙＶｉ ｏ ｃｅ ｃ ｃ ｎ ｌｇ ｓ ｎ ｉ
２１ ０２年 Ｏ ３月第 ０ ７期
科 技 视 界
科教前哨
无菌室标准化规程及验收规范
陈 雨
（ 哈药 集 团制药 总厂 １ ３车 间 黑龙江 ０
哈尔 滨
１０ ８ ） ５ ０ ６
１ 目的
本 规程 旨在为 无菌操 作及无 菌室 的保 护提供 ～个标 准
染 。检查前 ， ７ ％的酒精棉球 消毒外表面 。 用 ５ ４９ 每次操作过 程中 ， ． 均应做 阴性对 照 ， 以检查 无菌操作 的 可靠性
和缓 冲间都必 须密 闭。室 内装备 的换 气设备必须有 空气过滤
装置 。无菌室 内的地 面 、 墙壁 必须 平整 ， 易藏污纳垢 ， 不 便于 清洗。工作台的台面应该处于水平状态 。无 （ 下转第 １ ７页 ） ３
平板杂菌数平 均不得 超过 １ 菌落 ，０ ０ 个 １００级洁净 室平 均不
４ 建造 规 程
４１ 生产 区域 的洁净 级别按 照 ＩＯ ４ ４ ． Ｓ １６ ４标准划分 原则 ． 设 置为 ＡＢＣＤ 四个级 别 。无 菌操作 间洁净 度应 达到 Ａ级 、 ／／／ Ｂ 级， 分装 时应 在 Ａ级环境下操作。 室内温度保持在 １～ ６Ｃ， ８２￣ 湿度 保持 在 ３ ～ ５ ０ ６ ％，不 同等 级 洁净 区之 间 的压差 不 低 于
无菌室操作规程
无菌室操作规程
《无菌室操作规程》
一、入室前准备
1. 穿戴工作服和帽子，佩戴口罩和手套。
2. 洗手并进行手部消毒。
3. 确认所需的物品已准备齐全，包括试剂、实验器具等。
二、进入无菌室
1. 打开无菌室门前，进行手部再次消毒。
2. 缓慢打开无菌室门，确保空气不会造成污染。
3. 进入无菌室后，关闭门窗，确保无菌环境不受外界污染。
三、操作规程
1. 所使用的器皿和仪器应当是经过无菌处理的。
2. 所有操作均需在无菌工作台上进行，不得在无菌室内随意移动物品。
3. 操作过程中不得进行交谈、咳嗽、喷嚏等操作，以免污染无菌环境。
四、操作完毕
1. 所有操作完毕后，进行手部消毒，然后缓慢打开无菌室门。
2. 将使用过的器皿和仪器进行处理，确保下次使用前已经过无菌处理。
3. 离开无菌室后，确认无菌室门窗关闭完毕，确保无菌环境不受外界污染。
五、其他注意事项
1. 定期清洁无菌室内部和工作台面，确保无菌环境的维护。
2. 使用过的试剂和实验器具应当妥善处理，避免造成环境污染。
3. 随时遵循相关的安全操作规程，确保无菌室内的安全和无菌环境的维护。
以上就是关于《无菌室操作规程》的详细内容，希望大家能够严格遵守规定，确保无菌室内的工作环境和实验结果的准确性。
菌种室无菌操作规程(正)
菌种室无菌操作规程一、目的保证无菌室的清洁卫生及保证生产，为生产提供合格无杂菌种，特制订该规程二、适用范围本作业指导书适用于实验室无菌室的操作管理。
三、职责实验室负责人负责本作业指导书的监督捡查。
四、作业要求1.环境卫生1.1、进入无菌室必须换鞋、工作服，然后用桶里面的消毒液洗手。
如果是进行接种必须换防护措施严格的工作服，帽子、口罩。
1.2、无菌室每日均通无菌空气操作时关闭，并依使用频繁与否不定期用新洁尔灭溶液或84等消毒液擦地、墙、桌面、灯。
每周三、周日彻底的打扫、擦拭墙地面，不留任何死角，清洁消毒的顺序是从上而下，从左到右，由里而外。
打扫完之后填写《菌种室消毒记录》。
1.3、每周各房间做一次沉降菌试验，具体操作是：在紫外灯关闭后半小时后进入无菌室立即将营养琼脂培养平皿打开，在空气中放置30min（每个房间放置一个）然后盖好皿盖放于37℃培养24h，然后计数，填写《菌种室落菌情况记录》，如果平板上的菌落数超过3个必须进行消毒灭菌。
待消毒灭菌之后，再做平板落菌。
如果此时平板的菌落数仍然超过三个，此时必须进行熏蒸灭菌。
1.4. 无菌室平时应保持整洁，无关杂物严禁放入尽可能的少在无菌室走动。
1.5.使用完无菌室之后关排风装置，开启臭氧发生器30min。
待下次使用时提前打开排风装置，方可进入操作。
如遇染菌等异常情况下，要对无菌室进行全面的卫生清理，并进行熏蒸（一般不建议采用，除非特殊情况）。
1.5.1、甲醛熏蒸方法：将房间面积计算出，然后按照按照甲醛（40%）5ml／m3、高锰酸钾2.5g／m3的用量。
不同情况下，用量有所不同，但比例均为2：1。
1.5.2、将高锰酸钾放置于耐高温、耐腐蚀的陶瓷或玻璃器皿中，然后将甲醛倒入器皿内快速撤离，关好房门。
1.5.3、将空间密闭12h后打开无菌风通风换气，熏蒸后若甲醛味浓烈，可在使用前用一半甲醛量的氨水中和。
1.6.使用前后半小时用紫外灯对无菌间、缓冲间照射消毒。
微生物检验无菌室洁净标准及其操作规程
微生物检验无菌室洁净标准及其操作规程无菌室(洁净室)是微生物检验室的核心。
无菌室普通是在微生物试验室内开拓的一个自立小房间。
无菌室的规划设计、建设要符合《洁净室施工及验收规范》(GB50591-2010)的要求。
(一)无菌室洁净标准无菌操作间洁净度应达到10000级，超净工作负清净度应达到100级，室内温度维持在18～27℃，湿度保持在30%～70%。
详细要求见表4-3。
表4-3 无菌室(洁净室)空气洁净度级别注：1.浮游菌m3和沉降菌/皿可任测一种。
2.100级洁净室(区)0.8m高工作区的截面最低风速：垂直单向流0.25m/s，水平单向流0.35m/s。
(二)无菌室操作规程 (1)无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
(2)无菌室应定期用相宜的消毒液灭菌清洁，以保证洁净度符合要求。
按照无菌室的净化状况和空气中含有的杂菌种类，可采纳不同的消毒剂，如、、、3%气溶胶喷雾(20mL/m3)、(配成1%浓度喷洒)、5%气溶胶喷雾(2.5mL/m2)等。
(3)工作人员进入无菌室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽子、口罩和手套。
(4)无菌室用法前，应将全部物品置于操作部位(待检物除外)，然后打开紫外灯杀菌30min以上，并同时打开超净工作台举行吹风。
操作完毕，应准时清理无菌室，再打开紫外灯灭菌20min。
(5)凡带有活菌的物品，必需经高压灭菌后才干清洗或丢弃。
(6)每2～3周用3%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌椅及地面。
(7)无菌室应每月检查菌落数。
在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的养分琼脂平板3～5个，分离放置在工作位置的左、中、右等处，开盖裸露30min后，倒置于30～35℃培养箱内培养48h，取出检查。
100级洁净室平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平板杂菌数平均不得超过3个菌落。
如超过限度，应对无菌室举行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。
手术室无菌操作规范
患者准备：患者需在手术前进行相关检查，如血液检查、影像学检查等，以确定手术方式 和范围。
手术中无菌操作规范
手术前准备：手术间消毒、器械消毒、手术人员准备 手术中无菌操作：严格遵守无菌原则、正确使用无菌器械和敷料、避免污染和交叉感染 手术中注意事项：保持手术间整洁、避免人员流动、遵循消毒隔离制度 术后处理：对使用过的器械和敷料进行清洗和消毒、对手术间进行终末消毒
培训与教育
医护人员培训内容与要求
手术室无菌操作 规范的重要性
手术室无菌操作 流程与细节
医护人员无菌操 作技能培训
医护人员无菌操 作意识培养
患者及家属教育内容与要求
手术前教育：告知患者及家属手术目的、过程及注意事项 手术后教育：指导患者及家属正确护理、康复及预防并发症 心理指导：提供心理支持，缓解患者及家属焦虑情绪 健康宣教：普及健康知识，提高患者及家属健康素养
手术室着装要求：必须穿手 术衣、戴口罩、戴手套
手术室着装要求：禁止佩戴 首饰、长发需盘起、穿清洁
鞋
手术室人员管理规范：定期 进行无菌操作培训，提高无
菌意识
消毒操作规范
消毒剂选择：应选择高效、广谱、低毒的消毒剂 消毒方法：采用浸泡、擦拭、喷洒等方法进行消毒 消毒时间：应按照规定的消毒时间进行消毒，确保消毒效果 消毒人员防护：消毒人员应佩戴防护用品，确保自身安全
布局与设施
手术间内应有适宜的空间和 照明
手术室应分为无菌区、清洁 区、半污染区等
手术台应符合无菌操作要求 手术室内应有空气净化系统
清洁与消毒
清洁：每日清洁手术间地面、 墙壁、门窗等
消毒：使用紫外线灯照射或 臭氧消毒机进行空气消毒，
无菌室消毒
无菌室消毒目的：建立无菌室清洁消毒标准操作规程，为质检中心的无菌室清洁消毒操作提供标准，防止污染，保证药品质量控制及检验的准确性和真实性。
范围：适用于实验室的无菌室的清洁消毒工作。
质检中心无菌室的工作人员对本规程实施负责，质保部负责监督。
消毒灭菌操作要领1、先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟。
2、检验用的有关器材，搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒。
3、操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室。
4、进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。
操作过程注意事项1、动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境。
2、操作应在近火焰区进行。
3、接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌。
4、使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。
5、观察平板时不好开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能大开，而是上下盖适当开缝。
6、进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。
7、工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。
常用消毒剂现将常用的消毒药品及其配制、使用方法，介绍如下：1．35％甲醛水溶液（HCHO）：又名福尔马林，使蛋白质变性。
用于培养室、无菌室的灭菌。
2．0.1％的升汞水（HgCL3）：能使蛋白质变性，抑制酶类。
0.1％升汞配制方法是称取升汞0.1克，用少许酒精溶解，再加水至100毫升即成。
用于无菌箱、培养箱、培养皿四周表面以及手指的灭菌。
3．石炭酸（C6H5OH），5％浓度喷雾后，能使蛋白变性沉淀。
石炭酸（苯酚）50毫升，加水950毫升配成。
用于工作服、实验桌的灭菌。
杀菌效果同升汞。
4．高锰酸钾（KMnO4）：氧化剂。
0.1％浓度能使蛋白质与氨基酸氧化，失去酶的活性，用于消毒，能抑制或杀死杂菌。
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物学研究和实验的重要场所，其操作规程对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将详细介绍无菌实验室操作规程的五个部分。
一、实验室准备1.1 清洁与消毒：无菌实验室应定期进行清洁和消毒，确保实验环境的无菌状态。
清洁应使用无菌纱布和无菌溶液，消毒则应选择适当的消毒剂，如酒精或过氧化氢。
1.2 实验器材准备：在进行实验前，必须确保实验器材的无菌状态。
实验器材应经过高温高压灭菌或使用无菌过滤器过滤，确保无菌操作的可靠性。
1.3 个人防护：进入无菌实验室前，实验人员应穿戴适当的个人防护装备，包括无菌手套、口罩和实验服。
这些装备能有效减少外界微生物的污染，保证实验的无菌性。
二、无菌技术操作2.1 消毒操作：在进行无菌实验前，必须进行适当的消毒操作。
这包括用酒精或火焰对实验台面、实验器材和手术刀进行消毒处理，以杀灭表面的微生物。
2.2 灭菌操作：在进行培养基、培养皿等实验材料的制备时，必须进行灭菌操作。
常见的灭菌方法包括高温高压灭菌、紫外线辐射灭菌等，确保实验材料的无菌性。
2.3 采样操作：在进行微生物采样时，必须采取严格的无菌操作。
这包括用无菌棉签或无菌吸管进行采样，避免外界微生物的污染。
三、培养基制备与使用3.1 培养基配制：在制备培养基时，必须按照一定比例将培养基粉末与无菌蒸馏水混合，并进行高温高压灭菌，以确保培养基的无菌性。
3.2 培养基使用：使用培养基时，必须采取无菌技术进行操作。
这包括使用无菌吸管或无菌移液器取出适量的培养基，并将其均匀涂布在培养皿上。
3.3 培养基保存：未使用完的培养基应保存在冰箱或低温冷藏室中，避免细菌的生长和污染。
同时，应定期检查培养基的无菌性，确保其质量。
四、细胞培养操作4.1 细胞传代：在进行细胞培养时，必须进行细胞传代操作。
这包括将细胞从旧培养皿中取出，用无菌吸管或无菌移液器转移到新的培养皿中，以保持细胞的健康和纯度。
4.2 细胞培养液更换：细胞培养液应定期更换，以保持培养液的无菌性和营养成分的充足。
灭菌操作规程(清晰整齐)
灭菌操作规程一、微生物检验器皿的包扎1、目的杀菌前的准备工作2、所用器具(1)、棉花(2)、橡胶塞(3)、牛皮纸或报纸(4)、棉绳3、操作方法(1)、试管：塞上棉塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。
做乳糖胆盐培养基时，将试管头塞上专用塑料塞放入铁丝框。
(2)、吸移液管：将吸移液管一头塞上棉塞，然后单支或几只用纸包起来，或用盒装。
(3)、三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口用棉塞塞好，或塞上橡胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。
(4)、玻璃洗瓶：将玻璃洗瓶瓶口用棉塞或橡胶塞塞好，用牛皮纸把塞头部包起来。
(5)、磁性漏斗：用牛皮纸或报纸将磁性漏斗整个包扎起来。
(6)、平皿：10 个为一组，用牛皮纸包裹或盒装。
二、高压蒸汽灭菌1、适用范围本法适用耐湿热器具的灭菌如：(1)、易分解的、耐热性的培养基(2)、耐热性好的玻璃器皿(3)、橡胶(4)、耐热性塑料2、原理利用1.5kgf/cm2，121℃的饱和蒸汽，灭菌20分钟。
4、仪器和设备高压灭菌锅5、操作方法(1)、包装a.装入培养基的（箱）瓶用螺旋盖盖上，容器用棉塞塞住，再用牛皮纸包扎。
螺旋盖应微松。
b.在瓶中的培养液不要超过1L，否则灭菌不彻底。
c.容器的上部应留有足够的空间，以便产生气泡。
d.器具用牛皮纸包裹，放入灭菌袋中。
e.器具的组合和包裹应允许灭菌蒸汽接触所用物品。
f.各类器具装入釜内时，相互间要留有空隙以使蒸汽自由流动。
(2)、高压杀菌a.在灭菌器内加入适量的水（不得低于釜底指示横片，露出加热盘管），放入需灭菌物品，盖上内盖，拧紧外盖上的螺栓。
拧紧时要注意对称的进行，否则容易造成漏气。
b.开始加热前，将排气阀打开。
c.待温度上升至100 oC 时（即当所有的冷空气已排出时），关闭放汽阀门，使压力上升至1.05kgf/cm2（15 磅/英吋2），在此压力下维持20 分钟。
注意：加热时间不要过长，但也不要低于指定的20分钟。
(3)、断开电源。
(4)、排气阀关闭的状态下，让釜内压力自然下降。
无菌室清洁消毒标准操作规程
无菌室清洁消毒标准操作规程1. 目的：建立无菌室清洁消毒标准操作规程，为质检中心的无菌室清洁消毒操作提供标准，防止污染，保证药品质量控制及检验的准确性和真实性。
2. 范围：适用于实验室的无菌室的清洁消毒工作。
3. 责任：质检中心无菌室的工作人员对本规程实施负责，质保部负责监督。
所有执行过程必须做完整记录。
4. 内容：4.1 清洁周期4.1.1 小清洁（每天一次）4.1.2 中清洁（每三天一次）4.1.3 大清洁（每两周一次）4.2 清洁剂: 饮用水、纯化水、食用洗洁精、2%纯碱（Na2CO3）溶液。
4.3 消毒剂：75%乙醇，0.1%新洁尔灭溶液。
（消毒剂每月轮换一次）4.4 清洁工具: PVC塑料管及连接件、专用洁净布、专用拖把、专用毛刷、登高具或专用长竿。
4.5 清洁标准4.5.1 现场无任何废弃物。
4.5.2. 工作台面：整洁，无肉眼可见污渍和尘埃；用净手触摸，无油污感，在工作光线下观察，手上不得染有油污和尘埃。
4.5.3 地面：无杂物；无肉眼可见的污渍；无积水。
4.5.4 墙面：无肉眼可见的尘埃、污渍和霉菌斑；墙角无蛛丝。
用净手触摸，无油污感，在工作光线下观察，手上不得染有油污和尘埃，不得有肉眼可见的异物脱落。
4.5.5 天棚：无肉眼可见的尘埃、污渍、霉菌斑和蛛丝。
用干净的专用洁净布擦拭，不得有肉眼可见的异物脱落。
4.5.6 无菌工作台：4.5.6.1 无肉眼可见污渍、霉菌斑和尘埃；用净手触摸，无油污感，在工作光线下观察，手上不得染有油污和尘埃。
4.5.6.2 必要时可用“棉签擦拭法”在布风板的内外表面25cm2取样作琼脂培养，不得有菌落生长。
4.5.6.3 局部A级区域静态空气监测符合规定。
4.6 清洁方法4.6.1 小清洁4.6.1.1 进行无菌操作前3小时内开无菌室紫外灯照射30分钟。
4.6.1.2 操作完毕，清除所有检品和废弃物，将检验设施拆卸于专门的容器具内，清洗消毒。
4.6.1.3 收集整理工作台面和地面，将废弃物清出无菌室，收入废物贮器。
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无菌室消毒灭菌操作规程
1、目的：
规范无菌室中检验工作的质量控制，确保检测结果准确可靠。
2、适用范围：
无菌室
3、操作规范：
3.1无菌室日常消毒灭菌
无菌室无固定程序，但按一般操作应遵循如下规程：
3.1.1操作间和缓冲室使用打开紫外线灯，照射杀菌。
3.1.2穿上工作服及无菌工作帽、鞋，然后用消毒液洗手。
3.1.3每次无菌操作前，均用用75%的酒精棉球擦拭操作台及可能污染的死角，每次实验前应开启净化系统使运转至少Ih以上，开启净化台，用紫外灯照射30分钟以上。
3.1.4如有菌液洒在桌上或地上，立即用5%石碳酸溶液或3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再进行高压蒸汽灭菌。
工作衣帽等受到菌液污染时，立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
3.1.5 1.5每次工作完毕，生物安全柜或超净台内用75%酒精擦拭台面后，开启紫外线灯照射30min.对用过的污染物品进行高压灭菌。
然后逐一关闭实验室送风和通风设备。
3.2无菌室定期消毒灭菌
1.2.1每两周用经过0.1%新洁尔灭或84消毒液(1:50)浸泡的纱布擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面等，两种消毒剂相互交替使用，然后用5%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后用紫外灯杀菌半小时。
2.2.2如果无菌室长期不用，再使用前需用乳酸熏蒸1〜2小时消毒，最后紫外灯杀菌半小时。
3.3无菌室的消毒灭菌，可采取以下几种方法：
4.3.1用甲醛和高锌酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40%甲醛10毫升、高锌酸钾8毫升，进行熏蒸。
使用时•，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锌酸钾，人员随之离开无菌室，关紧房门，熏蒸20—30分钟即可。
3.3.2乳酸熏蒸：乳酸4〜5ml加等量水，使用酒精灯加热蒸发，密闭2〜3ho 消毒时最适相对湿度60〜80乐低于60%效果下降。
3.3.30.1%升汞水消毒：用0.1%升汞水浸过的纱布或海绵进行擦拭，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起来。
喷雾后20〜30分钟，箱内的杂菌和雾滴一起落到箱底被杀死，内部的空气就变得很清洁。
3.3.4紫外线照射灭菌：在无菌箱中装一支200伏、30瓦的紫外线灯管，每次开20〜30分钟，就能达到空间杀菌的目的。
照射结束后，罩黑布半小时，以增强杀菌效果。
3.3.5石炭酸喷雾：在每次接种之前，用5%石炭酸溶液喷雾，可促使空气中的微粒和杂菌沉降，防止桌面微尘飞扬，并有杀菌作用。
3.3.6石灰揩擦：经常用药物熏蒸，易造成酸性环境，特别用甲醛和高镒酸钾熏蒸长久，污染往往越来越严重，预防办法可把各种药品交替使用，过一段时间(约五周)用石灰擦洗一遍。
实践证明，这样做效果很好。
3.4常用消毒剂
现将常用的消毒药品及其配制、使用方法，介绍如下：
3.4.135%甲醛水溶液(HCHO)：又名福尔马林，使蛋白质变性。
用于无菌室的灭菌。
3.4.20.1%的升汞水(HgCL
3
)：能使蛋白质变性，抑制酶类。
0.1%升汞配制方法是称取升汞0.1克，用少许酒精溶解，再加水至100毫升即成。
用于无菌室、培养箱、培养皿四周表面以及手指的灭菌。
3.4.3石炭酸(CAOH)：5%浓度喷雾后，能使蛋白变性沉淀。
石炭酸(苯酚)50毫升，加水950毫升配成。
用于工作服、实验桌的灭菌，杀菌效果同升汞。
3.4.4高镒酸钾(KMnOJ：氧化剂。
0.1%浓度能使蛋白质与氨基酸氧化，失去酶的活性，用于消毒，能抑制或杀死杂菌。
34.5乙醇(CH
1CH
2
OH)：又称酒精。
消毒以75%浓度的效果最好，它能使蛋白
质脱水变性，高浓度酒精会使蛋白质很快脱水凝固，消毒作用反而减弱。
3.4.6新洁尔灭：0.1%新洁尔灭用于培养箱、无菌室的灭菌。
3.4.7漂白粉水：取漂白粉10克，加水140毫升配成。
通常在使用前临时配
制，静置1〜2小时，取上清液喷射，进行室内消毒，每平方米用1升。
也可用84消毒液按说明书配制。
3.4.8药皂：煤酚皂、硼酸皂等各种药皂的水溶液，均可用于器具、橡皮塞及手指的消毒。
3.4.92%硫酸铜溶液：用硫酸铜（胆矶）2克，加水至100毫升加热溶解配成。
用于床架、木架等各种菌种架的消毒，还可用5%硫酸铜溶液。
3.4.100.5%波尔多液：先用硫酸铜1斤，溶于100斤水，再用石灰1斤,加水100斤。
然后等量混合起来即成。
用于菌种架、段木的消毒。
3.4.11多菌灵：用于杀灭真菌、半知茵。
1：800倍拌料或1：500倍喷洒均可。
3.5无菌室空气灭菌效果验证方法（沉降法）
定期检验无菌室空气污染情况，对改进灭菌措施，提高空气质量是非常必要的。
常用方法步骤如下：
3.5.1在消毒处理后与开展检验工作之前期间采样。
3.5.2取样点的选择应基于人员流量情况和做实验的频率。
一般情况下，无菌室面积W3（⅛2时，从所设定的一条对角线上选取3点，即中心1点，两端各距离Im处取1点；无菌室面积230m'2时，选取东、南、西、北、中5点，其中东点、南点、西点、北点距墙1m。
3.5.3在所选位点，将平板计数琼脂平板（90mm）或水化3MPetrifiInT菌落总数测试片置于距地面80CnI处，开盖暴露15min,然后，置于36°C±1C恒温培养箱培养48h±lh°如果侦查某目标细菌，则可用选择琼脂性平板（如PDA平板）或微生物测试片（如3MPetrifilmN环境李斯特氏菌测试片）。
3.5.4确认平板上的菌落数，如大于所设定的风险值，应分析原因，并采取适当措施，记录《洁净室监测计划及监控记录》、《生物安全柜及超净台监测计划及监控记录》。
如霉菌较多时；可先用5%石炭酸全面喷射后，再用甲醛熏蒸。
如细菌较多时，可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的办法加以杀灭。
4、依据:
4.1《病原微生物实验室生物安全管理条例》
4.2《实验室生物安全通用要求》(GB19489-2004)
4.3卫生部《人间传染的病原微生物名录》
4.4《实验室质量控制规范食品微生物检测》(GB/T27405-2008)
5、相关记录：
5.1《洁净室监测计划及监控记录》
5.2《生物安全柜及超净台监测计划及监控记录》。