邻甲苯胺法测定血糖ppt课件
生化实验--血糖的测定ppt课件
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注意事项
• 严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液 ，然后在进行测定。
• 酶酚混合液一般现用现配。
• 葡萄糖氧化酶对 β - D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡 萄糖约 36% 为 α 型， 64% 为 β 型。葡萄糖的完全氧 化需要 α 型到 β 型的变旋反应。葡萄糖变旋酶，可 加速这一反应，延长孵育时间可达到完成自发变旋 过程。新配制的葡萄糖标准液主要是 α 型，故须放 置 2h 以上 ( 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用。
• 有何临床意义？
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• 口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance test， OGTT）是一种口服 葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食 葡萄糖后的血糖调节能力。
• 通过OGTT试验，可以早期发现糖代谢异 常，早期诊断糖尿病(Diabetes Mellitus, DM) ，是一种简单、快捷的 诊断方法。
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OGTT方法：WTO标准化
实验前三天，受试者每日食物中糖含
量不应低于150g，且维持正常活动，影响
试验的药物应在三天前停用，受试前应空
腹10-15h。
空腹取血后，5分钟内饮入250ml含
75g无水葡萄糖的糖水，妊娠妇女用量为
100g，儿童按1.75g/kg体重给予,不超过
75g。
服糖后半小时，1小时，2小时，3小时
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葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理
葡萄糖氧化酶
（1）葡萄糖＋O2＋H2O （GOD） 葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
实验十 血糖的测定
实验（一）十血糖的测定血液中的葡萄糖称血糖。
正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。
血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。
其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。
因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。
血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。
下边介绍两种方法供选择。
一、葡萄糖氧化酶法【目的】1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。
2. 掌握血糖测定的临床意义。
【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。
后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。
其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与管比较可计算出血糖的浓度。
反应式如下：2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物POD2H 2O2H 2O 2O 2葡萄糖+葡萄糖酸+GOD+【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。
2. 酶试剂称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/L NaOH调pH至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。
实验七 血液中葡萄糖的测定
二、显 色
取7只试管，编号，按下表操作。混匀后，置沸水
浴中煮沸15min，取出，在冰水浴中冷却。
邻甲苯胺法测定血糖操作表
比色及结果
以“0”号管为对照，用分光光度计在 630nm处比色测定，以各管的吸光度为 纵坐标，相应管中葡萄糖含量为横坐标， 绘制标准曲线。 根据测定管吸光度，通过标准曲线即查 得含量。
实验四 血糖的测定---邻甲苯胺法
标准曲线法
实验目的
掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。
掌握标准曲线法在定量分析中的应用
实验原理
本实验采用临床上常用的邻甲苯胺法，利用葡 萄糖在热的醋酸溶液中脱水后与邻甲苯胺缩合， 生成青色的Schiff碱，对波长630nm的光有特 征吸收，可比色定量测定。 由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测 定法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时 也无需去除血浆或血清中的蛋白质。
附：标准样品法定量测定
取3只试管，编号，按下表操作。混匀后，置沸
水浴中煮沸15min，取出，在冰水浴中冷却。 试剂 蒸馏水 邻甲苯胺 葡萄糖标准品 待检血清 空白管 0.1ml 5ml
__ __
标准管
__
检测管
__
5ml 0.1ml
__
5ml
__
0.1ml
以空白号管为对照，用分光光度计在630nm处比色测定， 记录各管吸光度，数学计算 作
一、标准曲线的制备（标准品梯度稀释） 取l0ml容量瓶5只，分别编号1，2，3，4， 5，依次加入葡萄糖贮存标准液0.5，1.0， 2.0，3.0，4.0(ml)，再以饱和苯甲酸溶液 稀释至l0ml刻度，混匀。上述溶液l00ml葡 萄糖含量分别为50，100，200，300， 400(mg)。
临床常用生化检测诊断学PPT课件
Clinical Significance
• 诊断糖尿病 • 判断IGT • 平坦型糖耐量曲线 • 储存延迟型糖耐量曲线 • 鉴别尿糖与低糖血症
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3.血清胰岛素检测和胰岛素释放试验
(Insulin AND Insulin releasing test)
11
血清胰岛素检测和胰岛素释放试验
【方法】
7
2.口服葡萄糖耐量试验
(Oral glucose tolerance test, OGTT)
8
Reference interval
FPG：3.9 - 6.1 mmol/L 30-60min 血糖达高峰，峰值 ＜11.1 mmol/L 2h PG：＜ 7.8mmol/L 3h恢复至空腹水平 尿糖：均为阴性
在蛋白水解酶作用下，在胰岛素原（pro-insulin）转变 为胰岛素的过程中，释放出一个由31个氨基酸组成的片断， 称C-肽（C-peptide）。
测定血清C-肽的水平可以了解胰岛素的分泌、代谢和胰 岛B细胞的储备功能。
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【参考值】
空腹c-肽：0.3～1.3nmol／L。 C-肽释放试验：口服葡萄糖后30min～1h出现高峰。
磷脂 (Phospholipid,PL) 游离脂肪酸 (Free fatty acid,FFA)
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1. 总胆固醇测定 (Total cholesterol,TC)
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【参考值】
合适水平：< 5.20mmol／L 边缘水平：5.23～5.69mmol／L 升 高：> 5.72mmol／L 严重高胆固醇血症 > 7.76mmol/L
• TG↓
– 严重肝病、甲亢、肾上腺皮质功能减退等 – 低脂蛋白血症
《实验五激素对血糖》幻灯片
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1. 血糖及测定方法介绍
血糖即血液中的葡萄糖，正常人空腹血 糖在3.89～6.11 mmol/L〔70 ～110 mg％ 〕之间。
血糖的测定方法有葡萄糖氧化酶法﹑邻 甲苯胺法等。
作者及通信地址
吴勉云 1
1. 武汉科技大学医学院护理学0702班 湖北 武汉 430065
[摘要] 目的 探讨胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响
方法
结果
结论
[关键词] 胰岛素；肾上腺素；血糖．
引言 1 材料与方法
1.1 1.2 1.3 2 结果
[Abstract] Aim Methods Results Conclusions
胰岛素诱导糖酵解关键酶类的合成； 阻遏糖异生关键酶的合成； 胰岛素促进葡萄糖进入红细胞、肌肉等组织的
易化扩散，促进糖的利用。
4. 肾上腺素升高血糖
和肝细胞膜受体结合，通过cAMP-蛋白 激酶系统激活肝磷酸化酶，同时抑制糖 原合成酶，导致肝糖原分解加速。
5. 操作步骤
称两只家兔体重并记录； 从耳缘静脉采血，使血液滴入盛有草酸钠(每毫
[Key words]
2.1
2.2
2.3
3 讨论
参考文献：
1. 李燕俊，计融，李玉伟，等.高丽红参对小鼠 抗疲劳作用的研究。
中国公共卫生，2003；19〔6〕：712-713.
2. Cheng C, Campbell KL, Kushner H et al. Correlation of oral glucose tolerance test-derived estimates of insulin sensitivity with insulin clamp measurements in an African-American
血糖测定-邻甲苯胺
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糖尿病的分类
①IDDM：也称Ⅰ型糖尿病，好发于青春期，对胰岛 素敏感。
结果偏高10%
同上 G+Fe(CN)6-3 →Fe(CN)6-4 历史意义
黄色
无色 Technicon曾用
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（二）有机化学法（缩合法）
方法
类型
原理
用途及备注
邻甲苯胺 定量 G+邻甲苯胺→G基胺 操作简便、
法
（630nm） 无需滤液、
特异性较高，
中小医院使
用普遍，很
少用于自动
4.高脂血的标本最后显色有时会出现浑浊，影响测定结果。可先制备血滤液 后再行测定。
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类型
原 理 用途及备注
班氏法 半定量 G+Cu+——→Cu2O↓ 尿糖测定 （Benedict）
磷钼酸法 定量 G+Cu+——→Cu2O↓ 历史意义 （Folin-Wu）分光 Cu+ 磷（砷）钼酸盐 操作复杂、
需制滤液、
砷钼酸法 同上 蓝色络合物
特异性差、
新铜试剂法
碱性高铁 氰化物法
（660nm）
受还原物质影响
手工、自动化分析
葡萄糖氧 同上 G+O2 → GA+H2O2 推荐常规方法
化酶（POD） H2O2 + 染料→有色染料
实验十 血糖的测定
实验十血糖得测定血液中得葡萄糖称血糖。
正常人血糖浓度较恒定,维持在3.9mmol／L～6.1mmol／L之间。
血糖浓度得相对恒定就是机体进行正常生理活动得前提条件之一,有着双重实际意义:其一,维持稳定得能源供给,满足机体在各种生理状态下对能量得需求。
其二,保证机体不因进食致血糖浓度过高,导致糖得丢失。
因此,血糖得测定就是临床生化检验实验室得常规检测项目。
血糖测定按其发展过程及反应原理得不同,大致分三类:氧化还原法 ,缩合法(主要有邻甲苯胺法),酶法(主要有己糖激酶法与葡萄糖氧化酶法)。
下边介绍两种方法供选择。
一、葡萄糖氧化酶法【目得】1、了解葡萄糖氧化酶法测定血糖得原理,能进行血糖测定得操作。
2、掌握血糖测定得临床意义。
【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase,GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸与过氧化氢。
后者在过氧化物酶 (peroxidase,POD)作用下,分解为水与氧得同时将无色得4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色得醌类化合物,即 Trinder 反应。
其颜色得深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比,在505nm波长处测定吸光度,与标准管比较可计算出血糖得浓度。
反应式如下:【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1、 0、1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7、0)称取无水磷酸氢二钠8、67g及无水磷酸二氢钾5、3g溶于800ml蒸馏水中,用1mol/L 氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调节pH至7、0,然后用蒸馏水稀释至1L。
2、酶试剂称取过氧化物酶1200U,葡萄糖氧化酶1200U,4氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/L NaOH调pH至7、0,加磷酸缓冲液至100ml。
置冰箱保存,4℃可稳定3个月。
3、酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中(酚在空气中易氧化成红色,可先配成500g/L得溶液,贮存于棕色瓶中,用时稀释),用棕色瓶贮存。
实验三血糖的测定
教研室
生物化学
课程
生物化学实验
专业
2012级临床
指导教师
徐燕
教材
生物化学实验指导
内容
实验三邻甲苯胺法测定血糖
学时
2
教学要求
教学目的和要求
1.掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法
1.掌握分光光度计的使用方法
教学重点难点
重点：邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法
难点：分光光度计的原理和使用方法
教学媒体
学生动手操作为主，课堂演示为辅
复习旧课
血糖的来源和去路
教学过程
讲
授
新
课
（一）原理
血液中所含的葡萄糖，称为血糖。它是糖在体内的运输形式。目前国内医院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。前者特异性强、价廉、方法简单，其正常值：空腹全血3.6～5.3毫摩尔/升（65～95毫克/升），血浆为3.9～6.1毫摩尔/升。后者由于血中绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉淀下来，因而不易出现假性过高或过低，结果较可靠，其正常值：空腹全血为3.3～5.6毫摩尔/升（60～100毫克/升），血浆为3.9～6.4（70～115毫克/升）。本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的希夫氏碱，与同样处理的标准液进行比色，即可计算出血糖的含量。
（二）试剂和器材
1.试剂
邻甲苯胺试剂：称取硫脲1.5ｇ溶于750ｍL冰醋酸中，加邻甲苯胺150ｍL及饱和硼酸40ｍL，混匀后加冰醋酸至1000ｍL，置棕色瓶中，冰箱保存。
葡萄糖标准溶液：5.0mg/mL，临用时稀释成1.0mg/mL。
邻甲苯胺法测定血糖实验报告
邻甲苯胺法测定血糖实验报告
一、实验目的
实验旨在使用邻甲苯胺法测定血糖水平。
二、实验原理
邻甲苯胺法是一种常用的血糖测定方法，它是一种光敏催化方法，可以用来测定和分析人血液中的血糖含量。
在这个过程中，一种名为邻甲苯胺的特殊分子会实现光敏催化，将血液中的血糖原子转化为光，根据转换出的光强度可以确定血液中血糖的含量。
三、实验材料
（1）血液标本；
（2）50mL蒸馏水；
（3）邻甲苯胺；
（4）吸光度测量仪；
（5）20mL分离管。
四、实验步骤
（1）将20mL分离管中放入50mL蒸馏水，加热至100℃；
（2）在分离管内加入4mg邻甲苯胺，搅拌均匀；
（3）将血液标本以1:1的比例加入分离管中，然后搅拌均匀；
（4）将分离管中的混合液放入吸光度测量仪，在660nm波长下进行测定；
（5）根据测量出的光强度可以计算出血液中的血糖浓度。
五、实验结果
根据测量出的光强度，可以计算得出血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L。
六、实验结论
本次实验使用邻甲苯胺法测定血液中的血糖浓度，结果显示血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L，结果合理有效。
生化实验-血糖的测定
A=KLC
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朗伯-比尔定律应用
A标=KC标L A样=KC样L
C样=
A样 A标
×C标
标准品法测定未知样品含量
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分光光度计的使用
1. 接通电源，调整波长。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计
酶酚混合液一般现用现配。
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小结
1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 测定血糖的原理。
2、分光光度计的正确使用。 3、实验操作中存在的问题。
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中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。 3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开
盖）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待
测样品的吸光度值。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ品课件
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测激 素对血糖浓度的影响
方 法
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实验步骤：
（1）葡萄糖＋O2＋H2O （GOD） 葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
Trinder反应
相对血糖浓度
光吸收法测定
505nm
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分光光度计的工作原理
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朗伯-比尔定律
朗伯定律：A=k1L 比尔定律：A=k2C 朗伯-比尔定律：如同时考虑液
实验四
血糖的测定
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血糖及血糖水平的概念：
血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平： 3.9~6.7mmol/L
最新②尿中葡萄糖邻甲苯胺法PPT课件
2 实验仪器与试剂 ⑴实验仪器
⑴实验仪器 ①尿蛋白磺基水杨酸比浊法：试管、可见光分光
光度计等 ②尿中葡萄糖邻甲苯胺法：试管、水浴锅、烧杯、
可见光分光光度计等
⑵ 试剂
①尿蛋白磺基水杨酸比浊法：3%磺基水杨酸溶液：称取 A.R纯品磺基水杨酸3.0g和无水硫酸钠7.0g，以蒸馏 水溶解至100ml，必要时过滤备用。
➢ 葡萄糖标准贮备液（10 mg/1ml）：取无水纯葡萄糖（A.R） 2-3克，置于洁净的烧杯内，在40-50℃干燥箱中烘干至恒 重，置于干燥器中保存。准确称取烘干的葡萄糖1.000g， 加约50 ml 0.25%安息香酸溶液溶解，倒入100 ml容量瓶 中，用0.25%安息香酸溶液稀释至刻度，置冰箱中保存。
已知sinxcosx1,x2，则tanx的值为
5
A.4 B.4或3 C.3 D.4
3
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4
3
你能一眼识别它！加油！
答案：A
小组讨论交流、质疑、点拨、提升
学后反思
• 我学到的方法
• 体现的数学思想
A.1 V 2
B.1 V 3
C.1 V 4
D.1 V 5
A'
C'
Q B'
P A
答案：B
C B
沙场点兵
若动点P、Q在椭圆x2 +y2 =1上，且满足OPOQ， 16 9
则中心O到弦PQ的距离OH必等于
A.?20 B.?23 C.?12
3
4
5
D. 4? 15
任务6：
若a ln 2 , b ln 3 , cFra bibliotek ln 5 ，则
血糖的测定ppt课件
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）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待测
样品的吸光度值。
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葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测激 素对血糖浓度的影响
方 法
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实验步骤：
（1）取4支试管，按下表加入试剂:
试剂
血清样品 葡萄糖标准液 蒸馏水 酶酚混合试剂
标准管 (ml)
– 0.02
测定管光密度
测定管葡萄糖含量 ＝
×5
（mmol/L）
标准管光密度
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注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液 应占比色皿的2/3。
血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血 糖易分解，故使含量降低。
酶酚混合液一般现用现配。
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小结
1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 测定血糖的原理。
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
Trinder反应
相对血糖浓度
光吸收法测定
505nm
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分光光度计的工作原理
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朗伯-比尔定律
朗伯定律：A=k1L 比尔定律：A=k2C 朗伯-比尔定律：如同时考虑液
层厚度和溶液浓度对吸光度的 影响，则吸光度与溶质的浓度 和溶液的厚度的乘积成正比。
A=KLC
– 3.00
测定管 1(ml)
0.02 – –
3.00
测定管 空白管 2(ml) (ml)
0.02
–
–
–
–
0.02
3.00 3.00
充分混匀，37℃ 水浴中保温20min； 冷却至室温后，505nm处比色
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邻甲L） 蒸馏水
葡萄糖标准溶液 血清
邻甲苯胺试剂
A630
空白管 0.1 — — 5.0
标准管 — 0.1 — 5.0
测定管 — — 0.1 5.0
混匀后，置沸水浴中煮沸15min。取出于冷
水中冷却，在630nm波长处比色，以空白管
调零点，测定各管吸光度。
邻甲苯胺法测定血糖
3
四、计算
血糖浓 (m度 g/10m 0)L AA标 测准 定C标准100
C标准 ：葡萄糖标准液浓度，为 1mg/mL
邻甲苯胺法测定血糖
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实验七 血糖的测定(邻甲苯胺法)
• 一、目的
掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法
二、原理
血糖是指血液中的葡萄糖，葡萄糖与冰醋酸、
邻甲苯胺共热时，葡萄糖先脱水转化为羟甲基
糠醛，再与邻甲苯胺缩合为蓝绿色的薛夫碱，
其颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。可用比色
法进行定量测定。
邻甲苯胺法测定血糖
1
三、操作
1、配制葡萄糖标准应用液（浓度为1mg/mL） 取10mL葡萄糖标准贮存液（浓度为 10mg/mL），置于100mL容量瓶中，加饱和 苯甲酸至刻度，备用。（每个实验室配制 100mL即可）