无内毒素质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
质粒小提步骤
质粒小提（AxyPrep质粒DNA小量试剂盒）本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。
适合从1-4ml细菌培养物中提取多至20ug高纯度的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性Rnase A:50mg/ml,室温可贮存6个月，长期贮存于-20℃。
Buffer S1：细菌悬浮液。
加入Rnase A后，混合均匀，4℃贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。
混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗涤液，室温密闭贮存。
二、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三、实验准备1、第一次使用前，Rnase A全部加入Buffer S1中，4℃贮存。
2、准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3、第一次使用前，Buffer W2 concentrate 中加入指定体积的无水乙醇。
4、使用前，检查Buffer S2是否出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后再使用。
四、操作步骤1、取1-4ml在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12000*g离心1min，弃尽上清。
2、加250ul Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
*确认Buffer S1中已加入Rnase A3、加250ul Buffer S2，温和并充分的上下翻转4-6次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒I简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备II.注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A置于4o C保存。
质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
切勿直接取冻存的菌种进行培养。
DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL(PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100% 乙醇加入DNA Wash Buffer。
Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。
在室温下（22-25o C）进行所有离心操作。
III.操作步骤1.接种新鲜的单个菌落到1-5 mL的LB培养基（含适量抗生素），37o C震荡培养14-16小时。
室温下10,000 x g离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani）培养基培养12-16 小时后，OD600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。
若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD600不超过3.0。
2.加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。
(完整word版)质粒提取试剂盒说明书(word文档良心出品)
E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2．加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中.室温保存除试剂盒外还需准备：可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程：(提取过程在室温下进行)：1.在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37cº振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min，去上清3. 加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
（用移液枪吹打进行重悬浮）4.加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min，紧凑的白色沉淀就会形成，迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略9.弃滤过液，再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min，弃过滤液。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(无内毒)
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下500×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution 将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
质粒小量制备试剂盒
质粒小量制备试剂盒（离心柱型）1. 取1~2 ml 2YT或LB培养基过夜培养的菌液，8000 rpm离心1 min，弃尽上清。
注意：对于低拷贝数的质粒，请用4~6 ml菌液，适当增加Solution Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ的用量，或分几个离心管处理，最后通过多次离心将上清液收集到一个吸附柱中。
2. 加入200 μl Solution Ⅰ，用枪头或振荡器充分悬浮细菌。
注意：不要残留细小菌块，否则会影响裂解，导致提取质粒量低和质量下降。
3. 加入200 μl Solution Ⅱ，立即温和并充分地上下翻转混合4~6次，使菌体充分裂解，直至形成透亮的蛋清状溶液，此步骤不宜超过5 min。
4. 加入350 μl Solution Ⅲ，温和并充分地上下翻转混合8~10次，室温放置2~5 min。
12000 rpm，离心5~10 min。
5. 将步骤4中的上清转移到套放于2 ml收集管内的GenClean Column中，室温6000 rpm离心1 min，取出GenClean Column，倒掉收集管中废液。
6. 将GenClean Column重新放回收集中，加入500 μl Wash Solution，12000 rpm，室温离心1 min，倒掉收集管中废液。
7. 重复步骤6一次。
8. 倒掉收集管中废液，12000 rpm，室温离心1 min，彻底去除Wash Solution。
注意：此步骤不可省略。
9. 将GenClean Column放入干净的1.5 ml离心管中，在GenClean Column膜中央加入50~70 μl Elution Buffer，37 ℃放置2 min。
10. 12000 rpm，室温离心1 min，离心管中的液体即为包含目的质粒的溶液。
11. 取2~5 μl（视质粒浓度定）进行琼脂糖凝胶电泳检测，纯化好的DNA可立即用于后续实验或-20 ℃冻存。
GENMED 无内毒素小量质粒抽提试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60007.3 v.A GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂是一种旨在通过化学和生物裂解细胞、 沉淀、亲和树脂过滤、萃取来达到脱盐、去内毒素、去蛋白、去杂质小分子的纯化无内毒素质粒DNA的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种质粒/柯斯质粒DNA样品的制备，OD260/280在1.8-2.0之间。
产物可用于各种后续分子生物学操作。
产品即到即用，性能稳定，操作方便迅速，提取效率和纯化程度高。
技术背景内毒素（Endotoxin）是一种脂多糖（Lipopolysaccharides；LPS），革兰氏阴性细菌细胞膜的组成成分。
在质粒纯化过程中，细菌裂解释放出内毒素，伴随着质粒，严重干扰后续真核细胞的转染，尤其对于敏感的细胞株。
GENMED无内毒素小量质粒DNA制备技术综合了酶解、碱裂、煮沸等优势元素，融入了特异亲和树脂充分有效地使细菌中核酶、PCR反应抑制剂失活，并清除内毒素（低达<0.1 EU/微克）以及非DNA 分子，其效率和纯度都出乎其上。
产品内容GENMED混匀液（Reagent A）毫升GENMED裂解液（Reagent B）毫升GENMED平衡液（Reagent C）毫升GENMED去毒液（Reagent D）毫升GENMED去干扰剂（Reagent E）微升GENMED沉淀液（Reagent F）毫升GENMED清理液（Reagent G）毫升GENMED保存液（Reagent H）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED混匀液（Reagent A）和GENMED去干扰剂（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5和2毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于沉淀核酸涡旋震荡仪：用于混匀反应物37℃恒温水槽：用于孵育反应物1．加入毫升含质粒的细菌到毫升离心管（注意：确保细菌量OD600＝ ;如果细菌量不足，影响质粒提取）2．放进微型台式离心机离心秒，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED混匀液（Reagent A），涡旋震荡少许，使细菌颗粒混匀5．加入微升GENMED裂解液（Reagent B），轻轻混匀6．加入微升GENMED平衡液（Reagent C），强力涡旋震荡秒7．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）8．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免絮状物9．同时移取微升GENMED去毒液（Reagent D）到另一个新的毫升离心管（注意：参见注意事项3和4）10．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）11．小心抽去上清液12．加入微升实验步骤的上清液13．涡旋震荡秒14．平放在平式摇荡仪上孵育分钟，速度为RPM15．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）16．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免黑色小粒17．加入微升GENMED去干扰剂（Reagent E），混匀18．放进℃恒温水槽孵育分钟19．加入微升GENMED沉淀液（Reagent F）20．涡旋震荡秒21．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）22．小心抽去上清液23．加入微升GENMED清理液（Reagent G）24．放进微型台式离心机离心分钟，速度为0g（例如eppendorf 5415D，RPM）25．小心抽去上清液26．空气中晾干27．加入0微升GENMED保存液（Reagent H）28．放进℃冰箱里备用注意事项1．本产品为20次操作2．本产品采用特殊树脂法3．使用GENMED去毒液（Reagent D）前，充分混匀4．使用1毫升枪头，将枪头尖端部分剪去，用于移取GENMED去毒液（Reagent D）5．细菌量是个重要因素：通常1毫升细菌可获得1－5微克无内毒素质粒6．如果需要制备各种数量的细菌质粒/柯斯质粒，可订购中量和大量规格7．本公司提供GENMED RNA清除试剂盒（GMS20059）和GENMED去内毒素试剂盒（GMS20067）8．本公司提供系列质粒提取试剂产品1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定去内毒素和纯化程度高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒 Mini Plasmid Kit(目录号：HS0101)产品包装（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。
通过漂洗液PW 的清洗可去除杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒DNA 。
使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug 的高纯度质粒DNA ，在30 min 之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR 、测序等各种常规分子生物学操作。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液不需要另加乙醇，即开即用。
3. 高质：OD260/280在1.7 ~ 1.9之间。
4. 稳定：正确保存条件下一年内提取效果不发生变化。
操作步骤1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。
（注意：是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮充分，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次，直到溶液变得清亮粘稠。
质粒小量提取试剂盒说明书
质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。
（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
质粒小提试剂盒提取质粒
质粒小提试剂盒提取质粒
（1）柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μL的平衡液BL，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；
（2）取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000rpm离心1分钟，尽量吸除上清；
（3）向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1（先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；
（4）向离心管中加入250μL溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解；
（5）向离心管中加入350μL溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。
12,000rpm离心10分钟，此时在离心管中底部形成沉淀；
（6）将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中，注意尽量不要吸出沉淀。
12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；
（7）向吸附柱CP3中加入600μL漂洗液PW（先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；
（8）重复操作步骤（8）；
（9）将吸附柱CP3放入收集管中，12,000rpm离心2分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液除去；
（10）将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100μL洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000rpm离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中。
宁波基内生物技术 小量质粒提取试剂盒说明书
【注意事项】（1）溶液Ⅱ和溶液Ⅲ均应避免长时间与空气接触，使用后立即盖紧瓶盖，否则会因溶液失效而导致菌体裂解效率效果下降。
漂洗液PW含有乙醇成分，用后立即盖紧瓶盖，避免乙醇成分的挥发。
（2）菌体裂解、中和过程中，剧烈混合会造成基因组DNA断裂，导致提取的质粒DNA有基因组DNA污染，请按说明书操作。
（3）溶液Ⅱ作用细菌太久，一方面导致基因组DNA断裂成较短的DNA，不易和其他成分一起沉淀，造成基因组DNA污染。
另一方面会使质粒DNA 出现切口和断裂，间接导致质粒的质量下降。
裂解步骤所用时间不应超过5分钟。
（4）溶液Ⅱ加入后，溶液会变清亮，若无清亮现象，应加大溶液Ⅱ的用量。
（5）含质粒的转化菌的培养时间不应超过16小时。
过度培养一方面导致抗生素失效，选择压力降低，质粒丢失，无质粒细菌增多。
另一方面长时间的培养条件会导致细菌崩解。
（6）尽管本试剂盒可以抽提较大的质粒（>10kb），但不推荐使用。
如果一定要使用，请参考以下方法：加大菌体使用量（使用5～10ml过夜培养物），同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的用量；溶解液TE应在60℃预热，洗脱时延长放置时间或用50～100ul TE洗脱2次。
【生产企业】宁波基内生物技术有限公司【医疗器械生产企业许可证编号】浙食药监械生产许20080119号【生产地址】宁波镇海区庄市街道中官路777号【注册地址】宁波镇海区庄市街道中官路777号【联系方式】电话：*************传真：*************小量质粒提取试剂盒说明书宁波基内生物技术有限公司【产品名称】通用名称：小量质粒提取试剂盒商品名称：Geneinn小量质粒提取试剂盒英文名称：Kit for small scale plasmid preparation【产品代码】GN00014【包装规格】50次/盒，100次/盒【预期用途】应用本试剂盒制备的质粒DNA纯度高，可以用于酶切、PCR、测序、细菌转化等实验。
质粒DNA小量提取试剂盒说明书
质粒DNA 小量提取试剂盒一、产品简介采用SDS碱裂解法，结合硅胶膜选择性吸附DNA的方法，适合1-4ml细菌培养物中提取多至20 μg质粒DNA。
纯化的质粒DNA适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染等分子生物学实验。
二、试剂盒组成和储存组成内容DK301-01 (50次) DK301-02 (200次)RNase A1＊30 μl 120 μlBuffer BL 15 ml 60 mlBuffer P1 15 ml 60 mlBuffer P2 15 ml 60 mlBuffer P3 20 ml 90 mlBuffer WA§19 ml 75 mlBuffer WB§16 ml 65 mlDNA吸附柱-B 50套200套1.5 ml离心管50个200个TE※15 ml 30 ml说明书1份1份＊RNase A1: 50 mg/ml, -20℃长期保存；第一次使用前将RNase A1全部加入Buffer P1中，于4℃保存。
§Buffer WA和Buffer WB，使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。
※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。
除RNase A1和Buffer P1(已加入RNase A1)外，其他组成成分于室温储存。
三、注意事项1.Buffer P3和Buffer WA含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛，立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处，必要时寻求医疗咨询。
2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子，以免影响下次使用效果。
3. 操作步骤A2和B2，充分悬浮细菌，无可见的块状菌团，不然会影响裂解效果。
4. 操作步骤A3和B3，缓慢翻转离心管，以免机械力打断基因组DNA而导致最后纯化的质粒DNA中有基因组DNA污染，同时避免打断质粒DNA，保持其完整性。
质粒小量提取质粒小量提取试剂盒
质粒小质粒小量提取量提取量提取试剂盒试剂盒（Plasmid Miniprep Kit ）目录号目录号：：ZP101 版本版本：：2014-10-15 试剂盒内容： 试剂盒组成ZP101-1 (50次) ZP101-2 (100次) ZP101-3 (200次) RNaseA (10 mg/ml) 150 μl 300 μl 600 μl 溶液1 15 ml 30 ml 60ml 溶液2 15 ml 30 ml 60 ml 溶液3 20 ml 40 ml 80 ml去蛋白液W1 30 ml 60 ml 120 ml 漂洗液W2 15 ml 2X15 ml 2X30 ml 洗脱缓冲液TE 15 ml 15 ml 30ml 吸附柱 50个 100个 200个 收集管(2 ml) 50个 100个 200个 说明书 1份 1份 1份 储存条件： 本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2-8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在-20℃可稳定保存1年以上。
加入RNase A 后的溶液1应置于2–8℃保存，可稳定保存半年。
产品简介： 本试剂盒采用碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA。
本说明书操作步骤适用于从1-5 ml过夜培养的大肠杆菌LB(Luria-Bertani) 培养液中，快速提取多至40 μg纯净的高拷贝质粒DNA。
使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译等。
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1． 按1：100的比例向溶液1中加入RNaseA，混匀，置于2–8℃保存。
2． 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液W2中加入无水乙醇。
GTpure 质粒小量提取试剂盒
GTpure TM质粒小量提取试剂盒一、 试剂盒组成Cat.NO. 246-050包装 50次离心柱C107 50个收集管 50个BRS Buffer 15mlLS Buffer 15mlNE Buffer 25mlWA Buffer 10mlDE Buffer 15mlRNase A solution 30μl说明书 1二、 试剂盒贮存试剂盒所有组分可在室温（15-25度）干燥条件下保存2年，BRS Buffer加入RNase A后应在2-8度保存。
三、 产品说明类型离心柱型处理时间 12分钟/单次制备离心柱最大载量800μl离心柱最大吸附量20μg最小洗脱体积30μl建议使用培养液的体积：高拷贝质粒低拷贝质粒2-3ml 5ml下游应用测序、克隆、连接、转化、限制性酶切和扩增等四、使用前注意事项1．将全部RNase A solution加入BRS Buffer中，混匀后置于4度保存，并在试剂瓶的标签上做好标记。
2．检查LS Buffer和NE Buffer中是否有沉淀（请不要剧烈振摇LS Buffer，使用后应立即旋紧瓶盖），若有沉淀请置于37度水浴充分溶解.3．向WA Buffer中加入40ml无水乙醇，混匀后室温密闭保存。
4．所有操作在室温下进行。
5．请将DE Buffer 70度预热，预热的DE Buffer有助于提高DNA洗脱效率。
五、操作步骤Page 1 of 2Page 2 of 21．加入250μl UP Buffer 至离心柱C107，16,000 × g 离心60sec 弃废液。
＊此步有助于增强离心柱对DNA 的吸附作用，请在24h 内使用该离心柱。
2．收集菌体，将培养物加入1.5ml 或2ml 离心管中，16,000 × g 离心30sec 。
＊高拷贝和低拷贝质粒分别建议取2-3ml 和5ml 过夜培养的菌液。
建议培养的细菌浓度在OD 6002.0-3.0之间。
无内毒素质粒大量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EndoFree Plasmid Maxi Kit无内毒素质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL13试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1301)RNaseA（10mg/ml）-20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml内毒素清除剂-20℃25 ml漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
内毒素清除剂常温运输，4度可以保存一个月，长期保存放-20℃。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会混杂有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速，方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90 %。
无内毒素质粒小提中量试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EndoFree Plasmid Midi Kit无内毒素质粒小提中量快速提取试剂盒目录号：PL10试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(PL1001)平衡液室温5mlRNaseA（10mg/ml）-20℃250µl溶液P1 4℃25 ml溶液P2 室温25 ml溶液N3 室温25 ml内毒素清除剂-20℃10 ml漂洗液WB 室温15 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15ml吸附柱AC 室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
内毒素清除剂常温运输，4度可以保存一个月，长期保存放-20℃。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（<0.1 EU/μg DNA），细胞转染效果极佳。
也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、等各种分子生物学实验。
质粒提取试剂盒提取步骤
质粒提取试剂盒提取步骤
一、质粒抽提
1、细胞抽提：将细胞培养物加入或移植到一种含有高浓度酸性剂的6-8mm离心管里，将细胞离心至半浸没，以保持溶液沉积在离心管壁上。
2、除去膜：添加浓酸溶液（如硫酸氢钠（NaHSO3）），膜结构会被溶解，使其细胞表面的结构被破坏，从而除去细胞的膜。
3、去染色：添加RNA隔离试剂，脱去细胞染色物质以获得高纯度的RNA质粒。
4、离心：离心至接近干旱，并移除液体，这时的混合液中已只剩下RNA质粒。
5、抹拭：将离心管倒过来，将质粒在管壁上均匀抹拭，这时的RNA 质粒就会在管壁上附着。
6、冷冻干燥：将管子放到冰上，将管子中的水分蒸发冷冻干燥，使RNA质粒固定在管壁上。
7、溶解：最后，将RNA质粒溶解到可以用于后续实验的溶液中。
二、PCR扩增：
1、PCR建库：将抽提的DNA放入PCR管中，加入PCR反应混合液（包括DNA聚合酶、dNTPs和MgCl2），并添加特长引物，即可进行PCR 反应。
2、PCR扩增：使用PCR反应温度循环加热并添加高分子量DNA来将DNA片段扩增。
3、电泳：将PCR配型片段送到电泳仪中，使用添加特异性引物的特定电泳条件，检测和鉴定基因突变。
无内毒素质粒小量提取试剂盒使用说明
10、 向 吸 附 柱 中 加 入 500ul 漂 洗 液 ， 12000rpm 离 心 1min， 弃 废 液 ， 将吸附柱放入收集管中。
3、向 离 心 管 中 加 入 200ul 溶 液 P2，温 和 地 上 下 翻 转 6-8 次 使 菌 体 充 分 裂 解 。 注 意 ： 混 匀 一 定 要 温 和 ， 以 免 污 染 细 菌 基 因 组 DNA， 此 时 菌 液 应 变 得 清 亮 粘 稠 ， 作 用 时 间 不 要 超 过 5 min， 以 免 质 粒 受 到 破 坏 。
2. 洗 脱 缓 冲 液 体 积 不 应 少 于 50ul， 体 积 过 小 影 响 回 收 效 率 ； 洗 脱 液 的
pH 值 对 洗 脱 效 率 也 有 影 晌 ，若 需 要 用 水 做 洗 脱 液 应 保 证 其 pH 值 在 8.0 左 右 (可 用 NaOH 将 水 的 pH 值 调 至 此 范 围 )， pH 值 低 于 7. 0 会 降 低 洗 脱 效 率。
由于质粒dna本身的性质清除过程可导致部分质粒dna丢失但内毒素却能得到最大限度清所有溶液应用无内毒素的高纯水配制所有器械材料均应不含内毒素玻璃器皿可高温烘烤非挥发性水溶液可高压处理
无内毒素质粒小量提取试剂盒使用说明 货 号 ： D1140 规 格 ： 50T/100T 保存：常温干燥保存，复检期为一年。 试剂盒内容：
有 机 化 合 物 。 内 毒 素 清 除 剂 可 最 大 限 度 地 除 去 内 毒 素。 从 1-5ml 大 肠 杆 菌 LB 培 养 液 中 ，可 快 速 提 取 5-15μ g 高 纯 度 质 粒 DNA，提 取 率 达 85-90%。使 用 本 试 剂 盒 提 取 的 质 粒 DNA 纯 度 高 ，可 直 接 用 于 细 胞 转 染 等 要 求 较 高 的 实 验 ， 以 及 其 他 各 种 常 规 操 作 ， 包 括 酶 切 、 PCR、 测 序 、 连 接 和 转 化 等 试 验 。
promega 小提质粒提取说明书
Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System protocol所用试剂盒为Promega公司的Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System，能够去除对细胞有害的细菌内毒素。
具体操作步骤如下：（1）将5ml 培养过夜的阳性菌在室温(24℃)下10000×g离心10 min。
弃上清，将离心管倒置至吸水纸上去除剩余水分。
（2）加入250µl 重悬液，振荡至完全重悬。
（3）加入250µl细胞溶解液，颠倒离心管6～8次，彻底混匀。
室温孵育5min。
（4）加入350µl中和液，立即颠倒离心管6～8次，彻底混匀。
（5）室温下10000×g离心细菌溶解产物20min，上清移至新的1.5 ml 离心管，再次离心20 min，将上清移至新离心管。
（6）彻底摇匀除内毒素树脂，加50µl到离心管中，室温孵育10 min，在孵育过程中每隔3 min剧烈振荡5 sec。
（7）将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。
放置至液体澄清后30 sec，吸取上清至新离心管，弃去沉淀。
（8）加入200 µl GTC（5M/L），与上步分离的上清剧烈振荡混和。
如果GTC产生沉淀，37℃加温10min，冷却到25℃使用。
（9）彻底重悬磁珠，加150 µl至溶液中，剧烈振荡混和，室温孵育2～3 min。
（10）将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。
放置至液体澄清后30 sec，弃上清，离心管继续放置2～3min，去除剩余液体。
（11）将离心管从磁架上取出，加入200 µl 4/40洗脱液。
剧烈振荡15sec 重悬磁珠微粒。
4/40洗脱液可以去除无关蛋白，如核酸酶。
质粒小量提取试剂盒磁珠法说明书
质粒小量提取试剂盒（磁珠法）说明书货号：DM1100规格：50T/100T保存：磁珠可以在室温下（15-25℃）运输，但请在4℃冰箱中保存。
RNase A 需-20℃保存，以保证其活性。
其余试剂可以室温保存，更长时间的保存可置于2-8℃。
试剂盒内容：产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统在高盐状态下特异性地结合溶液中的质粒DNA。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。
使用前请先在漂洗液中配置70%乙醇。
若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min溶解沉淀，摇匀后使用。
操作步骤：1. 裂解取1～5 mL菌液至EP管中，12000 rpm离心2分钟，尽量吸净上清。
在菌体沉淀中加入250 μl裂解液R1和2.5μl RNase A，吸打或振荡至彻底悬浮菌体；加入250 μl裂解液R2，立即温和颠倒离心管5-10次混匀，室温静置2-4 min；加入350 μl裂解液R3，立即温和颠倒离心管5-10次充分混匀（此时底部可能会出现大量白色絮状沉淀属于正常现象）。
置于离心机12000rpm，4℃离心5-10 min。
2. 结合尽量取净上清于新的1.5 mL EP管中，加入等量异丙醇以及振荡混匀的50 μL磁珠，颠倒混匀1 min，静置3 min。
将EP管置于磁铁上进行磁分离，吸弃废液（吸净管盖及管底残液）。
3. 洗涤加入600 μL 漂洗液（使用前请预先配置70%乙醇），轻柔混匀1-2 min，然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；重复本步骤一次。
4. 洗脱室温晾干5～10 min至乙醇挥发完全，加入50～100 μL洗脱液，缓慢抽吸混匀，56℃水浴10 min。
每隔2～3 min轻摇EP管几下混匀。
然后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下步实验。
质粒小量提取纯化试剂盒 说明书
质粒小量提取纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展，它有效结合了细胞裂解，杂质去除，及质粒纯化等功能。
无需过柱，不用酚氯仿抽提，直接获得高质量的质粒DNA。
我们独特的试剂系统能确保所提质粒DNA高产量，高质量。
本试剂纯度高，采用人性化设计，可按用户需求灵活制定容量大小。
产品特色●简单:添加GBpure Plasmid使细胞裂解，释放DNA，及杂质去除有效结合起来。
●方便:无需过柱，无需过滤，无需高效液相色谱法，无需超速离心机，无需特殊设备。
●无毒性:无酚、氯仿，无饱和正丁醇，无溴化乙锭，无氯化铯，无盐酸胍。
●快速:一分钟完成菌体沉淀，五分钟完成颗粒细菌碎片，10分钟完成沉淀质粒DNA，从培养细菌到提取质粒DNA只需30分钟。
●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂，可应用于所有分子生物学的操作。
●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行：miniprep, midiprep,或maxiprep;无需购买额外的试剂盒。
●高产量: 您可以从1 (mini), 10 (midi), 100 (maxi) ml的过夜培养基中获得大约5μg, 50 μg, 500 μg的DNA质粒。
●实惠：一盒GBpure Plasmid 售价 RMB 500/ 50 minipreps，即 RMB10/miniprep ，质优价廉。
产品内容与储存条件室温保存。
有效期12个月。
操作方法1.取1 ml过夜培养菌液，装入1.5 ml离心管中，室温12,000 × g离心1 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2.加入300 μl Buffer P1，充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3.加入300 μl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3-5次，室温放置1 min，使细菌完全裂解，此时溶液应呈透明。
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杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://
EndoFree Plasmid Mini Kit
无内毒素质粒小量快速提取试剂盒
目录号：PL04
试剂盒组成、储存、稳定性：
试剂盒组成保存20次（PL0401）50次（PL0402）
平衡液室温5ml 5ml
RNaseA（10mg/ml）-20℃150µl 150µl
溶液P1 4℃15 ml 15 ml
溶液P2 室温15 ml 15 ml
溶液N3 室温8ml 15 ml
内毒素清除剂-20℃5ml 5ml
漂洗液WB 室温15 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml
吸附柱AC 室温20个50个
收集管（2ml）室温20个50个
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
内毒素清除剂常温运输，4度可以保存一个月，长期保存放-20℃。
储存事项:
1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）
置于2-8℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分
钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时
盖紧盖子。
产品介绍：
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附
量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（<0.1 EU/μg DNA），细胞转染效果
极佳。
也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、等各种分子生物学实验。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，
如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
一般高拷贝质粒，建议
接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基，过夜培养14-16个小时，可提取出多达20µg的纯净质粒。
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、N3的用量，其它步骤相同。
3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
OD260
值为1相当于大约50μg/ml DNA。
电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。
本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
4. 质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知
道。
处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。
5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。
也可以使用水洗
脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。
用水洗脱质粒应该保存在－20℃。
质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM
EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
关于平衡液的使用
1.介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影
响其核酸的结合能力。
硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。
从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。
平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。
用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。
室温保存。
在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。
2.使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱
子中。
13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。
此时平衡液预处理柱子完毕。
接后续的操作步骤。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
⇨第一次使用前请先在漂洗液WB瓶中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
⇨将RNase A全部加入溶液P1中，混匀，每次使用后置于2-8℃保存。
1. 取1.5-4.5 ml过夜培养的菌液，12,000rpm离心30秒，尽可能的倒干上清，收集菌
体。
收集超过1.5 ml菌液，可以离心弃上清后，在同一个1.5ml管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。
2. 用250μl溶液P1重悬菌体沉淀，涡旋振荡至彻底悬浮。
如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3. 加250μl的溶液P2，温和地上下翻转6 -8次使菌体充分裂解，室温放置4分钟。
温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。
此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要准确的5分钟。
4. 加250μl溶液N3，立即温和地上下翻转6 -8次，充分混匀时会出现白色絮状沉淀。
13,000rpm离心10分钟，小心取上清至新管，避免吸取到漂浮白色沉淀。
加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。
5. 加入0.1体积(上清的体积的10%，约80µl)的内毒素清除剂到上一步所得上清，
颠倒旋转混匀，冰浴或者插入碎冰中(或冰箱冷冻室)放置5分钟直到浑浊变清亮透明（或仍旧稍有浑浊），中间偶尔混匀几次。
内毒素清除剂加入上清后，上清会变得浑浊，但是冰浴后应恢复清亮（或稍浑浊）。
6. 常温放置3-5分钟，温度恢复室温溶液很快变为浑浊，颠倒混匀。
如室内温度较低或者想加快速度可以在37-42℃水浴，将很快变浑浊，颠倒混匀。
7. 室温14,000 x g离心10 分钟分相。
上层水相含DNA，下层蓝色油状相含内毒素
和其它杂质。
将含DNA的上层水相转移到新管（注意不要吸到蓝色油状层，里面含内毒素等杂质），弃油状层。
平衡液预处理吸附柱：
使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”
8. 向上层水相中加入0.5体积异丙醇（约370µl）后充分颠倒混匀后分两次（每次不
超过700µl）转入吸附柱AC中（吸附柱放入收集管中），12,000 x g离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
直到所有混合溶液通过此吸附柱。
9. 加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，
弃掉废液。
再加入600μl漂洗液WB，重复漂洗一次。
10. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免
漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50-100μl洗
脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。
如果需要较多量质粒，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高。
如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于30μl，体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量。