实验一 血涂片的制备
血涂片的制作实验报告
一、实验目的1. 掌握血涂片的制作方法。
2. 了解血细胞的形态结构及其分布。
3. 学习显微镜的使用技巧。
二、实验原理血涂片是血液学检查的基本方法之一，通过制作血涂片，可以在显微镜下观察血细胞的形态结构，了解血细胞的分布情况，为血液病的诊断提供依据。
三、实验器材与试剂1. 器材：显微镜、载玻片、盖玻片、采血针、酒精棉球、蒸馏水、瑞氏染液、生理盐水、吸管、滴管等。
2. 试剂：生理盐水、瑞氏染液。
四、实验步骤1. 采血：用采血针对指腹进行采血，注意采血时动作轻柔，避免出血过多。
2. 制备血涂片：a. 取载玻片，用酒精棉球擦拭干净；b. 将载玻片倾斜45°角，用滴管吸取少量生理盐水；c. 将采血针插入载玻片上的生理盐水中，使血液自然流出；d. 待血液流出后，将载玻片放平，使血液在载玻片上形成一薄层；e. 用盖玻片轻轻覆盖在血液上，避免产生气泡；f. 轻轻推动盖玻片，使血液均匀分布。
3. 固定与染色：a. 将制备好的血涂片放入固定液（瑞氏染液）中浸泡5-10分钟；b. 取出血涂片，用蒸馏水冲洗干净；c. 将血涂片放入染色液中染色，染色时间为30分钟；d. 取出血涂片，用蒸馏水冲洗干净。
4. 观察与记录：a. 将染色后的血涂片放置在显微镜载物台上；b. 调整显微镜的焦距，观察血细胞的形态结构及分布；c. 记录观察结果。
五、实验结果与分析1. 红细胞：红细胞呈两面凹的圆饼状，无细胞核，细胞质主要成分为血红蛋白。
在显微镜下观察，红细胞数量最多，分布均匀。
2. 白细胞：白细胞呈圆形、椭圆形或不规则形，有细胞核。
在显微镜下观察，白细胞数量较少，分布不均匀。
3. 血小板：血小板形状不规则，无细胞核，数量较多。
在显微镜下观察，血小板分布均匀。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了血涂片的制作方法，了解了血细胞的形态结构及其分布。
在显微镜下观察，红细胞数量最多，呈两面凹的圆饼状；白细胞数量较少，有细胞核；血小板数量较多，无细胞核。
显微镜观察人血涂片实验步骤
显微镜观察人血涂片实验步骤一、实验前准备在进行显微镜观察人血涂片实验之前，需要进行一些准备工作。
1.实验材料准备–显微镜：确保显微镜正常工作，并清洁干净。
–血涂片：需要具备清晰的细胞结构，可通过医疗机构或实验室购买。
–血液涂片染色剂：例如伊红或金标染色液。
2.仪器准备–将显微镜放置在平稳、光线充足的工作台上。
–调整显微镜的放大倍数和焦距，以便观察到清晰的细胞结构。
二、制备血涂片制备血涂片是显微镜观察人血涂片实验的前提步骤。
1.取血–用消毒酒精擦拭被抽血部位，以减少感染的风险。
–使用一次性注射器抽取适量的血液，一般约为0.1毫升。
2.制备血涂片–取一片干净的载片，用火炬或酒精灯烘烤片面，以增强细胞附着力。
–将一滴血液滴在载片的一端，用另一片载片将血液平均涂抹开。
3.干燥与固定–将血涂片平放在无尘无湿的地方，自然晾干。
–可在固定前，将血涂片浸泡在无水乙醇等溶剂中，进行细胞固定。
三、染色染色是为了使细胞结构更为清晰、易于观察。
1.准备染色剂–根据实验需求，选择适合的染色剂，如伊红或金标染色液。
–根据染色剂的使用说明，配置合适的浓度。
2.染色过程–将干燥的血涂片浸入染色剂中，保持一定时间。
时间过长会导致过度染色，影响观察结果。
–取出血涂片并用水洗净，以去除过多的染色剂。
四、显微镜观察与记录准备就绪的血涂片可以通过显微镜进行观察和记录。
1.调整显微镜–根据需要，选择合适的镜头和放大倍数。
–调节焦距，使细胞结构清晰可见。
2.观察细胞结构–将染色后的血涂片放置在显微镜载片夹中，夹好后放入显微镜镜筒中。
–通过目镜观察细胞的外观、形状和结构。
3.记录观察结果–使用实验笔记录观察到的结构、数量、颜色等相关信息。
–可以使用绘图工具绘制细胞的结构示意图。
五、清洗与保存实验完成后，需要对实验仪器和材料进行清洗和保存。
1.清洗显微镜–将显微镜镜头、物镜和载片夹等部分用适当方式进行清洗，以去除污渍和残留物。
2.保存血涂片–将观察完毕的血涂片保存在干燥、无尘的地方。
实验报告 血涂片的制备
实验报告血涂片的制备实验报告：血涂片的制备引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液细胞的形态和数量。
通过制备血涂片，我们可以了解疾病的诊断和治疗过程中的重要信息。
本实验报告将介绍血涂片的制备过程和相关技术。
一、材料与设备：1. 血液样本：采集自健康人士或实验动物。
2. 血涂片玻片：具有一定的光学透明度和平整度。
3. 血涂片刮板：用于制备血涂片的工具。
4. 血涂片染色剂：如吉姆萨染色剂。
二、实验步骤：1. 准备工作：清洁实验台面，并确保材料和设备的无菌状态。
2. 血液采集：使用无菌针头采集血液样本，将血液缓慢抽入无菌注射器中。
3. 制备血涂片：a. 取一片无菌血涂片玻片，用无菌棉球蘸取适量的酒精擦拭玻片表面，使其干燥。
b. 用无菌血涂片刮板，将血液样本滴于血涂片玻片的一端。
c. 快速而均匀地将刮板从滴液处向另一端刮过，使血液在玻片上均匀分布。
d. 在刮板刮过的血液上方，迅速将另一片无菌玻片平放在上方，使血液与玻片接触。
e. 缓慢而均匀地将上方的玻片向下滑动，使血液在两片玻片之间形成薄膜。
f. 将制备好的血涂片放置在通风干燥的地方，待其完全干燥。
三、血涂片染色：1. 准备工作：将吉姆萨染色剂按照说明书的要求稀释至适当浓度。
2. 染色过程：a. 将制备好的血涂片放入染色盒中，使其与染色剂接触。
b. 根据需要，将血涂片浸泡在染色剂中的时间可调整为几分钟至几十分钟。
c. 取出血涂片，用清水轻轻冲洗，直至水清。
d. 将血涂片放置在通风处晾干。
四、结果与讨论：通过制备和染色的血涂片，我们可以观察到不同类型的血细胞，如红细胞、白细胞和血小板。
通过观察它们的数量、形状和结构，我们可以判断出是否存在异常情况，如贫血、感染或血液疾病等。
血涂片的制备和染色技术在临床诊断和科学研究中具有广泛的应用。
结论：通过本实验报告，我们了解了血涂片的制备过程和相关技术。
制备血涂片的步骤包括血液采集、血涂片制备和血涂片染色。
血涂片制备实验报告
血涂片制备实验报告血涂片制备实验报告引言：血涂片制备是一项重要的实验技术，通常用于临床血液学检查和疾病诊断。
本实验旨在探究血涂片制备的步骤和技巧，以及其在血液学研究中的应用。
一、材料和方法1. 实验材料：- 血液样本：采用新鲜的全血样本。
- 血液薄片：玻片、刮刀、洗净的无菌玻璃片。
- 染色剂：Wright染色液、甲醇、乙醇。
- 实验仪器：显微镜、离心机。
2. 实验步骤：- 步骤一：准备血液样本。
使用无菌针头采集新鲜全血样本，将其转移到干净的离心管中。
- 步骤二：制备血涂片。
取一块洗净的玻璃片，将其倾斜放置于离心管中的血液样本上，使血液与玻璃片接触，形成一条薄而均匀的血涂片。
- 步骤三：干燥血涂片。
将制备好的血涂片放置于通风处，使其自然干燥。
- 步骤四：固定血涂片。
将干燥的血涂片浸入甲醇中，使其固定。
- 步骤五：染色血涂片。
将固定的血涂片浸入Wright染色液中，保持一定时间，使细胞染色。
- 步骤六：洗净血涂片。
将染色后的血涂片放入乙醇中，轻轻摇晃，将多余的染色剂洗净。
- 步骤七：干燥血涂片。
将洗净的血涂片放置于通风处，使其自然干燥。
- 步骤八：观察血涂片。
将干燥的血涂片放置于显微镜下，调节倍率和焦距，观察细胞形态和结构。
二、结果与讨论通过血涂片制备实验，我们成功制备了一张血涂片，并进行了染色和观察。
观察结果显示，血涂片中可见红细胞、白细胞和血小板等细胞成分。
红细胞呈圆形或椭圆形，中间凹陷，具有较大的体积；白细胞则呈现不同的形态和大小，包括淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞等；而血小板则呈现为小而不规则的颗粒状结构。
血涂片制备的关键在于制备过程中的技巧和细节注意。
首先，采集血液样本时应使用无菌针头，以避免污染。
其次，在制备血涂片时，要保持玻璃片与血液的均匀接触，避免形成过厚或过薄的血涂片。
此外，干燥和固定过程中的时间和条件也会对血涂片的质量产生影响。
过长或过短的干燥时间都会导致血涂片的异常，而固定过程中甲醇的使用量和浸泡时间也要控制适当。
血涂片的制备、染色、观察方法、复检
04
章节 PART
血涂片的复检
血涂片的复检
血涂片复检的意义，首先是复核该复检标本的血常规报告的准确性， 其次是在观察血细胞形态时，根据所观察到的外周血细胞形态，提供给临 床有效的信息，要做到保证血常规结果的准确、不漏检、不误诊、不误导。 切实的结合临床，关注已知的患者信息，查看患者的相关检查结果，了解
靠等待自然干燥章。节 PART
血涂片的染色
4、瑞氏染色是最经典，最常用的染色法，尤其对于细胞质成分，中 性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。姬姆萨染 液对细胞核着色较好，结构更清晰，但对细胞质成分的着色能力略差。采
用瑞-姬姆萨章复节合染PA液R可T使细胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果。
患者出现的体章征节、P症A状R（T 必要时要询问临床医生），在此基础上，了解临
床医生的诊断或治疗思路，然后在显微镜下有目的地进行查找，才能做到 有百密而无一疏。
红系统细胞形态
一、正常红细胞
章节 PART
红系统细胞形态
二、红细胞大小改变
章节 PART
红系统细胞形态
三、红细胞血红蛋白含量改变
章节 PART
章节 PART
红系统细胞形态
3、卡波环
章节 PART
红系统细胞形态
4、有核红细胞
章节 PART
红系统细胞形态
5、网织红细胞：是指晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红 细胞之间的过度细胞，分为4型。Ⅰ型：丝球形，Ⅱ型：网型， Ⅲ型：破网型，Ⅳ型：点粒型（图2-165、2-166、2-167）
红系统细胞形态
章节 PART
血涂片的制备
二、将推片接近血滴处，然后轻轻接触血滴并压在血滴上，使血滴呈”一”字型展开, 充满推片宽度(如果能做到边缘血量较少,中间血量稍多为最佳)(图1-2,图1-3).
血涂片的制备与染色实验报告
血涂片的制备与染色实验报告血涂片的制备与染色实验报告简介本报告旨在介绍血涂片的制备与染色实验方法及步骤，以及相关注意事项和结果分析。
实验步骤1.准备所需材料：–血液样本–血涂片载玻片–血液涂片器–双氧水–细胞染色剂–拖尾液–显微镜片2.制备血涂片：–取一滴血液样本，滴于载玻片中。
–使用血涂片器，将血液涂片器顶端垂直贴附在载玻片上。
–慢慢向后移动血涂片器，使血液样本均匀地涂布于载玻片上。
3.干燥血涂片：–将制备好的血涂片放置于通风处，自然晾干。
4.染色处理：–将已干燥的血涂片浸入双氧水中，浸泡5分钟，用来溶解红细胞。
–用显微镊子夹取血涂片，轻轻晃动10次，使红细胞充分分散。
–轻轻将血涂片冲洗干净，以去除残留的双氧水。
–将血涂片浸入细胞染色剂中，染色1分钟。
–将血涂片冲洗干净，确保没有染色剂残留。
5.拖尾处理：–取适量拖尾液滴在盖玻片上。
–将染色好的血涂片倒置放在盖玻片上，使其与拖尾液接触。
–轻轻拖动血涂片，使细胞核进入拖尾液。
6.结果观察与分析：–将染色好的血涂片放置在显微镜下进行观察。
–分析细胞形态、染色程度等指标，记录结果。
注意事项•实验过程中需戴好实验手套，避免直接接触血液。
•制备血涂片时，务必将血液涂布均匀，以免影响结果。
•双氧水具有漂白作用，使用时需小心避免溅到衣物或皮肤上。
•染色剂使用过程中，应注意避免吸入或误食。
•结果分析时，应根据实验要求和标准参考范围进行判断。
结论通过本实验，我们成功制备了血涂片并进行了染色处理。
观察结果可为后续血液相关研究提供重要数据和参考。
在实验过程中，我们严格遵守实验室操作规程，并注意了安全事项。
希望本报告对今后的血涂片制备与染色实验有所帮助。
参考文献：无。
第三节血涂片制备
合格的血涂片：厚薄适宜，头、体、尾分明，两端和两侧留 有空隙，血膜至少长 30~50mm，两侧空隙 2~3mm。
如果用力不均匀、载片不清洁可造成血涂片分布不均
（2）仪器推片法：目前有多种型号的血细胞分析仪或 血细胞形态分析仪配有血涂片仪和染色仪，可以根据需 要进行自动送片、取血、推片、标记和染色等操作。
2．厚血膜推片法 采血→取 1 小滴血液于载玻片中央→以推片的一角将血 滴由内向外旋转涂布，制成直径约 1.5cm 的圆形厚血 膜，干燥→滴加蒸馏水，溶解红细胞，脱去血红蛋白→ 倾去水，干燥。
（三）质量保证
1．玻片 2．标本 3．制片 载玻片需清洁、干燥、中性、无油腻，勿用手触及玻片表面。 抗凝血需在 4小时内制备血涂片，否则细胞形态会发生改变。
职业教备
（一）主要器材
1．载玻片
2．推片
（二）简要操作
1． 薄血膜推片法 （1）手工推片法：采血→取血于载玻片上→推片→干燥。
取 1 小滴血于载玻片的一端（1.5cm 处或整片 1/3 处）； 推片时使推片与载玻片成 30°～45°角度，让推片接触血滴， 使血液沿推片下缘散开，再向血滴前方向匀速移动推片。
①制备厚薄适宜的血涂片：
厚：血滴大、角度大、速度快—— 大、大、快 薄：血滴小、角度小、速度慢—— 小、小、慢
②制备血膜分布均匀的血片：
血膜分布不均主要是推片边缘不齐、用力不匀和载玻片不清洁所致。
4．制片后处理
实验报告 血涂片的制备
实验报告血涂片的制备实验报告：血涂片的制备引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液中的各种细胞和细胞形态。
本实验旨在探究血涂片的制备方法和技巧，以及观察和分析血涂片的步骤和注意事项。
材料与方法：1. 血液样本：采集新鲜的静脉血，使用无抗凝剂的试管收集。
2. 血涂片材料：玻璃片、洗净的玻璃滴管、无纺布、无纺布夹子、显微镜玻璃片、显微镜盖玻璃片。
3. 实验仪器：显微镜、离心机。
步骤：1. 准备工作：将玻璃片和显微镜玻璃片用去离子水和无纺布擦拭干净，保证表面无杂质。
2. 血液制备：使用无纺布夹子固定玻璃片，用洗净的玻璃滴管将血液滴在玻璃片上。
滴管与玻璃片的接触角度应适中，以保证血液均匀地分布在玻璃片上。
3. 血涂片制备：用另一块玻璃片将血液滴在玻璃片上的血液涂抹均匀，使血细胞分散均匀并形成单层。
4. 干燥处理：将血涂片放置在通风处晾干，或使用离心机低速离心，去除多余的液体。
5. 固定处理：将干燥的血涂片固定在95%乙醇中，浸泡2-3分钟，以保持细胞形态。
6. 染色处理：将固定的血涂片浸泡在Wright染料溶液中，浸泡时间根据染料浓度和需要的染色效果而定。
7. 清洗处理：用去离子水将染色过的血涂片洗净，去除多余的染料。
8. 干燥处理：将血涂片放置在通风处晾干，确保完全干燥。
9. 封片处理：将干燥的血涂片放在显微镜盖玻璃片上，用透明胶带固定。
结果与讨论：制备完毕的血涂片可用于显微镜观察。
通过血涂片，我们可以观察到血液中的各种细胞，如红细胞、白细胞和血小板，并且可以分析它们的数量、形态和结构。
在制备血涂片的过程中，有几个关键的步骤需要特别注意。
首先，血液的滴取和涂抹要均匀、细致，以避免细胞聚集和不均匀分布。
其次，血涂片在制备过程中要保持湿润，避免细胞干燥和变形。
此外，染色过程中的浸泡时间和染料浓度要控制好，以保证染色效果的准确性和清晰度。
血涂片的制备是一项基础实验技术，广泛应用于医学、生物学和病理学等领域。
血涂片的制备及染色
图 １ 血涂片制备
·１６８·
２０ｍｉｎ，用热水将肥皂和血膜洗去，然后，用自来水对其反复
冲洗，擦干或烤干后备用。 取用载玻片时需用专用仪器，不
可用手接触玻片表面，以免污染玻片表面。 另外，还需对载
玻片两角作斜线标记，用剥离切割刀将载玻片两角裁去，制
成宽度约为 １５ｍｍ 的推片。
（ 二） 采血
准备好载玻片后，便可给受检者采血，可采用静脉采血
的着色效果较差。
（ 二） 姬姆萨染色法
姬姆萨染色法染色操作基本同瑞特染色法，不同的是其
采用的染料为姬姆萨染料，这是一种由天青和酸性染料伊红
组成的复合染料，可对细胞核结构和寄生虫进行良好的着
色，从而能清晰显示出这些物质的结构，但是，其对细胞质和
颗粒的着色效果较差。
（ 三） 瑞－姬染色法
瑞－姬染色法指的是将瑞氏染料与姬姆萨染料充分混
否存在血液疾病等，虽然该项检验技术在临床应用上极广，
但是，在实际检验过程中，受血涂片制备和染色不当等因素
的影响，常常会降低检验结果的准确性，从而会影响该项检
验技术的临床应用效果。 基于此，就需要检验人员掌握正确
的血涂片制备和染色方法。
一、 血涂片制备
（ 一） 载玻片和推片准备
一般需选用高纯度、耐腐蚀性强、抗水的玻璃制成的载
缘平滑的一端从血滴前方后移接触血液，使血滴沿推片边缘
展开，然后是推片与载玻片保持 ３０ ～ ４５° 夹角，平稳匀速地向
前推动，使血液沿推片散开，在载玻片上形成厚薄适宜、边缘
整齐的薄层血膜（ 边缘需留有一定的空隙） ，且还需保证血
涂片呈舌状，头体尾三部分明显，如图 １ 所示。
（ 四） 血涂片干燥
完成血涂片制备后，还需对其进行干燥处理，可采用空
血涂片的制备
血涂片的制备
血涂片是一种常见的医学检查方法，它可以通过显微镜观察血液细
胞的形态和数量，从而帮助医生诊断疾病。
下面将从材料准备、制备
步骤和注意事项三个方面介绍血涂片的制备方法。
一、材料准备
制备血涂片需要的材料有：血液样本、玻璃片、无菌棉签、生理盐水、甲醇、乙醇、甲苯、染色剂（如吉姆萨染色液）等。
二、制备步骤
1.取一块干净的玻璃片，用无菌棉签在玻璃片上涂上一层薄薄的血液样本。
2.将玻璃片放在通风处晾干，使血液样本充分干燥。
3.将玻璃片浸泡在生理盐水中，轻轻摇晃，使血液样本充分溶解。
4.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
5.将玻璃片浸泡在甲醇中，固定细胞形态。
6.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
7.将玻璃片浸泡在乙醇中，使细胞脱水。
8.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
9.将玻璃片浸泡在甲苯中，使细胞透明。
10.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
11.将玻璃片浸泡在染色剂中，染色。
12.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
13.将玻璃片放在通风处晾干，制备完成。
三、注意事项
1.制备血涂片时要注意无菌操作，避免污染。
2.血液样本要新鲜，避免血液凝固。
3.制备过程中要注意时间控制，避免细胞形态变化。
4.染色剂的选择要根据需要进行，不同染色剂对细胞的染色效果不同。
5.制备完成后要注意保存，避免受潮和污染。
总之，血涂片的制备是一项细致的工作，需要严格按照步骤进行操作，才能得到准确的检查结果。
希望本文能对大家有所帮助。
血涂片制作与染色
血涂片制作与染色1.血涂片的制备血涂片的制备需要用到标本采集工具如无菌化的注射器、针头、试管、硅化玻璃片以及一些实验室试剂如无菌生理盐水、巴氏溶液和电解溶液等。
具体步骤如下：（1）将患者指尖的表面清洁卫生。
（2）选择一个适合的静脉穿刺点，通常是患者的中指或无名指。
（3）用酒精棉球清洁穿刺点，使其干燥。
（4）将无菌化的注射器连接到无菌生理盐水的瓶口上，并抽取一定量的生理盐水。
（5）将针头插入穿刺点后，将生理盐水匀速注射入患者的静脉内。
（6）在生理盐水滴入试管的同时，用眼微观检查，如果有血液进入注射器和管道内，即可采集。
宜用自来水洗净试管外表面，先不带盖座放倾空液。
（7）用试管夹夹住注射针，将针头推入试管内，然后轻轻射入试管底部液面下，同时向上抽手，保持抽液缓慢，可避免气泡产生。
（8）将采集到的血液缓缓带走，同时注入试管内，让其与100ml巴氏溶液进行搅拌。
（9）将混合液倾入瓷漏斗中，从中取出干燥了的血细胞。
2.血涂片的染色血涂片染色可使用湿涂片法或干涂片法，其中湿涂片法应用更广泛。
下文将以湿涂片法为例进行介绍。
（1）取一根硅化玻璃片，用纸巾或棉球擦拭干净。
（2）用血涂片染色钳将准备好的血涂片床放在玻璃片上。
（3）将一滴适量的Wright液倒在血涂片的中段。
Wright液包含了染色剂和辅助剂，其中主要成分是吡啶基甲重氮盐和三氧二氮菲盐。
（4）用另一根玻璃片的尾部将液滴均匀地扩开，并迅速在血涂片上来回涂抹，在染液与血涂片上充分接触并混合。
（5）保持血涂片在室温下静置5-10分钟，以促进染色反应的进行。
（6）用蒸馏水冲洗玻璃片上的染料，并将其晾干。
3.血涂片的观察与分析观察血涂片需用光学显微镜，常规放大倍数为1000倍。
观察血涂片时，应注意血细胞的形态、大小、核形态、细胞质染色情况及相关细胞间的比例等。
根据各种细胞的数量和比例，可以初步评估出是否存在异常细胞，及其可能的病理性质，如感染、贫血等。
总结：血涂片制作与染色是血液检查中重要的步骤之一，它能够帮助医生判断病情，制定治疗方案。
血涂片的制备与染色
血小板
染色结果
血小板呈淡蓝色或蓝紫色，染色质呈 颗粒状或块状。
观察指标
观察血小板数量、形态、大小等，判 断是否存在血小板减少症、血小板增 多症等。
04 染色注意事项
CHAPTER
染色时间
染色时间过短
染色时间适中
染色效果不佳，细胞结构不清晰，颜 色偏淡。
染色效果良好，细胞结构清晰，颜色 适中，便于观察。
染色温度过低
染色效果不佳，细胞结构不清晰，颜色偏淡。
染色温度适中
染色效果良好，细胞核和细胞质对比度明显，易 于观察。
05 染色问题处理
CHAPTER
染色过深或过浅
染色过深
可能是由于染色时间过长或染色液浓 度过高所致。为避免这一问题，应严 格控制染色时间和染色液的浓度，确 保染色过程的一致性。
染色过浅
详细描述
瑞氏染色法使用瑞氏染料和伊红染料进行染色，能够使细胞核呈紫红色，细胞 质呈粉红色，便于观察和鉴别细胞的形态和结构。该方法具有染色鲜艳、对比 度高的优点，适用于多种血细胞染色。
姬姆萨染色法
总结词
姬姆萨染色法是一种特殊的血涂片染色方法，能够更好地显示出细胞的内部结构 和核仁。
详细描述
姬姆萨染色法使用姬姆萨染料进行染色，能够使细胞核呈蓝色或深紫色，细胞质 呈浅红色或粉红色，便于观察细胞的内部结构和核仁。该方法具有较高的染色敏 感性和特异性，适用于鉴别异常细胞和病原体。
采血量
采集适量血液，一般为 20-50微升，根据实验需 求而定。
推片
载玻片
选择清洁、无划痕的载玻片，用 纱布擦拭干净。
推片方法
将血液滴在载玻片的一端，用边缘 平滑的推片从血滴一侧轻轻推动， 使血液均匀展开成一层薄膜。
1血涂片制备及血细胞形态观察
实验一血涂片制备及血细胞形态观察一、目的原理掌握血涂片的制备方法。
观察血细胞的形态。
二、材料及用具（每组）牛(羊)或鸡的新鲜血液、载玻片、显微镜、瑞氏染液、胶头滴管、染色缸。
三、方法步骤1.血涂片制备取两张洁净的载玻片A、B，用B蘸取少许血液与A的1/3处。
用B 末干净的一端成45度角紧贴与在载玻片A上，并使A的血液顺着B均匀的散开，然后使A、B成45度角往前平行的推B至末端1cm处。
2.血涂片染色将血涂片在室温下放置2-3分钟使血涂片完全干燥。
然后用胶头滴管吸1滴瑞氏染液与血涂片上，使染液要完全漫过血液。
静置5分钟左右，然后倾去染液，用很小的流水紧贴载玻片的一端轻轻的冲洗染液直至染液完全被冲洗干净。
3.血细胞观察用吸水纸将血涂片上的水吸干后放显微镜的高倍镜下观察血细胞的形态。
四、血细胞形态1．血涂片观察哺乳动物红细胞为无核、红色扁圆形小体。
由于它是双凹盘形，所以中央染成较边缘为淡。
鸡的红细胞呈卵圆形，内有一个卵圆形的细胞核。
2.嗜中性粒细胞细胞质内含有淡红色微细颗粒，胞核有3—5个分叶。
3.嗜酸性粒细胞细胞质内含有深红色大而圆的颗粒，核通常有2—3个分叶。
4.嗜碱性粒细胞细胞质内含有粗细不等的紫蓝色颗粒，核分叶不明显。
5.小淋巴细胞：细胞形态小，核椭圆形或豆形，染成蓝色，细胞质很小，染成浅蓝色。
6.中或大淋巴细胞：细胞较大，细胞较多，核的周围有亮晕。
7.单核细胞较淋巴细胞大，细胞质亦较多，细胞核是肾形或马蹄形。
8.血小板体形甚小，形态不规则，内含紫色颗粒，无核，常聚集成团。
五、要求与思考题5种白细胞的形态和数量有何差异？六、注意事项1.推开的血涂片要均匀，血液不能太多太厚，要尽可能的薄。
2.应严格控制染色的时间，并适当的做出调整。
3.观察细胞形态应耐心细致观察，如嗜碱性粒细胞应仔细寻找。
血涂片制备方法(一)
血涂片制备方法(一)血涂片制备概述在医学领域中，血涂片制备是一种常见的实验技术，用于观察血液中细胞的形态和结构，以辅助疾病的诊断与治疗。
本文将介绍血涂片制备的各种方法，包括涂片准备、标本采集和染色技术等。
涂片准备1.消毒工具：在制备涂片之前，准备消毒液（如70%乙醇或碘酒）、棉花球和医用手套。
确保操作环境和仪器表面清洁无菌。
2.采集血液：选择合适的采集器具（如针头、注射器）消毒。
采用无菌技术取血，往常采取放血法，但可采用烏斯夫斯基移液管利用负压的方法来采用更少的血液，适应于孩童，有危险性患者的使用。
3.涂片制备：使用无菌涂片刷或平片，用一下方法制备涂片：–手背法：用棉球或纱布擦拭患者手背部位，等待干燥，然后轻轻划开皮肤，等待血液自然出现，迅速在涂片上涂抹一层血液。
–指尖法：用棉球或纱布擦拭患者指尖部位，等待干燥，然后用无菌针头将患者指尖刺破，等待血液自然出现，迅速在涂片上涂抹一层血液。
标本采集1.血液收集器：使用采血盒、染片管、小瓶等器具，确保标本的完整性和安全性。
2.血液标本处理：–静脉全血：将血液收集到采血盒中，以避免凝固，然后轻轻倾倒和摇晃，以保持混合状态。
–静脉血清：将血液收集到染片管中，等待血液凝固，然后使用离心机将血液分离为血清和血细胞。
染色技术1.Wright-Giemsa染色法：这是制备血涂片的常用染色法，可显示出细胞的细节和染色质的颗粒分布。
具体步骤包括：–将涂片浸入Wright染料溶液中，浸泡2-5分钟。
–用蒸馏水冲洗涂片，直到冲洗液变清。
–将涂片浸入Giemsa染料溶液中，浸泡10-20分钟。
–最后用蒸馏水冲洗涂片，直到冲洗液变清。
2.Giemsa染色法：这是另一种常用的染色法，适用于观察红细胞、白细胞和寄生虫等。
–将涂片浸入Giemsa染料溶液中，浸泡10-30分钟。
–用蒸馏水冲洗涂片，直到冲洗液变清。
结果分析通过观察血涂片下显微镜下的细胞形态和结构，可以识别和计数不同类型的血细胞。
血涂片制备的操作方法
血涂片制备的操作方法血涂片制备是一种用于检查血液细胞形态和计数的常见实验方法。
以下是血涂片制备的详细操作方法：1. 实验前准备：- 准备好所需的实验器材和试剂，包括玻璃刮片、镊子、培养皿、荧光显微镜片、血液采集管、无菌生理盐水、硝酸盐涂片、形态涂片、涂片染色试剂（Wright 染色液）等。
- 仔细阅读实验操作方法，并进行必要的安全措施。
2. 血液采集：- 选择一个合适的采集部位，一般为患者的指尖或耳垂侧面。
- 用无菌棉球或无菌纱布清洁采集部位，消毒使用无菌棉球沾取酒精擦拭。
- 使用无菌注射器或针头，通过轻轻按压患者的采集部位，采集足够的血液样品。
3. 血涂片制备：- 先将玻璃刮片清洗干净，并在一侧的一个角落上写上标签，以示采集来源。
- 取一滴血液样品，将其滴在玻璃刮片的一端，并迅速将另一张刮片斜放在接触点上。
- 刮片形成一个小角度，然后将两张刮片迅速向前移动，使血液样品均匀涂开。
- 在制备血涂片的同时，要注意控制制片速度和角度，以保证血液样品的均匀和适当稀释。
4. 干燥与固定：- 制片完成后，应将其垂直放置在一个干净、无尘的地方，以允许刮片的自然干燥。
在炎热的季节或高湿度的环境中，可以使用加温脱水槽，将温度设定在37-40摄氏度，以加速干燥过程。
- 干燥后，将血涂片固定，可使用60-70%乙醇或其他合适的固定液，将刮片浸泡在固定液中1-2分钟，然后取出并晾干。
5. 涂片染色：- 取出固定的血涂片，逐一浸泡在Wright染色液中，浸泡时间一般为3-5分钟，可根据需要调整。
- 取出血涂片，用流动自来水轻轻冲洗，将多余的染色剂冲洗掉，直至冲洗水流变为清澈。
- 将血涂片倒挂在流动自来水下自然干燥，避免用纸巾擦拭，以免造成细胞形态的破坏。
6. 显微镜检查：- 取一滴橄榄油滴于血涂片中心，并将其覆盖与荧光显微镜片。
- 将显微镜调至合适的倍数，放入血涂片下进行观察和分析。
- 观察细胞形态，计算细胞数目，评估红细胞形态、白细胞分类及数量、血小板计数等。
血涂片制备
1、血涂片制备将一滴血液滴在干净的载玻片上，用另一张载玻片边缘与其接触，呈30°角拉回与血液接触。
当血液蔓延至接近玻片的宽度时，将玻片平稳快速地向前推出。
将玻片在空中轻轻会动，快速风干。
2、血涂片染色采用瑞氏染色法。
本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞特异性颗粒着色较好，但对核的着色略差。
瑞氏染料是由酸性染料伊红（使细胞的碱性成分染成红色，如血红蛋白和嗜酸性颗粒）和碱性染料亚甲蓝（使细胞的酸性成分染成蓝色，如白细胞）组成的复合染料。
（1）用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。
(2)用瑞氏染液3～5滴覆盖整个血膜，固定细胞0.5～1分钟。
(3)滴加等量或稍多的缓冲液（pH6.4～6.8的磷酸盐缓冲液，其作用是使染色环境维持在弱酸性，达到最佳的染色效果），用吸球将其与染液吸匀，或者摇动玻片染色5～10分钟。
(4)慢慢摇动玻片，然后用流动水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥后(或用滤纸吸干)，即可镜检。
3、染色效果正常情况：血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。
显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。
白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
附：瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR） 500ml或600ml1）先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。
2）再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。
3）存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。
实验一血涂片的制备
实验二、血涂片的制备和血细胞的观察目的要求1. 掌握血涂片的的制备方法2. 认识红细胞及各种白细胞的典型形态基本原理涂片技术是制备血液样品最常用的技术。
将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。
实验用品1. 器材：医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片；2.试剂：Wright's染液：Wright's色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。
方法与步骤1 ．采血采血前用70％酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后，刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核白细胞较多）。
2．涂片挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以45 ° 为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜（图2-2 ）。
推进时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀，初学者可把玻片放在桌上操作。
3．染色待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright 's 染液盖满血膜为止，染色1〜3 min。
然后滴加等量的缓冲液（pH6.4）或蒸馏水，使其与染液均匀混合，静置2〜5 min。
用蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干。
4．镜检显微镜观察可见人红细胞为凹圆盘形，无核，淡红色，缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8 微米。
白细胞数目少，为圆形。
颗粒白细胞（1）嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1-5 叶，直径10-12 微米；（2）嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2 叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色，直径10-15 微米；（3）嗜碱性颗粒白细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2 叶，染成淡蓝色，直径10-11 微米。
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实验二、血涂片的制备和血细胞的观察目的要求1.掌握血涂片的的制备方法2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态基本原理涂片技术是制备血液样品最常用的技术。
将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。
实验用品1.器材：医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片；2.试剂：Wright’s染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。
方法与步骤1．采血采血前用70％酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后，刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核白细胞较多）。
2．涂片挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以45°为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜（图2-2）。
推进时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀，初学者可把玻片放在桌上操作。
3．染色待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止，染色1～3 min。
然后滴加等量的缓冲液（pH6.4）或蒸馏水，使其与染液均匀混合，静置2～5 min。
用蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干。
4．镜检显微镜观察可见人红细胞为凹圆盘形，无核，淡红色，缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微米。
白细胞数目少，为圆形。
颗粒白细胞（1）嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1-5叶，直径10-12微米；（2）嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色，直径10-15微米；（3）嗜碱性颗粒白细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色，直径10-11微米。
无颗粒白细胞（1）淋巴细胞：可观察到中、小型两种。
小淋巴细胞与红细胞大小相似，圆形，核致密，染成深紫色。
周围仅一薄层嗜碱性染成淡蓝的细胞质。
中淋巴细胞较大，核圆形。
直径6-8微米。
（2）单核细胞：体积最大，细胞圆形。
胞质染成灰蓝色。
核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。
直径14-20微米。
血小板为不规则小体，直径2 - 3微米。
其周围部分浅蓝色，中央有细小的紫红色颗粒，聚集成群。
实验报告内容绘制人血涂片镜下图血涂片是通过特定的方法将血液按一定方向均匀涂开的过程，微观上使细胞是由球形变为平面形或近平面形平铺在载玻片上。
血涂片的显微镜检查是血液细胞形态学检查的基本步骤，特别是对于各种血液病的诊断和鉴别诊断，具有重要价值。
血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。
（一）血涂片制备1. 载玻片的准备新载玻片常带有游离碱质，须用浓度为 lmol/L 的HCl浸泡24h，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。
旧载玻片要用含洗涤剂的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反复冲洗，最后用0.95L/L乙醇浸泡1h，干燥备用。
使用载玻片时，不要用手触及玻片表面，保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。
2.血涂片制作方法取血液标本一滴置载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持 30～45 度夹角，平稳地向前推动，血液即在载玻片上形成薄层血膜(图1—1)。
图 2—1 血涂片的制作步骤示意图涂片的厚薄与血滴大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。
血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反之则血膜越薄。
一张良好的血涂片，要求厚薄适宜，头体尾明显，细胞分布均匀，血膜边缘整齐并留有的空隙。
下面是几种血涂片效果模式图及形成原因 (图l —2) 。
图 2—2 几种血涂片效果比较（二）血涂片染色染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。
血涂片染色包括两个过程：固定和染色。
固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持细胞原有形态结构不发生变化。
常用的染色方法有瑞特染色法 (Wright)、姬姆萨染色法(Giemsa)等。
1.瑞特（Wright）染色法本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞特异性颗粒着色较好，但对核的着色略差。
（1）瑞特染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。
伊红为钠盐，有色部分为阴离子。
美蓝为氯盐，有色部分为阳离子。
美蓝和伊红的水溶液混合后，产生一种不溶于水的伊红化美蓝 (ME)中性沉淀，即瑞特染料，溶解于甲醇中，即成为瑞氏染液。
甲醇的作用一方面使ME溶解，并解离为M ＋和E －，两种有色离子可以选择性地与细胞内不同成分结合。
另一方面因其具有强大的脱水作用，可将细胞瞬间固定，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状结构，表面积增加，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。
（2）缓冲液pH6.4～6.8的磷酸盐缓冲液，其作用是使染色环境维持在弱酸性，达到最佳的染色效果。
（3）细胞的着色原理细胞的着色既有化学的亲合作用，又有物理的吸附作用。
不同的细胞由于其所含化学成分不一样，化学性质各不相同，所以对染料的亲合力也不一样。
①细胞中的碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色，因此，该物质又称为嗜酸性物质。
如红细胞中的血红蛋白及嗜酸粒细胞中的嗜酸性颗粒等与伊红结合。
②细胞中的酸性物质可与碱性染料美蓝结合而染成蓝紫色，该物质又称嗜碱性物质。
如淋巴细胞胞质及嗜碱粒细胞的颗粒为酸性物质，与碱性染料美蓝结合。
③中性颗粒呈等电状态与伊红美蓝均可结合，染淡紫红色为中性物质。
另外细胞核蛋白主要由脱氧核糖核酸和强碱性的组蛋白等组成，与酸性伊红结合染成红色，但因核蛋白中还含有少量的弱酸性物质，与碱性美蓝作用染成蓝色，因含量太少，蓝色反应极弱，故也被染成紫红色。
④原始红细胞和早幼红细胞的胞质含有较多的酸性物质，与美蓝亲合力强，故染成较浓厚的蓝色；随着细胞的发育，晚幼红细胞阶段既含有酸性物质，又含有碱性物质（ Hb），既能与碱性染料美蓝结合，又能与酸性染料伊红结合，故染成红蓝色或灰红色；当红细胞完全成熟，酸性物质彻底消失后，只与伊红结合，则染成粉红色。
图2－3 瑞特染色原理示意图（ 4）pH对细胞染色的影响细胞着色对氢离子浓度十分敏感。
细胞各种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质是两性电解质，所带电荷的正负数量随溶液 pH值而定。
对某一蛋白质而言，如果环境的pH小于其等电点（PI），则该蛋白质带正电荷即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合，染色偏红；相反，当环境的pH大于PI即在碱性环境中负电荷增多，则易与美蓝结合染色偏蓝。
因此，要使用清洁中性的载玻片、优质的甲醇做溶剂和用缓冲液(pH6．4～6．8)来调节染色时的pH值，达到满意的染色效果。
（ 5）染色效果分析正常情况：血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。
显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。
白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
染色偏酸：红细胞和嗜酸粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。
染色偏碱：所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。
（三）血涂片染色的质量控制1．载玻片必须非常洁净，中性，无油脂。
不清洁或非中性的载玻片会造成细胞特别是红细胞形态发生改变，导致假性的异常形态红细胞出现。
非中性的载玻片还会影响染色环境的pH值，带油脂的载玻片会使细胞分布不均匀。
2．良好血涂片的“标准”。
血膜由厚到薄逐渐过度，血膜的体尾交界部位红细胞分布均匀，既不重叠又互相紧靠相连。
3. EDTA抗凝血液制备血涂片。
由于EDTA能阻止血小板聚集，如需在显微镜下观察血小板形态时可采用，但EDTA抗凝血有时能引起红细胞皱缩和白细胞聚集，所以应根据情况恰当选择。
4. 白细胞较低和需浓缩白细胞的标本处理。
为获得较多白细胞，可将抗凝血适当离心，使密度相同细胞集中并分层，然后取红细胞层上薄的灰白色层（有核细胞和血小板较集中)涂片、染色。
该方法非常适合于白细胞减低患者的白细胞分类计数及红斑狼疮细胞检查。
5. 血细胞比容与涂片关系。
血细胞比容高于正常时，红细胞较多，血液粘度较高，用较小的角度涂片，可获得满意的血膜。
相反，血细胞比容低于正常时，血液粘度较低，需用较大角度涂片。
6.新配制的瑞氏染液处置。
新配制的瑞氏染液包括瑞－姬染液，pH偏碱，染色效果不太理想，需在室温放置一段时间，其中美蓝逐渐转变为天青B。
在密封条件下，贮存时间愈久，转化的天青B愈多，染色效果愈好。
7.染色过深、过浅的处理。
染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。
对于重要的标本可采用先试染的方法，根据试染效果调节第二次染色方式。
纠正染色过深可缩短染色时间或稀释染液。
纠正染色过浅可延长染色时间。
如果标本片有限出现了染色过深、过浅的情况，可用如下办法挽救：染色过深可加少量缓冲液覆盖血膜部分褪色，在显微镜下观察褪色情况及时终止。
染色过浅可重加染色液和缓冲液复染，也要在显微镜下观察及时终止。
瑞氏染液英文拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。
后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
使用方法瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色：1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。
2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。
甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲醇ME（瑞氏染料）----→M+ + E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
染液配制(1) 瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR） 500ml或600ml○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。
○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。