组织病理切片以及HE染色
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析
病理技术HE染色是病理学中最常用的染色方法之一，主要用于组织切片的染色，帮助病理医师观察和诊断疾病。
HE染色的步骤相对简单，不仅能更加清晰地显示细胞核和胞质的细胞形态学特征，还能同时显示组织结构、细胞排列和组织成分。
所以，它广泛应用于病理学的初步识别和诊
断中，为后续的专门染色方法和分子生物学检测提供基础。
HE染色主要通过染色剂溶液中的染料与细胞组织中的亲核染料结合，以不同颜色反映出细胞核和胞质的结构和分布，从而帮助医生准确判断和诊断疾病。
在HE染色过程中，可以观察到细胞核的形状、大小和染色性质，以及胞质的颜色和形态。
通过这些特征，医生
可以区分正常细胞和病理细胞，进而判断组织的状态和疾病的类型。
在临床病理实践中，HE染色在不同疾病的诊断中发挥了重要的作用。
在肿瘤病理学中，HE染色能够区分不同类型的肿瘤组织，并确定肿瘤的来源和恶性程度。
在炎症病理学中，HE染色可以显示炎症细胞的浸润和病变组织的病理改变。
在肾脏病理学中，HE染色能够展示肾小球和肾小管的形态学变化，帮助鉴别各种肾脏疾病。
HE染色还可用于鉴别和诊断其他疾病，如肝病、心脏病、神经系统疾病等。
通过观察和分析细胞和组织的形态学特征，医生可以准确判断疾病类型、病变程度和预后。
HE染色具有操作简便、成本低廉、显示效果稳定和观察时间短等优点，因此在病理实验室中被广泛应用。
它也存在一些局限性，例如对细胞器的显示不够清晰、无法区分细胞
类型和组织成分的细微差别等。
he染色步骤HE实验步骤
he染色步骤 HE实验步骤动物病理切片小结[样本处理]动物麻醉后，开胸，暴露心脏，头皮针插入左心室尖，打开37?生理盐水输液装置，从右心耳下沿剪开右心房，灌洗至流出的生理盐水无血(20min)，换4%多聚甲醛固定液灌注(约5min)[固定]4%多聚甲醛固定。
[石蜡切片]取样从固定中取出待切组织，用手术刀切成2mm厚度的小样，装入脱水小盒中，铅笔标号纸条同放入小盒后流水洗30min，蒸馏水浸洗处理Mice:脱水50%乙醇 2-3h170%乙醇 1-2h80%乙醇 1h95%乙醇 2h(1h+1h)100%乙醇 2h(1h+1h)透明二甲苯 35min+35min浸蜡 1h+1h+1h (62?蜡)[HE染色]脱蜡二甲苯? 15min二甲苯? 15min二甲苯:无水乙醇(1:1) 2min无水乙醇? 2min无水乙醇? 2min95%乙醇 2min85%乙醇 2min70%乙醇 2min50%乙醇 2min蒸馏水 5min(如果是DAB染色要抗原修复)HE染色苏木素 6-8min (时间可以延长，现在10-30min)冲洗 1min(反向将载玻片反向冲洗，注意不要脱片)2含1%盐酸的乙醇进行分色(用75%乙醇配)2-3s动作要快氨水反蓝 >10min伊红 10s冲洗固定脱水95%乙醇 2min100%乙醇? 2min100%乙醇? 2min二甲苯? 2min二甲苯? 2min 树胶封片组织浸蜡-常规石蜡切片制作组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65?左右熔化的石蜡中，于65?的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。
组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。
组织浸蜡时，由于诱导剂(二甲苯)的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。
当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里3面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。
免疫组织化学及HE染色实验步骤
免疫组织化学及HE染色实验步骤免疫组织化学和HE（Hematoxylin and Eosin）染色是常用的组织学研究技术。
免疫组织化学用于检测组织中特定抗原的表达，可以帮助研究者了解细胞和组织的功能和性质。
HE染色则是常用的常规组织染色方法，用于观察组织的形态学特征。
下面将分别介绍免疫组织化学和HE染色的实验步骤。
1.获取组织标本：首先，需要获取要研究的组织标本，可以是活体组织或固定的组织。
固定的组织标本一般使用10%缓冲福尔马林进行固定。
2.制备标本切片：将标本切割成适合光镜观察的薄片。
切片厚度一般为3-5微米。
3.去蜡：将蜡包埋组织切片放入蜡溶液中，加热脱蜡，使组织切片恢复水化。
4.抗原修复处理：将切片放入抗原修复液中，通过高温或酶解方法进行抗原修复处理，使细胞或组织中的抗原保持完整。
修复液的选择和具体实验要求有关。
5.阻断非特异性结合：将切片浸入阻断液中，阻断非特异性结合位点，减少假阳性结果。
6.一抗孵育：将合适浓度的一抗溶液加到切片上，使其孵育一段时间。
根据要检测抗原的性质选择合适的一抗。
7.二抗孵育和信号增强：将与一抗结合的二抗溶液加到切片上，同时可以加入信号增强剂，提高检测灵敏度。
8.反应显色：将切片加入显色液中，使阳性细胞或组织部分显示出颜色反应。
常用的显色方法有原位杂交、过氧化物酶法和碱性磷酸酶法等。
9.脱水和封片：经过显色后，将切片在酒精中进行脱水处理，然后用透明介质嵌片，并保护封片，以便于观察。
HE染色的实验步骤如下：1.获取组织标本：同样，首先需要获取组织标本，可以是活体组织或固定的组织。
2.制备标本切片：将标本切割成适合光镜观察的薄片。
切片厚度一般为3-5微米。
3.去蜡和水化：将蜡包埋组织切片放入蜡溶液中，加热脱蜡，然后用醇和水进行水化，使组织切片恢复水化。
4.酸性染料处理：将标本切片放入染色液中，使用血红素作为酸性染料，将细胞核染成蓝色。
5.碱性染料处理：将标本切片放入染色液中，使用溴化钡和噻唑蓝作为碱性染料，将细胞质和胞浆染成红色。
HE染色原理
HE染色原理HE染色原理是一种常用的组织切片染色技术，用于观察组织结构和病理变化。
HE染色技术结合了不同染色剂的特性，能够清晰地显示出组织中的细胞核、胞浆和胶原纤维等结构，为病理诊断提供了重要依据。
HE染色原理的基本步骤包括组织切片脱脂、脱水、浸入熔蜡、切片、脱蜡、脱水、染色和封片。
在染色过程中，组织切片首先被浸泡在嗜酸性染色剂中，如酸性染料Hematoxylin，其主要作用是染色细胞核和胞质。
Hematoxylin能与细胞核中的DNA结合形成复合物，使细胞核呈蓝色或紫色。
接着，组织切片在嗜碱性染色剂中浸泡，如酸性染料Eosin，其主要作用是染色胞质和胶原纤维。
Eosin具有亲和性，能与细胞胞浆中的蛋白质结合，使细胞胞浆呈粉红色或红色。
通过HE染色，可以清晰地区分细胞核、胞浆和胶原纤维，为病变的诊断提供了有力支持。
在病理诊断中，HE染色被广泛应用于肿瘤、炎症和组织结构异常等疾病的鉴别诊断。
不同的组织结构在HE染色下呈现出不同的颜色和形态特征，通过观察组织切片的染色情况，病理医师可以判断组织是否存在异常变化，进而制定合理的治疗方案。
HE染色技术的准确性和可靠性为临床诊断提供了重要的参考依据。
除了在病理诊断中的应用，HE染色技术还被广泛用于科研领域。
科研人员可以通过HE染色观察细胞结构和组织形态的变化，研究细胞生物学、病理生理学等领域的问题。
HE染色技术的简便易行性和可靠性使其成为科研工作中不可或缺的工具。
总的来说，HE染色原理是一种简单而有效的组织染色技术，通过染色显示细胞核、胞浆和胶原纤维等结构，为病理诊断和科研研究提供了重要帮助。
HE染色技术的应用范围广泛，对于促进医学和生命科学的发展起到了重要作用。
希望通过对HE染色原理的了解，可以更好地理解组织结构和病理变化，为人类健康和科学研究做出贡献。
病理技术HE染色对病理诊断准确率的影响
病理技术 HE染色对病理诊断准确率的影响摘要：目的病理诊断中病理技术HE染色的应用方法及价值。
方法回顾性选取2017年4月－2020年4月我院404份病理组织石蜡切片，按照随机小球法分为研究组、常规组，各202份。
常规组应用HE染色，研究组基于常规组HE染色采取改进措施。
比较两组病理诊断的准确率。
结果研究组病理诊断准确率高于常规组（P＜0.05）。
结论 HE染色可以在病理诊断中发挥重要的作用，但在具体应用的过程中，应充分结合切片情况科学运用，以便最大限度保证病理诊断的准确性。
关键词：病理诊断；病理技术；HE染色病理诊断是临床常用的诊断方法，其具体指的是采集人体组织样本，而后经病理技术进行处理，并在显微镜下开展组织学检查的方法，进而实现对疾病的有效诊断。
在疾病的诊断上，病理诊断对比影像学诊断等方法更为客观、准确，其一直被视为最具有权威性的诊断，并且对于众多疾病的诊断有重要意义。
而HE 染色技术则是病理诊断中的重要内容，HE染色技术的应用对于病理诊断的准确性有着直接的影响[1]。
因此，强化HE技术在病理诊断中的应用成为确保病理诊断准确性的重要保障。
基于此，本次研究将围绕着病理诊断中病理技术HE染色的应用方法及价值进行分析论述，详细报道如下：1资料方法1.1研究资料回顾性选取2017年4月－2020年4月我院404份病理组织石蜡切片，按照随机小球法分为研究组、常规组，各202份。
纳入标准：纳入研究的切片均为按标准制作；对研究知情同意；排除标准：伴有破损的样本；非研究用样本。
子宫内膜组织切片80份，宫颈组织切片45份，囊肿切片47，肌瘤切片30份；研究组子宫内膜组织切片82份，宫颈组织切片45份，囊肿切片46份，肌瘤切片29份。
1.2方法1.2.1常规组常规组对病理切片进行HE染色处理，先采用二甲苯去蜡，而后应用酒精、蒸馏水予以处理，并进行苏木素液进行染色，苏木素液配置应用蒸馏水、无水酒精、硫酸铝钾、冰醋酸、黄色氧化汞，配置的过程中，要确保苏木素溶于无水酒精中，并要在其中放入硫酸铝钾、蒸馏水，并予以加热，确保硫酸铝钾溶解。
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下：（一）固定与修块取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。
6小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。
（二）脱水与透明1. 75%乙醇50分钟2. 85%乙醇50分钟3. 95%乙醇(I) 30分钟4. 95%乙醇(II) 30分钟5. 100%乙醇(I) 30分钟6. 100%乙醇(II) 30分钟7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟&二甲苯（I）20分钟9 .二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定）若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。
在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。
全过程约需要5h。
（三）浸蜡、包埋与修蜡块1.浸蜡：将60C恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60 C恒温箱120分钟。
2 .包埋：将60 C的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。
不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。
为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90 C左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。
3 .修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。
（四）切片在载玻片上擦少量甘油蛋白。
可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹匀，呈半干状为佳。
切片厚约4-8卩m，将切片在55C左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。
用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37C烘箱中过夜。
每个组织块捞片2张。
过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。
（五）脱蜡、染色与脱水倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓度的影响。
病理切片 制作优质HE病理组织切片的要素
病理切片制作优质HE病理组织切片的要素摘要】目的制作一张优质的病理组织切片。
方法对病理组织制片过程中出现的问题加以留意及改进。
结果病理组织固定、脱水效果好，制作的组织切片薄，HE染色胞浆分明。
关键词】病理组织；取材；脱水；切片；HE染色病理组织石蜡制片技术是病理诊断的基础，制片质量的好坏是指导医师作出精确诊断的重要保证。
常规石蜡制片一般经过取材、固定、脱水、透亮、浸蜡、包埋、切片、染色、封片等一系列的步骤，一个步骤做不好都会影响组织切片的质量。
本文就我们科在日常工作中各步骤可出现的问题总结出一些阅历和体会，现介绍如下。
1 材料1.1 各类病理组织标本1.2 仪器SHNDON-Thermo全封闭式组织处理机、包埋机、切片机。
1.3 试剂10%福尔马林、F固定液、梯度酒精、二甲苯、石蜡(58~60℃)、XX木素、伊红2 方法2.1 取材临床医师切取标本后，应尽快将标本置于10%福尔马林液内固定，固定液量为4~5倍于标本体积，也可到达15~20倍。
对较大的标本应切开固定，切开厚度为1 cm左右，为保存标本的原有大体形态，切开时最好不要完全断开。
固定时间应视标本大小而定，小标本应不少于4 h，大标本应不少于8 h。
取材组织面积为2 cm×1.5 cm，厚度不超过0.3 cm，骨组织或钙化组织需先经10%硝酸水溶液脱钙至针刺入无阻力感后再取材。
2.2 脱水标本放入全封闭式组织处理机后，F固定液1 h→80%酒精30 min→90%酒精30 min→95%酒精Ⅰ1 h→95%酒精Ⅱ1 h→无水乙醇Ⅰ1 h→无水乙醇Ⅱ1 h→无水乙醇Ⅲ1.5 h→二甲苯Ⅰ30 min→二甲苯Ⅱ1 h→石蜡Ⅰ30 min→石蜡Ⅱ30 min→石蜡Ⅲ1 h→石蜡Ⅳ1.5 h。
2.3 包埋将脱水后的组织按不同要求用石蜡(58℃~60℃)进行包埋。
2.4 切片将冷却的蜡块放于切片机上切片，厚度一般为3~4 μm。
2.5 染色石蜡切片脱蜡至水→放入XX木素工作液内染色1~5 min→自来水洗1 min→1%盐酸酒精分化10 s→自来水洗1 min→稀氨水(1%)反蓝20 s→自来水洗1 min→95%酒精10 s→乙醇性伊红液1~3 min→85%酒精1 min→90%酒精1 min →95%酒精Ⅰ1 min→95%酒精Ⅱ1 min→100%酒精Ⅰ1 min →100%酒精Ⅱ1 min→二甲苯透亮，电风筒吹干后，用中性树胶封片。
组织学染色类型
组织学染色类型
1、HE染色也叫苏木精-伊红染色法，是病理科切片染色技术中
最常见的染色方法之一。
HE染色法也是组织学、胚胎学、病理学教
学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
HE染色利用苏木素和
伊红分别显示胞核和胞浆，可以区分出一般细胞的形态，在实际应用中可以鉴别组织、细胞的病理学改变，在临床病理工作中是诊断良恶性疾病的最基本的染色方法。
2、免疫组化染色。
是根据抗原和抗体特异性结合的原理，通过
化学反应，使标记抗体的显色剂显色，来确定组织细胞内抗原的定位、定性及相对定量，是临床病理诊断中常用的辅助病理诊断和分子分型、预后预测等重要的病理学染色技术。
3、PAS染色。
又称过碘酸-雪夫染色，糖原染色。
一般用来显示细胞内或细胞外的糖原和其他多糖物质。
4、巴氏染色。
是脱落细胞染色中最好的染色方法。
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析病理技术是医学诊断工作的重要环节之一，而病理诊断是临床诊疗的基础。
HE染色是常用的病理技术之一，其应用广泛，特别是在肿瘤病理学中。
本文将从HE染色在病理诊断中的应用效果进行分析。
HE染色是一种常见的组织病理学染色方法，通过染色剂(Hematoxylin和Eosin)作用于组织切片，可清晰显示组织结构和细胞核的形态特征，帮助病理医师进行准确的诊断。
HE染色可以清晰地显示组织结构。
组织结构是组织病理学中一个重要的诊断依据，病理医师通过观察细胞的排列和组织的结构特点来判断是否存在病变。
HE染色可以使细胞核染色成紫色，胞质染色成粉红色，使细胞和组织结构清晰可见，有助于病理医师观察和分析组织的变化，从而准确地诊断病变。
HE染色可以显示细胞核的形态特征。
细胞核的形态变化与疾病密切相关，通过观察细胞核的大小、形状、染色质的排列和核仁的存在与否等特征，可以辅助病理医师判断是否存在病变。
HE染色能够清晰地显示细胞核的形态特征，帮助病理医师判断细胞核的异常变化。
HE染色在肿瘤病理学中具有重要意义。
肿瘤是病理诊断中的一个重要领域，而HE染色在肿瘤病理学中起着至关重要的作用。
通过HE染色，肿瘤的组织和细胞结构清晰可见，可以帮助病理医师确定肿瘤的类型、分级和分期。
肿瘤的组织学特征也是辅助病理医师诊断肿瘤的重要依据之一，而HE染色可以清晰地显示肿瘤的组织学特征，有助于病理医师做出准确的诊断。
HE染色的应用效果还与病理医师的经验相关。
病理诊断是一项高度依赖病理医师经验和技术水平的工作，而HE染色只是其中的一个步骤。
病理医师在观察和分析HE染色结果时，需要结合临床资料、其他病理检查结果等多方面因素进行综合分析和判断。
尽管HE染色在病理诊断中具有重要应用价值，但其效果还需要病理医师的实际操作和经验的支持。
HE染色试验技术及注意事项
HE染色试验技术及注意事项HE染色是一种常用的细胞和组织染色技术，被广泛应用于组织学、病理学以及生物学研究中。
本文将介绍HE染色试验的技术步骤和注意事项。
1.取得组织标本：首先需要取得待染色的组织标本。
一般情况下，可选择人体组织或动物组织。
组织标本应尽可能新鲜，并采用适当的方法进行保存。
2.固定组织标本：将组织标本固定在染色盘或载玻片上，以便后续的染色过程。
一般可选择使用福尔马林等化学物质进行固定，固定时间根据组织类型和标本大小而有所差异。
3.脱水：将固定的组织标本逐渐脱水，以去除组织中的水分。
这一步骤可以通过使用乙醇或异丙醇等溶剂进行。
4.渗透：在脱水之后，组织标本需要通过将其浸入合适的介质中进行渗透。
一般可使用有机溶剂，如丙酮或二甲苯。
5.制片：将渗透的组织放置在试管或盛有液体的容器中，然后将其切割成较薄的切片。
切片的厚度一般为3-5微米。
切片可以使用组织切割机或手工切片进行。
6.上染剂：将切片放入HE染色试剂中，浸泡一定时间以完成染色。
HE染色试剂主要由酸性染料和碱性染料组成，其中酸性染料为苏木精，碱性染料为伊红。
7.清洗：用去离子水或蒸馏水轻轻冲洗染色后的切片，以清除未结合的染色剂。
8.脱水：将染色后的切片通过逐渐浸入不同浓度的醇溶液中进行脱水，去除多余的水分。
9.透明化：使用透明介质，如柳酮或醋酸酯，使切片透明并保护其结构。
10.固定封片：将透明的切片放置在载玻片上，涂上适当的封片胶固定。
然后将载玻片放至烘箱中，进行封片胶的固化。
1.样本的存放：取得的组织标本必须及时固定和保存，以避免样本的腐败和变形。
2.染色时间控制：染色时间的长短会影响到最终染色结果的清晰度。
过长或过短的染色时间都会导致结果模糊不清。
3.清洗彻底：在清洗环节，要确保切片上的染色剂完全被清洗干净，以避免染色剂残留影响结果。
4.切片的薄度：切片的厚度直接影响到染色结果的清晰度和质量，因此需要掌握好切片的技巧和标本的处理。
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析病理学是医学的基础学科，病理诊断对临床医生的诊断和治疗方案起到了重要作用。
组织学及组织取材是病理诊断的基础，而病理技术则是完成病理诊断的重要手段之一。
HE 染色是病理技术中最常用的染色方法之一，本文就病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果进行分析。
1.HE染色技术简介HE染色是指将组织切片后嵌入蜡块中，然后经过去蜡、水洗、染色、脱水、透明、封片等步骤完成的一种组织染色方法。
HE染色方法中的H代表hematoxylin，E代表eosin，H染色是将组织核染色为深蓝色到紫色，E染色是将细胞质染色为橘红色到粉红色。
2.1观察组织结构HE染色可以有效的染出组织的细胞核、细胞质、胶原纤维等组织成分，使病理医生能够清晰的观察到组织的结构和组成，从而作出病理诊断。
2.2病理分类和分级病理诊断中，对于癌症等恶性肿瘤的分类及分级是至关重要的，而HE染色能够清晰明了的显示出细胞核的特征，从而为病理医生进行病理分级或诊断提供了有重要的参考。
2.3病理诊断病理诊断是根据对肿瘤细胞学特征的观察和分析来判断其性质和结构、确定其起源和发展、制定诊断与治疗方案的过程。
而在病理诊断中，HE染色是最常用的染色方法之一，其通过使组织细胞的细胞核染成蓝色和细胞质染成红色的方式，能够为病理医生提供清晰的病理诊断。
3.HE染色存在的不足3.1染色效果受到影响在进行HE染色过程中需要一定的技术操作，因此染色效果受到操作者的影响，存在一定的主观性。
同时，组织的取材方式和病变区域的选择也可能影响HE染色的效果。
3.2染色效果不适用于所有类型的组织HE染色一般适用于上皮组织和间叶组织等较为结构化的组织类型，但并不适用于神经组织、心肌组织和脂肪组织等非结构化组织类型，因此，在进行这些非结构化组织病理诊断时需要采用其它染色方法。
4.结论综上所述，HE染色可以提高组织学细胞学特征的可见性，为病理诊断提供了重要的帮助。
病理切片前处理及HE染色(小鼠肺组织为例)
HE染色（该方法对于肺组织较为适宜）
①新鲜组织取出后4%多聚甲醛固定48小时；
②浸入70%酒精中可保存15天;
③脱水（梯度）：70%乙醇1.5小时1次 80%乙醇30min 1次 95%乙醇
15min 2次 1000%乙醇10min 3次；
④透明：二甲苯透明2次（Ⅰ）、（Ⅱ）各15min（之前是30min）
⑤浸蜡，包埋，烘片程序（56度）
石蜡Ⅰ浸润30min 石蜡Ⅱ浸润90min 石蜡Ⅲ浸润6h（2-4h）包埋
切片烘片
⑥ HE染色
1.脱蜡：二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）各10min；
2水化：无水乙醇5分钟2次 95%乙醇5分钟2次 70%乙醇五分钟1次，自来水轻晃几下置于蒸馏水中3-5分钟（可一直放于蒸馏水中）；
3苏木精染色5分钟---自来水轻晃1分钟至无苏木精-----1%盐酸酒精分化10秒（变为橙红色）---硫酸锂中返蓝（上下来回，可见切片返回蓝色，蒸馏水中静置3秒；
4.脱水：70%酒精20秒----95%酒精5分钟-----无水乙醇10分钟，95%酒精脱水时可以取出切片显微镜下观察染色效果）；
5透明：二甲苯透明5分钟2次；
6.封片：中性树胶，在二甲苯中取出切片趁二甲苯未干时封片，通风厨中进行后置于通风厨中晾干。
病理制片和染色技术
4）固定剂兼有硬化作用，使组织硬化 增加组织硬义，便于制片。
5）防止细胞过度收缩或膨胀而失去其 原有形态结构。
6）经过固定的组织，能对染料产生不 同的亲和力而着色清晰，便于辩认。
由于固定的目的是在于尽量使组织和 细胞保持与生活时相仿的成分和形态。因 此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时， 应使用足量的固定液，其固定液的量一般
5）尽可能避免使组织膨胀或收缩。 6）能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉 淀下来。 7）增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 增加媒染作用和染色能力。 8）使组织变硬，适于制片，但又不使材料 太坚硬而松脆。 9）使组织充分固定，便于保存。
第二节 介绍几种常见固定液
固定剂有简单固定剂（液）和混合固定剂两 类。作为较好的固定液，首先有强渗透力，能迅 速地渗入组织内部；其次不会使组织过渡收缩或 膨胀，并能使组织内易观察的成分得以凝固为不 溶性物质；最后能使组织达到一定硬度，获得较 佳的折光率和对某些染料具有较强的亲和力。
2．标本切开或取厚块→组织固定（冰 冻切片法）→冰冻切片→粘片→乙醇固
定及水洗→常规染色→脱水→透明→ 树胶封片。
第二章 固定、固定液和取材
第一节 组织固定方法
在制作组织切片的过程中，首 先将组织充分固定后才能进行制片， 尤其对石蜡切片，这是不可少的重 要步骤。
1、固定的意义
就是使要观察的组织构造尽量 接近于它生前的正常状态。
此固定液是应用最广的一种，它可以保 护脂类和细胞核。在作酸性染色时，入 Ｖ-Ｇ，或三重染色之前，还可以再使用 第2次固定。
第三章
洗涤、脱水、透明、浸蜡 和包埋、切片
第一节 组织洗涤
一、洗涤的目的
6、丙酮
丙酮又名醋酮或本酮，极易挥发、 易燃的无色液体，能与水、醇、氯仿、醚 及多种溶液混合。
组织病理切片以及HE染色
组织病理切片以及 HE 染色组织病理切片以及HE 染色（一）实验原理:苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE 染色）能较好地显示组织结构与细胞形态,可用于观察、描述正常与病变组织的形态学,而且HE 切片可较长时间保存,被称为常规染色方法。
（二）实验步骤:一、制作切片1、取材、固定:取小鼠肾脏组织适当大小,并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块,进行石蜡切片。
脱水就是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后,必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂,通过这种溶剂的媒介作用,使石蜡浸入组织块。
在此过程中,因组织块中的水分被溶剂所取代,组织块变得透亮,因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯,处理时间为30min 左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其她浸透剂（如火棉胶、碳蜡与明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中,常需经过 3 小时的浸渍,期间需更换 3 次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为组织病理切片以及 HE 染色52-56 C。
组织块经过浸蜡或浸透,用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡与树脂等）包起的过程称包埋,包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度与韧度,有利于切成薄片。
石蜡包埋就是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60 C左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时,则需采用低温石蜡包埋,以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机与平推式切片机,以前者为多用。
切片厚度一般为3-5 ym。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上,迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40 C恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40 C的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60 C烤片30-60min后即可进行染色。
组织病理切片以及HE染色
组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
he染色步骤及注意事项
he染色步骤及注意事项一、组织固定1.组织取材后应立即进行固定，以防止组织自溶。
常用的固定剂有甲醛、乙醇等。
2.固定时应将组织放入适当的容器中，加入足够的固定剂，确保组织充分浸泡。
3.固定时间根据组织类型和大小而定，一般为数小时至数十小时。
二、切片制备1.固定后的组织需进行脱水、透明和浸蜡等处理，然后进行切片。
2.切片厚度应根据组织类型和染色需求而定，一般为3-5微米。
3.切片应平整、均匀，无皱褶、气泡等缺陷。
三、pH值调节1.在进行HE染色前，需将切片用pH值约为7.2-7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗。
2.pH值调节有助于染色过程中组织的着色和分色。
四、控制分色时间1.HE染色过程中，分色时间对染色效果影响较大。
应严格控制分色时间，确保切片染色均匀、清晰。
2.分色时间过长可能导致切片颜色过深，过短则可能使切片颜色过浅。
五、彻底脱去酒精1.在染色过程中需使用酒精进行脱水，因此染色结束后需用无水乙醇彻底脱去切片中的酒精。
2.脱去酒精有助于提高切片的透明度和染色效果。
六、保持切片湿润1.在整个染色过程中，应保持切片湿润，以防止切片干燥和收缩。
2.可以使用甘油等保湿剂来保持切片湿润。
七、封片注意事项1.染色结束后，需用中性树胶等封片剂将切片封固。
2.封片时应避免气泡和溢胶，以保证切片平整和美观。
八、洗涤步骤1.在染色过程中，需用流水将切片上的染液冲洗干净。
2.洗涤时应彻底，以防止残留染液对切片产生影响。
九、避免空气暴露1.在染色过程中，应尽量避免切片暴露在空气中，以防止氧化和褪色。
2.可以使用湿盒或塑料薄膜等将切片包裹，以减少空气接触。
十、保持切片的湿润1.在储存和运输过程中，应保持切片湿润，以防止其干燥和收缩。
2.可以使用甘油等保湿剂来保持切片湿润。
同时，应避免阳光直射和高温环境，以防止切片褪色和变质。
病理方面的染色技术,HE染色,IHC,FISH
Yinsai 技术部
广州伯信生物科技有限公司
主要内容
▪ HE染色 ▪ 免疫组化（IHE） ▪ 荧光原位杂交（FISH）
HE染色
▪ 苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ，HE)
▪ 石蜡切片技术里常用的染色法之一 。 ▪ HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学
3、吸收试验对照
用过量已知相应的纯化抗原与第一抗体反 应，抗体结合点全部被抗原结合，这种被 抗原吸收的抗体不能再与组织内的抗原反 应，故再做免疫组化染色时，结果应为阴 性。
对照实验的结果分析
编号
1 2 3 4 5
阳性片
+ + +
待检片
+ + +
阴性对 照 -
+
-
-
-
结论
操作错误， 抗体失效
非特异性着 色
与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
HE染色原理
▪ 脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，
带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精 碱性染料以离子键结合而被染色。
▪ 伊红是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成 带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳
离子结合使胞浆染成红色或粉红色，与蓝色的细 胞核形成鲜明对比。
抗体的选择
▪ 常用的第一抗体一般为单克隆（鼠抗）和多克隆 （兔抗）抗体，也有羊抗的抗体。
▪ 常用检测试剂盒中的第二抗体也有分为抗鼠、抗 兔或抗羊免疫球蛋白，不能错配，否则一抗、二 抗连接不上而导致假阴性的染色结果。
▪ 最好选用既含抗鼠又含抗兔或抗羊免疫球蛋白的 抗体。
酶标抗体系统中的酶与显色剂的合理选用
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组织病理切片以及HE染色
（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin
staining ，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可
用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：
一、制作切片
1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋
组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸
透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程
称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52- 56Co
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60C左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片
石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片
机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5卩m切片时先将组
织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30%的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40C恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40C的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60C烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色
1. 二甲苯脱蜡2X 10 min ;
2. 无水乙醇洗去二甲苯2X5min；
3. 95 %、80%乙醇各10 min，自来水洗I min （不要让急
水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min;
4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min ;
5. 1 %盐酸酒精分化20 s （镜下控制），自来水洗2 min ;
6. 1%稀氨水返蓝30s （镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗
1min;
7. 伊红染色90s;
8. 80 %乙醇脱水10s, 95%酒精10s，无水乙醇5min ;
9. 无水乙醇10min;
10. 二甲苯2X 10 min ;
11. 中性树胶或加拿大树胶封片。
（三）实验结果：细胞核呈蓝色；细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。
钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。
（四）实验分析：HE染色时病理学中常用的一种诊断方法，通常将病理切片染色后再在显微镜下观察组织的病理学变
化，从而做出病理学诊断。