沉降菌检测规程
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程沉降菌检测操作规程一、实验材料和仪器设备准备1. 培养基：选择适合于沉降菌生长的培养基，如营养琼脂、脑心提取物琼脂等。
2. 试管：清洁且干燥的试管，用于制备培养基和盖儿。
3. 平板培养皿：密封性好、无明显污损的平板培养皿。
4. 无菌纱布：用于对培养皿进行覆膜。
5. 显微镜：高倍显微镜，用于观察沉降菌。
6. 其他常规的无菌操作用具和试剂。
二、实验操作步骤1. 准备培养基：根据所选的培养基配方，按照要求将培养基配制成液体状态，并进行无菌过滤。
将液体培养基倒入试管中，每个试管约倒满的1/3，悬挂液体培养基放置在试管架上，待培养基凝固后，封闭试管盖儿。
2. 取样：将待检测的样品进行无菌采样，如空气、水、土壤、食品等，确保取样时避免污染和杂菌的进入。
3. 塑料膜覆盖：将待检测的培养基倒入平板培养皿中，约倒满1/2，然后用无菌纱布覆盖培养皿口，并用橡皮筋固定好。
确保培养基表面整齐平坦，无明显凸起或凹陷。
4. 样品接种：将取样时采集的样品（空气、水、土壤等）用滴管或铁丝等工具，均匀地接种到培养基的表面上，每个培养皿大约接种2～3滴，然后迅速盖上试管上的盖子。
5. 培养条件：将培养皿置于恒温箱中，一般温度设定为30-35°C，培养时间为24小时至72小时不等，具体视沉降菌生长速度而定。
三、结果判读1. 观察培养皿：取出培养皿，观察上面是否出现菌落。
正常情况下，如果检测的样品中存在沉降菌，培养皿上会出现可见的菌落。
2. 菌落形态观察：使用高倍显微镜观察菌落的形态特征，确定是否为沉降菌。
3. 菌种的鉴定：对形态特征与已知的沉降菌标准比对，进行菌种鉴定。
四、注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免外界杂菌的污染。
2. 严格控制培养基、试管和平板培养皿等材料的无菌。
3. 样品采集要避免手部接触，使用无菌工具进行采样。
4. 培养条件要保持稳定，避免温度、湿度等因素对实验结果的影响。
5. 观察菌落时要细心，准确判断是否为沉降菌。
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
洁净车间沉降菌检验规程
1 目对洁净车间沉降菌进行检测, 确保其符合相关要求要求。
2 范围本规程适适用于洁净车间沉降菌检测。
3 责任者质量管理部责任人及QC检验员。
4 内容4.1 测试方法4.1.1 方法提要本规程采取沉降法, 即经过自然沉降原理搜集在空气中生物粒子于培养基平皿, 经若干时间, 在适宜条件下让其繁殖到可见菌落进行计数, 以平板培养皿中菌落数来判定洁净环境内活微生物, 并以此来评定洁净车间洁净度。
4.1.2 人员职责及培训洁净车间测试人员应进行本专业培训并取得对应资格后才能推行对洁净车间测试职责, 其中包含包含卫生知识和基础微生物知识。
洁净车间测试人员应选择与生产操作空气洁净度等级要求相适应穿戴方法, 外面衣服不能带进100000级以上区域。
4.1.3仪器与器具包含:a)培养皿;b)培养基;c)恒温培养箱;d)高压蒸汽灭菌器。
4.1.3.1 培养皿通常采取φ90mm×15mm规格培养皿。
4.1.3.2 培养基大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。
4.1.3.3 恒温培养箱必需定时对恒温培养箱进行校验。
4.1.4 测试步骤4.1.4.1 测试前培养皿表面必需严格消毒。
4.1.4.2 将已制备好培养皿按采样点部署图逐一放置, 然后从里到外逐一打开培养皿盖, 使培养基表面暴露在空气中。
4.1.4.3 静态测试时, 培养皿暴露时间为30min以上, 动态测试时, 培养皿暴露时间为小于4h。
4.1.4.4 全部采样结束后, 将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
4.1.4.5 大豆酪蛋白琼脂平板培养基经采样后, 在30~35℃培养箱中培养, 时间不少于2d。
4.1.4.6 每批培养基应有对照试验, 检验培养基础身是否污染。
可每批选定3只培养皿做对照培养。
4.1.5 菌落计数4.1.5.1 用肉眼对培养皿上全部菌落直接计数、标识或在菌落计数器上点计, 然后用5~10倍放大镜检验, 是否有遗漏。
4.1.5.2 若平板上有2个或2个以上菌落重合, 可分辨是仍以2个或两个以上菌落计数。
静脉用药调配中心沉降菌监测项目操作规程
静脉用药调配中心沉降菌监测项目操作规程Ⅰ目的规范沉降菌检测，保障检测结果正确性及有效性。
Ⅱ范围适用于静脉用药调配中心沉降菌监测操作。
Ⅲ规程一、十万级洁净区清洁消毒后进行沉降菌测试。
二、每次测试前按照相关标准操作规程提前30min打开净化空调系统，使温度、湿度及压差达到规定要求，并进行记录。
三、如进行生物安全柜或水平层流洁净台沉降菌检测应提前30min打开紫外线灯、风机。
四、由专人从医学检验科微生物室取回制备好的培养皿。
五、制备好的培养皿由药品物品传递窗送至洁净区内，测试人员按照更衣标准操作规程穿戴进入洁净区。
六、按事先制定的采样布点图放置，逐个放置，逐个打开培养皿上盖，使培养基暴露在环境空气中。
打开时，用一手的大拇指和食指轻轻移开上盖，人体任何部位应尽量远离培养皿上部，防止产生假阳性。
七、检测生物安全柜或水平层流洁净台时，按最少培养皿数要求，把14个培养皿均匀放在工作台上，然后从里往外逐个打开，使其培养基暴露在空气中。
八、培养基在空气中暴露30分钟后，从外往里逐个盖好上盖并反扣培养基。
收集完毕，从成品输液传递窗出口送出。
测试人员按照更衣标准操作要求离开洁净区。
九、送医学检验科微生物室。
十、待医学检验科出具沉降菌检测报告，查看结果是否符合规定要求，如符合存档。
如不符合重新进行消毒后，再进行两次沉降菌检测，结果必须合格。
如不合格，对问题进行排除，如更换高效过滤器等。
十一、注意事项（一）采样前培养皿表面必须严格消毒；（二）静态测试时，室内测试人员不得多于2人；（三）采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染应剔除；（四）采样点尽量离地面0.8-1.5米，尽量避开尘粒较集中的回风口；（五）沉降菌检测定义：通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净区环境内的活生物数，以此来评定洁净区的洁净度。
（六）每月需要进行沉降菌检测的环境：十万级洁净区、万级洁净区、百级生物安全柜、百级水平层流洁净台。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程1. 引言沉降菌是指在液体中沉淀并附着在容器底部的微生物。
在许多行业中，沉降菌的检测是非常重要的，例如制药、食品加工、饮水安全等领域。
本文档旨在介绍沉降菌检测的操作规程，以确保检测结果准确可靠。
2. 检测设备和试剂准备在进行沉降菌检测之前，需要准备以下设备和试剂：•沉降菌检测容器：一般选择具有透明底部和标有刻度的容器，容量不小于100 mL。
•色谱纸：用于制作沉降菌检测培养基。
•高温灭菌器：用于灭菌沉降菌检测容器和试剂。
•干燥烘箱：用于干燥沉降菌检测容器和试剂。
•取样器：用于抽取待检测样品。
•生物安全柜：用于操作中的生物安全。
试剂准备：•培养基：可根据需要选择适当的培养基，例如Luria-Bertani（LB）培养基。
•蒸馏水：用于制备培养基和洗涤操作。
•山梨醇盐溶液：用于沉降菌悬浮液的稀释。
3. 检测操作步骤步骤1：沉降菌检测容器准备1.将需要检测的沉降菌检测容器放入高温灭菌器中，设定适当的温度和时间进行灭菌。
2.灭菌后，将沉降菌检测容器取出，放入干燥烘箱中进行干燥，确保容器完全干燥。
步骤2：制备培养基1.准备适量的色谱纸，切成小块。
2.在高温灭菌器中加热蒸馏水至沸腾，将色谱纸块放入烧杯中，倒入足够的蒸馏水。
3.候色谱纸块充分吸水后，取出备用。
步骤3：取样1.在生物安全柜内，使用取样器抽取待检测样品，确保样品干净无杂质。
2.将样品转移到沉降菌检测容器中，注意不要沾到容器外表面。
步骤4：制备沉降菌悬浮液1.取一定量的山梨醇盐溶液，进行稀释，制备合适的浓度。
2.将制备好的山梨醇盐溶液加入沉降菌检测容器中，使样品充分悬浮。
步骤5：培养和观察1.将沉降菌检测容器放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
2.观察培养后的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
4. 结果记录和分析根据观察到的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
根据结果进行分析和判断，判断样品是否符合标准要求。
5. 安全注意事项•操作过程中要戴好实验手套和口罩，避免直接接触待检测样品。
洁净室(区)沉降菌的测规程
1 目的确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。
2 范围适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。
3 责任QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。
4 内容4.1 参考标准中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。
中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。
4.2 监测程序4.2.1 设备高压消毒锅恒温培养箱培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
4.2.2 培养基及平皿制备4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基4.2.2.2 制备过程如下：◆将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20 分钟或180℃干热灭菌2小时；◆将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
◆待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
◆制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。
4.2.3 采样点和监测频次4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。
4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。
4.2.4 测试规则4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。
4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.2.4.4 测试时间：◆对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
洁净区沉降菌测试操作规程
范围：洁净区
职责：质量部、生产车间对本规程的实施负责
正文：
1.试剂及仪器、器皿
1.1试剂
——营养琼脂培养基
1.2仪器及器皿
1.3生化培养箱，Φ90mm培养皿、锥形瓶、胶塞、灭菌锅、烧杯等。
2.测试前准备
2.1培养基的配制
——按SOP-QM-424《培养基配制标准操作规程》进行。
2.2培养基平皿的制备
2.2.1将Φ90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或180℃干热灭菌2小时。
2.2.2将培养基加热溶化，冷至45℃时，于无菌检查操作间将培养基注入平皿，每皿约15ml。
2.2.3待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃生化培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
3.采样
3.1采样点的数目及采样点的布置
3.1.2.1采样点的布置力求均匀,避免采样点在某局部区域过于集中或过于稀疏，关键区域可增加采样点。
3.1.2.2采样点位置离地0.8-1.5米左右（略高于工作台面）
3.2采样方法：按3.1的要求放置平皿数，打开培养皿盖，使培养皿暴露30分钟，再将培养皿盖盖上。
4.培养
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所有采样结束后，将平皿倒置在30ºC—35ºC的生化培养箱中培养48小时。
5.操作结果的评价
5.1用肉眼直接计数并记录。
5.2结果计算
式中 M—平均菌落数（CFU）
M i—1，2，3……号平皿菌落数
n—平皿总数
5.3结果评价标准见下表：
测试结果均须合格。
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洁净区沉降菌培养检验操作规程
管理文件一、目的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准二、适用范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC人员将复核的培养皿转移至恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1小时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采用大豆酪蛋白琼脂培养基配制的培养皿时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采用沙氏培养基配制的培养皿时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度一次，以培养箱中温度计温度为准。
2.检测（菌落计数）2.1用肉眼对培养皿上所有菌落直接计数，专人复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进行记录，然后进行结果计算。
3.结果计算：3.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养皿菌落数M——2号培养皿菌落数2Mn——n号培养皿菌落数N——培养皿总数3.2结果评定：3.2.1用平均菌落数判断洁净室（区）空气中微生物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.非主要工作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试一次，动态测试频次为每一年测试一次。
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程⽬的制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试⽅法，指导沉降菌的测试⼯作。
范围适⽤于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。
责任QC微⽣物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进⾏统计分析。
程序1.定义1.1.菌落：微⽣物培养后，由⼀个或⼏个微⽣物繁殖⽽形成的微⽣物集落，简称CFU。
1.2.沉降菌：通过⾃然沉降原理收集在空⽓中的活微⽣物粒⼦，通过专⽤的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。
1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常⽣产状态设备在指定的⽅式下进⾏，并且有指定的⼈员按照规范操作的状态。
2.测试⽅法2.1.测试过程2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平⽫或者⾃制TSA平⽫。
2.2.测试条件2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其⽣产及⼯艺要求相适应（⽆特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。
2.2.2.风速、压差应在合格范围内。
2.2.3.动态测试。
2.3.测试⽅法2.3.1.将准备好的培养⽫按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。
将采样台⾯取样位置或采样辅助设施表⾯消毒，打开培养⽫，将培养⽫盖置于已消毒位置，将培养⽫置于培养⽫盖上，使培养基表⾯充分暴露后，将培养⽫盖盖上后倒置。
2.3.2.在每⼀只培养⽫上标记好具体的取样位置及取样⽇期，将所有培养⽫在QC微⽣物室进⾏培养观察。
2.4.培养观察计数2.4.1.全部采样结束后，将培养⽫倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。
2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本⾝是否污染。
可每次选定2只培养⽫作对照培养。
2.5.计算2.5.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MNNM1＝1号培养⽫菌落数M2＝2号培养⽫菌落数Mn＝n号培养⽫菌落数n＝培养⽫总数2.5.2.结果判定2.5.2.1.最终结果采⽤平均值。
沉降菌检测标准操作规程
1.目的：规范对洁净区沉降菌检查的方法，以做出洁净情况的正确评价。
2.范围：各生产车间洁净区3.职责：空气沉降菌检测操作人员负责本规程的实施，品保部经理监督执行4.内容4.1本测试方法是采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养皿中，经若干时间，在适宜条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
4.2所用设备、试剂高压消毒锅、恒温培养箱、φ90mm 营养琼脂培养基培养皿。
4.3测试状态4.3.1沉降菌测试前，被测试洁净室的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
4.3.2测试前，被测试洁净室已经过消毒。
4.3.3洁净厂房的空气净化调节系统的风机已启动至少30分钟。
4.3.4测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
4.4测试人员4.4.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服，培养基按物料进入规定传入。
4.4.2静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
4.5采样点数目及布置注:表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于乱流洁净室是指房间的面积4.5.2在满足最少测点数的同时，还要满足最少培养皿数，如下表。
不论面积大小，作为4.5.3采样点的布置：1)采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
2)可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.6采样方法及培养4.6.1将培养皿按要求放置后，打开平皿盖，使培养皿表面暴露30分钟后，将培养皿盖上后倒置，全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在30～35℃的条件下，培养48小时后计数。
每批可选定3只培养皿作对照培养。
4.7结果计算4.7.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏若。
4.7.2培养皿上有2个或者2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
沉降菌监测规程
1.范围适用于本公司生产洁净区的沉降菌的测定和环境的验证2. 质量指标：根据《GBT16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》进行；洁净度级别技术要求（沉降菌个数）100，000级≤10个/皿10000级≤3个/皿3. 测试方法3.1 本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净区的洁净度。
3.2 培养皿一般采用90c m×15mm规格的培养皿。
3.3 恒温培养箱必须对培养箱的温度计进行鉴定4. 测试步骤4.1将已制备好的培养皿按采样点放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.2静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h.4.3全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
4.4采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配置的培养皿经采样后。
在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于2d；采用沙氏培养基（SAD）配置的培养皿采样后，在20℃～25℃培养箱中培养，时间不少于5d.4.5每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
4.6菌落计数4.6.1若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可以辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.7注意事项4.7.1测试用具要作灭菌处理。
以确保测试的可靠性、正确性。
4.7.2采取一切措施防止人为对样本的污染。
5. 测试规则5.1 沉降菌测试前，被测试的洁净区的温度、静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内；温度和相对湿度的测试，温度在18℃～26℃，相对湿度在45﹪～65﹪为宜。
5.2 测试状态静态和动态两种状态均可进行测试。
静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
沉降菌测试前，被测试的洁净区已经过消毒5.3沉降菌菌落数计算5.4采样点数量及其布置5.4.1.1采样点的位置5.4.1.2采样点布置及放置平皿数应按5.4.1采样点：100000级≤20m2洁净区应布置2个采样点；10000级≤20m2洁净区应布置2个采样点；带：·的为布点位置5.4.2 平皿数：100000级≤20m2洁净区每个采样点应放置2个平皿；10000级≤20m2洁净区每个采样点应放置2个平皿；5.4.3平均菌落数的计算：5.4.4记录监测结果。
药典沉降菌检测操作规程
版药典沉降菌检测操作规程————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.1.3沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
沉降菌静态每月一次的标准
沉降菌静态每月一次的标准沉降菌是一种常见的微生物，它在环境监测和污染治理中起着重要的作用。
为了保证沉降菌的监测结果准确可靠，需要制定一套标准的操作规程。
本文将介绍沉降菌静态每月一次的标准，以帮助相关人员正确进行操作。
一、标本采集1. 选择合适的采样点位，应避免高污染源和强风区。
2. 使用消毒液清洁采样容器，并将容器放置在采样点位上。
3. 打开采样容器盖子，暴露采样底部。
4. 采用无菌手套和无菌铁锹，将采样底部的土壤或沉积物取样至容器中，约200克为宜。
5. 关闭采样容器盖子，并用胶带密封。
二、标本处理1. 将采集的标本送至实验室，尽快进行处理。
2. 在无菌环境下，将标本分成两份，一份用于沉降菌的培养，另一份用于其他微生物的检测。
3. 对于沉降菌培养，可选择适宜的培养基，如营养琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基等。
4. 将标本均匀涂布在培养基表面，并在适宜的温度下孵育。
5. 孵育时间通常为48小时，过长或过短都可能影响结果的准确性。
三、结果判读1. 沉降菌的形态特征主要包括菌落形状、颜色、透明度等。
2. 使用显微镜观察菌落下的微生物形态特征，如菌丝、孢子等。
3. 根据形态特征和相关鉴定手段，对沉降菌进行分类鉴定。
4. 记录沉降菌的数量和分类结果，并与历史数据进行比对。
四、质量控制1. 实验室应建立质量控制体系，包括标本采集、处理、培养和判读等环节。
2. 定期参加质量控制评估，确保实验室操作符合标准要求。
3. 建立标本库存管理制度，确保标本的保存和追溯。
五、数据分析与报告1. 对每次沉降菌监测结果进行统计分析，包括数量分布、变化趋势等。
2. 结合环境监测数据和其他相关信息，对沉降菌的来源和影响因素进行分析。
3. 撰写监测报告，明确沉降菌监测结果和相关结论，并提出相应的建议。
六、风险控制1. 在操作过程中，应严格遵循实验室安全规范，佩戴防护用品。
2. 对于有潜在危险的标本，应进行特殊处理，避免污染和传播。
洁净室沉降菌检测标准操作规程
1. 目的建立洁净室沉降菌检测的标准操作程序，用以规范检测人员的检测操作。
2. 范围适用于洁净区沉降菌的检测。
3. 职责3.1质量部专职检验员负责洁净室沉降菌的检测。
3.2 质量监督员负责监督本规程的执行情况。
4. 内容4.1仪器设备及培养基4.1.1培养皿：玻璃培养皿或一次用无菌培养皿。
4.1.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。
4.1.3仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅。
4.2 检测用培养基平皿的制备玻璃培养皿使用前应先灭菌，制备培养基平皿时注意无菌操作，每批次应设置对照平皿。
制备好的培养基平皿在2～8℃的环境中存放。
4.3采样4.3.1 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
图1 采样点位置参考图4.3.2 采样次数对任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点不得少于2个，每个采样点一般采样一次。
表2 最少培养皿数注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于非单向流洁净室，是指房间面积。
4.4采样注意事项4.4.1 测试用具要做无菌处理，以确保测试的可靠性，正确性。
4.4.2 采取一切措施，防止人为对样本的污染。
4.4.3对培养基、培养条件及其它参数做相应的记录。
4.4.4 计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别。
4.4.5采样前应仔细检验每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
4.5 测试状态空态、静态和动态三种状态均可进行测试。
空态或静态时，室内测试人员不得多于2人。
确保静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态，动态测试时洁净室已处于正常生产状态。
测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程
《沉降菌检测操作规程》
一、目的
为了保障食品安全，防止沉降菌污染食品，特制定本操作规程。
二、适用范围
本规程适用于对食品中沉降菌的检测工作。
三、检测仪器和试剂
1. 采用适用于沉降菌检测的培养基和培养皿。
2. 采用适用于沉降菌检测的显微镜和显微镜镜片。
四、检测操作步骤
1. 取一定量的食品样品，按照相应比例加入适量的生理盐水中，并进行均匀搅拌。
2. 取适量预处理后的样品液，分别加入培养基中的培养皿，并进行培养。
3. 观察培养皿，记录沉降菌的形态特征和数量。
4. 如果需要进一步分析，使用显微镜观察沉降菌的细胞形态和结构。
五、结果判定
根据检测结果，判断食品样品是否含有沉降菌，并确定其数量和种类。
六、记录和报告
1. 对检测操作进行详细记录，包括样品处理、培养条件、观察结果等。
2. 根据检测结果，制作检测报告，并按照规定提交相关部门。
七、注意事项
1. 操作人员应按照操作规程进行操作，严格遵守操作规范和安全操作规定。
2. 显微镜等实验仪器要定期检查和维护，以确保检测的准确性和可靠性。
3. 培养基的制备和保存要符合相关要求，避免影响检测结果。
通过严格按照《沉降菌检测操作规程》进行操作，可以保障沉降菌检测的准确性和可靠性，为保障食品安全提供了重要的技术支持。
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1目的
通过对环境进行沉降菌检测，作为确认环境是否符合规定要求及改善环境的依据。
2范围
沉降菌检测
3职责
检验人员按本规程操作，实验主管监督本规程的实施。
4程序
4.1洁净（区）clean room(area)
对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使
用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
4.2洁净工作台cleaning work station
一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤
的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、
自净器等。
4.3洁净度cleanliness
洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
4.4菌落colony forming units
细菌培养后，有一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
4.5沉降菌settling microbe
用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条
件下繁殖到可见的菌落数。
4.6单向流unidirectional air flow(曾称为层流laminar flow)
沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。
4.7非单向流nonumidirectional air flow(曾称为乱流turbulent flow)
具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。
4.8静态测试at-rest test
洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）
内没有生产人员的情况下进行的测试。
4.9动态测试operational test
洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。
4.10洁净室环境要求、测试项目和频次。
见表1
表1洁净室环境要求、测试项目和频次
4.11检测流程
4.11.1检测条件
4.11.2检测仪器、设备、培养基
恒温培养箱、蒸汽高压消毒锅、电热恒温干燥箱、百级超净工作台、Φ90mm×15mm培养皿、胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。
4.11.3测试状态
静态和动态两种状态均可进行测试。
静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测
试报告中应标明测试时所采用的状态和室内测试人数。
沉降菌测试前，被测洁净室（区）
由使用者决定是否需要预先消毒。
4.11.4测试时间
测试房间时应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30分钟后开始。
对于单向流应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10分钟后开始。
4.11.5采样点
4.11.
5.1沉降菌测试最少采样点见表2。
4.11.
5.2采样点的限制
对任何小洁净室或局部空气净化区域，沉降菌采样点的数目不得少于2个。
沉降菌
在满足最少测试点的同时，还宜满足最少培养皿数。
100级操作台至少为3个皿，10000
级至少为2个，100000级至少为2个。
表2沉降菌最少采样点数目
4.11.
5.3测试区域
本公司十万级净化车间、万级无菌检测室及百级操作台。
4.11. 6 检测程序
4.11.6.1开启百级工作台紫外杀菌灯及空气过滤装置30分钟。
培养皿严格消毒。
4.11.6.2在百级工作台里将已灭菌处理过的胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）和沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）在无菌操作要求下倾注约20mL至已无菌培养皿中，待凝固后备用。
4.11.6.3沉降菌检测前，被测试洁净室（区）得温湿度须达到规定的要求，静压差、换器次数风速必须控制在规定值内。
且被测试洁净室（区）已经灭菌。
4.11.6.4采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
4.11.6.5将已制备好的培养皿按上述表4、表5的采样点逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿，使培养基表面暴露在空气中。
4.11.6.6静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时暴露时间为不大于4h。
4.11.6.7全部采样结束后，将培养皿盖好后倒置，胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）置于30～35℃恒温培养箱中培养不少于2天。
当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时，可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA），置于20～25℃霉菌培养箱中培养不少于5天。
4.11.6.8每批培养基应选定3只培养皿做空白对照培养。
以检验培养基本身是否污染。
4.11. 7菌落计数及结果计算
4.11.7.1用肉眼直接计数，然后用5至10倍的放大镜检查，是否有遗漏。
4.11.7.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可以分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.11.7.3按下式计算平均菌落数
M=(M
1＋M
2
＋…＋M
n
)/n
式中：M--平均菌落数
M
1
--1号培养皿平均菌落数
M
2
--2号培养皿菌落数
M
n
--n号培养皿菌落数
n—总数
4.11.7.4 结果评定，洁净室（区）内的平均菌落数要符合表1的要求。
若测试结果不符合表1 的规定，则需再次消毒，然后重新采样2次，测试结果均需合格。
4.11.8注意事项
4.11.8.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
4.11.8.2采取一切措施防止人为对样本的污染。
4.11.8.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.11.8.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细
观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
4.11.8.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
5 警戒限值的运用
5.1为了及时发现异常并进行原因分析和改进，确保生产过程的稳定，在表1的检测标准
的基础上，设置一个警戒限值作为内控指标，警戒限值一般为标准限值的90%（参见表3）。
5.2当环境监测结果偶尔超出警戒限值但仍在标准范围内时，通知相关责任部门的负责
人，一般不必采取纠偏措施；当监测结果连续多次超出警戒限值但仍在标准范围内时，
应及时将相应的检测报告发送给质量部经理和相关责任部门的负责人，调查分析根本原
因并采取相应的措施，评估是否需要启动SJTK/QP-8.5-03《纠正预防措施控制程序》。
表3 警戒限值
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