高中生物 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养练习

课题1

微生物的实验室培养

1．培养基

物质。

的营养生长繁殖的不同需求，配制出的供其营养物质概念：人们按照微生物对(1) 1.培养基中含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等

营养物质。

2．实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高

压蒸汽灭菌等。

3．固体培养基的配制过程为：计算―→称量―→溶

化―→灭菌―→倒平板。

4．平板划线法和稀释涂布平板法是微生物接种的常用

方法。

5．消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有

害的微生物；灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括孢

子和芽孢。

碳源

营养成分：水、无机盐、

(3)

、

氮源

、特殊营养物质

pH

，此外还要满足微生物生长对

氧气

及

的要求。

2．无菌技术

(1)

目的：获得

纯净培养物

。

(2)

关键：防止

的入侵。

外来杂菌

(3)不同对象的无菌操作方法[连线]：

1．下面是查氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分，请根据下述培养基，回答下列问题：

蔗糖15 g

(1)

提示：固体培养基。因为该培养基加入了凝固剂琼脂。

(2)该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的几类营养物质？分别是什么？

提示：4类物质。分别是碳源、氮源、无机盐和水。

(3)蔗糖提供的是哪类营养物质？NaNO3提供的是哪类营养物质？

提示：蔗糖提供的是碳源。NaNO3提供的是氮源和无机盐。

(4)在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物所需要的哪些条件？

提示：满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需要。

2．探讨培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶所采用的灭菌或消毒方法。

提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。

3．消毒与灭菌的相同点与区别分别是什么？

提示：消毒是杀灭病原微生物和有害微生物，并不要求杀灭一切活的微生物；而灭菌则是杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。

[跟随名师·解疑难]

1．培养基的成分

1．制备固体培养基

2．纯化大肠杆菌

(1)方法：

平板划线法

①

：通过接种环在

琼脂

稀

的操作，将聚集的菌种逐步

连续划线

固体培养基表面

释分散

到培养基的表面。

：将菌液进行一系列的

梯度稀释

②

稀释涂布平板法

的菌液分别涂布到

稀释度

，然后将不同

琼脂固体培养基的表面，进行培养。

37

未接种

鉴定：将接种后的培养基和一个

(2)

的培养基都放入

和

12 h

恒温箱中，培养

_

℃

24 h后，分别记录观察。

(3)菌种保存：

对于频繁使用的菌种，可以采用

甘油管

临时保藏

法；对于需要长期保存的菌种，可以采用

藏

法。

1．培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板，你用什么办法来估计培养

基的温度？

提示：可以用手触摸，感觉上以刚不烫手为准。

2．如果需要调节培养基的pH，应在哪一步骤后进行？

提示：溶化后，灭菌前。3．在用平板划线法接种大肠杆菌时，第一次划线前、每次划线前及划线操作结束后，都

要灼烧接种环，请分析其目的分别是什么。

提示：

提示：将接种后的培养基和一个未接种的培养基，都放在37 ℃恒温箱中培养，观察并记

录结果。

[跟随名师·解疑难]

1．微生物培养中有关实验操作的注意事项

(1)倒平板操作：

①培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。

②培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。

③整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。

④平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，造成污染。

⑤若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应丢弃。

(2)平板划线操作：

①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。

②灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

③划线时最后一区域不要与第一区域相连。

④划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。

2．稀释涂布平板操作(1)稀释操作时：每支试管及其中9 mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应

在离火焰1～2 cm处。

(2)涂布平板时：稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌”，应特别

注意：

①酒精灯与培养皿的距离要合适。

②吸管头不要接触任何其他物体。

③吸管要在酒精灯火焰周围使用。

3．平板划线法和稀释涂布平板法的比较

[例1]

A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源

B．除水以外的无机物仅提供无机盐

C．凡是碳源都能提供能量

D．有些无机氮源也能提供能量

[解析] 对异养型微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。如蛋白胨既是碳源又是氮源和能源，葡萄糖是碳源同时又是能源。除水以外的无机物种类繁多，如CO2和N2是无机物，但也是某些微生物的碳源和氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。NaHCO3可作为自养型微生物的碳源和无机盐。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能源。

[答案] D