病毒学-微生物学-医学微生物学实验一(6次版)
医学微生物学课程实习实验报告
医学微生物学课程实习实验报告一、实验目的通过本次实验，掌握医学微生物学的基本实验技能，了解细菌、病毒的形态结构及其生理特性，提高观察、分析问题和解决问题的能力。
二、实验原理医学微生物学是研究微生物在医学领域中的分布、分类、形态、生理、致病和免疫等方面的科学。
实验中，通过观察细菌、病毒的形态结构，研究其生理特性，从而为临床诊断和治疗提供理论依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细菌、病毒样本，染色剂，培养基等。
2. 实验仪器：显微镜，培养箱，接种环，镊子，无菌棉拭子等。
四、实验步骤1. 细菌观察：（1）制备细菌涂片；（2）革兰染色；（3）显微镜观察，记录细菌形态、大小、排列等特征。
2. 病毒观察：（1）制备病毒样本涂片；（2）荧光染色；（3）显微镜观察，记录病毒形态、大小等特征。
3. 细菌生理特性研究：（1）接种细菌于不同培养基；（2）置于培养箱中培养；（3）观察细菌生长情况，记录菌落大小、形状、颜色等特征。
4. 病毒复制与感染实验：（1）接种病毒于细胞培养液；（2）观察细胞病变情况；（3）记录病毒复制、感染过程。
五、实验结果与分析1. 细菌观察结果：通过显微镜观察，发现细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰阳性菌呈紫色，菌体较大，排列紧密；革兰阴性菌呈红色，菌体较小，排列疏松。
2. 病毒观察结果：通过荧光染色，发现病毒呈圆形或椭圆形，大小约为100-300纳米。
病毒粒子结构清晰，荧光染色剂使其发出绿色荧光。
3. 细菌生理特性研究结果：细菌在不同培养基上的生长情况各异。
例如，大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，形成较大菌落，颜色为红色；金黄色葡萄球菌在血平板上生长良好，形成较小菌落，颜色为金黄色。
4. 病毒复制与感染实验结果：病毒接种于细胞培养液后，细胞出现病变现象，如细胞体积增大、细胞膜破裂等。
通过观察病毒复制、感染过程，可以了解病毒的生物学特性。
六、实验结论通过本次实验，掌握了医学微生物学的基本实验技能，对细菌、病毒的形态结构及其生理特性有了更深入的了解。
《医学微生物》课件
常见医学细菌的分类与特点
01Leabharlann 020304
革兰氏阳性菌
具有厚重的细胞壁，对青霉素 敏感，如葡萄球菌、链球菌等
。
革兰氏阴性菌
具有较薄的细胞壁，对青霉素 不敏感，如大肠杆菌、沙门氏
菌等。
厌氧菌
在缺氧环境中生存，如破伤风 梭菌、产气荚膜梭菌等。
分枝杆菌
生长缓慢，如结核分枝杆菌、 麻风分枝杆菌等。
细菌的致病机制
疱疹病毒
分为单纯疱疹病毒和EB病毒等，主 要通过直接接触传播，引起疱疹。
HIV病毒
攻击人体免疫系统，导致艾滋病。
病毒的复制与传播
病毒的复制过程
吸附、侵入、复制、组装和释放。
传播方式
空气传播、接触传播、血液传播、母婴传播等。
病毒的致病机制与症状
致病机制
病毒侵入人体后，会利用人体的细胞进行复制，导致细胞死亡或功能异常。
抗菌药物使用
合理使用抗菌药物，避免滥用和过度使用。
个人卫生习惯
保持良好的个人卫生习惯，如勤洗手、戴口 罩等，减少细菌性传染病的传播风险。
03
医学病毒学
常见医学病毒的分类与特点
流感病毒
分为A、B、C三种类型，主要通过飞 沫传播，引起流行性感冒。
肝炎病毒
分为甲、乙、丙、丁、戊五种类型， 主要通过血液、体液传播，引起肝炎 。
真菌性疾病的预防与治疗
预防
保持个人卫生，避免接触污染水源和环境，加强免疫力等措施可预防真菌感染。
治疗
抗真菌药物是治疗真菌性疾病的主要手段，包括唑类、丙烯胺类等抗真菌药物，也可采用中药治疗和物理治疗等 方法。
05
医学微生物学实验技术
微生物的分离与培养
医学微生物学(卫生部规划教材第6版)电子教案
医学微生物学（卫生部规划教材第6版）电子教案第一章绪论第一节微生物及病原微生物微生物:存在于自然界中，个体微小，结构简单，肉眼直接看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观察到的微小生物。
微生物的种类非细胞型微生物原核细胞型微生物真核细胞型微生物核酸（DNA/RNA）非细胞型微生物如：病毒（virus）蛋白质核质原核细胞型微生物细胞膜细胞壁如：细菌(Bacterium)衣原体(Chlamydia)支原体(Mycoplasma)立克次体(Rickettsia)螺旋体(Spirochete)放线菌(Actinomycete)细胞核真核细胞型微生物细胞质如：真菌(fungus)细胞膜细胞器微生物及人类的关系益参及自然界中C、N、S等元素的循环。
农业方面：杀虫、造肥、固氮……工业方面：食品发酵、石油脱蜡……医药方面：制药、正常菌群……害引起人类及动植物病害导致工业产品、农副产品和生活用品的腐烂和霉烂。
第二节医学微生物学一、微生物学(microbiology)是研究微生物的类型、分布、形态、结构、代谢、生长繁殖、遗传、进化，以及及人类、动植物等相互关系的科学。
二、医学微生物学发展史1.实验微生物学时期------微生物的发现及病原微生物学的建立Leeuwenhoek----显微镜Pasteur----巴氏消毒法Koch----分离细菌，郭霍法则Iwanovsky----烟草花叶病毒Loeffler,Frosch----口蹄疫病毒Walter-Reed----黄热病毒Twort----噬菌体2.实验微生物学时期---抗感染免疫、化学疗法及抗生素的发现Jenner----牛痘预防天花Pasteur----霍乱、炭疽、狂犬疫苗Behring----白喉抗毒素меЧНИкоВИИ----吞噬细胞学说Ehrlich----体液抗体学说Wright----体液免疫、细胞免疫Ehrlich----砷凡纳明Fleming，Florey----青霉素3.现代微生物学时期（1）新病原微生物的发现 :朊病毒，军团菌，幽门螺杆菌，人类免疫缺陷病毒，疯牛病，埃博拉病毒，冠状病毒，禽流感H5N1（2）病原微生物致病性的认识内源性感染，细菌耐药性，分子水平上的致病机制的研究……（3）微生物学诊断技术快速、准确、简易 ELISA，PCR……（4）微生物的防治措施新型疫苗的研制 : 核酸疫苗，基因工程疫苗……(周亚滨)第一篇微生物学的基本原理第二章微生物的生物学性状第一节细菌一、细菌的大小及形态1.细菌的大小 ------观察仪器：光学显微镜测量单位：微米(μm)球菌(coccus)2.细菌的形态----- 杆菌(bacillus)螺形菌(spiral bacterium)二、细菌的基本结构（一）、细胞壁(cell wall)------位于细菌细胞的最外层，包绕在细胞膜的周围，组成较复杂，并随不同细菌而异。
医学微生物学病毒学整理
呼吸道病毒
附注：
（1）正黏病毒包膜上的两种刺突
（2）麻疹病毒的致病机制：
麻疹病毒经呼吸道进入机体f感染麻疹病毒受体CD46分子的靶细胞，在其中增殖一侵入淋巴结增殖一入血（第一次病毒血症）f同时病毒在全身淋巴组织中大量增殖后再次入血（第二次病毒血症）f出现上呼吸道卡他症状（发热、病毒感染结膜、鼻咽黏膜和呼吸道黏膜引起）
f病愈后一周，0.1%的患者可以发生迟发型过敏反应疾病，引起脑脊髓炎，伴有永久后遗症，病死率为15%。
f恢复后数年或学龄前，百万分之一的患者可以发生亚急性硬化性全脑炎（SSPE）,为急性病毒感染的迟发并发症，表现为渐进性大脑衰退，一般在1-2年内死亡。
（3）冠状病毒：
1、非分节段的单正链RNA
2、普通感冒和咽喉炎、严重急性呼吸道综合征
3、无疫苗
4、基因组最大的RNA病毒
肠道病毒
无包膜的小RNA 病毒，衣壳为二十面体立体对称，基因组为单正链RNA 。
能在有相应病毒识别受体的易感细胞中增殖，迅速产生病变 对理化因素抵抗力较强，对酸具有一定的抵抗力，能耐受蛋白酶和胆汁的作用，对乙醚、 去垢剂有一定抗性。
免疫力持续时间短
共同特征: 1、
2、
3、
急性胃肠炎病毒
虫媒病毒
指通过吸血的节肢动物叮咬易感的脊椎动物而传播疾病的病毒。
①病毒能在节肢动物体内增殖，并可经卵传代。
因此节肢动物既是病毒的传播媒介，又是储存宿主。
②大多数是自然疫源性疾病，也是人畜共患病。
③明显的地方性和季节性。
其余病毒。
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
医学微生物学实验课件
医学微生物学实验课件xx年xx月xx日contents •实验准备•细菌的分离与培养•细菌的鉴定•病毒的分离与鉴定•医学寄生虫实验•医学微生物学实验总结目录01实验准备1 2 3通过本次实验，学生将学习到微生物学实验的基本技能，包括实验操作、显微观察、分离培养等。
掌握微生物学实验基本技能通过实验过程中的生理生化反应，学生将了解微生物的生理生化特性，初步掌握微生物分类鉴定的基本方法。
了解微生物的生理生化特性通过本次实验，学生将了解微生物在医学中的应用，包括致病微生物的检测、防治和免疫等方面的应用。
认识微生物在医学中的应用微生物学实验基本原理微生物学实验的基本原理包括显微镜技术、无菌技术、分离培养技术、生理生化反应等。
这些技术的基本原理是进行微生物学实验的基础。
微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应是微生物学实验中的重要内容。
通过观察和测定微生物的生理生化反应，可以初步鉴定微生物的种类和特性。
微生物在医学中的应用微生物在医学中有着广泛的应用，例如致病微生物的检测、防治和免疫等。
通过本次实验，学生将了解这些应用的基本原理和方法。
实验前的准备包括实验器材和试剂的准备、实验室环境的消毒等。
分离培养将样品接种在适宜的培养基上，分离培养出特定的微生物。
样品采集和预处理根据实验目的和要求采集样品，并对样品进行预处理，以备后续实验使用。
生理生化反应将分离培养出的微生物接种在适宜的生理生化反应管中，观察和记录微生物的生理生化反应结果。
显微观察将样品制成涂片或压片，在显微镜下观察微生物的形态和结构。
数据分析和总结对实验数据进行整理和分析，得出结论，并撰写实验报告。
实验步骤02细菌的分离与培养选择适合细菌生长的培养基，通常包含碳源、氮源、无机盐、水等。
培养基成分按照规定的步骤，将所需成分按比例混合、溶化、调PH值、过滤、分装等步骤制备成培养基。
制备流程确保培养基的质量和无菌，需要进行灭菌处理和细菌学检测。
质量控制培养基制备根据不同的分离要求，可采用划线分离法、稀释分离法、组织研磨法等。
医学微生物学实验
实验安全
强调实验室安全意识，包括生物安全级别和规范 的操作流程等方面。
染色技术，区分细菌的革兰阳性与革兰阴性特性。
2
酸速染色法
酸速染色法用于检测抗酸杆菌，如结核分枝杆菌。
3
苏木精-伊红染色法
苏木精-伊红染色法用于检测真菌和某些细菌，如假单胞菌。
培养物鉴定
1
形态特征
观察培养物的形态特征，如菌落大小、
尿液培养
将尿液培养在含有指 示性培养基的平板上， 观察、计数和鉴定细 菌的性质。
粪便培养
将粪便涂在不同的培 养基上培养，检测其 中的细菌和寄生虫， 进行微生物分析。
伤口培养
通过采集伤口分泌物 并培养在适当的培养 基上，鉴定和测定其 中的病原微生物。
医学微生物学简介
医学微生物学是研究与医学相关的微生物特性、生命周期、传播途径、致病 机制以及与宿主之间的相互作用的学科。
实验综述
步骤概览
了解医学微生物学实验的主要步骤和流程，为后 续的实验准备打下基础。
实验材料
介绍医学微生物学实验中常用的培养基、液体培 养物、试剂和工具。
实验设备
介绍用于医学微生物学实验的设备，包括显微镜、 培养箱和培养皿。
血清抗体检测
1
AG凝集试验
使用抗原和抗体进行凝集反应，检测体内是否产生相应抗体。
2
ELISA检测
通过酶标记的抗体和底物的反应，检测体液中的特定抗体含量。
3
免疫沉淀反应
将抗体和抗原结合形成沉淀物，通过眼睛观察或测定沉淀的形成。
血液、尿液、粪便和伤口培养及显微镜分 析
血液培养
利用适当培养基检测 血液中的细菌感染， 并通过显微镜分析细 菌的形态和数量。
医学微生物学课件病毒学
丙型肝炎病毒感染
病毒特性
丙型肝炎病毒属于黄病毒科，为单股正链RNA病 毒。
传染性
丙型肝炎病毒主要通过血液传播，如输血、注射 、共用注射器等。
危害性
丙型肝炎病毒感染可导致慢性肝炎、肝硬化、肝 癌等，且病程较长，容易慢性化。
人乳头瘤病毒感染
病毒特性
01
人乳头瘤病毒属于乳头瘤病毒科，为无包膜的圆形或卵圆形
针对新发病毒的防控措施与展望
加强国际合作
各国政府应加强国际合作，共 同应对新发病毒感染的挑战。
提高公众意识
加强公众对新发病毒感染的认 识，提高防范意识和自我保护
能力。
展望未来
对新发病毒感染的防控，需要 加强病毒监测和预警，深入研 究病毒的生物学特性和致病性
，提高防控能力和水平。
06
病毒感染研究的前沿技术与方法
疫苗研究
针对不同病毒，研究制备高效、安全、廉价的疫苗，提高疫苗接种覆盖率和接种 质量。
04
常见病毒感染及其危害
流行性感冒病毒感染
病毒特性
流行性感冒病毒属于正黏病毒科 ，呈球形或丝状，具有血凝素和 神经氨酸酶。
传染性
流感病毒具有较强的传染性，主 要通过飞沫传播，人群普遍易感 。
危害性
流感病毒感染可引起高热、头痛 、咳嗽、喉咙痛、肌肉疼痛、乏 力等症状，严重时可导致肺炎、 心肌炎等并发症，甚至死亡。
病毒颗粒进入细胞后，衣壳释放病 毒核酸并进入细胞质。
病毒基因表达
病毒核酸在细胞内表达病毒蛋白质 和复制病毒核酸。
病毒装配和释放
病毒蛋白质和核酸在细胞内装配成 完整的病毒颗粒，并通过细胞膜或 胞吐作用释放。
宿主的抗病毒防御机制
先天性免疫应答
医学微生物学实验
无菌操作技术是微生物学实验中的基本技能之一，包括无菌操作前准备、无菌操作过程和无菌操作后处理三个 环节。无菌操作前应对实验室和仪器进行消毒处理，穿戴专用的实验服和手套，实验过程中应避免直接接触样 品和培养基，使用过的器械应及时清洗和消毒。
细菌染色技术
总结词
了解细菌染色的原理和方法，掌握常用的细菌染色技术和应用场景。
详细描述
病毒分离与鉴定技术是医学微生物学实验中 重要的研究方向之一，通过对病毒的分离和 鉴定可以了解病毒的生物学特性和致病机制 ，为疾病的预防和治疗提供科学依据。常用 的病毒分离与鉴定技术包括细胞培养法、动 物接种法、分子生物学方法等，不同的方法
具有不同的优缺点和应用范围。
THANKS
谢谢您的观看
灭菌方法
采用高压蒸汽灭菌法，将培养基放入高压锅中加热至121℃保持20-30分钟， 以杀灭培养基中的所有微生物。
真菌的分离和纯化
样品采集
从临床样本、环境样本等采集真菌，使用无菌技 术进行操作。
分离方法
将采集的样本接种于真菌培养基上，观察菌落的 形态和颜色等特征，分离出不同的真菌菌落。
纯化方法
采用划线分离法或稀释分离法，将菌落纯化至单 个菌落，获得纯培养物。
02
通过病毒在特定细胞系或动物模型中的感染、复制和致病特点
，进一步确定病毒的种类和亚型。
分子生物学鉴定
03
利用病毒基因组的特异性序列，通过PCR、测序等技术对病毒
进行分子水平的鉴定。
病毒的致病性和防治措施
致病性
不同病毒的致病性各不相同，可引起急性或慢性感染，甚至 导致死亡。了解病毒的致病机制有助于预防和治疗。
总结词
细菌学检查是通过培养、分离、鉴定病原体，为临床诊断和 治疗提供依据。
医学微生物学实验指导
微生物学各论自学提纲……………………………………………59
第二篇医学免疫学
实验一天然免疫功能的检测（综合性实验）……………………60
实验二常见抗原抗体反应（综合性实验）………………………67
实验三细胞免疫检测I：细胞因子的检测（设计性实验）………86
1．皮肤破损：先除去异物，用生理盐水或蒸馏水洗净后，涂2 %红汞或2 %碘酊。
2．烧伤：局部涂凡士林、5 %鞣酸或2 %苦味酸。
3．化学药品腐蚀伤：强酸--先用大量清水冲洗，再用碳酸氢钠溶液洗涤中和。强碱--先用大量清水冲洗，再用5 %硼酸溶液洗涤中和。如受伤处为眼部，经上述步骤处理后，用橄榄油或液体石蜡1～2滴滴眼。
三、细菌动力的观察（悬滴法）
许多杆菌、弧菌具有鞭毛，有动力，在液体中能从一个地方较快速地移动到另一个地方。一般球菌无鞭毛，没有动力，但受到所处环境中液体分子的冲击而仅呈位置变更不大的颤动。
四、电镜观察细菌的菌毛
电子显微镜是根据电子光学原理，用电子束和电子透镜代替光束和光学透镜，使物质的细微结构在非常高的放大倍数下成像的仪器。
第二篇医学免疫学
实践教学是课程建设的重要环节，培养和提高学生的综合素质与创新能力重要途径。在免疫学实验教学中我们大力改革实验教学的形式和内容，将免疫学的16学时实验内容分为两大部分，第一部分为综合性实验，包括了解天然免疫的组成与生物学功能的检测；常见体液免疫检测指标的设计，使学生能较熟练应用基本的免疫学实验技术，能针对不同的临床病例开展相关免疫学项目的基本检测，并对检测结果进行合理的临床解释和分析。为了学生既能适应一般临床与科研工作，又具有一定的创新工作能力。第二部分我们开设设计性实验：市场有某一生物制剂有免疫增强作用，请设计实验方案证实。在这部分内容要求同学们初步掌握从不同角度证实某产品有免疫增强作用的实验设计，掌握与了解常见细胞免疫的检测技术和应用（ELISA检测细胞因子）、免疫标记技术的种类、原理、特点、应用、淋巴细胞分离记数技术、淋巴细胞增殖等实验。
医学微生物学实验(一)课件
球菌 ( coccus )
杆菌( bacillus )
螺形菌(spiral bacterium)
弧菌：一个弯曲
螺菌：多个弯曲
细菌的特殊结构
荚膜、鞭毛、芽胞、菌毛
荚膜(capsule)
细胞壁外的黏液性物质 1、组成：多数为多糖，少数是多肽 2、功能：
A 抗吞噬作用 --重要毒力因子
B 粘附作用 --与感染有关
C潴留水分 --抗损伤作用
鞭毛(flagellum)
菌体表面的细长并呈波状弯曲的丝状物。 鞭毛的功能：
1、运动 2、与致病性有关，如穿过粘液层 3、细菌的分类鉴定，具有抗原性
芽胞(endospore, spore) G+菌
1、形成： 内因——芽胞基因决定 外因——环境条件
2、结构：保存细菌全部生命必需物质： 即完整的核质、酶系统和合成菌体组分的结构
不仅菌落形态发生变异，生理特性也改变，一般光 滑型细菌毒力强；粗糙型细菌毒力减退或无毒力。 （示教平板）
菌落变异（S→R变异）
光滑型菌落
粗糙型菌落
细菌生化反应
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或 多或少的各有区别，可供鉴别细菌。用生化 试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用 及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之 为细菌的生化反应。
细菌生化反应 ຫໍສະໝຸດ 用酸碱指示剂：名称 中性红
酚红 酸性复红 溴甲酚紫
酸色 红 黄 红 黄
中性色 红 红 黄 紫
碱色 黄 红 黄 紫
1、糖发酵试验
由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类的分解 能力不尽相同
产酸产气：指示剂变色，小倒管内有气泡 以＋ 表示
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告实验目的本实验旨在通过对微生物的观察和鉴定，了解微生物的形态特征和生理特性，培养学习医学微生物学基本实验技术。
实验材料与方法1. 实验材料•活菌培养基•微生物培养物（包括葡萄球菌、大肠杆菌等）•显微镜和玻片•消毒液和消毒棉球•培养皿和接种环2. 实验方法步骤一：准备工作1.每个实验者佩戴好实验室服装，戴上口罩和手套，保证实验操作的无菌环境。
2.准备洁净的实验台面和所需实验器具。
步骤二：微生物培养1.取一块洁净的玻璃钢笔杆，在一盖玻片上滴一滴细菌液体培养物。
2.将滴有细菌液体的玻片倒置在洁净的培养皿内，并将盖玻片放在培养皿内，避免细菌液体外溢。
3.用接种环将细菌液体均匀地涂抹在活菌培养基上。
4.将培养皿盖好，放入恒温培养箱中，在适当的温度下培养。
步骤三：观察和鉴定1.取出培养好的菌落，放在显微镜的载玻片上。
2.用显微镜先进行低倍观察，调整镜头至清晰度适中，观察菌落的整体形态和颜色特征。
3.然后切换到高倍观察，观察菌落的细胞形态、大小和排列方式。
4.若有需要，还可以进行染色等特定试验，以进一步鉴定菌落的类型。
步骤四：记录和总结1.将观察到的菌落形态特征和鉴定结果记录在实验笔记上，包括颜色、形状、大小和排列等。
2.根据观察和鉴定的结果，总结各种微生物的形态特征和生理特性。
3.进行实验结果的讨论和思考，与其他实验者交流经验和观点。
实验结果与讨论经过实验观察和鉴定，我们成功培养并观察到了不同种类的微生物菌落。
通过低倍和高倍显微镜观察，我们发现不同菌落之间存在明显的形态差异。
有些菌落呈现出圆形，有些呈现出不规则的形状。
菌落颜色也有所不同，有的呈现出乳白色，有的呈现出黄色或粉红色。
在菌落的细胞形态观察中，我们发现一些细菌呈现出链状排列，而另一些呈现出聚集在一起的形态。
细菌的大小也存在差异，有些较为粗大，有些较为纤细。
根据我们的观察和鉴定结果，我们可以初步确定观察到的菌落为不同种类的细菌。
这些微生物的形态特征和生理特性可能与它们的菌属和菌种有关。
病毒学-微生物学-医学微生物学实验一(6次版)
• 医学意义
芽胞 菌体
炭疽杆菌（示芽胞）
取材：纯培养物 染色法：革兰染色 放大倍数：10X100
4. 菌 毛
• 概念 • 在光镜下看不见，使用电镜才能观察到
• 分类：普通菌毛和性菌毛
• 医学意义
大肠埃希菌的普通菌毛和性菌毛 （透射电镜 ×42500)
三、革兰氏染色法
常用染色方法
单染法： 一种染料使细菌着色，如美蓝和复红染色；
改细旋钮调节至物像清晰 注意
标本面要朝上
为什么镜检任何标本都要先用低倍镜观察？
（三）高倍镜观察
操作要点
低倍镜转换高倍镜（40x ）
适当调节细螺旋即可看到物像 注意
忌使用粗螺旋，为什么？ 此时勿加石蜡油，为什么？
（四）油镜观察
操作要点
1.滴油（不要抹散开） 2.转换为油镜头，使其浸入石蜡油 3.调节细螺旋即可找到物像 4.玻片处理：一次性玻片勿冲洗，直接放入回收器皿
（一） 细菌的基本形态
1．球菌： 葡萄球菌(葡萄状排列) 链球菌 (链状排列) 脑膜炎奈瑟菌(成双排列)
2．杆菌： 大肠杆菌、枯草杆菌等
3．螺形菌：
螺
霍乱弧菌等
菌
弧 菌
（二）细菌的特殊结构
1. 荚 膜
• 荚膜与微荚膜概念 • 产生 • 功能
肺炎链球菌（示荚膜）
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
5、爱护实验器材，实验用过的器材放置指定位置，实验室仪 器不得乱摸乱碰；实验自阅玻片标本损坏10元/张；
6、实验完毕后，整理实验台，值日生负责室内卫生，并负责 关门、关窗、关水、关电（冰箱/培养箱除外）。
《微生物学实验》考核
微生物学：医学微生物学实验
用于分离肠道致病菌
四、双糖铁培养基
l 成分
含酚红指示剂的pH7.6的蛋白胨水 500mL 琼脂(1.3%) 6.5g 乳糖(1%) 5g 葡萄糖(0.1%) 0.5g 硫酸亚铁铵(0.02%) 0.1g 硫代硫酸钠(0.02%) 0.1g
l 原理 l 用途
初步鉴别肠道杆菌
l 原理
肥达实验
人感染伤寒或副伤寒沙门菌后，经过一定的时
l 入院查体：T 39.5℃，P 150次/分，R 50次/分，BP 100/60 mmHg。发育一般，体质瘦弱，营 养差，痛苦面容，贫血貌，被迫卧位，右腿蜷曲，神志清，查体不合作。右额部可见一大小为 1×1 cm大小的硬结，表面及周围皮肤发红，有结痂。双下肢皮肤可见多个0.5×0.5cm褐色斑 疹，口唇发绀，张口呼吸，气管居中，颈软，双肺呼吸音粗，未闻及干湿罗音，心界不大，心 率150次/分，心音低钝，律齐，腹平软，肝脾未扪及。右股部肿胀，表面不红，触痛明显，无 波动感，髋关节处无红肿，压痛明显，被迫制动。
细菌代谢产物检查，数码鉴定
一、糖发酵试验
原理
结果判定
培养基变红色
阳性，记为+
培养基变红色，试管内有气泡
阳性，记为 +
指示剂不变色
阴性，记为-
二、IMViC I 靛基质(吲哚)产生试验
原理 结果判定
加入试剂后，试剂与培养基液面接触处出现红色→阳性 加入试剂后，液面接触处无颜色变化→阴性
M 甲基红试验
l 实验室检查结果：WBC 14.6×109/L，Neutrophil 91%，Lymphocyte 8%，Monocyte 1%。RBC 2.9×1012/L，Hb 84g/L。
l 问题： 1．患者的各种症状、查体及实验室检查结果中，哪些属于异常表现？ 2．患者最可能的初步临床诊断是什么？有哪些疾病需作鉴别诊断？ 3．该患者还需要做哪些检查以帮助诊断？ 4．可采集哪些标本？可用什么可靠的病原学检查作进一步确诊？
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G-杆菌
作业
第1页：实验内容
1、显微镜的使用操作及注意事项 2、细菌的形态和特殊结构观察：
（1）自阅片：变形杆菌（示鞭毛） （2）示教片：肺炎链球菌（示荚膜）、炭疽杆菌（示芽胞） 3、革兰染色法（自做）
第2页：
细菌特殊结构：绘图
第3页：
革兰染色法完全实验报告 （实验目的、原理、材料、步骤、结果、分析、结论）
（一）观察前准备
1. 显微镜拿取 左手托镜座，右手握镜臂
2. 调节通光量
使用油镜时，为使通光量最大，可采用：
1）光圈开到最大； 2）聚光器上升到最高； 3）控制光源强度（双目镜）或转动凹面反光镜（单目 镜），使视野的光照达到最明亮均匀。
（二）低倍镜观察
操作要点 先用粗旋钮使载物台上升至最高
下降载物台至物像出现
荚膜 菌体
鞭毛 菌体
芽胞 菌体
肺炎链球菌（示荚膜） 变形杆菌（示鞭毛） 炭疽杆菌（示芽胞）
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
取材：纯培养物 染色法：鞭毛染色 放大倍数：10X100
取材：纯培养物 染色法：革兰染色 放大倍数：10X100
细菌的特殊结构
2、实验材料为病原微生物，具有感染性 1）穿好白大衣，除必要的书籍、记录本及文具外，其他 个人用品不得带入实验室； 2）实验室禁食，未经许可严禁将实验材料带出实验室
3、上课认真听讲，严禁玩手机、接电话、听音乐及其它教学 无关行为；
4、按照实验要求，认真积极完成实验，有些实验需第二天观 察结果，要求同学们亲自观察，并详细记录结果，完成实 验报告；
复染法： 两种或两种以上染料染色，有助于鉴别细菌，
如革兰染色法和抗酸染色法。
【原理】
渗透性学说：两类细菌的细胞壁成分和结构差异
G+菌：
肽聚糖多 交联度大
脂类含量低
结晶紫 卢戈碘液
酒精 复红
G-菌： 脂类含量高 肽聚糖少
【材料】
1. 葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。 2. 革兰染色液。 3. 载玻片、接种环、酒精灯等。
【步骤】
涂片制作
涂片：注意无菌操作
干燥
固定
染色
各实验室老师具体指导
染色
初染：结晶紫染液染 1min
水洗，甩干
媒染：卢戈氏碘液染1min
水洗，甩干
脱色： 酒精脱色约30s，关键步骤！
水洗，甩干
复染： 复红染液染1min
水洗，甩干
印干
油镜检
【结果】
G+球菌
革兰染色结果 取材：混合菌液 放大倍数：10X100
（一） 细菌的基本形态
1．球菌： 葡萄球菌(葡萄状排列) 链球菌 (链状排列) 脑膜炎奈瑟菌(成双排列)
2．杆菌： 大肠杆菌、枯草杆菌等
3．螺形菌：
螺
霍乱弧菌等
菌
弧 菌
（二）细菌的特殊结构
1. 荚 膜
• 荚膜与微荚膜概念 • 产生 • 功能
肺炎链球菌（示荚膜）
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
荚膜 菌体
2. 鞭 毛（Flagllum）
• 概念 • 数目、位置和排列可不同 • 鞭毛是细菌的运动器官 • 医学意义
所有弧菌和螺菌都有鞭毛
单毛菌 双毛菌 丛毛菌 周毛菌
变形杆菌（示鞭毛）
取材：纯培养物 染色法：鞭毛染色 放大倍数：10X100
鞭毛 菌体
3. 芽 胞
• 概念 • 形状、直径、位置随菌种而不同 • 形成条件 • 非细菌的繁殖体
改细旋钮调节至物像清晰 注意
标本面要朝上
为什么镜检任何标本都要先用低倍镜观察？
（三）高倍镜观察
操作要点
低倍镜转换高倍镜（40x ）
适当调节细螺旋即可看到物像 注意
忌使用粗螺旋，为什么？ 此时勿加石蜡油，为什么？
（四）油镜观察
操作要点
1.滴油（不要抹散开） 2.转换为油镜头，使其浸入石蜡油 3.调节细螺旋即可找到物像 4.玻片处理：一次性玻片勿冲洗，直接放入回收器皿
《医学微生物学》实验（一）
南华大学病原学实验中心 南华大学医学微生物学教研室
实验内容
一、显微镜的使用及注意事项 二、细菌的基本形态和特殊结构观察
1.自阅片：炭疽芽胞杆菌（示芽胞） 、变形杆菌（示鞭毛） 2. 示教片：肺炎链球菌（示荚膜）
三、革兰染色法（自做）
实验室规则
微生物学实验要求
1、微生物无处不在，故要树立有菌观念，实验过程要无菌 操作;
5、爱护实验器材，实验用过的器材放置指定位置，实验室仪 器不得乱摸乱碰；实验自阅玻片标本损坏10元/张；
6、实验完毕后，整理实验台，值日生负责室内卫生，并负责 关门、关窗、关水、关电（冰箱/培养箱除外）。
《微生物学实验》考核
见Word文档：实验考核要求 请点击此处
一、显微镜的使用操作及注意事项
显 微 镜 的 使 用
5.镜头擦拭：擦拭时沿一个方向，勿来回或旋转擦，限取 2张擦镜纸擦拭2遍。
6.还原各部分 7.填写显微镜使用登记表
注意
通光量应最大 油镜头须浸入油中 不可使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转 如石蜡油不慎沾染高倍镜头应立即用擦镜纸直接拭 去, 擦拭时沿一个方向，勿来回或旋转擦
二、细菌的形态和特殊结构观察
• 抵抗力强
• 医学意义
芽胞 菌体
炭疽杆菌（示芽胞）
取材：纯培养物 染色法：革兰染色 放大倍数：10X100
4. 菌 毛
• 概念 • 在光镜下看不见，使用电镜才能观察到
• 分类：普通菌毛和性菌毛
• 医学意义
大肠埃希菌的普通菌毛和性菌毛 （透射电镜 ×42500)
三、革兰氏染色法
常用染色方法
单染法： 一种染料使细菌着色，如美蓝和复红染色；