病毒学-微生物学-医学微生物学实验一(6次版)
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《医学微生物学》实验（一）
南华大学病原学实验中心 南华大学医学微生物学教研室
实验内容
一、显微镜的使用及注意事项 二、细菌的基本形态和特殊结构观察
1.自阅片：炭疽芽胞杆菌（示芽胞） 、变形杆菌（示鞭毛） 2. 示教片：肺炎链球菌（示荚膜）
三、革兰染色法（自做）
实验室规则
微生物学实验要求
1、微生物无处不在，故要树立有菌观念，实验过程要无菌 操作;
改细旋钮调节至物像清晰 注意
标本面要朝上
为什么镜检任何标本都要先用低倍镜观察？
（三）高倍镜观察
操作要点
低倍镜转换高倍镜（40x ）
适当调节细螺旋即可看到物像 注意
忌使用粗螺旋，为什么？ 此时勿加石蜡油，为什么？
（四）油镜观察
操作要点
1.滴油（不要抹散开） 2.转换为油镜头，使其浸入石蜡油 3.调节细螺旋即可找到物像 4.玻片处理：一次性玻片勿冲洗，直接放入回收器皿
复染法： 两种或两种以上染料染色，有助于鉴别细菌，
如革兰染色法和抗酸染色法。
【原理】
渗透性学说：两类细菌的细胞壁成分和结构差异
G+菌：
肽聚糖多 交联度大
脂类含量低
结晶紫 卢戈碘液
酒精 复红
G-菌： 脂类含量高 肽聚糖少
【材料】
1. 葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。 2. 革兰染色液。 3. 载玻片、接种环、酒精灯等。
（一）观察前准备
1. 显微镜拿取 左手托镜座，右手握镜臂
2. 调节通光量
使用油镜时，为使通光量最大，可采用：
1）光圈开到最大； 2）聚光器上升到最高； 3）控制光源强度（双目镜）或转动凹面反光镜（单目 镜），使视野的光照达到最明亮均匀。
（二）低倍镜观察
操作要点 先用粗旋钮使载物台上升至最高
下降载物台至物像出现
（一） 细菌的基本形态
1．球菌： 葡萄球菌(葡萄状排列) 链球菌 (链状排列) 脑膜炎奈瑟菌(成双排列)
2．杆菌： 大肠杆菌、枯草杆菌等
3．螺形菌：
螺
霍乱弧菌等
菌
弧 菌
（二）细菌的特殊结构
1. 荚 膜
• 荚膜与微荚膜概念 • 产生 • 功能
肺炎链球菌（示荚膜）
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
【步骤】
涂片制作
涂片：注意无菌操作
干燥
固定
染色
各实验室老师具体指导
染色
初染：结晶紫染液染 1min
水洗，甩干
媒染：卢戈氏碘液染1min
水洗，甩干
脱色： 酒精脱色约30s，关键步骤！
水洗，甩干
复染： 复红染液染1min
水洗，甩干
印干
油镜检
【结果】
G+球菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
革兰染色结果 取材：混合菌液 放大倍数：10X100
• 抵抗力强
• 医学意义
芽胞 菌体
炭疽杆菌（示芽胞）
取材：纯培养物 染色法：革兰染色 放大倍数：10X100
4. 菌 毛
• 概念 • 在光镜下看不见，使用电镜才能观察到
• 分类：普通菌毛和性菌毛
• 医学意义
大肠埃希菌的普通菌毛和性菌毛 （透射电镜 ×42500)
三、革兰氏染色法
常用染色方法
单染法： 一种染料使细菌着色，如美蓝和复红染色；
荚膜 菌体
鞭毛 菌体
芽胞 菌体
肺炎链球菌（示荚膜） 变形杆菌（示鞭毛） 炭疽杆菌（示芽胞）
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
取材：纯培养物 染色法：鞭毛染色 放大倍数：10X100
取材：纯培养物 染色法：革兰染色 放大倍数：10X100
细菌的特殊结构
5.镜头擦拭：擦拭时沿一个方向，勿来回或旋转擦，限取 2张擦镜纸擦拭2遍。
6.还原各部分 7.填写显微镜使用登记表
注意
通光量应最大 油镜头须浸入油中 不可使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转 如石蜡油不慎沾染高倍镜头应立即用擦镜纸直接拭 去, 擦拭时沿一个方向，勿来回或旋转擦
二、细菌的形态和特殊结构观察
5、爱护实验器材，实验用过的器材放置指定位置，实验室仪 器不得乱摸乱碰；实验自阅玻片标本损坏10元/张；
6、实验完毕后，整理实验台，值日生负责室内卫生，并负责 关门、关窗、关水、关电（冰箱/培养箱除外）。
《微生物学实验》考核
见Word文档：实验考核要求 请点击此处
一、显微镜的使用操作及注意事项
显 微 镜 的 使 用
2、实验材料为病原微生物，具有感染性 1）穿好白大衣，除必要的书籍、记录本及文具外，其他 个人用品不得带入实验室； 2）实验室禁食，未经许可严禁将实验材料带出实验室
3、上课认真听讲，严禁玩手机、接电话、听音乐及其它教学 无关行为；
4、按照实验要求，认真积极完成实验，有些实验需第二天观 察结果，要求同学们亲自观察，并详细记录结果，完成实 验报告；
G-杆菌
作业
第1页：实验内容
1、显微镜的使用操作及注意事项 2、细菌的形态和特殊结构观察：
（1）自阅片：变形杆菌（示鞭毛） （2）示教片：肺炎链球菌（示荚膜）、炭疽杆菌（示芽胞） 3、革兰染色法（自做）
第2页：
细菌特殊结构：绘图
第3页：
革兰染色法完全实验报告 （实验目的、原理、材料、步骤、结果、分析、结论）
荚膜 菌体
2. 鞭 毛（Flagllum）
• 概念 • 数目、位置和排列可不同 • 鞭毛是细菌的运动器官 • 医学意义
所有弧菌和螺菌都有鞭毛
单毛菌 双毛菌 丛毛菌 周毛菌
变形杆菌（示鞭毛）
取材：纯培养物 染色法：鞭毛染色 放大倍数：10X100
鞭毛 菌体
3. 芽 胞
• 概念 • 形状、直径、位置随菌种而不同 • 形成条件 • 非细菌的繁殖体
南华大学病原学实验中心 南华大学医学微生物学教研室
实验内容
一、显微镜的使用及注意事项 二、细菌的基本形态和特殊结构观察
1.自阅片：炭疽芽胞杆菌（示芽胞） 、变形杆菌（示鞭毛） 2. 示教片：肺炎链球菌（示荚膜）
三、革兰染色法（自做）
实验室规则
微生物学实验要求
1、微生物无处不在，故要树立有菌观念，实验过程要无菌 操作;
改细旋钮调节至物像清晰 注意
标本面要朝上
为什么镜检任何标本都要先用低倍镜观察？
（三）高倍镜观察
操作要点
低倍镜转换高倍镜（40x ）
适当调节细螺旋即可看到物像 注意
忌使用粗螺旋，为什么？ 此时勿加石蜡油，为什么？
（四）油镜观察
操作要点
1.滴油（不要抹散开） 2.转换为油镜头，使其浸入石蜡油 3.调节细螺旋即可找到物像 4.玻片处理：一次性玻片勿冲洗，直接放入回收器皿
复染法： 两种或两种以上染料染色，有助于鉴别细菌，
如革兰染色法和抗酸染色法。
【原理】
渗透性学说：两类细菌的细胞壁成分和结构差异
G+菌：
肽聚糖多 交联度大
脂类含量低
结晶紫 卢戈碘液
酒精 复红
G-菌： 脂类含量高 肽聚糖少
【材料】
1. 葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。 2. 革兰染色液。 3. 载玻片、接种环、酒精灯等。
（一）观察前准备
1. 显微镜拿取 左手托镜座，右手握镜臂
2. 调节通光量
使用油镜时，为使通光量最大，可采用：
1）光圈开到最大； 2）聚光器上升到最高； 3）控制光源强度（双目镜）或转动凹面反光镜（单目 镜），使视野的光照达到最明亮均匀。
（二）低倍镜观察
操作要点 先用粗旋钮使载物台上升至最高
下降载物台至物像出现
（一） 细菌的基本形态
1．球菌： 葡萄球菌(葡萄状排列) 链球菌 (链状排列) 脑膜炎奈瑟菌(成双排列)
2．杆菌： 大肠杆菌、枯草杆菌等
3．螺形菌：
螺
霍乱弧菌等
菌
弧 菌
（二）细菌的特殊结构
1. 荚 膜
• 荚膜与微荚膜概念 • 产生 • 功能
肺炎链球菌（示荚膜）
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
【步骤】
涂片制作
涂片：注意无菌操作
干燥
固定
染色
各实验室老师具体指导
染色
初染：结晶紫染液染 1min
水洗，甩干
媒染：卢戈氏碘液染1min
水洗，甩干
脱色： 酒精脱色约30s，关键步骤！
水洗，甩干
复染： 复红染液染1min
水洗，甩干
印干
油镜检
【结果】
G+球菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
革兰染色结果 取材：混合菌液 放大倍数：10X100
• 抵抗力强
• 医学意义
芽胞 菌体
炭疽杆菌（示芽胞）
取材：纯培养物 染色法：革兰染色 放大倍数：10X100
4. 菌 毛
• 概念 • 在光镜下看不见，使用电镜才能观察到
• 分类：普通菌毛和性菌毛
• 医学意义
大肠埃希菌的普通菌毛和性菌毛 （透射电镜 ×42500)
三、革兰氏染色法
常用染色方法
单染法： 一种染料使细菌着色，如美蓝和复红染色；
荚膜 菌体
鞭毛 菌体
芽胞 菌体
肺炎链球菌（示荚膜） 变形杆菌（示鞭毛） 炭疽杆菌（示芽胞）
取材：小鼠腹腔渗出液 染色法：Hiss染色 放大倍数：10X100
取材：纯培养物 染色法：鞭毛染色 放大倍数：10X100
取材：纯培养物 染色法：革兰染色 放大倍数：10X100
细菌的特殊结构
5.镜头擦拭：擦拭时沿一个方向，勿来回或旋转擦，限取 2张擦镜纸擦拭2遍。
6.还原各部分 7.填写显微镜使用登记表
注意
通光量应最大 油镜头须浸入油中 不可使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转 如石蜡油不慎沾染高倍镜头应立即用擦镜纸直接拭 去, 擦拭时沿一个方向，勿来回或旋转擦
二、细菌的形态和特殊结构观察
5、爱护实验器材，实验用过的器材放置指定位置，实验室仪 器不得乱摸乱碰；实验自阅玻片标本损坏10元/张；
6、实验完毕后，整理实验台，值日生负责室内卫生，并负责 关门、关窗、关水、关电（冰箱/培养箱除外）。
《微生物学实验》考核
见Word文档：实验考核要求 请点击此处
一、显微镜的使用操作及注意事项
显 微 镜 的 使 用
2、实验材料为病原微生物，具有感染性 1）穿好白大衣，除必要的书籍、记录本及文具外，其他 个人用品不得带入实验室； 2）实验室禁食，未经许可严禁将实验材料带出实验室
3、上课认真听讲，严禁玩手机、接电话、听音乐及其它教学 无关行为；
4、按照实验要求，认真积极完成实验，有些实验需第二天观 察结果，要求同学们亲自观察，并详细记录结果，完成实 验报告；
G-杆菌
作业
第1页：实验内容
1、显微镜的使用操作及注意事项 2、细菌的形态和特殊结构观察：
（1）自阅片：变形杆菌（示鞭毛） （2）示教片：肺炎链球菌（示荚膜）、炭疽杆菌（示芽胞） 3、革兰染色法（自做）
第2页：
细菌特殊结构：绘图
第3页：
革兰染色法完全实验报告 （实验目的、原理、材料、步骤、结果、分析、结论）
荚膜 菌体
2. 鞭 毛（Flagllum）
• 概念 • 数目、位置和排列可不同 • 鞭毛是细菌的运动器官 • 医学意义
所有弧菌和螺菌都有鞭毛
单毛菌 双毛菌 丛毛菌 周毛菌
变形杆菌（示鞭毛）
取材：纯培养物 染色法：鞭毛染色 放大倍数：10X100
鞭毛 菌体
3. 芽 胞
• 概念 • 形状、直径、位置随菌种而不同 • 形成条件 • 非细菌的繁殖体